酶解牦牛乳清蛋白制备ACE抑制肽的工艺研究

目的:乳清蛋白是牦牛乳中的重要成分,其经酶解制备的乳源性ACE抑制肽以安全性高和无副作用等优点在高血压的防治中具有重要的研究和应用价值.本实验研究利用乳清蛋白制备ACE抑制肽的工艺技术.方法:本实验对从耗牛乳中提取的乳清蛋白,分别根据碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶及胃蛋白酶各自的最适pH及温度,采用酶解法制备ACE抑制肽,以ACE抑制活性为指标初步筛选出最佳水解酶,并探究最佳酶水解乳清蛋白制备ACE抑制肽的最佳反应条件.结果:碱性蛋白酶为制备ACE抑制肽的最佳水解酶,英最佳反应条件为:pH8.5、温度60℃、E/S为5.5％、水解6h.制备的ACE抑制肽抑制率可达到85.2％.结论:碱性蛋白酶为最佳酶选,用碱性蛋白酶制备的ACE抑制肽体外抑制率较高,符合工业生产要求.这为进一步优化乳清蛋白降血压肽的制备工艺提供依据.     

瑞士乳杆菌发酵制备牦牛乳酪蛋白源性降血压肽的工艺研究

目的:以牦牛乳源酪蛋白为原料,利用瑞士乳杆菌,对发酵法制备降血压肽的工艺进行初步探讨.方法:试验首先采用凝乳酶沉淀法从耗牛乳中提取酪蛋白,依据瑞士乳杆菌的发酵特点,按5％(体积比)接菌量进行发酵制备降血压肽.然后并以降血压肽对血管紧张素转换酶(ACE)的抑制率为指标,主要探讨了底物浓度、pH值、发酵时间三因素对瑞士乳杆菌发酵法制备降血压肽工艺的影响.结果:在接菌量为5％,其他三因素各设置五个水平进行工艺优化,最优工艺条件为:底物浓度4％、发酵pH值8.0、发酵时间16 h.此工艺条件下ACE抑制率可达约68％.结论:通过实验说明底物浓度、pH值、发酵时间等参数的控制对发酵酪蛋白制备抑制肤很重要,此试验数据为后续进一步完善制备降血 压肤的实验奠定了重要的基础.     

紫贻贝多糖酶法制备工艺研究

用木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶分别提取紫贻贝粗多糖,以及木瓜蛋白酶和中性蛋白酶复合酶提紫贻贝粗多糖,木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶复合酶提紫贻贝粗多糖。并分析研究加酶量、料液比、pH和温度对紫贻贝提取率的影响。结果显示:木瓜蛋白酶最佳加酶量1%,料液比1:15 g/m L,pH为7,温度为60℃。提取率为6.65%。中性蛋白酶最佳为加酶量2%,料液比1:15 g/m L,pH为7,温度为50℃,提取率为5.52%。碱性蛋白酶最佳加酶量为2%,料液比1:15 g/m L,pH为10,温度为50℃,提取率为6.89%。木瓜蛋白酶与中性蛋白酶两步联合酶提取最佳提取条件为加酶量1%,料液比1:20 g/m L,pH为7,温度为50℃,此条件下提取率为6.86%。木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶两步联合酶提最佳提取条件为加酶量1%,料液比1:20 g/m L,木瓜蛋白酶缓冲液pH为7,碱性蛋白酶缓冲液pH为10,温度为50℃,此条件下提取率为7.27%。     

CPP生产副产物--CNPP酶膜耦合法 制备ACE抑制肽研究

采用酶解与膜分离耦合的方法,以酶膜耦合法生产酪蛋白非磷酸肽(CPP)得到的副产物——酪蛋白非磷酸肽(CNPP)为原料制备高活性ACE抑制肽.用Protease N、胰蛋白酶、Fla-vourzyme、AS1398、酸性蛋白酶等几种蛋白酶对经过酶膜耦合制备的酪蛋白非磷酸肽进行二次酶解,同时与1 K膜分离耦合,然后对二次酶膜耦合所得产物的ACE抑制活性进行比较.结果表明,Protease N比其他几种蛋白酶更适合用于酪蛋白非磷酸肽制备高活性的ACE抑制肽,其产物的蛋白质量浓度为1 g/L时的ACE抑制率达到55.60%.     

