肺纤方提取物干预肺纤维化模型大鼠肺微血管内皮细胞新生血管形成的体外研究

目的探讨肺纤方提取物体外干预肺纤维化微血管生成的作用及机制。方法从肺纤维化模型大鼠分离培养肺微血管内皮细胞,将其等量分为空白组、氯沙坦组、泼尼松组、肺纤方大剂量组、肺纤方中剂量组、肺纤方小剂量组。对各组的迁移细胞及微血管内皮细胞形成的血管进行计数。结果与空白组和泼尼松组相比,肺纤方大、中剂量、氯沙坦均能抑制内皮细胞的迁移(P0.05)。氯沙坦、肺纤方各剂量均能抑制血管形成(P0.05),其中肺纤方大剂量几乎完全抑制血管形成。结论肺纤方具有抑制肺纤维化大鼠体外培养的肺微血管内皮细胞的迁移及新生血管形成,从而发挥抗肺纤维化作用。     

肺纤方对肺间质纤维化大鼠VEGF及VEGFR1、VEGFR2基因表达的影响

目的 探讨肺纤方提取物对肺间质纤维化大鼠血管新生的影响.方法 将大鼠分为假手术组、模型组、泼尼松组、氯沙坦组、肺纤方大剂量组、肺纤方中剂量组、肺纤方小剂量组7组,除假手术组外,其余6组采用气管插管灌注博莱霉素3 mg/kg进行大鼠肺间质纤维化造模;造模第2天各组予以相应药物灌胃干预.于第14天及第28天分2批进行取材,HE染色观察肺泡炎程度、MAS-SON染色观察肺纤维化程度,RT-PCR检测血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体(VEGFR)l、VEGFR2mRNA表达.结果 肺纤方大中剂量均能抑制肺泡炎和纤维化程度、下调VEGF及VEGFR1、VEGFR2mRNA表达水平(P＜0.05).肺纤方中剂量作用更显著.结论 肺纤方通过下调VEGF及VEGFR1、VEGFR2基因表达水平,抑制血管新生,发挥抗肺纤维化作用.     

肺纤方提取物对肺间质纤维化大鼠血管新生的影响

目的探讨肺纤方提取物对肺间质纤维化大鼠肺纤维化程度和肺微血管变化和血小板-内皮黏附因子31、34(CD31、CD34)表达的影响。方法将大鼠分为假手术组、模型组、泼尼松组、氯沙坦组和肺纤方大、中、小剂量组,共7组。除假手术组外,采用气管插管灌注博莱霉素3 mg/kg进行大鼠肺间质纤维化造模;造模第2天予以不同药物灌胃干预。于14、28 d分两批进行动物处理,电镜观察肺纤维化程度和肺微血管变化,免疫组化检测CD31、CD34表达。结果肺纤方大、中剂量组均能抑制肺泡炎、纤维化程度及微血管密度,较模型组有显著差异(P0.05)。结论肺纤方通过减轻肺纤维化微血管密度表达,减少肺泡炎时的异常血管新生,而具有抗肺间质纤维化作用。     

小鼠主动脉环血管新生实验模型的优化

目的: 建立优化体外培养小鼠主动脉环血管新生实验模型的条件和方法。方法: 分离C57BL/6小鼠的胸主动脉,剔除主动脉周围的脂肪及结缔组织,使用Ⅱ型胶原酶消化动脉,剥离血管外膜,将血管剪成0.5 mm长的动脉环,置于预先包被有鼠尾Ⅰ型胶原的96孔板中培养,给予DMEM+2.5%胎牛血清,DMEM+10%胎牛血清或DMEM+2.5%胎牛血清+血管内皮生长因子(VEGF,终浓度为50 ng/mL)100 μL/孔,覆盖胶原表面。倒置显微镜下观察动脉环新生微血管。免疫荧光染色鉴定内皮细胞。结果： 鼠尾Ⅰ型胶原包被的96孔板（DMEM+2.5%胎牛血清）内新生微血管数量明显多于24孔板（t=－6.000,P<0.05）。DMEM+10%胎牛血清组新生微血管数量明显高于DMEM+2.5%胎牛血清组和DMEM+2.5%胎牛血清+VEGF组。DMEM+10%胎牛血清组培养2~4 d后小鼠主动脉环开始出芽, 6~8 d后动脉环新生微血管分支、数量及长度达到高峰。结论： 优化后的方法可以得到生长状态良好,出芽率高,纯度高的离体小鼠动脉环血管新生实验模型。     

