二烯丙基二硫诱导人白血病细胞系HL-60细胞凋亡的研究

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人急性髓性白血病细胞系HL-60细胞凋亡和对细胞周期的影响。方法采用MTT、流式细胞仪等方法检测DADS对HL-60的增殖抑制,诱导凋亡以及细胞周期分布的影响。结果20μΜDADS作用HL-60细胞48h,MTT显示DADS对HL-60细胞有明显的抑制增殖作用;流式细胞仪分析结果显示DADS对HL-60细胞有明显的G2/M期阻滞作用;用丫啶橙染色法观察到不同阶段的凋亡细胞形态学改变,且DADS呈时间依赖性诱导HL-60细胞凋亡。结论DADS引起HL-60细胞G2/M期阻滞并诱导凋亡可能是其抗肿瘤的机制之一。     

中华补血草多酚诱导白血病细胞HL-60凋亡的研究

采用MTT法研究了中华补血草根多酚提取物对HL-60细胞的抑增殖效果;AO/EB染色、DNA片段化检测和Annexin V-FITC流式细胞术等方法检测了多酚提取物对HL-60细胞诱导凋亡结果.Western blotting检测HL-60细胞株中Bcl-2、Bax蛋白的表达量.结果表明,中华补血草多酚能明显抑制HL-60细胞增殖,诱导HL-60细胞凋亡并具有质量浓度依赖性;Western blotting检测经药物处理的细胞内Bax蛋白显著升高,而Bcl-2蛋白表达水平明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05),其凋亡机制可能与下调Bcl-2蛋白、上调Bax蛋白表达量相关.     

d-柠檬烯诱导白血病细胞凋亡的机制研究

探讨传统中药中挥发油成分d-柠檬烯在HL-60细胞株中的抗肿瘤作用机制。体外细胞培养、凋亡检测、流式细胞术和蛋白免疫印迹等分子生物学技术进行机制研究。d-柠檬烯可以抑制HL-60细胞增值的同时可以诱导HL-60细胞的凋亡。d-柠檬烯可引起细胞内活性氧(ROS)的蓄积、线粒体膜电位(MMP)的下降和Caspase-8活化。抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)可以阻断d-柠檬烯诱导的细胞内活性氧(ROS)的蓄积,但不能阻断线粒体膜电位(MMP)的下降和Caspase-8活化。d-柠檬烯诱导的HL-60细胞凋亡机制是通过活性氧非依赖的Caspase-8活化来实现的。     

丙戊酸诱导多药耐药白血病细胞HL-60/ADR凋亡的研究

目的 研究丙戊酸对多药耐药白血病细胞HL-60/ADR的抑制作用及其机制.方法 采用MTT比色试验观察丙戊酸对多药耐药细胞HL-60/ADR的抑制作用.采用光镜技术观察细胞形态结构的改变,利用流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 (1)丙戊酸能明显抑制HL-60/ADR细胞的生长,药物浓度相当于生药32.65mg/mL时,即具有显著的抑制作用,抑制率呈剂量和时间依赖性,半数抑制浓度(IC50)相当于生药66.44mg/mL.(2)形态学改变呈典型的凋亡特征.(3)丙戊酸能诱导多药耐药细胞HL-60/ADR凋亡,凋亡率也呈时间和剂量的依赖性.结论 丙戊酸对多药耐药细胞HL-60/ADR的生长具有极强的抑制作用,诱导其凋亡是其机制之一.     

异叶败酱中三萜化合物常春藤皂苷元对人早幼粒白血病细胞HL-60的增殖抑制、周期阻滞及凋亡诱导作用

利用倒置显微镜观察法、台盼蓝排染法、Hoechst33258荧光染色法、DNA ladder电泳以及流式细胞分析技术,检测了从甘肃产异叶败酱(Patrinia heterophylla Bunge.)中分离得到的三萜化合物常春藤皂苷元(HG)对人早幼粒白血病细胞HL-60的增殖抑制、周期阻滞及凋亡诱导作用.结果表明,常春藤皂苷元在较低浓度(10～40 μmol·L-1)条件下,时HL-60细胞增殖具有良好的抑制作用;在较高浓度(40～50μmol·L-1)条件下,对HL-60细胞具有致死作用;同时,常眷藤皂苷元对HL-60细胞的G1期阻滞和凋亡诱导作用极可能是其实现增殖抑制和致死作用的主要途径.     

小剂量阿糖胞苷体外诱导HL-60细胞凋亡的作用

阿糖胞苷是白血病的重要药物,其小剂量化疗仍用于临床治疗白血病,并取得了一定的疗效,但其作用机制尚未完全阐明,可能与药物诱导细胞分化或凋亡有关.文中用TUNEL法和流式细胞仪分析小剂量Ara-C(10-8M)对HL-60细胞周期和细胞凋亡的影响,用免疫组化法和原位杂交法分别检测P53蛋白和p53mRNA、bcl-2mRNA表达水平的改变,以探讨bcl-2和p53基因表达与小剂量阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡的关系.结果表明:小剂量Ara-C能诱导HL-60细胞凋亡,其分子机制可能与P53蛋白、p53mRNA表达增加和bcl-2mRNA表达降低有关.     

