蜂毒素对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响及其部分机制研究

目的研究蜂毒素对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用和HDAC2及Hedgehog信号通路的关系。方法给予不同浓度蜂毒素,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HepG2细胞的增殖变化,Hoechst33258染色和流式细胞术检测HepG2细胞凋亡变化;qRT-PCR检测SHH、PTCH1、SMO、Gli1、HDAC2 mRNA的表达;Western blot检测SHH、PTCH1、SMO、Gli1、HDAC2蛋白的表达。结果不同浓度的蜂毒素在作用48 h后,能明显抑制Hep G2细胞的增殖,促进其凋亡;Hedgehog信号通路中SHH、PTCH1、SMO、Gli1 mRNA及蛋白水平均明显降低,并与蜂毒素浓度呈负相关。同时检测到细胞内HDAC2 mRNA及蛋白水平均降低,与蜂毒素剂量呈负相关。结论蜂毒素可明显抑制人肝癌Hep G2细胞增殖,促进其凋亡,其作用与抑制HDAC2,下调Hedgehog信号通路密切相关。     

siRNA沉默CD147基因对肝癌细胞的影响

目的 观察小分子干扰RNA(siRNA)沉默CD147基因在肝癌细胞HepG2中的表达,探讨CD147基因对肝癌细胞生长、凋亡的影响.方法 根据CD147 cDNA序列设计具有短发夹结构的两条DNA序列,与载体pSileneerTM4.1-CMV neo构建重组表达载体,鉴定后转染至HepG2细胞,Western blotting法检测抑制效果,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡情况.结果 成功构建了针对CD147基因表达的干扰质粒,有效抑制了HepG2细胞增殖,促进了HepG2细胞凋亡.结论 CD147靶向RNA干扰重组表达栽体为肝癌的基因治疗提供了可能.     

虫草素对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨虫草素对HepG2细胞增殖和凋亡的影响.方法 用0(对照组),100,200,400,600,800和1000μmol·L-1虫草素处理HepG2细胞24 h和48 h后,用噻唑蓝法检测细胞存活率.将HepG2细胞分为对照组和低、高剂量实验组,并分别用0,200和400μmol·L-1虫草素处理48 h.用克...     

甲基莲心碱对HepG2细胞增殖及凋亡的影响

摘 要 目的：研究甲基莲心碱对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响。方法: 采用CCK 8法观察甲基莲心碱对人肝癌细胞HepG2细胞生长增殖的影响;Hoechst33258染色观察甲基莲心碱作用HepG2细胞后细胞形态的变化;测定乳酸脱氢酶 (LDH)释放率观察HepG2细胞受损程度;Annexin V PI双染测定甲基莲心碱对HepG2细胞凋亡率的影响;PI/RNase单染检测不同浓度的甲基莲心碱对其凋亡周期的影响。结果: 甲基莲心碱对体外培养的人肝癌HepG2细胞的生长具有抑制作用,且呈剂量、时间依赖性;细胞膜的受损程度随着药物剂量的增大逐步提高;Hoechst33258及流式结果表示,甲基莲心碱可使HepG2细胞阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率随药物浓度的增大亦呈增长趋势。结论: 甲基莲心碱可显著抑制肝癌HepG2细胞的生长增殖,并在一定的范围内呈剂量、时间依赖性,诱导其阻滞于G0/G1期,发生晚期凋亡。     

吡非尼酮对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响(“豪森杯”优秀论文三等奖)

目的：研究吡非尼酮（pirfenidone,PF）对人肝癌细胞系HepG2增殖和凋亡的影响。方法：CCK-8法测定不同浓度PF对HepG2细胞增殖活性的影响;Hoechst 33258荧光染色法观察PF处理后HepG2细胞形态的变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：PF对HepG2细胞具有显著增殖抑制作用,并呈浓度和时间依赖性;Hoechst 33258染色可见PF处理后细胞出现典型的凋亡形态学变化;流式细胞仪检测结果显示,与空白组比较,PF处理后的HepG2细胞凋亡率显著增加（P﹤0.01）。结论：PF对人肝癌细胞系HepG2细胞增殖具有抑制作用,且与诱导HepG2细胞凋亡有关。     

