日本血吸虫重组32kD抗原的纯化和诊断应用

用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结合电渗洗脱的方法分离、纯化日本血吸虫重组３２ｋＤ抗原（ｒＳｊ３２）；用酶联免疫印迹技术（ＥＩＴＢ）分析纯化抗原的免疫活性。用纯化抗原、日本血吸虫成虫抗原（ＡＷＡ）和可溶性虫卵抗原（ＳＥＡ）分别检测慢性血吸虫病人、肺吸虫病人、肝吸虫病人、钩虫病人和健康人血清抗体。结果表明：纯化的ｒＳｊ３２分子量为３７ｋＤ，有较好的免疫活性；用其检测日本血吸虫病的敏感性和特异性与虫源性抗原（ＡＷＡ和ＳＥＡ）无显著性差异。提示ｒＳｊ３２可代替ＡＷＡ和ＳＥＡ用于日本血吸虫病诊断     

日本血吸虫重组32kD抗原的纯化和诊断应用

用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结合电渗洗脱的方法分离，纯化日本血吸虫重组３２ｋＤ抗原；用酶联免疫印迹技术分析纯化抗原的免疫活性。用纯化抗原，日本血吸虫成虫抗原和可溶性虫卵抗原分别检测慢性血吸虫病人肺吸虫病，肝吸虫病人，钩虫和健康人血清抗体。     

应用日本血吸虫病患者血清特异性抗体亚类考核疗效

用纯化的日本血吸虫成虫３１／３２ＫＤ原建立的ＢＡ－ＥＬＩＳＡ系统检测慢性血吸虫病患者治疗前、后血清中的ＩｇＧ１，ＩｇＧ３和ＩｇＧ４抗体水平，同时用常规ＥＬＩＳＡ检测ＩｇＧ和ＩｇＭ特异抗体。结果表明：各类抗体均未见假阳性，亦未与肝吸虫病和肺吸虫病者血清出现交叉阳性。提示ＩｇＧ１和ＩｇＧ４抗体的敏感性和特异性高，具有诊断和疗效考核的价值。     

应用日本血吸虫病患者血清特异性抗体亚类考核疗效

用纯化的日本血吸虫成虫３１／３２ＫＤ抗原建立的ＢＡ－ＥＬＩＳＡ系统检测慢性血吸虫病患者治疗前、后血清中的ＩｇＧ１，ＩｇＧ３和ＩｇＧ４抗体水平；同时用常规ＥＬＩＳＡ检测ＩｇＧ和ＩｇＭ特异抗体。结果表明：各类抗体均未见假阳性，亦未与肝吸虫病和肺吸虫病患者血清出现交叉阳性。提示ＩｇＧ１和ＩｇＧ４抗体的敏感性和特异性高，具有诊断和疗效考核的价值。     

日本血吸虫31/32kDa抗体的检测及其在诊断中的作用

目的：探讨纯化日本血吸虫３１／３２３ｋＤａ抗原（Ｓｊ３１／３２）诊断的特异性、敏感性及疗效考核价值。方法：利用纯化Ｓｊ３１／３２与可深性虫卵抗原（ＳＥＡ）ＥＬＩＳＡ方法检测急、慢性日本血吸虫病患者血清。结果：急、慢性血吸虫病患者血清抗Ｓｊ３１／３２抗体检出率为１００％和９５％，与正常人、肝吸虫和肺吸虫病患者血清未出现交叉反应；抗ＳＥＡ抗体检出率为９７．４％和９０％，与正常人和肠道吸虫病患者有不同程     

免疫金银染色法对日本血吸虫31／32KD分子抗原的定位研究

应用免疫金银染色法（ＩＧＳＳ）和免疫酶染色法（ＩＥＳ）对日本血吸虫３ｌ／３２ＫＤ分子抗原进行了比较定位研究。结果证实了日本血吸虫３１／３２ＫＤ抗原是一种肠相关抗原，并进一步验证了常规制备的单特异抗血清用于抗原分析和来源定位的可行性。     

绿脓杆菌外毒素A抗原的制备与纯化

目的：制备绿脓杆菌外毒素Ａ（ＥＰＡ）抗原。方法：用胰酶酪蛋白大豆肉汤（ＴＳＢ），于３２℃水浴１２０次／ｍｉｎ振荡培养绿脓杆菌ＰＡ１０３株，其培养物经７０００ｒ／ｍｉｎ离心，取上清用７０％饱和硫酸铵沉淀，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱层析，ＤＥＡＥ－５２（ＤＥ－５２）柱层析，羟基磷灰石柱层析制备ＰＥＡ。结果：纯化的ＰＥＡ经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）为一条带，分子量为Ｍｒ（６６     

