禽呼肠孤病毒鸡源分离株的鉴定与人工感染试验

从临床患病鸡关节病料中分离到一株病毒，在电镜下观察到病毒粒子无囊膜，有双层衣壳，外衣壳直径约75nm，内核约50nm；分离病毒株对酸、热有较强的抵抗力，对乙醚不敏感；病毒感染鸡胚成纤维细胞上能产生以融合细胞为特征的CPE；爪垫接种1日龄雏鸡表现出明显的病毒性关节炎临床症状，并伴有吸收障碍型和坏死型的病理变化；血清中和交叉试验表明，该病毒分离株与国内的2株番鸭源呼肠孤病毒（YH和YB）分离株和国外S1133呈不同程度的交叉反应。通过对分离病毒株进行电镜观察、理化特性试验、病毒感染力测定、致病性试验、血清学试验，可以确定该分离病毒为禽呼肠孤病毒。     

鸡呼肠孤病毒分离与鉴定

从广西玉林市某鸡场出现跛行、瘫痪、跗趾关节和腱肿胀等症状的不同发病鸡群中分离到两株病毒。经病毒分离培养、理化特性鉴定、血清中和试验、动物回归试验、抗体检测以及PCR诊断,确定所分离到的两个病毒株为禽呼肠孤病毒。     

禽呼肠孤病毒ZJS株种毒的纯净性鉴定

将禽呼肠孤病毒ZJS株细胞毒(弱毒)在鸡胚成纤维细胞(CEF)上连续传代,对其CI、C2、C3代种毒进行了无菌和支原体污染检验,对C5、C8和C10代种毒进行了外源病毒污染检验,对C3、C8和C10代种毒还进行了特异性鉴定,以确定禽呼肠孤病毒ZJS株细胞毒(弱毒)作为种毒的可行性.结果显示,禽呼肠孤病毒ZJS株细胞毒(...     

禽呼肠孤病毒S1733株单克隆抗体的制备及特性鉴定

将增殖的禽呼肠孤病毒S1733毒株进行浓缩,然后进行蔗糖梯度纯化,测定纯化后病毒的浓度,按每只鼠100 μg的病毒用量免疫BALB/c小鼠,免疫5次后取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0 按5∶1进行融合。对融合后的杂交瘤细胞进行筛选,阳性孔经3次有限稀释法克隆。通过间接ELISA方法测定抗体效价,并通过Western blotting、Dot-ELISA、直接免疫荧光和中和反应等方法对2株单克隆抗体特性进行检测。试验结果表明,纯化的病毒含量为43 mg/mL,用纯化的病毒免疫BALB/c小鼠后与骨髓瘤细胞融合,通过克隆筛选成功获得2株能稳定传代并分泌抗禽呼肠孤病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株SF6-3K3和SB2-1K3。2株单克隆抗体的腹水经间接ELISA测定效价达10⁵以上,其抗体为IgG1亚类,特异性试验表明其与其他病毒株没有交叉反应,具有良好的特异性,并且这2株单克隆抗体没有中和禽呼肠孤病毒的能力,具有识别禽呼肠孤病毒的能力,可以用于禽呼肠孤病毒的特异性检测。     

一株雏鹅呼肠孤病毒的分离与鉴定

2013年福建省某鹅场发生一起以肝脏和脾脏均有灰白坏死点(肝白点)为典型病变特征的急性传染病。本研究利用10日龄非免疫番鸭胚,从病死雏鹅肝脏中分离到1株病毒。病毒分离株没有血凝活性,其ELD50为10-3.25/0.2 m L,可被鹅呼肠孤病毒高免血清特异性中和。利用鹅呼肠孤病毒特异性检测引物对FJ-06株病毒尿囊液进行RT-PCR检测,可扩增到约572 bp特异性目的条带。将RT-PCR产物进行克隆测序,Blast分析表明,克隆的基因片段为鹅呼肠孤病毒δC蛋白基因片段。结果表明成功分离到1株鹅呼肠孤病毒。     

禽呼肠孤病毒S1133株的毒力鉴定

将引进的ARV S1133株强毒在SPF鸡胚上传1代,对E2代种毒进行了病毒含量和对雏鸡的毒力测定试验,结果表明,E2代ARV S1133株病毒含量≥105.9EID50/0.2 mL.对3～7周龄雏鸡的半数感染量≥104.16～4.18/0.1 mL,ARVS1133株强毒毒力符合要求,可以作为强毒攻毒株.     

禽腺病毒AH株的分离与鉴定

为获得禽腺病毒毒株,将临床疑似Ⅰ群禽腺病毒感染病例的肝组织,通过接种SPF鸡胚进行病毒分离,用PCR方法对分离产物进行扩增,将PCR产物进行序列测定,对测定的序列在NCBI网上进行分析,结果显示,从病料可分离出病毒,用PCR方法特异性地扩增出了与设计片段大小相一致的片段,序列分析表明,分离株序列与禽腺病毒SD1-15分离株序列同源性99%,说明分离株为Ⅰ群禽腺病毒血清4型。     

禽巴氏杆菌Pm-HB株的分离与鉴定

湖北省某鸡场疑似巴氏杆菌(Pasteurella)感染,从送检病鸡的肺脏和肝脏中分离到1株细菌,通过菌落形态、培养特性、生化试验、16S rRNA序列比对鉴定为禽多杀性巴氏杆菌,并命名为Pm-HB株。动物回归试验表明,10 CFU细菌即可100%致死30日龄SPF鸡,可确诊为巴氏杆菌病。     

