人／猪造血嵌合体构建及特异性免疫耐受形成的初步研究

目的初步探析人/猪造血嵌合体的构建及所诱导形成特异性免疫耐受的条件,为实现嵌合体人源性造血提供实验支持。方法实验分为3组,新生猪5只/组,实验1组:将人脐血来源CD34+细胞移植入正常新生小型猪体内后,持续注射人源SCF、EPO;实验2组:新生猪移植细胞后不注射人源因子;实验3组(正常对照组):新生猪注射生理盐水。移植后10、20、30、40、50、60d时取嵌合体猪外周血,检测人源CD71+细胞比例,同时检测猪外周血抗人种属抗体。结果2组嵌合体猪外周血中均有一定比例的人源CD71+细胞,但实验1组外周血比例显著高于同期实验2组(P<0.01);正常小型猪外周血于16d出现抗人种属抗体,嵌合体猪外周血于移植后50d出现,且抗体效价低于同龄正常猪。结论利用新生乳猪可建立人/猪造血嵌合体,可诱导形成供者型免疫耐受;在人源造血因子作用下,可实现人造血干细胞在嵌合体内分化。     

造血细胞嵌合体供者诱导异种移植物的免疫耐受☆

目的:探讨脐血造血细胞嵌合体动物作为异种组织、器官移植的供者,诱导异种移植物免疫耐受的机制。方法:实验于2005-06/2006-01在解放军第一五九中心医院全军烧伤中心实验室完成。①采用人脐血单个核细胞经宫内胎鼠移植加新生鼠肝内注射的方法制作人脐血造血细胞嵌合体动物模型,非嵌合体对照以同法注入等量磷酸盐缓冲液。②4周后利用免疫组织化学和流式细胞三色标记检测嵌合体大鼠体内人源性细胞和补体调节蛋白,并对hCD45/SSC设门时不同区域内hCD55和hCD59阳性细胞的百分率进行分析。③用补体依赖性淋巴细胞毒性反应评估嵌合体鼠异种移植免疫适应性,与非嵌合体鼠进行比较;并对嵌合体鼠补体依赖性淋巴细胞毒性反应和外周血补体调节蛋白地相关关系进行分析。结果:①随机选择嵌合体大鼠14只,非嵌合体大鼠8只进行研究。②嵌合体鼠骨髓、脾脏和心脏中有人源性β2微球蛋白阳性细胞和hCD55,hCD59抗原存在,外周血中hCD45 细胞的比率为(6.69±4.51)%。选择hCD45/SSC设门时,hCD45 细胞区域中hCD55和hCD59阳性细胞占门内细胞数的(53.69±18.23)%和(31.8±27.5)%,占全细胞总数的(2.0±1.32)%和(0.74±0.59)%,与全细胞区域内hCD55和hCD59阳性细胞百分率犤(4.11±2.83)%和(2.82±1.38)%犦相比,差异具有显著性意义(t=-2.7～-3.7,P<0.05)。③嵌合体组补体依赖性淋巴细胞毒性反应显著低于非嵌合体组犤(20.85±15.03)%,(60.70±21.08)%,t=-3.924,P<0.01犦。④嵌合体大鼠的淋巴细胞毒试验结果与外周血hCD55 细胞百分率呈负相关(r2=0.637,P<0.05)。结论:人脐血造血细胞嵌合体大鼠的骨髓、外周血、脾脏和心脏有人源性细胞分布,嵌合体内异种补体调节蛋白的存在,可能是造血细胞嵌合体供者异种移植物免疫耐受的基础。     