血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽的酶法制备

以扇贝裙边的酶解产物——蛋白多肽对ACE活性的抑制率作为控制水解程度的指标,确定制备ACE活性抑制肽的最佳酶种及酶解工艺技术条件.通过胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合风味酶、枯草杆菌蛋白酶5种酶酶解扇贝裙边得到的蛋白多肽对ACE抑制能力的比较发现,5种酶在不同酶解时间所得到的酶解蛋白多肽都具有一定的ACE抑制能力,其中胃蛋白酶酶解蛋白多肽的ACE抑制率最高,为91.33%;再经L9(3)4正交实验对胃蛋白酶酶解工艺条件进行优化,确定酶解反应最佳条件是酶量400 U.g-底1物,pH 2.5,温度32℃,底物浓度(原料∶水)1∶2,酶解时间3 h;试验结果还表明,单酶(胃蛋白酶)的酶解蛋白多肽比复合酶(复合风味酶)和双酶(胃蛋白酶 木瓜蛋白酶)的酶解蛋白多肽对ACE活性的抑制能力都强.     

花生分离蛋白复合酶水解工艺优化研究

探讨了超声波辅助前处理对花生分离蛋白复合酶解的影响,比较了碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶等六种蛋白酶解物清除DPPH自由基的效果,确定碱性蛋白酶和胰蛋白酶较佳的复合比例为8∶2.在此基础上,开展响应面优化试验,以DPPH自由基清除率和水解度为指标,探讨复合酶与风味蛋白酶酶解的较佳工艺参数,并分析DPPH清除率和水解度相关性.实验结果表明,复合蛋白酶制备花生分离蛋白抗氧化肽的较佳酶解工艺为pH 8.5,温度49.36℃,酶添加量(E/S,质量分数m/m)3.40%,酶解时间203.59 min.     

响应面法优化酶解鱼鳞制备ACE抑制肽的研究

鱼鳞是鱼类加工的下脚料之一,含有丰富的蛋白质和矿质元素等营养物质,是非常好的可利用生物资源. 文中研究了碱性蛋白酶酶解鱼鳞制备ACE抑制肽的优化工艺. 以ACE抑制率为指标,在酶解温度、酶解pH、加酶量、底物质量浓度等条件下先进行单因素实验,在此基础上运用响应面法优化碱性蛋白酶酶解鱼鳞制备ACE抑制肽的工艺条件. 结果表明:在加酶量61%(约12 000 U/g)、pH 89、温度547 ℃的条件下酶解2 h,ACE抑制率理论值为8536%,实际酶解物的ACE抑制率为862%,相对误差为091%.     

碱性蛋白酶水解豆粕制备ACE抑制肽水解条件的优化

为了寻求高效的血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽制备方法,在实验室条件下利用碱性蛋白酶水解豆粕生产ACE抑制肽,并采用单因素和多因素实验相结合的方法对酶解条件进行优化.结果发现,适当延长碱性蛋白酶的水解时间和提高p H,可大幅度提高ACE抑制肽的抑制活性.单因素和多因素实验综合结果显示,碱性蛋白酶水解豆粕产生ACE抑制肽的适宜水解条件为:p H为9.0,水解温度为50℃,水解时间为4 h,蛋白酶质量分数(酶质量/底物质量)为2.0%,底物质量浓度为40 g/L,在此条件下制备的ACE抑制肽的抑制率可达到97.97%.     

酶解法制备鱿鱼蛋白抗氧化肽工艺优化

以酶解液的还原力为抗氧化性指标,测定木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶、碱性蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶7种蛋白酶的鱿鱼蛋白酶解液抗氧化性.实验结果表明7种蛋白酶在相同加入酶量(酶活力U/底物g)条件下,中性蛋白酶在酶解1 h、3 h、5 h所得的酶解液还原力均最高.以中性蛋白酶为实验用酶,进行三因素二次正交旋转组合实验优化出酶解法制备鱿鱼蛋白抗氧化肽的最佳酶解条件为酶加入量4 841 U/g、pH 5.3、酶解时间1.3 h.所得酶解液定性检测结果为具有抗氧化性的肽类混合物,有进一步开发应用价值.     

超声辅助酶解法制备兔肉抗氧化肽工艺

以搅碎的兔肉末为原料，以超声辅助酶解制备抗氧化肽，对其抗氧化活性进行评价，发现抗氧化活性较好.比较不同酶制备的抗氧化肽的DPPH自由基清除率，从胰蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶中筛选出最佳用酶，利用单因素实验和响应面法优化了兔肉酶解的工艺条件.结果表明，酶解效果最好的是胰蛋白酶，在超声时间22.5 min,超声温度37℃,超声功率330 W的条件下酶解得到的抗氧化肽DPPH自由基清除率最好，为81.17%,与响应面优化实验回归模型的预测值基本一致；在此基础上制备兔肉抗氧化肽，对酶解液的ABTS、羟基自由基和超氧阴离子清除率进行检测，值分别为44.03%、94.69%和34.32%,均大于未酶解液.该研究可以为制备兔肉抗氧化肽方面提供理论依据和数据支持.     

