UMR106细胞膜钾离子通道的记录及鉴定方法研究

目的 :建立一种研究大鼠成骨肉瘤细胞 (UMR10 6 )钾离子通道的方法。方法 :采用膜片钳技术 ,在细胞贴附方式下用内面向外的方法记录。并用TTX、CdCl2 分别阻断电压依赖性钠通道和钙通道。结果 :首次在URM10 6细胞上记录到一种电导为 8.79ps电压依赖性钾通道的通道电流。并观察了开放时间、关闭时间以及开放概率随电压的变化。结论 :通过使用钾通道阻断剂证实本方法记录的是一种电压依赖性内向整流型钾通道。     

人胃癌SGC7901细胞膜钾离子通道的特性

目的　研究人胃癌细胞系 SGC790 1细胞膜钾离子通道特性 .方法　以人胃癌细胞系 SGC790 1为研究对象 ,采用穿孔膜片钳全细胞记录法 .结果　人的胃癌 SGC790 1细胞系的静息膜电位为 (- 32 .2± 2 .2 ) m V,在钳制电压 - 40 m V,阶跃电压在 - 80～ +80 m V,记录到一种跨膜电流 ,该跨膜电流具有电压依赖、外向整流特性 ,该电流在延迟 2 5 ms后最大激活 ,80 0 m s内不失活 ,翻转电位在 - 6 0～ - 40 m V,能被已知的钾通道的阻断剂 4- AP或 TEA阻断 .结论　在人胃癌SGC790 1细胞系细胞膜上存在延迟整流钾离子通道 .     

膜片钳技术及其在星形胶质细胞钾离子通道研究中的应用

星形胶质细胞（astrocyte，AST）是神经系统中数量最多、分布最广的一类胶质细胞。它的生物学功能的研究日益受到重视。研究发现星形胶质细胞除了对神经系统起营养与支持作用外，在神经系统的发育、突触传递、组织修复与再生、神经免疫等方面，都起着十分重要的作用。研究还表明星形胶质细胞与疼痛也有着非常密切的关系。细胞膜上的离子通道是离子进出细胞的必经之路，对细胞功能的调节具有十分重要的作用，     

血管紧张素Ⅱ对乳鼠缰核细胞膜上钾离子通道活动的影响

目的 :研究血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对乳鼠缰核 (Hb)细胞膜上钾离子通道活动的影响 ,以了解Hb内AngⅡ的作用机制。方法 :用细胞贴附式单通道膜片钳记录方法观察了AngⅡ对乳鼠Hb细胞膜上延迟整流钾通道 (IK)开放概率 (Po)、平均开放时间和平均关闭时间的影响。结果 :AngⅡ降低IK 的Po ,缩短平均开放时间 ,延长平均关闭时间 ,但不影响单通道电流幅度的大小。在 0～ +6 0mV的阶跃电压范围内 ,不同浓度AngⅡ对IK 均有抑制作用 ,其作用呈浓度依赖性。结论 :AngⅡ可能通过间接跨膜通路抑制Hb细胞膜上IK 的活动。     

体外培养视网膜神经元电压门控钾离子通道特性的研究

目的探讨体外培养不同时期新生小牛视网膜神经元电压门控钾离子通道的特性。方法分别取培养2、4、6周的视网膜神经元,进行全细胞膜片钳记录,并进行统计学分析。结果去极化刺激可诱导3组细胞产生IK电流,各组检出率差异无统计学意义(P>0.05);随培养时间延长,IK电流平均峰值增高(P<0.05)。超极化刺激可诱导培养6周的部分细胞产生内向整流钾电流。结论体外培养新生小牛视网膜神经元表达不同电压门控钾电流。某些神经元的电生理学特性在不同培养阶段发生变化。     

补肾中药对成骨样细胞UMR106增殖的影响(Ⅰ)

目的：探索补肾中药对成骨样细胞UMR106增殖的作用。方法：用各种补肾中药的醇提取物和成骨样细胞UMR106共同体外培养，以MTT法检测细胞的增殖。结果：在所筛选的7种补肾中药中，仙茅，地骨皮，牛膝，山茱萸对成骨样细胞的增殖具有显著的促进作用。结论：补肾中药可通过促进成骨细胞的增殖来发挥健骨及抗骨质疏松的作用。     

补肾中药对成骨样细胞UMR106增殖的影响(Ⅱ)

目的：探索补肾中药对成骨样细胞UMR106增殖的作用。方法：用各种补肾中药的醇提取物和成骨样细胞UMR106共同体外培养，以MTT法检测细胞的增殖。结果：在所筛选的15种补肾中药中，补骨脂、蛇床子、锁阳对成骨样细胞的增殖具有显著的促进作用。结论：补肾中药可通过促进成骨细胞的增殖来发挥健骨及抗骨质疏松的作用。     

细胞膜离子通道实验中玻璃微电极的制备

对心肌细胞膜离子通道记录实验中微管电极的材料选择，拉制，抛光，树脂涂料，充灌等制作过程以及使用情况，结合作实践体会进行了较详细的描述，对某些过程作了改进，获得满足效果，研究表明，微管电极制作好坏的实验的成功起着举足轻重的影响。     