造血细胞嵌合体供者诱导异种移植物的免疫耐受

目的探讨脐血造血细胞嵌合体动物作为异种组织、器官移植的供者,诱导异种移植物免疫耐受的机制.方法实验于2005-06/2006-01在解放军第一五九中心医院全军烧伤中心实验室完成.①采用人脐血单个核细胞经宫内胎鼠移植加新生鼠肝内注射的方法制作人脐血造血细胞嵌合体动物模型,非嵌合体对照以同法注入等量磷酸盐缓冲液.②4周后利用免疫组织化学和流式细胞三色标记检测嵌合体大鼠体内人源性细胞和补体调节蛋白,并对hCD45/SSC设门时不同区域内hCD55和hCD59阳性细胞的百分率进行分析.③用补体依赖性淋巴细胞毒性反应评估嵌合体鼠异种移植免疫适应性,与非嵌合体鼠进行比较;并对嵌合体鼠补体依赖性淋巴细胞毒性反应和外周血补体调节蛋白地相关关系进行分析.结果①随机选择嵌合体大鼠14只,非嵌合体大鼠8只进行研究.②嵌合体鼠骨髓、脾脏和心脏中有人源性β2微球蛋白阳性细胞和hCD55,hCD59抗原存在,外周血中hCD45+细胞的比率为(6.69±4.51)%.选择hCD45/SSC设门时,hCD45+细胞区域中hCD55和hCD59阳性细胞占门内细胞数的(53.69±18.23)%和(31.8±27.5)%,占全细胞总数的(2.0±1.32)%和(0.74±0.59)%,与全细胞区域内hCD55和hCD59阳性细胞百分率[(4.11±2.83)%和(2.82±1.38)%]相比,差异具有显著性意义(t=-2.7～-3.7,P＜0.05).③嵌合体组补体依赖性淋巴细胞毒性反应显著低于非嵌合体组[(20.85±15.03)%,(60.70±21.08)%,t=-3.924,P＜0.01].④嵌合体大鼠的淋巴细胞毒试验结果与外周血hCD55+细胞百分率呈负相关(r2=0.637,P＜0.05).结论人脐血造血细胞嵌合体大鼠的骨髓、外周血、脾脏和心脏有人源性细胞分布,嵌合体内异种补体调节蛋白的存在,可能是造血细胞嵌合体供者异种移植物免疫耐受的基础.     

猕猴造血嵌合体检测方法的建立与应用

在受体内检测到供体细胞嵌合是判断动物移植模型成功建立的关键。为了研究猕猴移植模型中的造血细胞嵌合状态，本研究利用多聚酶链反应（PCR）扩增猕猴Y特异性序列，建立检测性别不同供受者猕猴移植模型嵌合体的方法；用体外雄性、雌性DNA混合稀释实验研究该方法的敏感性；用染色体分析法验证该方法的准确性，并对1例异基因外周血造血干细胞移植的猕猴和1例间充质干细胞（MSC）异体输注的猕猴进行嵌舍监测。结果表明：雄性猕猴DNA扩增产物长度为176bp，雌性无扩增产物，敏感性达0．05％（雄性／雌性DNA比例）。对异基因外周血造血干细胞移植的猕猴，用Y特异性序列分析法和性别染色体检测法于移植后7及14天均检测到雄性供者嵌合。输注非亲缘雄性MSC的雌性猕猴，输注后1小时的外周血和30天的骨髓用本方法检出雄性供体嵌合．结果性别染色体检测未发现雄性供体嵌合。结论：采用PCR法扩增猕猴Y特异性序列检测猕猴移植模型嵌合体方法简便，样本需要量少，敏感性高。该法可用于猕猴各种异体器官移植和细胞输注实验的嵌合状态评价。     

建立人/猪造血嵌合体模型的初步探讨

本研究目的是利用免疫系统尚未成熟的胎猪和新生猪作为人脐血造血干细胞（HSC）的移植受者，建立人／猪造血嵌合体模型，初步探讨在猪体内扩增HSC的可行性。在无菌隔离器中，通过肌肉或脐静脉（剖子宫）给胎猪移植人脐血细胞，或在断脐前通过脐静脉给新生猪移植人脐血细胞，应用流式细胞术检测移植组猪外周血中人CD45^＋细胞。结果表明：移植后，受试猪生长发育与对照猪一致；移植后60天时，用流式细胞术在猪的外周血中检测到一定比例的人源细胞。结论：胎猪或新生猪能耐受一定量的人源抗原的植入，建立人／猪造血嵌合体模型是可行的。     