原花青素联合Apollon siRNA抑制肝癌HepG2细胞增殖及凋亡

目的研究原花青素联合凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)家族成员Apollon小干扰RNA(small interfer-ence RNA,siRNA)对人肝癌(HepG2)细胞增殖、凋亡的影响。方法设计并合成Apollon siRNA的序列,将一定浓度的人工合成的Apollon siRNA经脂质体包裹转染肝癌(HepG2)细胞,运用实时荧光定量RT-PCR检测Apollon mRNA的表达水平,蛋白质免疫印记技术检测Apollon的蛋白表达水平,并筛选出Apollon siRNA的有效序列,并进一步联合不同浓度的原花青素作用于肝癌(HepG2)细胞48 h后,采用WST-8法检测单用Apollon siRNA、单用原花青素、及Apollon siRNA联合原花青素对肝癌细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞早期凋亡率;Hoechst 33258染色观察HepG2细胞凋亡形态。结果设计的三对Apollon siRNA序列,筛选出其中有一对(NO.2)能明显下调Apollon mRNA与蛋白的表达水平,Apollon siRNA联合原花青素作用于HepG2细胞48 h后,单用原花青素的IC50为25.24 mg.L-1;Apollon siRNA与原花青素联合使用,原花青素的IC50为9.99 mg.L-1,增敏倍数为2.53,表现为协同作用。流式细胞术检测结果显示:Apollon siRNA联合原花青素能促进HepG2细胞凋亡,其早期凋亡率达25.2%;经荧光显微镜观察,Apollon siRNA组可见核高强度荧光的细胞,并见凋亡小体。结论 Apollon siRNA可增强肝癌细胞对原花青素的敏感性,作用机制可能为共同促进肝癌细胞早期凋亡有关,为临床上肝癌的治疗提供理论基础。     

沉默Cdk7导致pRb和Cdk2磷酸化水平下降并诱导HepG2细胞凋亡

目的　研究转染反义寡脱氧核苷酸 (antisenseoligode oxynucleotides, ASODN)对Cdk7特异性的沉默作用及其对体外培养人肝细胞癌HepG2细胞pRb和Cdk2磷酸化水平以及细胞周期进展的影响,确定Cdk7作为抗肿瘤药物研发靶点的可行性。方法　以免疫印迹检测转染ASODN对Cdk7的特异性沉默作用及其对pRb和Cdk2磷酸化水平的影响;以流式细胞术测定转染ASODN后细胞DNA含量,确定细胞周期进展和凋亡情况,透射电子显微镜观察细胞凋亡形态。结果　转染ASODN 72h后,Cdk7蛋白水平显著下降,有明显剂量 -效应关系,最高可降至对照组的 0 12±0 05;在ASODN浓度>100nmol L-1时,pRb和Cdk2磷酸化水平显著下降,两种蛋白的磷酸化水平与给药剂量有明显依赖关系。随转染ASODN浓度上升及转染时间的延长,G0 /G1 期细胞、凋亡细胞比例迅速升高,与对照组比较,出现明显的G0 /G1 期阻滞(P<0 01)和细胞程序性死亡(P<0 01);透射电子显微镜观察显示>50nmol·L-1各组细胞具特征性凋亡形态。结论　用ASODN沉默Cdk7可降低pRb以及Cdk2的磷酸化水平,使其生物活性下降,对体外培养HepG2细胞可产生显著的G0 /G1 期阻滞,引起细胞周期延长和细胞凋亡,产生抗增殖作用,可以Cdk7作为抗肿瘤药物研发的新靶点。     

千金藤素调控肝癌细胞 HepG2增殖和凋亡的实验研究

目的探讨千金藤素对肝癌细胞 HepG2增殖、凋亡的影响和机制。方法 2020年 1—6月,从上海通派生物科技有限公司购入肝癌细胞 HepG2,用千金藤素( 20 μmol/L)处理肝癌细胞 HepG2,MTT方法测定增殖活性, PI单染法检测细胞周期, Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,蛋白质印迹法( Western blotting)检测细胞周期蛋白 D1(cyclin D1)、 p21、Bcl-2相关 X蛋白( Bax)、活化胱天蛋白酶 3(cleaved caspase-3)、核因子 κB p65(NF-κB p65)蛋白表达。用 NF-κB信号激活剂和千金藤素联合处理肝癌细胞,检测细胞增殖、周期、凋亡变化。结果千金藤素处理后的肝癌细胞增殖活性下降,细胞 G0/G1期比例［(65.81±3.73)%比( 50.61±4.17)%］升高,细胞凋亡率［(13.47±1.58)%比( 2.18±0.12)%］升高,细胞中 p21、Bax、cleaved-caspase-3蛋白水平升高, cyclin D1蛋白水平下降, NF-κBp65蛋白水平( 0.19±0.02比 0.36±0.05)降低。 NF-κB信号激活剂处理可以提高千金藤素条件下肝癌细胞增殖活性( 0.46±0.03比 0.35±0.04)减少 G0/G1期比例,降低细胞凋亡率,降低细胞中 p21、Bax、cleavedcaspase-3蛋白表达水平,提高细胞中 cyclin D1和 NF-κBp65蛋,白水平。结论千金藤素抑制肝癌细胞增殖,阻滞细胞周期,诱     