补肾中药对成骨样细胞UMR106增殖的影响(I)

目的 :探索补肾中药对成骨样细胞 UMR10 6增殖的作用。方法 :用各种补肾中药的醇提取物和成骨样细胞 UMR10 6共同体外培养 ,以 MTT法检测细胞的增殖。结果 :在所筛选的 7种补肾中药中 ,仙茅 ,地骨皮、牛膝、山茱萸对成骨样细胞的增殖具有显著的促进作用。结论 :补肾中药可通过促进成骨细胞的增殖来发挥健骨及抗骨质疏松的作用。     

Forskolin抑制成骨肉瘤细胞增殖的作用

Forskolin系天然植物中提取到的二萜类化合物，为腺苷酸环化酶的特异激活剂。实验发现它能下调成骨肉瘤细胞的EGF受体，抑制酪氨酸蛋白激酶活性，抑制转化生长因子α（TGFα）的基因表达，抑制3H－TdR参入DNA以及抑制细胞周期的S期，这均支持Forskolin对成骨肉瘤细胞具有抑制增殖的作用。     

卵巢细胞膜的制备及鉴定

作者用匀浆、超声波及蔗糖密度梯度离心法制备了卵巢细胞膜,较单纯匀浆之HCG结合率提高1750倍,四种蔗糖浓度及五种蔗糖浓度之分离效果对比,以前者为宜,离心速度为78000×g时结合率最高,且集中于33％表面层及33％～37％界面层。     

单个胃肠道平滑肌细胞的分离及其细胞膜离子通道检测

目的:建立胃肠道平滑肌细胞的分离及离子通道检测方法,为胃肠道动力性疾病和离子通道相关性疾病的研究提供技术平台。方法:酶消化法急性分离胃肠道平滑肌细胞,运用离子通道膜片钳技术在全细胞模式下检测单个平滑肌细胞膜上离子通道的状况。结果:用酶消化法急性分离可获得细胞膜完整生物活性状态良好的单个胃肠道平滑肌细胞,该细胞符合膜片钳实验的要求;运用离子通道膜片钳技术在全细胞模式下可以记录基础状态和干预后单个胃肠道平滑肌细胞细胞膜上离子通道的开放状况,可用于相关的病理、生理、药理研究。结论:酶消化急性分离法是获得单个胃肠道平滑肌细胞的一种简单、有效、易操作的方法,运用该方法结合离子通道膜片钳技术可以准确记录胃肠道平滑肌细胞细胞膜上离子通道的开放状况。     

NCAPG 促进成骨肉瘤细胞增殖的研究

目的:初步探究非染色体结构维护亚基凝聚素Ⅰ复合物亚基G（NCAPG）基因对成骨肉瘤细胞增殖的影响。方法:选择商 丘市第一人民医院和烟台毓璜顶医院2010年7月—2021 年1月收治的成骨肉瘤患者58例,通过免疫组织化学染色法对成骨肉 瘤和正常组织中NCAPG 基因的表达水平进行比较。成骨肉瘤细胞MG-63 和U-2 OS, 通过转染慢病毒载体和对照载体的 shRNA,敲减NCAPG基因来抑制其表达,qRT-PCR、Western 印迹验证敲减效果,通过集落形成实验、CCK-8 检测其对成骨肉瘤 细胞MG-63与U-2 OS细胞增殖的影响。结果:免疫组织化学染色显示,与正常组织相比,成骨肉瘤组织中NCAPG蛋白表达水 平明显升高,并且NCAPG 基因的表达与临床分期（字2=6.375,P=0.042）和肿瘤大小（字2=4.169,P=0.012）密切相关。qRT-PCR、 Western 印迹显示,慢病毒载体明显抑制了NCAPG mRNA 及蛋白的表达（mRNA:tUG-63=20.7,tU-2 OS=22.9;蛋白质:tUG-63=18.7,tU-2 OS= 16.9,均P<0.001）。与NCAPG基因未敲减相比,NCAPG基因敲减后MG-63 与U-2 OS克隆形成细胞数量降低（tUG-63=18.3,tU-2OS= 15.9,均P< 0.01）。结论:成骨肉瘤组织NCAPG基因表达增加,敲减NCAPG基因可抑制成骨肉瘤细胞的增殖。     

肿瘤细胞膜钾通道与细胞周期G1／S期转换的关系

钾通道是一类分布广泛且种类繁多的离子通道 ,在不同细胞中起着至关重要的作用。电压门控性钾通道调控着可兴奋细胞的兴奋性 ,配体门控性钾通道如钙激活及ATP依赖钾通道则在细胞膜的生理特性与细胞内代谢通路的激活之间有着功能性的联系。近年来 ,随着膜片钳技术和分子生物学技术的进展及在肿瘤细胞膜离子通道研究中的应用 ,肿瘤细胞膜离子通道的研究倍受关注 ,其中又以钾通道的研究最多。肿瘤细胞的增生与钾通道的改变有无必然性和相关性 ,对这个问题已经有足够的证据表明钾通道阻断剂在阻断钾电流的同时也抑制了细胞的增生 ,但是钾通道…     