造血细胞嵌合体供者诱导异种移植物的免疫耐受

目的：探讨脐血造血细胞嵌合体动物作为异种组织、器官移植的供者，诱导异种移植物免疫耐受的机制。 方法：实验于2005-06／2006-01在解放军第一五九中心医院全军烧伤中心实验室完成。①采用人脐血单个核细胞经宫内胎鼠移植加新生鼠肝内注射的方法制作人脐血造血细胞嵌合体动物模型，非嵌合体对照以同法注入等量磷酸盐缓冲液。②周后利用免疫组织化学和流式细胞三色标记检测嵌合体大鼠体内人源性细胞和补体调节蛋白，并对hCD45／SSC设门时不同区域内hCD55和hCD59阳性细胞的百分率进行分析。③用补体依赖性淋巴细胞毒性反应评估嵌合体鼠异种移植免疫适应性。与非嵌合体鼠进行比较；并对嵌合体鼠补体依赖性淋巴细胞毒性反应和外周血补体调节蛋白地相关关系进行分析。 结果：①随机选择嵌合体大鼠14只。非嵌合体大鼠8只进行研究。②嵌合体鼠骨髓、脾脏和心脏中有人源性B2微球蛋白阳性细胞和hCD55，hCD59抗原存在，外周血中hCIM5。细胞的比率为（6．69&;#177;4．51）％。选择hCD45／SSC设门时，hCD45^＋细胞区域中hCD55和hCD59阳性细胞占门内细胞数的（53．69&;#177;18．23）％和（31．8&;#177;27．5）％，占全细胞总数的（2.0&;#177;32）％和（0．74&;#177;0．59）％，与全细胞区域内hCD55和hCD59阳性细胞百分率[（4．11&;#177;2．83）％和（2．82&;#177;1．38）%相比，差异具有显著性意义（t=-2．7～-3．7，P〈0．05）。③嵌合体组补体依赖性淋巴细胞毒性反应显著低于非嵌合体组[（20．85&;#177;15．03）％，（60．70&;#177;21．08）％，t=-3．924，P〈0．01]。④嵌合体大鼠的淋巴细胞毒试验结果与外周血hCD55＋细胞百分率呈负相关（r^2=0．637，P〈0．05）。 结论：人脐血造血细胞嵌合体大鼠的骨髓、外周血、脾脏和心脏有人源性细胞分布，嵌合体内异种补体调节蛋白的存在。可能是造血细胞嵌合体供者异种移植物免疫耐受的基础。     

异基因骨髓胸腺内输注对大鼠小肠移植受者外周血嵌合体影响

目的探讨供体特异性骨髓胸腺内输注大鼠小肠移植后受体大鼠外周血嵌合体动态变化及对急性排斥的影响。方法对18只大鼠进行了供体特异性骨髓细胞(DBMC)输注(试验组),同期18只单纯接受异基因小肠移植(对照组)。采用原位PCR与流式细胞仪相结合的PCR-Flow方法对18只DBMC输注大鼠和18只对照大鼠外周血进行嵌合体检测。结果实验组大鼠术后存活时间(中位数=52.28d,P<0.005)明显延长,病理结果显示排斥反应轻微。可诱导较稳定的移植耐受。移植后5d即有少量嵌合体产生,嵌合状态在15d内呈明显增长,而在15d后嵌合状态增加缓慢。结论胸腺内注射异基因大鼠骨髓细胞可诱导大鼠特异的移植耐受,而外周血嵌合体与耐受状态有明显的相关性。     

小鼠骨髓腔内输注人脐血造血干/祖细胞植活水平的观察

目的 探讨小鼠骨髓腔内输注能否增强人脐血造血干/祖细胞(HS/PC)异种移植的植活能力.方法 将不同数量(1×103、1×104、0.5×105、1×105、5×105)的人脐血CD34+细胞经尾静脉和骨髓腔途径移植入经亚致死剂量照射的NOD/SCID小鼠.于指定时间点处死小鼠,用PCR法检测人17号染色体α-微卫星特异性片段及用流式细胞术检测人源CD45+细胞,观察脐血CD34+细胞在移植小鼠左、右两侧胫骨和股骨及脾脏等部位的归巢及其长期植活能力.结果 异种移植后24h,经骨髓腔移植5×105 CD34+细胞的小鼠肝、脾、肺组织,外周血,左右两侧胫骨和股骨、骨髓细胞均表达人17号染色体α-卫星特异性片段.不同数量的人脐血CD34+细胞经骨髓腔途径移植入NOD/SCID小鼠后,8周时其植活良好(检测部位包括输注部位右侧胫骨,以及非输注部位右侧股骨、左侧胫骨、左侧股骨、脾脏及外周血).分别经尾静脉和骨髓腔两种途径输注同一来源的人脐血CD34+细胞1.0×105,8周时两组间人造血细胞植活水平分别为(44.063±20.095)%和(45.881±22.316)%,差异无统计学意义(P＜0.05);而将移植CD34+细胞数降至1.0×104时,则经骨髓腔途径输注的人脐血CD34+细胞小鼠植活水平(54.019±31.338)%显著优于尾静脉输注途径[(12.197±10.350)%,P＜0.01)];当CD34+细胞输注量降至1.0×103时,仅有骨髓腔内输注组小鼠能见到人脐血CD34+细胞植活,且植活部位通常为非输注部位骨骼.结论 小鼠骨髓腔内移植能够增强人脐血造血干/祖细胞的植活水平.     