澳洲茄边碱对肝癌 HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨澳洲茄边碱（SM ）对 HepG2细胞增殖、凋亡的影响及其可能作用机制。方法用不同浓度SM 5、10、15和20μg／ml分别处理 HepG2细胞3、6、12和24 h ,并设不加药的对照组。采用MTT法检测 HepG2细胞增殖,DAPI染色法观察细胞核形态的变化,流式细胞术检测细胞凋亡和周期,Western blot法检测B细胞淋巴瘤‐白血病2（Bcl‐2）、Bcl相关X蛋白（Bax）、半胱天冬氨酸蛋白酶3（Caspase‐3）及Ki67的蛋白表达。结果与对照组相比,SM 呈剂量依赖性地抑制HepG2细胞增殖,促进HepG2细胞凋亡,将细胞周期阻滞于G2／M期,并且上调Bax和Caspase‐3蛋白表达,下调Bcl‐2和Ki67蛋白表达（P＜0．05或P＜0．01）。结论 SM 能有效抑制 HepG2细胞的增殖,促进细胞凋亡的发生;SM上调Bax和Caspase‐3表达,下调Bcl‐2和Ki67表达,细胞周期阻滞于G2／M期可能是其发挥上述作用的机制。     

靶向沉默SSBP1基因对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭转移的影响

目的 观察靶向沉默线粒体单链DNA结合蛋白(SSBP1)基因对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭转移的影响.方法 设计并构建靶向SSBP1 基因的特异性siRNA,采用脂质体介导瞬时转染肝癌HepG2细胞,细胞分3组:对照组、空白转染组、转染组.Real time-PCR和Western-blot检测靶向干扰后SSBP1 mRNA和蛋白表达变化.CCK-8法检测细胞增殖.流式细胞仪检测细胞周期、凋亡率及线粒体膜电位.划痕实验及Transwell 侵袭实验检测细胞侵袭转移能力.Western-blot检测增殖、侵袭转移相关基因蛋白表达状况.结果 SSBP1 siRNA能够显著抑制SSBP1 mRNA和蛋白表达.与对照组和空白转染组比较,转染SSBP1 siRNA后HepG2细胞增殖能力、G2期和S期细胞比例、线粒体膜电位明显降低,G1期细胞比例、细胞凋亡率明显升高(P<0.05);同时细胞增殖相关基因PCNA、凋亡抑制基因Bcl-2、转移相关基因MMP-9蛋白表达显著下调,凋亡诱导基因Bax蛋白表达显著上调(P<0.05).结论 靶向沉默SSBP1基因能够通过线粒体途径抑制肝癌HepG2细胞增殖、侵袭转移,并诱导其凋亡.     

白藜芦醇烟酸酯抑制人肝癌细胞HepG2增殖并诱导细胞的凋亡

目的：观察白藜芦醇的修饰物白藜芦醇烟酸酯（ResT）对人肝癌细胞HepG2生长增殖的影响及诱导凋亡的作用。方法：用不同浓度的ResT处理HepG2细胞，MTT法检测ResT对HepG2细胞生长增殖的抑制作用；应用Hochest荧光染色法观察凋亡细胞的发生；流式细胞术（FCM）检测分析细胞周期和细胞凋亡率；比色法测定Caspase-3酶活性。结果：ResT抑制HepG2细胞的增殖并呈现一定的量效和时效关系，HepG2细胞与ResT作用后出现典型的凋亡细胞形态改变，FCM分析显示大部分细胞阻滞于G1期，S期细胞比例降低。且药物作用组出现凋亡峰。药物作用12、24、48h后，细胞的凋亡率分别为8．7％、21．1％、和32.7％。显示ResT诱导的细胞凋亡作用随时间的延长而增加，同时Caspase-3酶活性显著增强。结论：ResT可抑制人肝癌细胞HepG2的生长增殖，其作用机制之一可能与阻滞细胞于G1期及诱导细胞凋亡有关。     