PARP-1抑制剂对骨肉瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨PARP-1抑制剂3-aminobenzamide（3-AB）对骨肉瘤U2OS细胞增殖及凋亡的影响。方法常规培养骨肉瘤U2OS细胞,采用CCK-8法检测U2OS细胞的增殖和流式细胞术检测细胞凋亡,并用caspase-3活性测定试剂盒检测caspase-3活性和Western-blot技术检测Bcl-2、Bax的表达。结果 3-AB能抑制骨肉瘤细胞的增殖,且与剂量和时间呈相关性,流式细胞术检测结果显示3-AB能促进骨肉瘤细胞的凋亡,且呈时间相关性,3-AB刺激早期caspase-3活性增高,Western-blot显示3-AB刺激后随时间延长Bax的表达量逐渐升高,而Bcl-2的表达量则轻度升高后降低。结论 PARP-1抑制剂3-AB能抑制骨肉瘤细胞的增殖,促进其凋亡,这为PARP-1作为骨肉瘤治疗的新靶点提供了初步实验依据。     

大鼠肾脏近曲小管细胞基侧膜钾离子通道特性的离体研究

目的 探讨大鼠肾脏近曲小管细胞基侧膜钾离子通道生理学特性及其意义。方法 在体视显微镜直视下，从大鼠肾脏冠状切片中机械分离出肾小管，采用膜片钳单通道实验技术，探讨大鼠近曲小管基侧膜钾离子通道的生理学特性。结果 大鼠近曲小管细胞基侧膜上容易记录到一类低电导、有内向整流性的钾离子通道，该通道在多数膜片(81％)中自发性开放，无自发性开放的通道在压力增加时可被激活。在inside-out膜片，通道活动出现rn-down现象。通道开放时间常数分别为0．524ms与5．087ms,通道关闭的两个时间常数分别为1．029ms与16．500ms。结论 大鼠近曲小管细胞基侧膜广泛分布一类低电导的钾离子通道，具有牵张敏感性和化学敏感性双重特性，呈现两个开放状态与两个关闭状态的动力学特征。     

pSiRNA-D114逆转录病毒载体的构建及对骨肉瘤UMR106细胞D114蛋白表达的作用

目的 建立逆转录病毒介导的人D114基因RNA干扰体外表达体系并观察对骨肉瘤UMRl06细胞的作用.方法 将人Dil4基因RNAi双链转录DNA片段重组到逆转录病毒质粒psilencer 5.1-H1 R.etro中,构建成携带人D114基因RNAi逆转录病毒载体pSiP,NA-D114,经PT67细胞包装后,产生的重组逆转录病毒感染骨肉瘤细胞UMR106.用Westem blot分别检测对转染细胞人D114蛋白表达的影响.结果 重组pSiR.-NA-D114质粒经测序鉴定正确.重组逆转录病毒滴度可达221×104cfu/mL,感染UMR106骨肉瘤细胞3 d能明显抑制细胞Dll4蛋白表达,其表达水平明显低于阴性对照组和未干扰组.结论 成功构建了沉默D114表达的载体pSiRNA-D114,并且该载体能有效地敲低骨肉瘤细胞D114基因表达.     

粘附式细胞仪快速分析细胞膜脂质流动的方法

用荧光探针ＮＢＤ－Ｃ６－ＨＰＣ标记体外培养４８ｈ的小鼠肝细胞，细胞膜磷脂用５７０型粘附式细胞仪激光漂白局部，细胞膜，然后测定荧光的重新分布。结果显示，荧光恢复率为７６％，膜流动性（１．４９±０．０５７）×１０＾－９ｃｍ＾２／ｓ。     

人骨形态发生蛋白2，3，6，12对大鼠骨肉瘤 细胞株UMR106的作用

目的：研究人骨形态发生蛋白（human bone morphogenetic proteins, hBMP）对大鼠骨肉瘤细胞株UMR106的作用。方法：用hBMP2,3,6,12重组腺病毒（AdBMP2,3,6,12）干预大鼠骨肉瘤细胞株UMR106,利用台盼蓝拒染法、TUNEL法、吖啶橙/溴乙啶（AO/EB）荧光双染法、Transwell小室和碱性磷酸酶活性测定法分别检测细胞增殖、凋亡、迁移以及成骨分化能力的变化。结果：与空白对照组和实验对照组比较,AdBMPs的干预致骨肉瘤细胞株细胞存活率降低,并呈一定的时间依赖性;凋亡率均随时间延长而增加,并且TUNEL和 AO/EB两种检测方法的结果一致;3个检测时间点的细胞穿膜数均明显减低;碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性在干预第3天开始逐渐增加,至第9天仍可观测到,以上差异均有统计学意义(P＜0.01)。结论：以腺病毒介导基因转入的作用方式,hBMP2,3,6,12可以抑制大鼠骨肉瘤细胞株UMR106的增殖和迁移,并诱导其凋亡和向成骨细胞分化。