LR—98对肝癌细胞增殖的抑制性效应

利用在体和离体实验相结合 ,以动物接种肿瘤细胞后的生存时间、瘤重与体重比值、肝癌细胞生存率、超氧化物歧化酶 (SOD)活性及肝癌细胞凋亡为指标 ,研究了不同剂量榄仁树叶提取物 (LR 98)对肝癌细胞增殖的抑制性效应及可能机制 .在体实验结果表明 ,5× 10 - 3g/mLLR 98处理组动物的生存时间较对照组明显延长 (P <0 .0 1) ,不同剂量处理组 (5× 10 - 3g/mL ,2× 10 - 2 g/mL ,5× 10 - 2 g/mL)的瘤重与体重比值均较对照组明显减小 (P <0 .0 5) .体外培养的细胞经不同剂量LR 98(1× 10 - 5g/mL ,5× 10 - 5g/mL ,1× 10 - 4 g/mL)作用后 ,生存率及SOD活性均显著下降 (P <0 .0 1) .流式细胞仪分析表明 ,不同剂量LR 98作用于肝癌细胞 8h后 ,在G1 期前均出现一亚二倍体峰 ,表明均能诱导肝癌细胞发生凋亡 ,凋亡率分别达 2 9.4 4 % ,2 4 .4 5%和 2 5.2 2 % .以上结果说明LR 98可显著抑制肝癌细胞增殖 .降低SOD活性 ,诱导肝癌细胞凋亡可能是LR 98抑制肝癌细胞生长的机理之一 .     

三氧化二砷联合Trolox对人早幼粒白血病细胞HL-60增殖和凋亡的影响

利用MTT法、台盼蓝排染法、Hoechst33258荧光染色法、瑞氏-姬姆萨染色法以及单细胞凝胶电泳法检测了三氧化二砷(As2O3)单独作用及联合Trolox后对人早幼粒白血病细胞HL-60的增殖抑制、凋亡诱导作用及其DNA损伤作用.结果表明,1μmol.L-1As2O3作用即可抑制HL-60细胞的增殖,联合100μmol.L-1Trolox对HL-60细胞增殖抑制作用较As2O3单独作用时明显增强.高浓度的As2O3(4μmol.L-1)作用24h可引起HL-60细胞的凋亡,与Trolox联合作用,在低浓度(1μmol.L-1)下即可引起细胞凋亡.联合100μmol.L-1Trolox可以显著增强As2O3引起的HL-60细胞的DNA损伤.这种损伤可能导致细胞周期阻滞,从而在生长曲线中体现出对HL-60细胞的增殖抑制作用.     

HL-60多药抗性细胞抗HT诱导凋亡机制的研究

用1mg·L-1三尖杉酯碱(Harringtoning,HT)处理人早幼粒急性白血病HL-60细胞2h,诱导细胞出现明显的凋亡(Apoptosis,Apo)形态学和生化特征,包括染色质凝集、Caspase-3(天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白水解酶-3)活化、DNA断裂等.来自HL-60的多药抗性细胞HR20和HT9抗HT诱导的凋亡,一般认为是P-糖蛋白(P-GP-170)对药物的外排作用引起细胞对凋亡的抗性.但用2mg·L-1 CsA(Cysclosporine A)逆转抗性细胞对药物的外排作用,1mg·L-1 HT作用48h仍不能诱导HR20和HT9细胞凋亡,说明HR20和HT9多药抗性细胞抗HT诱导凋亡的机制不仅仅在于细胞膜上的P-糖蛋白对药物的外排作用,可能还有凋亡相关因子或其他因素参与作用.Caspase-3是细胞凋亡通路中的一个中心环节,HR20和HT9抗HT诱导的Caspase-3活化,这可能是HR20和HT9不能凋亡的一个重要原因.     