A comparison of apoptosis and necrosis induced by hepatotoxins in HepG2 cells

7H-Dibenzo[c,g]carbazole (DBC), an N-heterocyclic aromatic hydrocarbon, is cytotoxic and carcinogenic in rodent liver. While DBC leads to necrotic lesions in the liver, the induction of apoptosis by DBC has not been investigated. The focus of this study was to determine the degree to which apoptosis and necrosis contributed to DBC cytotoxicity in a human hepatoma cell line (HepG2). To determine if these effects were unique to DBC, the results were compared to another hepatotoxin, aflatoxin B(1) (AFB(1)). DBC produced a distinct biphasic LDH release curve within 24 h of exposure. During the same time period lower concentrations of DBC (<10 microM) induced the formation of DBC-DNA adducts and increased p53 protein levels followed by apoptotic cell death. However, increasing the concentration of DBC to 80 microM led to lower DNA adduct and p53 protein levels. At this concentration, intracellular ATP levels were rapidly depleted followed by cell swelling and loss of membrane integrity consistent with necrotic cell death. In contrast to DBC, a biphasic LDH release curve was not observed for AFB(1). Instead, AFB(1) induced a concentration-dependent increase in apoptosis that reached two- to threefold higher levels than DBC. These results suggest that differences exist in the extent and type of cell death induced by DBC and AFB(1) at equimolar concentrations. Apoptosis and necrosis result from low and high concentrations of DBC, respectively, and may be dependent upon intracellular ATP levels.     

重组慢病毒LV-hTERT-tumstatin的构建及其对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的构建重组慢病毒LV-hTERT-tumstatin并探讨其对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法用不同病毒感染复数（MOI）LV-hTERT-tumstatin感染肝癌细胞HepG2及正常肝细胞L02,荧光显微镜下观察转染情况,MTT法检测两种细胞增殖情况,流式细胞术检测两种细胞凋亡情况。结果重组慢病毒LV-hTERT-tumstatin转染后在肝癌HepG2细胞中特异表达,在L02细胞中无表达。肝癌细胞HepG2的生长抑制率随MOI增加而逐渐增加,L02细胞生长无明显变化。慢病毒治疗组HepG2细胞凋亡率达（48.39±3.32）%,明显高于空白对照组（3.96±0.94）%（P〈0.05）,而对L02细胞作用不明显（P〉0.05）。结论重组慢病毒LV-hTERT-tumstatin可靶向抑制肝癌HepG2细胞增殖和促进HepG2细胞凋亡。     

山奈酚对HepG2细胞增殖的影响及诱导其凋亡的机制研究

目的研究山奈酚对人肝癌细胞(HepG2细胞)增殖与凋亡的影响及其机制。方法将HepG2细胞分为空白组和实验组,实验组以CCK-8法检测10个不同浓度的(10,20,30,40,50,60,70,80,90,100μmol·L^-1)山奈酚处理HepG2细胞24 h后的存活率。最终以3个浓度(20,40,50μmol·L^-1)山奈酚作为低、中、高3个浓度实验组。以免疫印迹法检测核苷酸结合寡聚化域样受体蛋白3(NLRP3)和死骨片-1(P62)蛋白表达水平(灰度值)。结果山奈酚处理HepG2细胞24 h后,空白组与低、中、高3个浓度实验组HepG2细胞的存活率分别为(100.00±0.00)%,(87.92±3.13)%,(77.92±4.40)%和(70.53±4.19)%;上述这4组的NLRP3表达水平分别为0.27±0.05,0.50±0.03,0.71±0.08和0.93±0.10;上述这4组的P62表达水平分别为0.54±0.06,0.76±0.05, 0.87±0.04和1.09±0.10。上述指标:3个浓度实验组与空白组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论山奈酚可有效抑制HepG2细胞增殖、抑制其自噬并诱导其凋亡,其机制可能为有效促进P62的沉积,同时能诱导凋亡经典途径中NLRP3的合成,从而抑制HepG2细胞自噬并促进其凋亡。