血管内皮细胞生长因子及其受体在大鼠肺气肿模型中的表达

目的　探讨血管内皮细胞生长因子 (VEGF)及其受体 2 (VEGFR 2 )在大鼠肺气肿模型中的表达及意义。方法　经气管内注入脂多糖及熏香烟法建立大鼠肺气肿模型。免疫组化法检测VEGF在肺组织的表达部位 ,ELISA法检测支气管肺泡灌洗液 (BALF)中VEGF的含量 ,Westernblot检测VEGFR 2蛋白的表达。结果　VEGF在肺泡上皮细胞、支气管粘膜上皮细胞及血管内皮细胞表达 ,模型组BALF的VEGF含量 (110 2± 4 6 0 .1)pg/mL较对照组 (2 0 17± 84 0 .6 ) pg/mL明显降低 (P <0 .0 5 ) ;模型组VEGFR 2蛋白的表达低于对照组 (P <0 .0 5 )。结论　VEGF及VEGFR 2的减少可能参与了肺气肿的发生     

黄芪、当归对血管内皮细胞纤溶酶原激活物抑制剂-1的影响

目的 观察中药黄芪、当归对血管内皮细胞纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)表达及活性的影响,探讨黄芪、当归抗血栓作用的分子机制.方法 使用成品的黄芪和当归注射液,各设两个浓度(6 mg/ml和 3 mg/ml),分别加入细胞培养板,实验组各孔均加入0.5 ng/ml TGF-β1作为诱导剂以增加PAI-1Ag表达.同时设立TGF-β1组(细胞液中只加入0.5 ng/ml TGF-β1)以及空白对照组(细胞液中不加入任何成分),各组在37 ℃,5%CO2孵箱中培养24 h.应用RT-PCR方法检测黄芪、当归对血管内皮细胞PAI-1 mRNA表达的影响,ELISA法检测黄芪、当归对PAI-1表达的影响,发色底物显色法检测黄芪、当归对PAI-1活性的影响.结果 黄芪、当归可不同程度地降低血管内皮细胞PAI-1 mRNA表达、抗原水平与活性,以黄芪、当归联合应用作用更为明显.黄芪、当归单独及联合应用对PAI-1 mRNA表达的抑制率分别为17%、24.6%和36.6%.结论 黄芪、当归可能通过抑制血管内皮细胞PAI-1表达和活性而发挥其抗血栓形成的作用.     

LPS诱导小鼠肺微血管内皮细胞VEGF表达的探讨

目的：研究小鼠肺微血管内皮细胞分离培养方法并探讨脂多糖(LPS)诱导小鼠肺微血管内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达．方法：贴块法培养小鼠肺微血管内皮细胞,并进行系列鉴定．采用ELISA方法检测正常组、LPS(1μg／ml)作用2、8、16、24、36、48h组的VEGF变化水平。结果：获得的小鼠肺微血管内皮细胞具有鹅卵石形态,但LPS对小鼠肺微血管内皮细胞形态影响明显。对异植物血凝素结合试验,CD31及Ⅷ因子抗原免疫组化染色为阳性。LPS(1μg／ml)分别作用小鼠肺微血管内皮细胞2h组可见VEGF表达升高,8h组达最高,16、24、36、48h组的表达量低于8h组。结论：LPS作用后,小鼠肺微血管内皮细胞VEGF表达呈抛物线型下降。LPS损伤内皮细胞功能和形态。     

复方丹参注射液对RF滑膜细胞VEGF mRNA的影响

目的:观察复方丹参注射液对体外培养的类风湿关节炎(RA)滑膜细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响。方法:行关节腔镜手术取RA患者膝关节滑膜组织,消化分离滑膜细胞进行分组培养。对照组:含9.0 g/L氯化钠注射液 100 ml/L胎牛血清的达氏修正依氏培养基(DMEM)培养;复方丹参低剂量组:1.5μg/ml复方丹参 100 m l/L胎牛血清的DMEM培养;复方丹参高剂量组:150μg/m l复方丹参 100 ml/L胎牛血清的DMEM培养。提取总RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组VEGF mRNA的表达。结果:复方丹参高低剂量组VEGFmRNA表达较对照组均明显降低(P<0.05)。结论:复方丹参注射液可以下调RA患者滑膜下细胞VEGF mRNA表达水平,从而可以通过抑制VEGF表达减轻滑膜血管翳增殖。     