海参内脏酶解制备海参肽工艺

以蛋白水解度和酶解液中海参肽相对分子质量的分布作为指标,考察不同蛋白酶的酶解效果,筛选水解海参内脏的最适合蛋白酶,并通过单因素实验和正交实验优化酶解工艺.实验结果表明:胰蛋白酶的水解效果最佳,可用于水解海参内脏制备海参肽;在底物质量分数为1.0%,加酶量为0.375 1 mkat·g^-1,pH值为8.0,酶解温度为37 ℃,水解时间为5 h的最优酶解条件下,海参内脏的水解度可达到48.90%,酶解液中的多肽(2 000~5 000 u)质量分数为52.68%,寡肽(含氨基酸)(≤2 000 u)质量分数为47.25%.     

用响应面法优化酶水解法制备葵花盘小分子肽

为提取并利用葵花盘中具有降尿酸和溶解痛风石作用的小分子肽, 以小分子肽得率为指标, 通过酶水解法优化提取条件, 确定碱性蛋白酶为最理想的酶. 通过单因素实验考察料液比、 时间、 温度、 pH值和加酶量对小分子肽得率的影响, 利用响应面Box-Behnken实验, 优化酶水解法提取葵花盘小分子肽的工艺, 得到其最佳工艺条件为： 加入碱性蛋白酶, m(料)∶V(液)=1∶15, 酶的用量为2%, pH=9.0, 温度为55 ℃, 时间为2 h, 葵花盘小分子肽的得率最高为(42.41±0.01)%.     

用响应面法优化酶水解法制备葵花盘小分子肽

为提取并利用葵花盘中具有降尿酸和溶解痛风石作用的小分子肽, 以小分子肽得率为指标, 通过酶水解法优化提取条件, 确定碱性蛋白酶为最理想的酶. 通过单因素实验考察料液比、 时间、 温度、 pH值和加酶量对小分子肽得率的影响, 利用响应面Box-Behnken实验, 优化酶水解法提取葵花盘小分子肽的工艺, 得到其最佳工艺条件为： 加入碱性蛋白酶, m(料)∶V(液)=1∶15, 酶的用量为2%, pH=9.0, 温度为55 ℃, 时间为2 h, 葵花盘小分子肽的得率最高为(42.41±0.01)%.     

复酶水解鹅血工艺条件的优化

研究了中性蛋白酶和木瓜蛋白酶对鹅血液的水解作用,并分析了酶用量、温度、时间、pH值等因素对鹅血酶水解的影响。结果表明,双酶水解效果较好,确定了其最适宜的酶解条件：中性蛋白酶,酶底物浓度比（E／S）为4000U／g,pH值为7．0,温度为55℃,时间为5h;木瓜蛋白酶,酶底物浓度比（E／S）为6000U／g,pH值为7．5,温度为50℃,时间为4h。     

碱性蛋白酶交联酶晶体的制备及稳定性

研究了用透析平衡法制备碱性蛋白酶晶体的过程,在硫酸铵饱和度为２５％的条件下获得了符合要求的碱性蛋白酶晶体,然后采用戊二醛进行交联,制备出了交联酶晶体,并对其在高酸碱度、高温、有机溶剂或有机溶液中的稳定性进行了研究．实验结果表明,交联酶晶体有较高的稳定性．     

牛乳酪蛋白源ACE抑制肽的稳定性和毒理特性研究

研究目的：创新要点：研究方法：重要结论：酸碱热处理对牛乳酪蛋白源血管紧张素转化酶（ACE）抑制肽的抑制活性、游离氨基、色泽及其毒理特性的影响。在pn9.0-12．0的热处理条件下,牛乳酪蛋白源ACE抑制肽的抑制活性降低,色泽加深。热处理后的ACE抑制肽对Caco-2细胞和ECV-304细胞没有毒性作用。以ACE抑制活性、游离氨基、色差值和细胞存活率为检测指标,研究了酸碱热处理对ACE抑制肽的稳定性和毒理特性影响。高温和碱性热处理能破坏酪蛋白源ACE抑制肽的稳定性（见图1～3）。     

纳米材料MCM-41的制备及其固定化酶的研究

在使用扩孔剂间三甲苯的条件下,对新型大孔纳米材料MCM-41进行了制备,并对该材料作为载体固定化木瓜蛋白酶进行了研究。X射线衍射和氮气吸附表征结果表明：材料内部孔的排列高度有序且孔径集中分布在6.3nm附近。用该材料作为载体固定化木瓜蛋白酶的结果表明：在给酶量、戊二醛质量分数、时间、温度和pH值分别为20mg/g,0.75%,2h,10～20℃和7.0的条件下,固定化酶的回收率为55%左右,效果最佳。