凋亡细胞线粒体膜电势与物理参数变化的可视化研究

目的: 通过放线菌酮(CHX)诱导HL-60细胞凋亡模型,探讨线粒体膜电势与细胞物理参数的变化.方法:建立CHX诱导HL-60细胞凋亡模型.于6和18 h时点,利用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测凋亡和晚期凋亡细胞及坏死细胞比率;利用JC-1染色流式细胞术,通过对对照组和CHX组FL1/FL2散点图上具有不同荧光强度的细胞群划分为R2,R3,R4 3个细胞群,并分别对这些细胞群在FSC/SSC二维散点图上进行反向设门,分析细胞凋亡过程中线粒体膜电势变化与细胞物理参数间的关系.通过透射电镜观察凋亡细胞形态结构改变.结果:CHX可引起HL-60细胞凋亡;与对照组相比,CHX组R2和R3细胞群物理参数为FSC和SSC均显著增高,但线粒体膜电势无显著性差异,P>0.05;R4细胞群则为FSC降低,SSC增高,P<0.05,且线粒体膜电势降低.CHX可诱导HL-60细胞体积变小,皱缩,并出现凋亡特征,如核固缩形成新月体和质膜"出芽"现象.结论:流式细胞仪FSC/SSC图可视为细胞指纹图谱.本模型中线粒体膜电势降低的细胞变小,且颗粒程度增加,可能与细胞凋亡过程中的结构改变有关.     

Bcl-2和Caspase-3在HT诱导的HL-60细胞凋亡中的作用

利用常规的HL－60细胞和转染了 bcl－2基因的HL－60/Bcl-2细胞及转染了空载体的对照HL－60／neo细胞为模型,研究Caspase-3及过表达的Bcl-2对凋亡过程中的各种生化,形态学特征的影响,探讨了Caspase-3及Bcl-2在三尖杉酯碱（HT）诱导的HL－60细胞凋亡中的作用,研究表明,Caspase-3的湃化在HT诱导的HL－60细胞凋亡中处于关键地位,导致了质膜出泡,PS翻转,染色质凝集,DNA断裂及凋亡下游的发生,而Bcl-2则通过抑制aspase-3的活化抑制了凋亡的发生,同时还证明,在HT诱导的HL－60细胞凋亡中,通常被认为是凋亡早期特征的磷脂酰丝氨酸PS翻转并不是一个早期特征,它至少晚于Caspase-3的活化,甚至不早于质膜出泡及染色质凝集。     

抗三尖杉酯碱的HL60细胞蛋白质磷酸化

研究了抗三尖杉酯碱的ＨＬ６０细胞蛋白质磷酸化的变化。经差速离心得到纯膜蛋白，抗性细胞有一高度磷酸化的１１０ｋｕ的蛋白质存在，免疫沉淀ｃ－ＫＡＦ－１蛋白激酶，抗性细胞内ｃ－ＲＡＦ－１蛋白激酶磷酸化程度明显提高，其活性被蛋白激酶Ｃ抑制剂ＣａｌｐｈｏｓｔｉｎＣ明显地抑制。结果表明：ＨＬ６０细胞对三尖杉酯碱的抗药性与蛋白质高度磷酸化有关；抗性细胞内ｃ－ＲＡＦ－１蛋白激酶磷酸化程度明显提高，可能与多药抗药性和抗细胞调亡有关。     

敏感和抗性的白血病HL60细胞对staurosporine诱导凋亡的不同反应(英)

用对蛋白激酶具有强烈抑制、作用广泛的抑制剂staurosporine（Sta）,研究敏感和抗三尖杉酯碱的人白血病HL60细胞中凋亡和多药抗药性的关系．Sta均能诱导2种细胞发生典型的凋亡,但抗性细胞发生凋亡需更长的时间,凋亡的细胞数减少．Sta增加柔红霉素在抗性细胞内的积聚,说明其能逆转多药抗药性．在抗性细胞凋亡过程中,mdrl基因表达没有变化,c-myc基因表达稍有增加．结果显示：Sta能诱导敏感和抗三尖杉酯碱的HL60细胞发生凋亡,mdrl基因表达与凋亡过程无关．     

福司可林(FSK88)对HL60细胞抑增殖促分化的实验研究

研究了诱导分化剂FSK88对人白血病HL60细胞的抗肿瘤作用，将HL60细胞培养在含不同浓度FSK88的RPMI1640培养液中，测定FSK88对HL60细胞生长曲线、NBT阳性率、ANAE酶活性的影响，探讨了FSK88对HL60细胞裸鼠异种移植瘤体内抗肿瘤作用。结果表明，FSK88能诱导HL670细胞向单核／巨噬细胞方向分化，表现为生长抑制，NBT还原能力提高，酸性非特异性酯酶（ANAE）活性增加；流式细胞仪检测表明FSK88对HL60的诱导作用与细胞所处细胞周期的变化无明显相关性；FSK88可以有效的抑制白血病HL60的致瘤力，可见FSK88能抑制人白血病细胞的生长，促使其进入终末分化及凋亡。     