肺纤煎联合泼尼松对博莱霉素A_5致肺纤维化小鼠肺组织TGF-β_1 mRNA表达的影响

目的 :观察肺纤煎联合泼尼松对博莱霉素致小鼠肺纤维化的干预作用及机制。方法 :以腹腔注射博莱霉素A5复制肺纤维化模型 ,将小鼠随机分组并给予不同药物治疗 ,从病理改变、转化生长因子 (TGF) β1mRNA表达等方面 ,动态评价肺纤煎联合泼尼松对肺纤维化的治疗作用。结果 :肺纤煎联合泼尼松治疗后肺泡炎、肺纤维化明显减轻 ;TGF β1mRNA表达有不同程度的降低。结论 :肺纤煎联合泼尼松可通过调控TGF β1mRNA从而减轻博莱霉素A5致小鼠肺纤维化     

肺间质纤维化患者的PAI-1、VEGF的变化

目的:探讨纤溶酶原激活剂抑制剂-1(PAI-1)、血管内皮生长因子(VEGF)在肺间质纤维化发病机制中的作用。方法:选择肺间质纤维化患者40例,健康人40例,采用ELISA法测定其血清及肺泡灌洗液的PAI-1、VEGF。结果:肺纤维化患者的肺泡灌洗液中的PAI-1水平为3.736±0.485μg/L,比健康人的1.245±0.126μg/L明显增高(P<0.05);肺纤维化患者的肺泡灌洗液中的VEGF水平为3.236±0.133μg/L,比健康人的1.545±0.231μg/L明显增高(P<0.05);肺纤维化患者的血清PAI-1水平为58.486±0.148μg/L,较健康对照组的45.383±0.119μg/L明显增高(P<0.01);肺纤维化患者的血清VEGF水平为0.530±0.048μg/L,较健康对照组的0.423±0.069μg/L明显增高(P<0.05)。结论:肺纤维化组PAI-1、VEGF水平明显升高,推测其参与了肺间质纤维化的形成。     

雷帕霉素对PAN肾病小鼠肾脏病变和VEGF及受体表达的影响

目的 探讨雷帕霉素对嘌呤霉素氨基核苷（PAN）肾病模型小鼠肾脏病变和肾小球VEGF及受体（VEGFR）表达的影响.方法 24只BALB/c小鼠随机分为PAN 组（单次尾静脉注射PAN造模,n=8）、雷帕霉素干预组（单次尾静脉注射PAN造模＋雷帕霉素干预,n=8）和对照组（单次尾静脉注射PBS,n=8）.各组动物留取24 h尿液,BCA蛋白定量试剂盒测定24 h尿蛋白排泄量.于造模后第10天处死动物取肾脏制备肾组织标本,透射电子显微镜观察各组肾小球足突结构改变;分别采用Real-time PCR、Western b1otting和免疫组织化学方法检测各组肾组织VEGF、VEGFRI、VEGFR2 mRNA以及VEGF、VEGFR2蛋白表达.结景24 h尿蛋白排泄量为PAN组〉雷帕霉素干预组〉对照组,组间差异均有统计学意义（P〈0.05）.电子显微镜观察发现PAN 组肾小球上皮细胞足突广泛融合.各组肾组织VEGF、VEGFRI、VEGFR2 mRNA及蛋白表达为PAN组〉雷帕霉素干预组〉对照组（P〈0.05）,且各组VEGF、VEGFRI、VEGFR2 mRNA及VEGF蛋白表达与24 h尿蛋白排泄量呈正相关（P〈0.05）.结论 雷帕霉素能减轻PAN肾病小鼠蛋白尿的程度,作用机制可能与下调肾小球VEGF及其受体基因表达有关.     

