数字PCR法检测血液EGFR基因T790M突变的评价

目的 使用血浆循环肿瘤DNA基因突变检测国家参考品,对EGFR基因T790M突变检测试剂盒（数字PCR法）的准确性、特异性和检测限的性能进行评价。方法 提取国家参考品的血浆游离DNA,并测定浓度。取不同浓度的EGFR基因T790M突变的游离DNA样本,加入装有ddPCR和ddPCR MIX3的PCR预混液的PCR管中,混匀后使用全自动样本处理系统进行微滴制备。将微滴转入96孔板内后,使用微滴式数字PCR系统的封膜仪和PCR仪进行封膜和PCR扩增。取PCR扩增样本,加至芯片中,使用生物芯片阅读仪读取结果。结果 对国家参考品中不同突变频率的EGFR基因T790M突变样本,试剂盒能够准确检出T790M突变。对国家参考品中EGFR基因其他突变的样本,试剂盒未检出T790M突变。试剂盒能够准确检测0.05%突变频率的国家检测限参考品。结论 EGFR基因T790M突变检测试剂盒（数字PCR法）具有很好的检测准确性、特异性和灵敏度,国家参考品具有很好的检测方法适用性。     

ctDNA检测晚期NSCLC患者EGFR基因突变的Meta分析

目的探讨循环肿瘤DNA(ctDNA)在晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)突变检测中的应用价值。方法检索PubMed、Embase、Medline、万方数据库、中国知网数据库、中国生物医学文献数据库、维普数据库,纳入报道了ctDNA检测晚期NSCLC患者EGFR突变灵敏度与特异度的文献;采用合并灵敏度、特异度、似然比点状图、集成受试者工作特征(SROC)曲线及曲线下面积(AUC)评估ctDNA诊断价值。结果共纳入28篇文献,包括3 644例晚期NSCLC患者,合并后的灵敏度、特异度分别为64.0%(95%CI:0.59～0.70)、98.0%(95%CI:0.95～0.99)。SROC曲线下面积为0.85(95%CI:0.82～0.88),表明ctDNA有较高的诊断价值。结论对于晚期NSCLC患者EGFR突变的检测,ctDNA是一个高特异性及高诊断价值的生物标志物,ctDNA基因检测将是晚期NSCLC患者个体化靶向治疗的重要组成部分。     

奥西替尼治疗EGFR T790M突变的晚期肺腺癌1例

1例表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)基因第19外显子敏感缺失突变肺腺癌患者接受第一代EGFR抑制剂(tyrosine kinase inhibitors,TKIs)治疗后,无进展生存期(progressionfreesur vival,PFS)达33个月,此后病情进展,患者出现脑转移,肺内病灶增大,行经皮肺肿物穿刺活检术,再次行肿瘤组织标本EGFR基因检测,提示20外显子T790M突变,予以奥希替尼靶向治疗34个月,2019年10月8日患者仍未达到PFS。奥希替尼治疗T790M突变肺腺癌,疗效确切、安全性良好,该例患者主要不良反应为QTc间期延长。     

临床常见干扰因素对ctDNA EGFR T790M突变检测的影响

目的探讨临床常见干扰因素对血浆循环肿瘤DNA(ctDNA)表皮生长因子受体(EGFR)T790M突变检测的影响。方法收集7例确认T790M为野生型的正常献血者血浆,添加不同浓度T790M突变质粒及单一干扰物(三酰甘油、胆红素或血红蛋白)模拟干扰血浆,提取DNA后,采用超级突变扩增阻滞系统(SuperARMS)进行T790M突变检测,每份样本重复检测3次,记录DNA浓度、DNA纯度、Super-ARMS检测内控Ct值及T790M突变ΔCt值,应用SPSS 22.0软件对检测结果进行统计学分析。结果临界阳性突变样本DNA浓度极易受胆红素(≥85.5μmol/L)及三酰甘油(≥9.25 mmol/L)干扰(P0.05),但其纯度不易受干扰;强阳性突变样本DNA浓度可受低浓度胆红素(85.5μmol/L)及高浓度血红蛋白(2.0 g/L)干扰(P0.05),且纯度受三酰甘油(≥9.25 mmol/L)和血红蛋白(0.5～1.5 g/L)干扰(P0.05)。脂血对Super-ARMS检测T790M突变的影响最显著,临界阳性、强阳性突变样本内控Ct值及T790M突变ΔCt值均可受三酰甘油(≥9.25 mmol/L)干扰(P0.05);此外,强阳性突变样本内控Ct值受较高浓度胆红素(≥256.5μmol/L)干扰,T790M突变ΔCt值可受中等浓度血红蛋白(≥1.0 g/L)干扰(P0.05)。结论不同浓度的血红蛋白、三酰甘油和胆红素对SuperARMS检测ct DNA EGFR T790M突变的各项参数可产生不同程度的影响,在临床实际检测中应尽量避免使用含干扰因素的血浆。     