血管内皮生长因子反义核酸增强HL60和K562细胞对As_2O_3的敏感性

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义核酸能否提高HL60和K562细胞对三氧化二砷(As2O3)的敏感性。方法:采用经筛选所得的最优反义核酸(A7),20个碱基经过全硫代修饰;以脂质体介导转染细胞,反义核酸和As2O3联合作用72h以后,用MTT法检测细胞生长情况,求IC50值;用ELISA法检测培养液中VEGF蛋白的浓度,用流式细胞仪检测细胞凋亡百分数。结果:VEGF反义核酸可显著降低HL60、K562细胞对As2O3的IC50值,下调VEGF蛋白的表达,增加As2O3诱导的HL60、K562细胞凋亡作用。结论:VEGF反义核酸具有增强HL60和K562细胞对As2O3的敏感性,增强As2O3诱导的HL60和K562细胞凋亡作用;提示内源性VEGF蛋白具有使细胞产生耐药性的作用。     

链霉菌(Streptomyces sp103)发酵产物对4种病原真菌的抑菌活性

采用生长速率法测定了链霉菌Streptomyces sp103的发酵液及其菌丝体的乙醇提取物对小麦赤霉病病菌、苹果轮纹病菌、苹果炭疽病菌、油菜菌核病病菌4种病原真菌的抑菌活性.结果表明:发酵液对4种病原真菌的相对抑制率分别为100%,86.7%,82.9%和100%,而其菌丝体的乙醇提取物对3种病原真菌的相对抑制率均为100%.     

视网膜母细胞瘤基因产物磷酸化水平与细胞生长状态的关系

随着无血清培养细胞时间的延长，红胞合成Ｒｂ蛋白量和磷酸化水平逐渐降低，当细胞生长停止时，Ｒｂ蛋白处于低磷外化状态．正丁酸钠可诱导ＨＬ６０终端分化为单核－巨噬细胞；视黄酸、二甲基亚砜使ＨＬ６０分化为粒细胞．尽管分化途径不同．但是终端分化的细胞都只能合成低磷酸化的Ｒｂ蛋白．结果表明当细胞处于生长停滞状态，细胞都只能合成低磷酸化的Ｒｂ蛋白．     

中国鲎鲎素T-1抗人早幼粒白血病HL-60细胞活性研究

利用从中国鲎血细胞中提取的鲎素Ｔ－１作抗肿瘤活性实验．结果表明,鲎素Ｔ－１在体外对人早幼粒白血病ＨＬ－６０细胞的增殖有明显抑制作用．急性毒理实验显示,鲎素Ｔ－１对正常活体毒性较小,可用于活体实验．荷瘤裸鼠实验统计,鲎素Ｔ－１对肿瘤抑制率达４２．３％．     

OA对人肝细胞HL-7702和肝癌细胞Bel-7402增殖的影响和对细胞凋亡的诱导作用研究

 以人肝细胞HL-7702和肝癌细胞Bel-7402为研究对象,通过MTT法、细胞外部形态观察、Annexin V.FITC&;PI双染法及TUNEL法等方法,研究了腹泻性贝毒的主要组分大田软海绵酸（Okadaic acid, OA）对其增殖的影响及对细胞凋亡的诱导作用。结果表明：OA对人两株细胞的增殖均有显著的抑制作用,24 h IC₅₀分别为65 ng/mL和60 ng/mL,且这种抑制作用呈剂量依赖性。OA导致两株细胞的形态均发生明显变化：细胞变圆,脱壁,细胞膜形成泡状突起,最终形成膜包裹的凋亡小体。Annexin V.FITC和PI双染法及TUNEL法检测均发现：OA能够诱导两株细胞发生不同程度的凋亡,且凋亡细胞的比例与OA的浓度相关。以上结果表明：OA能够通过抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡而对人肝细胞和肝癌细胞造成影响,且这种影响的程度与OA的浓度和作用时间密切相关。     

艾蒿提取物对烟草病原菌的抑制作用

采用菌丝生长速率法、孢子萌发法和滤纸片法,对艾蒿的乙醇提取物及其萃取物做生物活性测试．结果表明：在50mg·mL。的浓度下,艾蒿乙醇提取物对烟草疫霉菌、链格孢菌的菌丝生长抑制率分别为100．00％（96h）、18．51％（168h）,对烟草链格孢菌孢子萌发抑制率为76．26％（6h）;艾蒿乙醇提取物的石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物对烟草疫霉菌菌丝生长抑制率分别为79．49％（120h）、87．42％（72h）．在100mg·mL。的浓度下,艾蒿乙醇提取物对烟草链格孢菌的菌丝生长抑制率、孢子萌发抑制率分别为58．84％（48h）、100％（6h）;艾蒿乙醇提取物的石油醚萃取物、氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物对烟草链格孢菌的菌丝生长抑制率分别为26．11％（96h）、57．17％（72h）、32．87％（48h）;艾蒿乙醇提取物的氯仿萃取物对烟草链格孢菌孢子萌发抑制率为80．05％（6h）．在50、100、200mg·mL-1的浓度下,艾蒿乙醇提取物对烟草青枯菌均无抑制作用．