鼠醛糖还原酶的分离纯化和性质分析

利用离心、盐析及多步层析法将鼠睾丸醛糖还原酶（ａｌｄｏｓｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＡＲ）分离纯化，纯化的酶经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴定示一单一蛋白条带，ＡＲ分子量为３９０００±１０００，ＡＲ底物特异性，按１／Ｋｍ大小依次排列为：Ｐ－硝基苯醛，ＤＬ－甘油醛，Ｄ－葡萄糖醛酸，Ｄ－木糖，Ｄ－半乳糖，Ｄ－葡萄糖。     

醛糖还原酶的分离纯化和性质分析

利用离心，盐析及ＤＥＡＥ－纤维素，羟基磷灰石，葡聚糖－Ｇ１００多步层析法将牛睾丸ＡＲ分离纯化，醛糖还原酶（ａｌｄｏｓｅｒｅｄｕｃａｓｅ，ＡＲ），并利用体外酶动力学方法测定其底物特异性，为寻长有效的醛糖还原酶抑制剂提供线索，结果；纯化的酶经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴定示一单一蛋白条带，牛睾丸ＡＲ，Ｍｒ约为（４００００±１０００）ｕ，ＡＲ底物特异性，按１／Ｋｍ大小依次排列为：Ｐ－硝基苯醛；ＤＬ－甘油醛，Ｄ     

日本血吸虫肝门型童虫蛋白质SDS—聚丙烯酰胺凝电泳的分析

本文采用十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）对日本血吸虫肝门型童虫蛋白组分进行了分析，结果显示，１４ｄ肝门型雌雄童虫出现３３条蛋白区带，主带８条，２１ｄ肝门型雌雄童虫出现３４例蛋白区带，主带８条，２１ｄ雄性童虫出现３１条蛋白区带，主带７条，各组童虫与成虫比较，有２７～２８条共同蛋白区带，提示日本血吸虫不同时期的肝门型童虫与成虫的蛋白组分在质与量方面虽然存在着某些差异，但总体上两者     

佐剂对日本血吸虫31／32kd蛋白保护性免疫力的影响

本实验用纯化的日本血吸虫３１／３２ｋｄ蛋白（Ｓｊ３１／３２）辅以ｐｏｌｙａｌｐｈａｏｉｅｆｉｎ（ＰＡＯ）佐剂免疫小鼠，同时比较了Ｓｊ３１／３２辅以福氏完全佐剂（ＦＣＡ）对小鼠保护性免疫力的影响。Ｓｊ３１／３２＋ＰＡＯ组小鼠减虫率为４３．１７％，肝减卵率为６７．０２％，Ｓｊ３１／３２＋ＦＣＡ组小鼠减虫率为２８．７４％，肝减卵率为６４．２４％，Ｓｊ３１／３２组小鼠减虫率为２６．９９％，肝减卵率为５１．     

BCG 65KD热休克蛋白的纯化

目的：研究卡介苗（ＢＣＧ）６５ＫＤ热休克蛋白的提纯方法。方法：ＢＣＧ经３７℃恒温振荡培养两周，４２℃热休克处理２ｈ，培养液经离心、抽滤、盐析沉淀、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分离、电泳洗脱等步骤纯化。结果：提纯产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，其电泳区带在６５ＫＤ位置，经抑制试验表明具有较高抗原活性。结论：流程方法简单、实用，有助于对ＩＤＤＭ的诊断及其深入研究。     

可溶性日本血吸虫成虫抗原及可溶性蚯蚓抗原对小鼠胸腺细胞亚群的影响

血吸虫疫苗的研究与发展是血吸虫病防治的热点［１］。本实验观察了感染日本血吸虫或以可溶性日本血吸虫成虫抗原（ＳＷＡＰ）及可溶性蚯蚓抗原（ＳＥＷＰ）免疫后小鼠胸腺细胞总数、胸腺活性细胞率、ＣＤ＋４细胞百分率、ＣＤ＋８细胞百分率的变化，现予以报道。１　材料与方法１．１　ＳＥＷＰ及ＳＷＡＰ的制备：蚯蚓为参环毛蚓（ｐｈｅｒｅｔｉｍａａｓｐｅｒｉｇｌｌｕｍ），血吸虫成虫取自人工感染兔，其抗原制备具体方法见文献［２］。所得ＳＥＷＰ蛋白含量为０．１９８ｍｇ／ｍｌ，ＳＷＡＰ蛋白含量为０．１９５ｍｇ／ｍｌ。１．２　…     