雷帕霉素对PAN肾病小鼠肾脏病变和VEGF及受体表达的影响

目的 探讨雷帕霉素对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)肾病模型小鼠肾脏病变和肾小球VEGF及受体(VEGFR)表达的影响.方法 24只BALB/c小鼠随机分为PAN 组(单次尾静脉注射PAN造模,n=8)、雷帕霉素干预组(单次尾静脉注射PAN造模+雷帕霉素干预,n=8)和对照组(单次尾静脉注射PBS,n=8).各组动物留取24 h尿液,BCA蛋白定量试剂盒测定24 h尿蛋白排泄量.于造模后第10天处死动物取肾脏制备肾组织标本,透射电子显微镜观察各组肾小球足突结构改变;分别采用Real-time PCR、Western b1otting和免疫组织化学方法检测各组肾组织VEGF、VEGFRI、VEGFR2 mRNA以及VEGF、VEGFR2蛋白表达.结景24 h尿蛋白排泄量为PAN组>雷帕霉素干预组>对照组,组间差异均有统计学意义(P<0.05).电子显微镜观察发现PAN 组肾小球上皮细胞足突广泛融合.各组肾组织VEGF、VEGFRI、VEGFR2 mRNA及蛋白表达为PAN组>雷帕霉素干预组>对照组(P<0.05),且各组VEGF、VEGFRI、VEGFR2 mRNA及VEGF蛋白表达与24 h尿蛋白排泄量呈正相关(P<0.05).结论 雷帕霉素能减轻PAN肾病小鼠蛋白尿的程度,作用机制可能与下调肾小球VEGF及其受体基因表达有关.     

缺氧条件下视网膜微血管内皮细胞中缺氧诱导因子1和血管内皮生长因子m RNA表达的研究

目的 探讨视网膜微血管细胞在缺氧过程中缺氧诱导因子1(HIF1）和血管内皮生长因子(VEGF)基因mRNA水平表达的变化。方法视网膜微血管细胞(RECs)分别在正常氧、缺氧3h不同条件下培养后，应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法半定量测定HIF1a和VEGF基因的mRNA水平的表达。结果缺氧组RECs HIF1基因的mRNA水平表达为对照组的4．6倍。同时缺氧组RECs细胞的VEGF基因的mRNA水平表达为对照组的3倍。结论缺氧能引起视网膜微血管细胞的HIF-1及VEGF基因mRNA水平高表达，提示缺氧可能通过HIF1基因的转录途径来诱发VEGF基因的高表达导致视网膜新生血管形成。     

Inhibition effect of small interfering RNA of connective tissue growth factor on the expression of vascular endothelial growth factor and connective tissue growth factor in cultured human peritoneal mesothelial cells

Background The peritoneum response to peritoneal dialysis can lead to fibrosis. The transforming growth factor β1 （TGF-β1 ） plays a key role in regulating tissue repair and remodelling after injury. Connective tissue growth factor （CTGF）, a downstream mediator of TGF-β1 inducing fibrosis, has been implicated in peritoneal fibrosis. Vascular endothelial growth factor （VEGF） plays a key role in angiogenesis that can hasten peritoneal fibrosis. In this study, we investigated the effect of small interfering RNA （siRNA） of CTGF by pRETRO-SUPER （PRS） retrovirus vector on the expression of CTGF and VEGF in human peritoneal mesothelial cells. Methods Retrovirus producing CTGF siRNA were constructed from the inverted oligonucleotides and transferred into packaging cell line PT67 with lipofectamine, and the virus supernatant was used to infect human peritoneal mesothelial cell （HPMC）. The cells were divided into seven groups： low glucose DMEM, low glucose DMEM ＋ TGF-β1 5 ng/ml, low glucose DMEM ＋ TGF-β1 5 ng/ml ＋ PRS-CTGF-siRNA1-4 and low glucose DMEM ＋ TGF-β1 5 ng/ml ＋ PRS. The expression of CTGF and VEGF were measured by semiquantitative RT-PCR and Western blot. Results Low levels of CTGF and VEGF were detected in confluent HPMCs. Following stimulation with TGF-β1 , the levels of CTGF and VEGF were significantly upregulated （P〈0.01）. Introduction of PRS-CTGF-siRNA1-4 resulted in the significant reduction of CTGF mRNA and protein, and VEGF mRNA （P〈0.01）, especially in groups PRS-CTGF-siRNA, and PRS-CTGF-siRNA4. The introduction of PRS void vector did not have these effects （P〉0.05）. Conclusions The expression of CTGF siRNA mediated by PRS retrovirus vector can effectively reduce the level of CTGF and VEGF induced by TGF-β1 in cultured HPMCs. This study may provide potential therapeutic strategies to prevent the peritoneal fibrosis.     

