pcDNA3.1-asHpa对高转移性人乳腺癌细胞系侵袭力和黏附力的影响

目的探索pcDNA3.1asHpa对高转移性人乳腺癌细胞株MDA MB435S侵袭力和黏附力的作用。方法以质粒pcDNA3.1为载体,将乙酰肝素酶信号密码的DNA片段反向插入得到反义乙酰肝素酶信号密码真核表达载体(pcDNA3.1asHpa),以脂质体共转染人乳腺癌细胞MDA MB435S,以Boyden侵袭小室实验检测癌细胞侵袭力的变化,以细胞贴壁能力的变化检测其黏附力的变化。结果与正常对照组(侵袭率为54.3%,贴壁细胞数为22.91/视野)及空载体转染组(侵袭率为42.6%,贴壁细胞数为19.17/视野)相比,经pcDNA3.1asHpa转染的细胞侵袭力(16.3%)受到一定的抑制,黏附力(贴壁细胞数为21.36/视野)没有明显的变化。结论pcD NA3.1asHpa对人乳腺癌细胞株MDA MB435S的侵袭力有一定的抑制作用,对黏附力无显著影响。     

ADAM9在高侵袭转移 MDA －MB －231乳腺癌细胞系中的表达

目的：探讨去整合素金属蛋白酶9（a disintegrin and metalloproteinase 9，ADAM9）蛋白在人乳腺癌细胞系中的表达。方法：提取人正常乳腺上皮细胞 HBL100，人乳腺癌细胞系 MCF －7，ZR －75－1，MDA －MB －231，HCC1937和 Hs578T，小鼠乳腺癌细胞系4T1的总蛋白和总 mRNA，提取细胞的总蛋白和总 RNA 进行蛋白免疫印迹和实时定量 PCR 检测 ADAM9的表达。结果：在人乳腺癌细胞系 MDA －MB －231中 ADAM9蛋白表达最高，在小鼠乳腺癌4T1细胞中 ADAM9表达较低。结论：ADAM9在高侵袭的 MDA －MB －231乳腺癌细胞中高表达。     

多西他赛体外干预前列腺癌PC-3细胞转移能力的实验研究

目的:研究不同浓度多西他赛体外对人前列腺癌PC-3细胞侵袭力及MMP-2、MMP-9表达水平的影响。方法:在0.1血浆峰值浓度(peakplasma concentration,PPC)、1.0PPC、10.0PPC的多西他赛作用下,用Transwell小室对前列腺癌PC-3细胞的侵袭力与转移能力进行检测,并采用荧光定量RT-PCR方法检测转移相关水解蛋白酶MMP-2和MMP-9的变化。结果:经0.1PPC、1.0PPC和10.0PPC的多西他赛处理后,在1.0PPC和10.0PPC下,人前列腺癌PC-3细胞趋化、侵袭能力均下调,而0.1PPC浓度下,人前列腺癌PC-3细胞趋化能力变化不大,而侵袭能力明显降低。在各处理组PC-3细胞中,0.1PPC、1.0PPC和10.0PPC组的MMP-2mRNA的表达水平分别为0.40±0.12、0.36±0.16和0.26±0.09,MMP-9mRNA的表达水平分别为0.35±0.10、0.31±0.12和0.19±0.08,均显著低于两者相应的空白对照组,提示MMP-2和MMP-9转录水平明显降低。结论:多西他赛能够通过下调MMP-2和MMP-9基因的转录而抑制人前列腺癌PC-3细胞的侵袭力。     

抑制PI3K/Akt信号转导通路提高化疗效果的实验研究

目的:探讨通过抑制PI3K/Akt信号转导通路提高抗癌药物对恶性肿瘤细胞的杀伤作用。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测塞莱昔布、顺铂及多西紫杉醇单独或联合PI3K抑制剂LY294002对人宫颈癌HeLa细胞和人乳腺癌MCF7细胞的抑制率;采用流式细胞技术检测药物单独或联合作用对HeLa细胞和MCF7细胞凋亡的影响。结果:①联合LY294002能够显著提高塞莱昔布、顺铂及多西紫杉醇对HeLa细胞和MCF7细胞抑制率(P<0.05)。②LY294002与塞莱昔布、顺铂及多西紫杉醇的协同治疗指数均小于1,具有协同治疗作用。③联合LY294002能够增加HeLa细胞和MCF7细胞的凋亡水平。结论:抑制PI3K/Akt信号转导通路能够显著提高塞莱昔布、顺铂及多西紫杉醇对HeLa细胞和MCF7细胞的杀伤作用。     