旋毛虫肌肉期幼虫膜抗原的制备及应用价值的初步探讨

用非离子去垢剂ＴｒｉｔｏｎＸ－１１４分离制备旋毛虫肌肉期幼虫膜抗原，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、铵银染色后显示１４种组分，分子量在９９～２８ｋｄ之间，主带分子量为９４、９０、４７、３２及２８ｋｄ。间接ＥＬＩＳＡ表明该抗原与血吸虫、犬弓首线虫、肝吸虫及斯氏肺吸虫感染兔血清不发生交叉反应。经４８小时培养获得的旋毛虫肌肉期幼虫的排泄分泌抗原和用溴化十六烷基三甲胺剥脱的旋毛虫肌肉期幼虫表面抗原与血吸虫和肝吸虫感染兔血清均发生交叉反应。     

双胸蚓纤溶酶Ⅲ的分离纯化及其性质研究

用硫酸铵分段盐析，ＤＥＡＥ－纤维素，ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５柱层析的方法，从双胸蚓组织中分离纯化出一种纤溶酶，经聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）显示一条区带，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其分子量为２２．１ＫＤ     

日本血吸虫肝门型童虫蛋白质SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳的分析

本文采用十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）对日本血吸虫肝门型童虫蛋白组分进行了分析，结果显示：１４ｄ肝门型雌雄童虫出现３３条蛋白区带，主带８条；２１ｄ肝门型雌雄童虫出现３４条蛋白区带，主带８条；２１ｄ雄性童虫出现３１条蛋白区带，主带７条。各组童虫与成虫比较，有２７～２８茶共同蛋白区带，提示日本血吸虫不同时期的肝门型童虫与成虫的蛋白组分在质与量方面虽然存在着某些差异，但总体上两者的蛋白组分有很大的相似性。     

掌叶半夏凝集素A的分离纯化及分析

首次从中草药堂叶半夏（Ｐｔｎｅｌｌｉａ ｐｅｄａｔｉｓｅｃｔａ Ｓｅｈｏｔｔ）中通过Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００分子筛层析、ＤＥ－３２离子交换层析和制备电泳分离纯化出一种对兔红血球有血凝生的凝信要素，称之为掌叶半夏凝集素Ａ（ｐｉｎｅｌｌｉａ ｐｅｄｔａｉｓｅｃｔａ ｌｅｃｔｉｎ Ａ，ＰＰＬ－Ａ）ｄ ＰＡＧＥ＇ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦电泳上ＰＰＬ－Ａ均显示出一条蛋白质着色带。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定     

单克隆抗体双夹心ELISA检测血吸虫循环抗原对抗血吸虫药…

应用日本务虫抗３１／３２ＫＤ单克隆抗体双夹关免疫吸附试验检测血吸虫循环抗原，用于城市急性血吸虫病经吡喹酮治疗５年后无再次感染患者的疗效考核，阳性率为１２．２％。与快速法ＥＬＩＳＡ检测循环抗原的符合率为９６．３４％。与常用检测抗体的ＩＨＡ、ＥＬＩＳＡ法平行对照，阳性率基本一致     

SDS—PAGE鉴定霍乱弧菌不同菌株外膜蛋白成分

霍乱弧菌５６９Ｂ等菌株用ＥＤＴＡ－溶菌酶法提取其外膜蛋白，以高速离心法纯化并以聚丙烯酰胺凝胶电泳分离其主要蛋白区带。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及免疫电泳等方法鉴定，表明不同菌株的外膜蛋白均显示一主要区带。其分子量为２５ＫＤａ，免疫双扩试验表明不同霍乱弧菌菌株的外膜上都有一个共同的蛋白抗原。     

日本血吸虫成虫31／32KD蛋白的纯化及其免疫化学特性

本支采用制备型SDS-PAGE和电渗析法分离纯化日本血吸虫成虫31／32KD蛋白，分离纯化的血吸虫31／32KID蛋白经SDS--PAGE、EITB和ELlSA检测证明纯度高，活性不量影响．鉴于血吸虫成虫31／32KD蛋白是一种主要血清学抗原，它的分离纯化为改进和标化血吸虫病的诊断及分子疫苗的研制提供了条件。