免疫组织化学方法在人/山羊嵌合体人源细胞鉴定中的应用

目的在胎山羊宫内移植人造血干细胞(hHSC)获得人／山羊嵌合体基础上，应用免疫组织化学技术分析嵌合体实验山羊肝、肺和肾组织中人源细胞的生长及分化情况。方法对7头经荧光激活的细胞分选(FACS)、荧光原位杂交(FISH)和分子生物学方法鉴定为阳性的实验山羊，在出生后不同时间取其肝、肺和肾组织，制作石蜡切片，然后采用免疫组织化学的EnVision系统，用特异性人增殖期细胞核抗原(PCNA)单抗、人肝细胞特异性抗原(HSA)单抗及人β—2微球蛋白(β—2M)单抗鉴定这些组织中的人源细胞。结果7头实验山羊的肝组织中有一定比例的PCNA和HSA抗体阳性染色细胞，肺和肾组织内有PCNA及β—2M抗体阳性染色细胞，正常人的肝、肺和肾细胞也呈阳性染色，而非hHSC移植的正常山羊的肝、肺和肾组织中未见有阳性染色细胞。结论胎山羊宫内移植hHSC所形成的嵌合体的肝脏中有人源细胞存活，并检测到表达人肝细胞特异抗原的人肝样细胞。免疫组化鉴定的阳性结果与分子生物学等方法的鉴定结果相符。此外，在嵌合体山羊肺和肾组织中也发现有人源细胞。     

骨髓腔内输注人造血干／祖细胞促进NOD-SCID小鼠体内造血功能的恢复

本研究比较经骨髓腔内输注（intra—bone marrow infusion,iBMI）及静脉输注（intravenous infusion,iVI）人脐血（cord blood,CB）造血千／祖细胞（HS／PC）对NOD～SCID受鼠体内造血重建的影响。将纯化的CB CD34^＋细胞移植到受亚致死剂量照射的NOD—SCID受鼠体内。受鼠随机分为3组：①iBMI组：骨髓腔内输注CD34^＋细胞5×10^5／只;②iVl组：尾静脉输注CD34^＋细胞5×10^5／只;③阴性对照组：输注PBS缓冲液。于异种移植后第3、5及第8周通过流式细胞术、聚合酶链式反应、免疫组织化学及造血祖细胞集落分析的方法比较人造血系统各系细胞植入率,通过二次移植实验比较NOD—SCID受鼠体内人HS／PC长期造血重建能力。结果表明：移植后第8周,iB—MI组受鼠骨髓、外周血及脾脏中人CD45^＋细胞比例均显著高于iVI组（P〈0．05）;iBMI组及iVI组移植的HS／PC均具有多向分化能力;移植后第8周,iBMI组受鼠骨髓中CD45^＋CD19^＋细胞、CD45^＋CD33^＋细胞、CD45^＋CD56^＋细胞及CD45^＋CD34^＋细胞比例均显著高于iVI组（P〈0．05）,CD45^＋CD14^＋细胞及CD45^＋CD41a^＋细胞比例亦高于iVI组（P〉0．05）。iVI组及iBMI组长期存活受鼠的肝脏、脾脏、肺脏、外周血、骨髓细胞中均可检测到人17号染色体α-卫星特异性片段。应用免疫组织化学法在移植后第8周的iBMI组受鼠的脾脏、肝脏和肺脏中均可检出人CD45抗原的表达.iBMI组受鼠的骨髓细胞各系集落总数于移植后第8周显著高于iVI组（P〈0．05）。二次移植后第6周,iVI组及iBMI组受鼠的各组织脏器中均可检出人17号染色体α-卫星特异性片段的表达。结论：与iVI相比,经iBMI移植人CBCD34^＋细胞至NOD—SCID受鼠可以促进HS／PC的造血重建及多向分化,提高植入率。     