4-氨基吡啶对多西紫杉醇抗人乳腺癌细胞作用影响的实验研究

目的：探讨选择性钾离子通道阻断剂4-氨基吡啶（4-AP）对多西紫杉醇（docetaxel，DOC）抗人乳腺癌细胞MDA-MB-43—5S增殖、凋亡和周期的影响。方法：MTT比色法分析DOC、4-AP单独应用以及两药联合应用对MDA—MB-435S增殖的影响；流式细胞术Annexin V—FITC／PI双染法和PI单染法检测两种药物对MDA—MB-435S凋亡和周期的影响。结果：DOC和4-AP单独应用均能抑制MDA—MB-435S的增殖；5mmol／L的4-AP并用25μmol／L的DOC对MDA—MB-435S达最大抑制率的时间明显缩短，DOC和4-AP对MDA—MB-435S的增殖抑制有相加或协同作用，并呈剂量-时间依赖性。2和5μmol／L的DOC单独作用24h，MDA—MB-435S产生凋亡并不明显，当与5mmol／L的4-AP联合应用后，细胞早期凋亡和死亡明显增加。单用DOC可使MDA—MB-435S阻断在G2／M期，单用4-AP可使MDA—MB-435S阻断在G0／G1期，两药联合应用可使MDA—MB-435S阻断在G2／M期。结论：DOC和4-AP分别在G2／M期和G0／G1期抑制MDA—MB-435S的增殖，4-AP通过促进DOC诱导细胞凋亡从而抑制MDA—MB-435S的增殖。     

槲皮素对人乳腺癌细胞MDA-MB-435S增殖及侵袭力的影响

 目的 探讨槲皮素对人乳腺癌细胞MDA-MB-435S 增殖及侵袭能力的影响。 方法 人乳腺癌细胞MDA-MB-435S以12.5、25、50、100、200μM 终浓度的槲皮素处理后,台盼蓝拒染法检测细胞的增殖状况、流式细胞术法检测细胞的凋亡率、Boyden小室法检测细胞的侵袭能力。 结果 人乳腺癌细胞MDA-M-435S经槲皮素处理后,其体外增殖及侵袭能力明显下降的同时凋亡率明显上升,且与药物的剂量呈正相关,当槲皮素终浓度达到200μM时,MDA-MB-435S细胞的生长及侵袭能力几乎完全受到抑制。 结论 槲皮素在体外剂量依赖性的抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-435S的增殖及侵袭能力并能诱导其凋亡,为槲皮素用于乳腺癌的预防和治疗提供了部分依据。     

细胞周期相关因子与乳腺细胞的癌变及生物学特性的相关性研究

目的：研究正常乳腺上皮细胞与乳腺癌细胞之间以及不同恶性程度的乳腺癌细胞之间的细胞周期相关因子的表达异同。方法：采用Western印迹法检测正常乳腺细胞株AG11132A、ER阳性和乳腺癌细胞株MCF－7及ER阴性的乳腺癌细胞株MDA－MB－231之间细胞周期蛋白D1、E及P21蛋白表达的异同及与其生物学特性的关系。结果：（1）正常乳腺上皮细胞株高表达P21蛋白,低表达周期蛋白E。与正常细胞相比,乳腺癌细胞株MCF－7、MDA－MB－231细胞高表达周期蛋白E,其中表达的周期蛋白E中存在异常的你分子量周期蛋白E成分,而正常乳腺上皮细胞不表达这种异常 的周期蛋白E。（2）在乳腺癌细胞株之间,相对ER阳性的MCF－7细胞,ER阴性的MDA－MB－231细胞则高表达周期蛋白E,基本无表达P21蛋白。结论L（1）正常细胞与这间、相对低恶性程度的民相对高恶性和蔼的癌细胞之间的差别是多环节的、质和量异常导致的结果;（2）周期蛋白E及P21均可反映乳腺癌细胞的增殖活性和恶性程度,可能是乳腺癌的临床预后指标。     

人血白蛋白增强顺铂对MCF7细胞的耐药作用

摘 要：［目的］ 探讨人血清白蛋白(HSA) 联用顺铂 (DDP) 对MCF7细胞耐药的影响。［方法］ 不同浓度DDP干预MCF7 细胞 72h,CCK8 检验细胞增殖抑制率。选用DDP的IC50浓度分别与10、20μmol/L HSA联用,进一步检测联合用药对 MCF7细胞的增殖抑制率。样品分为空白对照组、顺铂组、HSA组、顺铂联合HSA治疗组（10或20μmol/L）。各组处理MCF7细胞72h,实时荧光定量PCR (qRT-PCR)和免疫印迹法检测ERCC1 mRNA和蛋白表达。 ［结果］ DDP联用10或20μmol/L HSA 对MCF7 的增殖抑制率分别为(50.97±1.50)%、(45.15±2.10)%,单独用药组DDP对MCF7 的增殖抑制率为(55.60±5.20)%。qRT-PCR和Western blot检测表明DDP联用HSA (20μmol/L) 显著增强ERCC1 mRNA和蛋白的表达。［结论］ DDP联合使用高浓度HSA可通过上调ERCC1表达诱导化疗药物耐药。     