脑溢安对缺氧大鼠脑微血管内皮细胞VEGF蛋白表达的影响

目的:观察脑溢安血清对体外缺氧培养的大鼠脑微血管内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响。方法:大鼠用脑溢安浸膏连续灌胃3d后,心脏内采血分离出血清;用新生7d SD大鼠脑内分离培养的微血管内皮细胞（RCMEC）移入厌氧培养箱造成缺氧模型;MTT法测定细胞活性;免疫细胞化学及Werstern blotting研究脑微血管内皮细胞VEGF蛋白表达。结果:缺氧18h脑溢安组OD值较对照组增高（P<0.05）。缺氧损伤的脑微血管内皮细胞内VEGF蛋白表达增强,脑溢安血清组VEGF蛋白的表达水平高于对照组(P<0.01)。结论:缺氧可诱导脑微血管内皮细胞VEGF蛋白的表达;脑溢安可以上调VEGF蛋白的表达,这可能是脑溢安对缺氧的脑微血管内皮细胞的保护作用机制之一。     

Epo 3'-端增强子对内皮细胞缺氧时血管内皮生长因子基因转录的影响

体外合成红细胞生成素(Epo)3'-端增强子野生型及突变型片段,借助脂质体转入培养的大鼠肺微血管内皮细胞,用半定量RT-PCR方法测定内皮生长因子(VEGF)mRNA。结果发现:①内皮细胞在常氧下培养有VEGF基因转录,mRNA量吸光度(A)值为2.32±0.36;②缺氧4h时VEGF基因转录增加,mRNA量(A)值为4.71±0.52,与常氧组比较PO.05。结果提示:在VEGF基因序列中可能存在Epo 3'-端增强子片段,它参与了内皮细胞的缺氧反应。     

人参皂苷Rg1对急性心肌梗死大鼠血管新生的作用

目的:研究人参皂苷Rg1对急性心肌梗死(AMI)大鼠血管新生的影响及其机制。方法:建立Wistar大鼠急性心肌梗死模型,分假手术组、急性心肌梗死对照组、人参皂苷Rg1低剂量治疗组(1mg/kg)和高剂量治疗组(5mg/kg),于术后3,7,10,14d测定血清心肌酶、心肌梗死面积、梗死区微血管密度,RT-PCR法检测梗死区心肌组织血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达。结果:心肌梗死组织中各时段假手术组的微血管密度、VEGFmRNA表达均低于手术各组(P<0.01);治疗组心肌酶及心肌梗死面积明显降低(P<0.05),梗死区血管生成数量稳定持续增加,与对照组有显著差异(P<0.01);心肌梗死后VEGFmRNA表达随缺血时间的延长(3,7,10d组)有增高趋势,治疗组明显升高(P<0.01),14d时VEGFmRNA的增长出现停止或下降。结论:严重缺血急性期可刺激心肌组织产生大量的VEGF起自我保护作用,人参皂苷Rg1增加其表达,并可刺激心肌梗死区的血管生成。     

链脲佐菌素构建糖尿病小鼠视网膜病变模型及评价

目的 建立链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病小鼠视网膜病变模型,研究早期糖尿病小鼠视网膜的病理改变及其发展过程中血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（VEGFR1、VEGFR2）在动物模型中的表达情况。方法 6～8周龄C57BL/6J小鼠腹腔连续注射STZ（55 mg/kg）5 d,注射后1周时测量空腹血糖浓度,将糖尿病模型建立成功的小鼠与对照组小鼠均喂养5个月。注射后5个月时,通过石蜡切片H-E染色、伊文思蓝灌注造影、视网膜血管网铺片等方法分析糖尿病小鼠视网膜组织形态变化。通过实时定量PCR、蛋白质印迹法分析糖尿病视网膜病变过程中VEGF及其受体VEGFR1、VEGFR2的表达情况。结果 与对照组相比,注射后1周、1～5个月时模型组小鼠血糖水平均升高（均高于16.5 mmol/L）,差异均有统计学意义（P均<0.01）。注射后5个月时模型组小鼠视网膜全层变薄,感光细胞层、内核层及外核层细胞数量减少,排列紊乱;血管走行迂曲,出现渗漏及渗漏斑;血管内皮细胞数量增加,形态改变,周细胞数量减少,可见无细胞毛细血管、管腔闭塞;VEGF、VEGFR1、VEGFR2的蛋白质和mRNA表达均增加,与对照组相比差异均有统计学意义（P均<0.01）。结论 成功构建糖尿病小鼠视网膜病变模型,该模型表明在糖尿病发展5个月后出现增殖性糖尿病视网膜病变,且糖尿病小鼠视网膜中VEGF、VEGFR1和VEGFR2表达水平均上升。