Phenotypic characterization and preclinical production of human lineage-negative cells for regenerative stem cell therapy

BACKGROUND: Regenerative stem cell therapy (SCT) is currently being tested in clinical trials. The ideal type and source of cells have not yet been defined. Lineage (Lin) depletion is an experimental procedure capable of enriching all recently recognized SC types with regenerative potency. This study was performed to define a practicable monoclonal antibody (MoAb) cocktail for Lin depletion and to test whether clinical-scale Lin depletion is possible. STUDY DESIGN AND METHODS: MoAbs (CD2/14/15/19/41/56/glycophorin A) were selected to mark seven mature hematopoietic lineages. Lin7-negative (Lin7NEG) cells were analyzed in peripheral blood (PB, n = 9), mobilized PB (MPB, n = 5), umbilical cord blood (UCB, n = 5), and marrow aspirates (BM, n = 4) by flow cytometry. Preclinical Lin depletion was tested with leukapheresis products from PB following good manufacturing practice (GMP) principles. RESULTS: Lin7NEG cells comprised 0.23 +/- 0.04, 0.27 +/- 0.03, 0.53 +/- 0.07, and 0.49 +/- 0.03 percent of PB, MPB, UCB, and BM, respectively. Basophils, CD34+, and dendritic cells constituted the major Lin7NEG subpopulations (84 +/- 2, 90 +/- 3, 40 +/- 3, and 80 +/- 3% in PB, MPB, UCB, and BM, respectively). Minor populations included CD7- and CD45- cells. Preclinical CD2/14/15/19/56 (Lin5) depletion after automated red blood cell and platelet reduction resulted in up to a 16.7-fold enrichment of CD34+ and CD34-/Lin5NEG cells. CONCLUSIONS: A seven-MoAb cocktail is sufficient to label more than 99 percent of nucleated cells in PB, MPB, UCB, and BM. Preclinical Lin depletion can be performed under GMP conditions from PB apheresis procedures.     

人急性B淋巴细胞白血病-NOD/SCID/IL2rγnull新生小鼠异种移植模型的建立

本研究旨在应用NOD/SCID/IL2rγnull新生小鼠建立人急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)的异种移植模型。NOD/SCID/IL2rγnull新生期(出生48 h之内)小鼠经亚致死剂量(100 cGy)137Cs全身照射后,由面静脉输注FACSAria流式细胞仪分选纯化的B-ALL患者骨髓CD3-CD4-CD8-CD34+CD19+细胞,于移植后8-12周用流式细胞术检测受鼠外周血、骨髓和脾脏中人源细胞的植入水平及其免疫表型,并通过HE染色评价人源B-ALL细胞在受鼠各组织器官中的迁移浸润能力。结果表明,在接受B-ALL患者CD34+CD19+细胞移植的受鼠外周血、骨髓和脾脏细胞中,不仅检测到了不同程度的人源B-ALL(huCD45+CD19+)细胞的植入〔(83.36±10.05)%,(93.88±5.05)%,(88.31±5.01)%〕,而且植入细胞具有与B-ALL患者相似的细胞形态和免疫表型特征。此外,人源B-ALL细胞广泛迁移浸润到受鼠的肝脏、肺脏、肾脏和脑等组织器官中。结论:NOD/SCID/IL2rγnull新生小鼠模型能够支持B-ALL患者CD34+CD19+细胞的高水平植入,是对人B-ALL进行体内功能性研究的新型异种移植模型。     

