抗AFP抗体双标记法及其产物特性测定

采用氯胺丁改良法和过碘酸钠氧化法，进行抗ＡＦＰ多抗或单抗直接双标记＾１３１Ｉ和ＭＭＣ，地Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ５０柱并以ｒ计数仪与紫外分光光度仪同步监测分离，收集标记物。经测定多抗和单抗双标记物，标记比分别为７０．３ＭＢｑ：ｍｇ：２．２μｇｔ和５９．２ＭＢｑ：ｍｇ．：１．８μｇ；放化纯度９８％和９７％；     

三种荧光标记法对寡核苷酸芯片杂交信号的影响

目的 观察标记引物法、随机渗入标记法、末端转移标记法三种荧光标记法对寡核苷酸芯片杂交信号的影响。方法 将淋球菌gyrA基因91位密码子突变型探针倍比稀释成终浓度为1000／μmol／L～0．25μmol／L的梯度浓度点样并制作寡核苷酸芯片，PCR扩增荧光标记包含gyrA基因突变的目的DNA片段，与芯片杂交，分别记录三种标记方法的杂交信号强度。结果 标记引物法的荧光信号最强，随机渗入标记法的荧光信号强度次之，其Cy5—duTP最佳浓度为0．1mmol／L(dTTP：Cy5—dUTP=10：1)，末端转移标记法反应时间在60min和120min时荧光信号值相近。点样的探针浓度达到31μmol／L，以上，荧光信号为平台期。结论 明确了三种荧光标记法对寡核苷酸芯片杂交信号的影响，有助于选择寡核苷酸芯片的荧光标记方法。     

蛋白质和抗体微阵列技术进展

为了进行复杂样品的特征分析,人们必须重视对蛋白质组的特征研究。蛋白质和抗体微阵列技术作为二维凝胶电泳 质谱技术的补充,是筛选复杂蛋白质样品最适宜的两项技术。然而,蛋白质和抗体微阵列技术还必须克服目前的局限性以获得成功。本文对这些新技术进行了介绍并强调了它们目前的发展前景和缺点。     

硅酸修饰的抗体微阵列玻片对红细胞的血型抗体吸附能力的研究

目的探讨用硅酸修饰的微阵列玻璃基片,对红细胞血型抗体的吸附能力.方法将玻片用硅酸钠溶液处理,经酸化以形成硅酸,然后用抗红细胞血型抗体(抗-A、抗-B、抗-AB、抗-D)包被,以对应红细胞作反应指示物,以检测经硅酸修饰后的玻片对红细胞血型抗体的吸附能力,以及血型抗体的免疫活性.结果抗红细胞血型抗体可以牢固的结合在硅酸修饰过的玻片上,并且可以与其对应的红细胞抗原进行免疫学反应.结论经硅酸修饰的玻片对血型抗体有很高的结合效力,同时抗体仍保持很高的免疫活性,因而可进一步充当蛋白质抗体微阵列基片.     

直接标记的抗体芯片筛选血清疾病候选标志物的研究

目的应用血清样品直接标记和抗体芯片方法进行抗原和疾病标志物的筛选。方法分别取正常、糖尿病和甲亢患者的血清,采用FMB的ASB600抗体芯片的样品及相关的标记试剂盒,对3μl血清样本进行直接生物素标记。抗体芯片孵育后,用链霉亲合素标记的Cy3荧光显色芯片,经扫描仪检测杂交信号,分析比较芯片内、芯片之间的信号结果重复性,初步筛选疾病样本中与正常样本有差别的蛋白标志物。结果芯片内的两点重复性相关系数R2达到0.95～0.99,芯片重复实验间的相关系数R2达到0.98。对不同样本间的芯片信号进行比较,可以发现与疾病相关的新蛋白分子。结论本研究中使用的ASB600抗体芯片和直接标记荧光检测的实验方法可用于疾病相关的血清分子标志物的识别与寻找。     

DNA探针非同位素标记的研究进展

DNA探针技术对基础研究及临床各种传染病、遗传病、肿瘤等疾病的诊断越来越显示出其独有的优势.在使用的各种同位素中,Durrant等人发现35S标记的探针在分解性和敏感性方面优于3H和32P,而33P相似于35S,较35S又有反应背景干净的优点,只是曝光时间及半衰期较35S短[1].     