人乳腺癌细胞RECK基因的表达及检测

目的:研究人乳腺癌细胞株RECK基因的表达,阐明RECK基因表达水平与乳腺癌细胞侵袭力的关系。方法:采用transwell法,测定HBL-100,MCF-7和MDA-MB-435S三株人乳腺(癌)细胞的体外侵袭能力,同时应用免疫细胞化学技术,Westernblotting和RT-PCR技术分别检测三株细胞株MMP-2,MMP-9和RECK基因蛋白表达水平,及RECK基因mRNA转录丰度。结果:三株细胞中,MDA-MB-435S侵袭力最高(425.20±54.09),HBL-100最低(101.00±63.88),MCF-7居中,为(239.00±91.39),三组细胞的侵袭力比较差异均有显著性(P<0.01)。RECK基因在HBL-100细胞株中蛋白表达水平最高(免疫细胞化学值:3188.24±894.86;Westernblotting值:3.32±0.25),在MDA-MB-435S细胞株中不表达,MCF-7为(免疫细胞化学值:1058.92±336.53,P<0.01;Westernblotting值:2.23±0.59,P<0.05)。且在免疫细胞化学中,RECK基因的蛋白表达与MMP-2,MMP-9的表达水平成负相关。RECK基因在HBL-100细胞株中mRNA水平最高(2.32±0.02),在MDA-MB-435S细胞株中不表达(P<0.001)。结论:RECK基因表达水平与乳腺癌细胞体外侵袭力及MMP-2,MMP-9的表达水平成明显负相关。     

ROR1-AS1调控Notch1信号通路对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡影响

摘 要：［目的］ 研究酪氨酸蛋白激酶跨膜受体 1 反义 RNA 1（tyrosine protein kinase transmembrane receptor 1 antisense RNA 1，ROR1-AS1）调控Notch1信号通路对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)的影响。［方法］ 实时荧光定量PCR方法检测乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-361细胞和正常乳腺上皮MCF10A细胞中ROR1-AS1表达变化。乳腺癌MCF-7细胞分成对照、sh-NC（转染shRNA 对照）、sh-ROR1-AS1（转染ROR1-AS1 shRNA）、sh-ROR1-AS1+Jagged1组（转染ROR1-AS1 shRNA，Notch1通路激活剂Jagged1处理）。CCK-8实验检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡，Transwell小室检测细胞迁移和侵袭，Western blot方法检测细胞中活化的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶9（cleaved cysteinyl aspartate-specific protease-9，C-Caspase-9）、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）、活化的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3（cleaved cysteinyl aspartate-specific protease-3，C-Caspase-3）、神经型钙黏蛋白（N-cadherin）、Notch1、Hes1蛋白表达。 ［结果］ 乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-361细胞中ROR1-AS1水平明显高于正常乳腺上皮MCF10A细胞（P<0.05）。与对照组、sh-NC组比较，sh-ROR1-AS1组乳腺癌MCF-7细胞存活率降低(100.00%±9.82%，99.74%±12.05%，58.91%±6.33%)，细胞凋亡率升高(4.81%±0.26%，4.93%±0.34%，20.58%±2.11%），细胞迁移数目( 225.36±12.84个，224.89±19.56个，140.89±13.64个）和侵袭数目(180.47±16.32个，177.54±16.92个，110.44±10.87个)减少，细胞中C-Caspase-9、E-cadherin、C-Caspase-3蛋白表达水平增加，N-cadherin、Notch1、Hes1蛋白表达水平降低（P<0.05）。与sh-ROR1-AS1组比较，sh-ROR1-AS1+Jagged1组乳腺癌MCF-7细胞存活率升高(100.00%±11.58% vs 147.36%±12.05%），细胞凋亡率降低(19.54%±1.74% vs 8.36%±0.75%)，细胞迁移数目(139.58±12.78个 vs 175.26±16.94个)和侵袭数目（107.45±9.35个 vs 162.04±13.67个）均升高，C-Caspase-9、E-cadherin、C-Caspase-3蛋白水平降低，N-cadherin、Notch1、Hes1蛋白水平升高（P<0.05）。［结论］ 下调ROR1-AS1通过抑制Notch1信号减弱乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭和EMT能力，激活细胞凋亡。     