间充质干细胞与人脐血CD34+细胞共移植对NOD/SCID小鼠造血重建的影响

目的 观察间充质干细胞(MSC)与不同比例脐血CD34+细胞共移植对NOD/SCID小鼠造血重建的影响,明确MSC与脐血CD34+细胞共移植的最适数量.方法 给60Coγ射线照射的雌性NOD/SCID小鼠共移植人MSC和不同比例的脐血CD34+细胞,观察共移植后42 d内小鼠外周血白细胞和血小板变化,并于移植后42 d处死小鼠,用流式细胞术检测外周血、骨髓和脾脏人源细胞含量.结果 与单纯脐血CD34+细胞移植相比较:①脐血CD34+细胞与1、5和10倍数量的MSC共移植时,可明显减轻外周血白细胞和皿小板的下降幅度(P<0.01),提前1周使白细胞和血小板恢复至正常水平(P<0.05),三组间差异无统计学意义(P>0.05);②MSC与不同比例的脐血CD34+细胞共移植均可明显提高外周血、骨髓和脾脏造血细胞植入率.比例为10:1时,外周血、骨髓和脾脏中的人源细胞(huCD45+细胞)含量分别增加了(2.8±0.6)倍、(3.5±0.9)倍和(5.2±0.6)倍,增加倍数差异均有统计学意义(P<0.01),达到了最佳的植入效果.结论 脐血CD34+细胞与10倍数量的MSC共移植可达到最佳的促进造血重建作用.     

人脐血细胞在SCID小鼠体内生长特性的研究

本实验将人脐血和骨髓单个核细胞,分别经腹腔输入C.B-17SCID小鼠体内,动态观察了受体内人CD3抗原表达及增殖能力。结果输入脐血或骨髓单个核细胞后,受体内均有逐渐增加的人CD3细胞(分别从2.0％、1.5％增至6.8％、5.4％),且脐血组高于骨髓组。接种后60d,二组实验小鼠骨髓CFU-GM产率明显高于对照组(P<0.01),脐血组高于骨髓组(P<0.05)。在60d时受体小鼠外周血、骨髓、肝、脾、肺组织和骨髓CFU-GM集落,用PCR方法检测出人Y染色体特异DNA片段。结果表明,输注人脐血或骨髓细胞到SCID小鼠腹腔后,可在体内长期生长且具有增殖能力。这种模型的建立为今后造血细胞体内研究提供了一种良好途径,也进一步以动物实验证实脐血造血干/祖细胞具有不同于骨髓造血细胞的生物学特性。     

Human umbilical cord blood stem cells infusion in spinal cord injury: engraftment and beneficial influence on behavior

The use of human umbilical cord blood (hUCB)--a rich source of nonembryonic or adult stem cells--has recently been reported to ameliorate behavioral consequences of stroke. In this study, we tested whether human cord blood leukocytes also ameliorate behavioral impairments of spinal cord injury. Rats were divided into five groups: (1) laminectomy (without spinal cord injury) only; (2) laminectomy + cord blood infusion; (3) spinal cord injury + cord blood infused 1 day post injury; (4) spinal cord injury + cord blood infused 5 days post injury; and (5) spinal cord injury only. Spinal cord injury was induced by compressing the spinal cord for 1 min with an aneurysm clip calibrated to a closing pressure of 55 g. Open-field behavior was assessed 1, 2, and 3 weeks after intravenous injection of prelabeled human cord blood cells. Open-field test scores of spinal cord injured rats treated with human cord blood at 5 days were significantly improved as compared to scores of rats similarly injured but treated at day 1 as well as the otherwise untreated injured group. The results suggest that cord blood stem cells are beneficial in reversing the behavioral effects of spinal cord injury, even when infused 5 days after injury. Human cord blood-derived cells were observed in injured areas, but not in noninjured areas, of rat spinal cords, and were never seen in corresponding areas of spinal cord of noninjured animals. The results are consistent with the hypothesis that cord blood-derived stem cells migrate to and participate in the healing of neurological defects caused by traumatic assault.     