一株肉鸡呼肠孤病毒变异株的分离鉴定

旨在研究肉鸡呼肠孤病毒分离株致病与基因组变异情况。2017年从山东潍坊地区跗关节肿胀、出血严重商品肉鸡中收集病料,进行病毒分离,通过RT-PCR检测、电镜观察对病毒进行鉴定;将分离到的病毒回归商品肉鸡;设计18对引物对分离株全基因组扩增测序,并进行了遗传进化分析;将分离毒株与经典毒株S1133进行血清交叉中和试验。结果表明分离到一株禽呼肠孤病毒(命名为WF17),回归商品肉鸡能完全复制出临床症状,并能从试验鸡中重新分离到该病毒。该分离株基因组完全符合禽呼肠孤病毒基因组结构特点,主要抗原σC蛋白基因与台湾918株最接近,相似性为92.7%,与S1133株的相似性只有55.9%。WF17株与S1133株的抗原相关指数(R值)只有0.19。目前以S1133株为主的商品化疫苗无法对禽呼肠孤病毒变异株产生有效保护。     

禽流感病毒河北株的分离鉴定

禽流感（Ａｖｉａｎ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ）是由 Ａ型流感病毒引起的一种禽类的病毒性传染病,被国际兽疫局确定为Ⅰ类烈性传染性病。该病毒属正粘病毒科,几乎所有的野生与家养禽类均可感染。１８７８年在意大利的鸡群中首次暴发,其后许多国家和地区都相继报道ＡＩＶ存在的事实,近几年,我国在不同地区都分离到禽流感病毒,广泛存在的主要是Ｈ９亚型病毒,且多为中等以下毒力的毒株。本试验采集病料主要针对河北省养鸡业较为发达的几个县市的七个小型养鸡场,选择未注过流感疫苗,临床症状出现产蛋下降和呼吸道症状严重的鸡只,剖杀,采集病变明显的脏器,如胰、肝、肺、脾、气管、肾、泄殖腔及其干酪样物等,剪碎研磨,加抗生素处理后,接种９－１０日龄鸡胚,弃掉２４小时内死亡的鸡胚,收集２４－７２小时死亡鸡胚的尿囊液,盲传三代,并做血凝试验,对于ＨＡ阳性的样品,进一步做ＨＩ试验,结果有２株禽流感病毒为Ｈ９亚型;进一步测定其神经氨酸酶活性,结果为Ｎ２。取１： １０稀释的尿液０．２ｍｌ肌肉接种８只８周龄ＳＰＦ鸡测其致病力指数,观察１０天内鸡只发病情况,结果第三天鸡群精神稍有沉郁,其中一只出现歪脖的神经症状,采用英国中心兽医实验室静脉致病指数（ＩＶＰＩ）测定计算方法     

鸡传染性支气管炎病毒SH株的分离及鉴定

从黑龙江省绥化市某养鸡场疑似鸡传染性支气管炎的鸡群中采集病料,经鸡胚传代、电镜观察、生物学特性和分子生物学鉴定以及动物回归试验,表明该分离株具有明显的鸡传染性支气管炎病毒特征,具有鸡胚出现卷曲、出血、发育延迟等作用;对新城疫病毒有明显的干扰作用;动物回归试验导致未免疫鸡出现明显的感染症状,剖检可见明显的肾脏肿胀、尿酸盐沉积现象,同时可见呼吸道有出血现象。对该毒株的N基因进行扩增,并将其序列与NCBI的参考毒株的N基因进行序列对比,发现其与国内的分离株SC和N毒株的N基因具有较高的同源性,为97.6%;与国外参考毒株和国内的疫苗株同源性较低,为84.8%。表明分离的病毒为鸡传染性支气管炎病毒。     

鸡新城疫病毒强毒Q-BS株的分离与鉴定

从2003年10月至2004年6月,在河北、辽宁、山东等地区鸡群中大规模发生以神经症状、肠道出血为主的流行性疾病。本文对从河北省某AA肉鸡场的病死鸡中分离的病毒毒株,经过实验室的系统鉴定,证实该分离株具有血凝性,且可被ND标准阳性血清所抑制和中和,不能被AI(H5亚型与H9亚型)标准阳性血清及阴性血清抑制;该分离株的毒价为109.3ELD50/0.1ml,MDT为57.6h,ICPI为1.89,IVPI为2.62,回归试验鸡的临床表现与自然病例基本一致。试验结果证明,该毒株属于嗜神经型新城疫病毒强毒株,并命名为Q-BS株。     

Differential Diagnosis of Avian Reovirus and Pasteurella Mixed Infection in Broiler

In December 2014,a group of 4 weeks old broilers died in a large-scale chicken farm in Hebei province.The clinical symptoms of the ill and diseased chicken were depression,dyspnea,joint swelling and claudication.In order to diagnose the disease,a systematic analysis was conducted by laboratory diagnostic methods that included histopathological observation,bacterial isolation,PCR detection,drug sensitive test and animal pathogenicity experiment.The histopathological observation results showed that hemorrhage in the lung,the edema of heart and liver,a large number of heterophil granulocyte infiltration.Bipolar stained brevibacterium was observed under the microscopy.The PCR amplification results of Pasteurella multocida KMT-1 gene and avian reovirus σB gene were positive by using specific primers.The isolated Pasteurella could be lethal to mice and the isolate was highly sensitive to ceftriaxone and cefoperazone.Combination with the above laboratory test results and the clinical symptoms,we confirmed that the cases were mixed infection of avian reovirus and Pasteurella.     

鸡传染性支气管炎病毒BJ0903株的分离鉴定

从北京某养鸡场疑似肾型传染性支气管炎病死鸡的肾脏和肺脏组织中分离到一株病毒,经SPF鸡胚连续传代、血凝试验、鸡胚矮小试验、干扰新城疫病毒复制试验、PCR鉴定和动物回归试验,初步确定该病毒为鸡传染性支气管炎病毒,命名为BJ0903株。