地高辛标记核酸探针的应用

本工作中以肿瘤多药耐受基因ＭＤＲ－１的ｃＤＮＡ的限制片段（５Ａ）为模板ＤＮＡ，把模板ＤＮＡ用随机引物法标记上地高辛标记的脱氧尿苷三磷酸ＤＩＧ－ｄＵＴＰ。将此地高辛标记的核酸探针与变性的同源质粒及部分头颈肿瘤组织ＲＮＡ进行点杂交后，用抗地高辛－碱性磷酸酶及其底物进行酶联免疫分析，探讨了应用这种非放射性地高辛标记的ＤＮＡ探针及其检测系统的敏感性以及应用价值。     

荧光标记法检测神经节细胞轴突再生

目的：检测神经节细胞轴突在坐骨神经移植到视网膜后的再生。方法：荧光染料粒兰施于移植坐骨神经逆行荧光标记后，在荧光显微镜下观察视网膜神经节细胞。结果：在移植坐骨神经的诱导下，视网膜神经节细胞受损的轴突可以再生长入到该移植段内。结论：荧光标记法对检测神经再生，是一种有价值的方法     

MAR法直接检测精子抗体565例分析

根据世界卫生组织(WHO)调查,育龄夫妇有15%存在不育问题.在诸多不孕因素中,由于体内存在抗精子抗体导致不育占10%～30%,抗精子抗体(AsAb)可通过多种机制影响生育过程[1].混合抗球蛋白反应试验(MAR)直接法是检测结合在精子表面的AsAb,作为WHO推荐为临床男性不育诊断中免疫性不育的检测方法,已在国内外生殖医学领域中推广应用.本文分析1998年3月至2000年12月我科检测的565例男性不育患者的精子结合抗体发生率以及精子结合抗体与自身血清精子抗体(BAsAb)、精浆精子抗体(SAsAb)以及其配偶BAsAb的关系.     

一种新的基因芯片检测荧光标记技术:通用引物U2联合标记法

目的报告一种新的基因芯片荧光标记技术:通用引物U2联合标记技术(universal primer U2 labeling ,UPL);比较UPL与随机引物等其他标记方法的效率和可重复性。方法流感病毒RNA用四种标记方法处理后与流感病毒寡核苷酸检测芯片杂交,用Spss10.0对杂交结果进行分析。结果UPL方法在标记物杂交的荧光强度、信噪比、探针真阳性率和可重复性等方面均高于随机引物逆转录掺入标记法,而与其他两种RD标记方法相当,但标记过程相对更加简单。结论UPL方法可用于基因芯片研究和应用。     

两种限制性标记方法提高基因芯片杂交结果的信噪比

目的研究采用荧光标记的通用引物扩增或在扩增中掺入荧光标记dNTP两种限制性荧光标记方法标记探针对提高表达谱基因芯片杂交结果信噪比的作用。方法酵母mRNA经常规逆转录标记方法及两种限制性标记方法进行标记,探针纯化后与酵母表达谱基因芯片进行杂交,在同等条件下进行杂交后清洗和芯片扫描检测。结果两种限制性标记方法与直接逆转录标记相比杂交结果背景低,信噪比及灵敏度高,其中以荧光标记的通用引物扩增效果最佳。结论采用限制性标记方法后杂交结果信噪比提高,有利于基因芯片技术的应用。     

限制性显示技术作为一种高密度长链寡核苷酸芯片样本标记方法的初步研究

目的 初步研究限制性显示技术(RD-PCR)作为一种高密度长链寡核苷酸芯片样本标记方法对芯片杂交信号的影响。方法 收集3个健康人外周血单核细胞,提取RNA后分为两组,采用RD-PCR进行样本双色(Cy3/Cy5)荧光标记,与3张Agilent60mer高密度(22K)人1B寡核苷酸芯片进行杂交。排除阴性和阳性对照信号值、Cy3和(或)Cy5的前景与背景间无统计显著性差异点的信号值,进一步排除两种荧光标记间存在统计显著性差异点的信号值,将3张芯片的共同信号值用于分析。SPSS软件进行常规统计分析和作图,R语言环境下的VSN统计包排除芯片间和两种不同荧光标记间的系统误差。结果 3张芯片的8744个共同点用于本研究。芯片间及两种荧光标记间存在明显的可校正的系统误差。芯片间杂交信号值相关显著。RD-PCR样本标记方法对较低表达基因信号值较为敏感。结论 初步的统计分析结果表明,RD-PCR是一种潜在的有用的高密度长链寡核苷酸芯片样本标记方法。     