苯丁酸钠联合5-氮杂脱氧胞苷抑制Kasumi-1细胞裸鼠移植瘤的生长

目的　探讨组蛋白脱乙酰化酶 (HDAC)抑制剂苯丁酸钠 (PB)联合 5 氮杂脱氧胞苷 (5 Aza CdR)对t(8;2 1)急性髓系白血病裸鼠移植瘤模型的抑瘤活性与作用机制。方法　用Kasumi 1细胞皮下接种的方法建立t(8;2 1)急性髓系白血病裸鼠移植瘤模型 ;观察裸鼠的致瘤潜伏期、PB预处理Kasumi 1细胞的致瘤性改变 ,以及PB和 5 Aza CdR腹腔注射对移植瘤生长的抑制作用。流式细胞术检测细胞分化抗原和细胞周期 ,末端脱氧核糖核酸转移酶介导的dUTP原位缺口末端标记 (TUNEL)检测瘤组织凋亡 ,免疫组织化学染色检测血管新生。结果　切脾和不切脾裸鼠接种Kasumi 1细胞后致瘤潜伏期分别为 17～ 2 3d和 4 0～ 5 0d ,瘤细胞不转移 ,仍检测出t(8;2 1)和AML1 ETO融合基因。接种PB预处理Kasumi 1细胞的裸鼠未见成瘤。PB、5 Aza CdR单独或联合裸鼠体内用药后 ,移植瘤生长抑制率分别为 4 9.0 7%、2 5 .6 9%和 87.4 6 % (P <0 .0 5 ) ,凋亡细胞指数分别为 (2 .2 5± 0 .85 ) %、(1.32± 0 .6 8) %和 (5 .4 1± 1.5 6 ) % (P <0 .0 5 ) ,微血管密度 (MVD)分别为 2 1.6 9± 6 .2 5 ,2 8.34± 4 .2 4和 9.4 8± 3.2 1(P <0 .0 1) ,与对照组相比有显著性差异 (P值均 <0 .0 5 )。PB腹腔注射后移植瘤细胞CD11b、CD13表达增高 [(12 .0 8±     

Increased risk of lethal graft-versus-host disease-like syndrome after transplantation into NOD/SCID mice of human mobilized peripheral blood stem cells, as compared to bone marrow or cord blood

We tested the ability of human cells from different hematopoietic tissues to generate graft versus host disease-like syndrome (GVHD) in sublethally irradiated non-obese diabetic/severe combined immunodeficient (NOD/SCID) mice. Tissue sources of human hematopoietic cells were: (1) bone marrow (BM), (2) nonmobilized peripheral blood (PB), (3) mobilized peripheral blood stem-progenitor cells (PBSC), and (4) cord blood (CB). To avoid interindividual donor variation, part of this study was done using BM, PB, and PBSC donated by a single healthy adult volunteer. A total of 179 NOD/SCID mice received graded human hematopoietic cell doses [5-500 x 10(6) mononuclear cells (MNC), containing 2-325 x 10(6) CD3(+) T cells, per mouse] from individual donors. Mice were observed for the development of GVHD and sacrificed 60 days after transplantation (earlier if ill). Mice were analyzed quantitatively by flow cytometry for human hematopoietic cell types and histologically, especially for human T lymphocytes infiltrating BM. No mouse transplanted with the tested doses of human CB or BM cells developed GVHD (experimentally defined as >10% human T lymphocytes infiltrating the mouse BM). For PB and PBSC, the frequencies of death, death with GVHD, and GVHD were directly related to the dose and source of human cells. Because PB cells contaminate harvested BM, the results from infused BM and PB were next combined for further analysis (BM/PB). The relative risks (hazard ratios estimated from the proportional hazards model) for death with GVHD, for each 10 human T cell dose increase, were 1.15 for BM/PB (p < 0.0001) and 1.47 for PBSC (p < 0.0001). In this in vivo xenogeneic model, the average T cell from human PBSC generated GVHD more potently than did the average T cell from human BM/PB, and the average CB T cell had a much lower GVHD potential. These results suggest that the potential for clinical GVHD from an HLA-disparate donor graft is likely to be quantitatively dependent both on the total number of T lymphocytes in the donor graft and the tissue source of the graft. Quantitative criteria for optimal T cell content of allogeneic donor hematopoietic grafts from different sources are discussed.     

人脐血间充质干细胞尾静脉移植治疗扩张型心肌病

背景：体外研究表明人脐血间充质干细胞可分化为自律性跳动的心肌细胞,而经静脉移植人脐血间充质干细胞治疗扩张型心肌病心力衰竭的报道较少。目的：探讨经尾静脉移植人脐血间充质干细胞对扩张型心肌病大鼠心肌结构、心功能的影响。方法：Wistar大鼠通过腹腔注射阿霉素诱导扩张型心肌病模型,扩张型心肌病实验组于造模后8周经尾静脉移植人脐血间充质干细胞,扩张型心肌病对照组注射等量DMEM培养基。健康对照组不造模,于相同时间点注射等体积的生理盐水。结果与结论：与健康对照组相比,扩张型心肌病组心功能明显受损,且扩张型心肌病实验组受损较扩张型心肌病对照组轻;移植的细胞有肌钙蛋白T的表达。结果提示人脐血间充质干细胞移植能促进扩张型心肌病大鼠心功能恢复,使心肌组织病变减轻。