非小细胞肺癌体外化疗敏感试验影响因素的研究

目的：研究非小细胞肺癌对化疗药物原发敏感情况及药敏试验相关影响因素。方法：采用MTT比色法测定31例非小细胞肺癌标本对9种化疗药物的敏感性，每种药物设3个浓度等级，根据每种药物的抑制率进行分析。结果：31例肺癌标本对9种化疗药物的敏感程度依次为：异长春花硷83．87%、长春新碱77．42%、丝裂霉索74．19％、阿霉素69．72%、卡铂69．72％、顺铂61．29％、足叶乙甙58．06%、氨甲喋呤22．58%、5-氟脲嘧啶19．35％；足叶乙甙和阿霉素对肺鳞癌抑制率明显高于肺腺癌，足叶乙甙和顺铂对低分化肺癌抑制率明显高于中高分化肺癌。结论：体外药敏试验受到多因素影响，药敏结果能够较好指导临床化疗。     

胶滴肿瘤药敏检测技术的研究进展

胶滴肿瘤药敏检测技术(CD-DST)是一种体外肿瘤药敏检测技术,其突出特点是能够排除成纤维细胞对实验的干扰,在体外对抗癌药物的特异性杀伤作用做出客观评价.所需标本量小(3×103个细胞/孔)的特点扩大了该技术的应用范围,弥补了目前其他药敏技术的不足.国外临床研究表明此技术的体外检测结果与临床疗效间存在较好的相关性.CD-DST作为一种先进的体外肿瘤药敏检测技术,对化疗药物杀伤肿瘤细胞有效性的评价、化疗方案的筛选以及肿瘤化疗个体化治疗的推广均具有实际意义.国外研究表明,该技术的应用能够提高恶性肿瘤患者的疗效和临床医师用药的科学水平.     

Evaluation of Cisplatin Efficacy on HepG2 and E. coli Cells under Acidic Conditions

Background: Cisplatin (Cispt) is a common anticancer drug for the treatment of several malignancies, includinghepatocarcinoma. However, this drug suffers from instability in aqueous solutions. The study aimed to evaluate cisplatinefficacy on HepG2 and E. coli cells under an acidic condition. Methods: Acidic Cispt was prepared via incubation inacidic condition (pH=2) for a month duration. The chemical structure of the acidic Cispt was evaluated by using FourierTransform Infrared Spectroscopy (FTIR) method. The cytotoxicity of the standard and acidic Cispt were then determinedby 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) and minimum inhibitory concentration (MIC)assays on HepG2 and E. coli cells, respectively. Results: After preparing of acidic Cispt, its chemical structure wasdetermined by FTIR method. In addition, cytotoxicity effects of Cispt in the standard and acidic forms were calculated58 ± 2.9 and 65 ± 3.25 μM, respectively. MIC results also confirmed the results of MTT assay. MIC results for thestandard and acidic Cispt were estimated 9.5 ± 0.47 and 9.8 ± 0.49 μM, respectively. Conclusion: Preparing Cispt inacidic condition not only did not degrade the drug, but also kept the potency of the drug approximately equal to parentdrug. Regarding the instability issues of Cispt, keeping Cispt in acidic condition could be a promising approach topreserve its efficacy.     

Measurement of steroid hormone receptors in breast cancer patients on tamoxifen

Summary Estrogen (ER) and progesterone receptor (PgR) positive breast tumors often respond to tamoxifen, but ultimately progress as they become tamoxifen resistant. An accurate assessment of receptor status in specimens from tamoxifen-resistant patients could help to understand potential mechanisms of resistance and to predict response to second line hormonal therapies. However, since tamoxifen itself can affect ER and PgR determinations, assay results can be misleading. We measured ER and PgR by both ligand binding (LBA) and immunohistochemical (IHC) assays in 34 tumors from patients on tamoxifen, 30 of whom were displaying resistance to the drug. These tumors were classified into several receptor phenotypes. Eleven patients, 8 of whom were clearly progressing, expressed both receptors while on tamoxifen. ER was significantly less often negative when measured by IHC, suggesting that ER status by LBA was falsely negative in this group due to receptor occupancy by tamoxifen. Six patients had no detectable ER by LBA or IHC but still expressed PgR. The presence of PgR suggests that ER could still be functional, though undetectable, in these tumors, or that PgR is constitutively expressed by them. Finally, 12 patients were ER and PgR-negative by both assays, suggesting hormonal independence as the mechanism for resistance in this group. In a subset of patients with receptor assays both prior to tamoxifen and at the time of progression while taking the drug, we found that most ER-positive tumors converted to an apparent ER-negative status when assayed by LBA, while PgR status frequently remained unchanged. The continued expression of ER and/or PgR in many patients with tumor progression on tamoxifen indicates that mechanisms for resistance other than receptor loss are common in breast cancer.Deceased     