限制性显示技术作为一种高密度长链寡核苷酸芯片样本标记方法的初步研究

目的初步研究限制性显示技术（RD-PCR）作为一种高密度长链寡核苷酸芯片样本标记方法对芯片杂交信号的影响。方法收集3个健康人外周血单核细胞，提取RNA后分为两组，采用RD-PCR进行样本双色（Cy3／Cy5）荧光标记，与3张Agilent 60 mer高密度（22K）人1B寡核苷酸芯片进行杂交。排除阴性和阳性对照信号值、Cy3和（或）Cy5的前景与背景间无统计显著性差异点的信号值，进一步排除两种荧光标记间存在统计显著性差异点的信号值，将3张芯片的共同信号值用于分析。SPSS软件进行常规统计分析和作图，R语言环境下的VSN统计包排除芯片间和两种不同荧光标记间的系统误差。结果3张芯片的8744个共同点用于本研究。芯片间及两种荧光标记间存在明显的可校正的系统误差。芯片间杂交信号值相关显著。RD-PCR样本标记方法对较低表达基因信号值较为敏感。结论初步的统计分析结果表明，RD-PCR是一种潜在的有用的高密度长链寡核苷酸芯片样本标记方法。     

细胞膜表面标志CD系列抗体蛋白芯片制备及应用的研究

目的：本研究利用抗原抗体免疫反应的原理，研制一种可同时快速检测多种蛋白的蛋白芯片，用于细胞膜表面抗原的检测。方法：将抗细胞表面标志CD抗原的CD系列抗体蛋白固定在醛基玻片上形成微阵列，从样品细胞中抽提膜蛋白抗原并用FSE标记，然后与固定在芯片上的CD抗体阵列反应，扫描仪检测反应结果。结果：本研究选用HL－60，K562，NB4，Jurkat细胞株为代表，测定到细胞膜表面蛋白质CD抗原HL－60，K562，NB4，Jurkat细胞CD13均为阳性，HL－60，NB4，Jurkat细胞CD4阳性，NB4细胞CD38阳性，K562细胞CD7阳性。所得结果与免疫印迹及免疫组织化学验证等方法一致。结论：HL－60，K562，NB4，Jurkat细胞膜表面蛋白质CD抗原有差异。蛋白芯片方法具有的高信息通量，低成本，制备，制定快速简单的优点，展示了良好的应用前景。     

椭偏光学生物传感器及生物医学应用

椭偏光学生物传感器是识别和检测蛋白质的一种新型的高通量、快速生物分子分析技术。它可以实现无标记多元生物分子自动化检测、静态或动态测量及定性和定量测量等,已应用于生物医学与临床检测等方面,如肿瘤标志蛋白检测、乙肝五项同时检测、蛋白质竞争吸附以及多元蛋白质相互作用动态测量等,显示出了广阔的应用前景。     

一种用于生物芯片标记效率的研究方法

目的利用自杂交的方法对芯片杂交样品的标记效率进行检测和实验质控。方法提取人红白血病K562细胞RNA后,将核酸样品等分成两等份,分别应用通用引物标记Cy3和Cy5荧光物质,然后和制备的K562芯片进行杂交,通过比较杂交后探针上Cy3和Cy5的荧光信号强度,对样品的标记效率和杂交流程进行实验分析和质控。结果杂交后的芯片探针显示为等量的Cy3和Cy5重叠后的黄色荧光,由于样品是等量的同一种核酸物质,从而证明了样品标记的效率一致性较好。结论通过自身杂交方法来比较相同样品两种荧光标记物的信号强度,对芯片本身的质量进行检测,分析标记物的标记效率,可以应用于生物芯片实验的质量控制。     

99Tcm直接法标记血管抑素

目的: 探索用99Tcm直接标记血管抑素(angiostatin, AS)的方法,并研究标记产物的体外稳定性及其生物活性. 方法:制备的AS经鉴定后,分别用2-巯基乙醇(2-ME)和氯化亚锡(SnCl2)还原法进行标记,并用正交设计筛选最佳合成条件;对标记产物用纸层析法及Sephadex G-50层析柱分离测标记率;产物中分别加入牛血清白蛋白(BSA)、生理盐水及不同摩尔比的半胱氨酸(Cys)以观察其体外稳定性;用人脐静脉内皮细胞系ECV304观察其生物活性. 结果:2-ME法最佳标记条件为AS 100 μg,PB(0.5 mol*L-1, pH 7.3) 1 mL, 2-ME 100 μg, 亚甲基二膦酸盐(MDP)(用1 mL生理盐水溶解) 10 μL,加入99TcmO4- 185 MBq,标记率可达(97.0±1.5)%; SnCl2法为AS 100 μg,硼酸缓冲液(0.1 mol*L-1, pH 9.0) 1 mL, 20 g*L-1 SnCl2 (1 mol*L-1盐酸作为溶剂) 20 μL加入MDP药盒,用去氧水稀释至1 mL, 取20 μL,加入99TcmO4- 185 MBq,标记率可达(90.0±3.0)%. 产物在体外稳定;细胞培养观察其抑制内皮细胞生物活性与AS无显著差异. 结论:用99Tcm直接法标记AS简单高效,且对AS生物活性无明显影响.