肿瘤标志物放射免疫分析进展

本文从免疫分析总体发展的过程中展示了肿瘤标志物分析的进展.从经典的竞争性RIA到以IRMA开始的非竞争性免疫分析和多分析物微点阵的出现,其中非竞争分析的成功是一个历史性转折.肿瘤标志物的诞生恰遇这一变革,大都直接采用了先进的抗体标记、双位点、夹心式非竞争性分析技术.根据位点占据的理论,竞争性分析本质上属于间接测定,非竞争性分析属于直接测定;直接量度比间接推导的结果更为精确.因此,直接测量的非竞争性方式是达到分析结果高精确、高灵敏以及其他优越性的最关键因素.在同样条件下非竞争分析的灵敏度可比竞争性分析高一百倍以上.在非竞争分析中非特异性结合很容易达到1%以下,在最佳条件下甚至可以达到0.01%,此时的灵敏度可再上升两个数量级.非竞争分析的优越性同样体现在微点阵分析中.微点阵分析是免疫分析中新的分支,尚在发展之中,肿瘤标志物检测及一般临床常规诊断对它尚无明显需求,它的主要潜力将在大规模筛选实验之中.     

硒酸钠对人前列腺癌细胞PC-3细胞株活力和增殖的影响

目的：研究硒酸钠(一种主要的无机含硒化合物)对人前列腺癌细胞系PC-3生长和增殖的影响。方法：用硒酸钠对体外培养的人前列腺癌细胞PC-3进行药物处理，然后用MTT法测定细胞的活力，用^3H-TdR掺入法测定细胞的增殖情况。结果：24小时作用时，硒酸钠中剂量组A值显著低于对照组，高剂量组A值与对照组有极显著差异。48小时作用时，硒酸钠低剂量组A值显著低于对照组，中剂量和高剂量组A值与对照组有极显著差异；48小时的硒酸钠处理抑制PC-3细胞的增殖，中剂量组与对照组相比有显著差异，高剂量组与对照组有极显著差异。结论：硒酸钠可抑制PC-3细胞的活力，抑制细胞增殖，并且这两种作用都呈剂量依赖效应。     

肺癌快速诊断渗滤试剂盒的研制及其临床应用

目的:为能简便快速检出肺癌。方法:研制以微孔滤膜为载体,以胶体金有色微粒为标记物的渗滤试剂盒。结果:检测肺癌血清141例,检出116例,漏诊25例;阳性率为82.3％,假阴性率为17.7％。检测良性肺疾患106例,检出肺癌阴性101例,阴性率为95.3％,其敏感性为82.3％,特异性为95.3％,准确性为87.9％。结论:其优点:不需加显色剂,检测快速简便;性能稳定,冷冻干燥后可在室温下长期保存;不需任何仪器设备,几分钟即可用肉眼判断结果。     

使用极限稀释液体微量培养法检测小儿急性白血病细胞的药物敏感性

使用CFU-AML和CFU-ALL两种培养体系对35例小儿急性白血病(AL)进行了祖细胞培养,研究了集落细胞的遗传学和细胞表面免疫标记,发现集落细胞的染色体核型和表面免疫标记均与培养前白血病细胞一致.因此本文把这两种培养体系应用于体外药敏试验中,对部分患儿进行了VP、VLDP、COAP、HOAP四组化疗方案的药敏试验,使用的是极限稀释液体微量培养法.结果表明体外药敏与体内疗效的符合率为11/12.本法具有简单、敏感、客观、无放射性污染等特点,可望为白血病的临床治疗和研究提供帮助.     

EXPERIMENTAL STUDY ON ANTITUMOR EFFECT OF MONOCLONAL ANTI－IDIOTYPIC ANTIBODY－DNR CONJUGATE TO LEUKEMIA

ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬＳＴＵＤＹＯＮＡＮＴＩＴＵＭＯＲＥＦＦＥＣＴＯＦＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬＡＮＴＩ－ＩＤＩＯＴＹＰＩＣＡＮＴＩＢＯＤＹ－ＤＮＲＣＯＮＪＵＧＡＴＥＴＯＬＥＵＫＥＭＩＡ￥ＷａｎｇＸｉａｏｌｉｎ；王晓林；ＣａｏＸｉｆａｎｇ；曹熙芳；Ｚｈｕ...