1例EGFR T790M突变阳性晚期肺腺癌的治疗策略及文献复习

回顾性分析中南大学湘雅医学院附属株洲医院1例晚期肺腺癌患者的临床资料,并进行相关文献复习。该患者经胸腔穿刺术及左侧淋巴结活检确诊为肺腺癌,头部MRI及上腹部增强CT示头、肝、脾、胰腺及左侧肾上腺多发转移,表皮生长因子受体扩增阻滞突变系统(epidermal growth factor receptor-amplification refractory mutation system,EGFR-ARMS)检测提示EGFR 21外显子突变(L858R),给予第1代EGFR抑制剂(tyrosine kinase inhibitors,TKIs;吉非替尼)治疗11个月后,病情出现进展,再次基因检测EGFR T790M突变为阳性,二线给予第3代EGFR-TKIs(奥西替尼)治疗,病情得到缓解。说明初次EGFR-TKIs治疗后,部分晚期肺腺癌患者耐药后仍然可在EGFR-TKIs治疗中受益。以奥西替尼为代表的第3代EGFR-TKIs治疗耐药后出现T790M突变的患者疗效显著,给晚期肺癌患者带来更多的生存获益。     

奥希替尼治疗T790M突变的晚期肺腺癌1例并文献复习

在肺癌的驱动基因中,表皮生长因子(epidermal growth factor receptor,EGFR)是其最常见的驱动基因之一。在EGFR突变阳性的患者中,一线使用表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs)(例如吉非替尼、埃克替尼、阿法替尼等)口服治疗,已经体现出良好的疗效。但大多数患者在服用初始一线的TKIs治疗后出现T790M突变,引起耐药,导致疾病进展。嘉兴市第二医院呼吸与危重症医学科收治的1例EGFR突变阳性患者,在使用吉非替尼片口服治疗1年后,出现疾病进展。行基因检测后提示T790M突变阳性,改奥希替尼口服。目前患者疗效评价为部分缓解。奥希替尼对于出现T790M突变患者的治疗,有着稳定的疗效。早期及时将临床、病理和分子诊断学技术联合起来对患者治疗进行全程管理,可以为晚期非小细胞肺癌患者的治疗提供强有力的保障。     

奥西替尼治疗EGFR T790M突变的老年晚期肺腺癌患者1例

1例表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)基因第19外显子突变阳性肺腺癌患者接受第一代EGFR抑制剂(tyrosine kinase inhibitors,TKIs)治疗后,无进展生存期(progression-free survival,PFS)达31个月,此后病情进展,患者肺内病灶增大,行血液标本基因检测,提示T790M突变,予以奥希替尼靶向治疗19个月,2019年9月患者仍未达到PFS。奥希替尼治疗T790M突变老年肺腺癌,疗效确切,安全性较好,该例患者主要不良反应为腹泻。     

液滴式数字PCR检测晚期非小细胞肺癌血液EGFR突变的应用价值

目的采用液滴式数字PCR(ddPCR)法检测晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血循环肿瘤DNA(ctDNA)EGFR基因突变的情况,探讨试剂盒的性能、检测结果的可靠性和准确性以及ddPCR法在外周血ctDNA中的应用价值。方法使用标准突变比例的模拟cfDNA样本ddPCR法对试剂检测限、准确性、特异性、精密度、抗干扰能力等指标进行分析及评价;使用ddPCR法检测262例NSCLC患者外周血ctDNA,随机选取30例样本同时进行Super-ARMS法检测,并从方法学标准化和检测结果准确性两方面进行统计学分析。结果检测试剂在检测限以上的准确性、特异性均为100%,定量精密度(突变比例对数的绝对值变异系数CV)5%,关键环节质量控制各主要参数的相关性和线性关系均符合要求;Super-ARMS和ddPCR法同步检测30例NSCLC患者外周血ctDNA的结果具有较好的一致性(Kappa=0.783,P=0.000)。结论 ddPCR法灵敏度高,可绝对定量,是血液检测的有效的方法,但其在检测过程中存在较多对检测结果产生影响的环节,故而检测方法标准化至关重要。     

多重数字PCR平台检测cfDNA突变在NSCLC患者中的应用评估

摘要:目的基于 多重数字PCR( dPCR)技术检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者血浆游离DNA( efDNA)中表皮生长因子受体(EGFR)基固突变,评估其检测性能及临床应用价值。方法选取不 同浓度EGFR-19Del .1858R .T790M突变的质粒样本作为研究对象,对基于多重dPCR的新平台进行性能验证(包括检测精密度、灵敏度、空白限与线性范围)。收集2019年6月至2020年11月复旦大学附属中山医院呼吸科确诊的49例NSCIC患者标本,采用多重dPCR和Super-ARMS方法分别检测cIDNA标本中EGFR基固突变水平,使用卡方检验比较两组间的差异,并进一步比较检测结果的一致性。结果多 重dPCR平台检测1858R、19Del .1790M 3种常见突变,在10% .5%、1%的检测精密度均达到厂商声明的CV<15%;对于3种常见突变位.点在不同检测限(0.5% .0.1% .0.05%)的检測均报告阳性。1858R 、19Del .1790M突变的检测空白限分别为0.038 2.0.000和0.053。1790M. 19Del .L858R突变百分比在0.05%~ 10%(0.05% .0.1% .0.5%、1%、10%)时,实测值与预期百分比的线性回归方程中的R''值分别为0.997 7,0.9954和0.998 4,P<0.01，相关性显著。49例临床样本中,基于多重dPCR与Super-ARMS技术检测S7681、G719X .19Del .1790M. 20ins. L858R 突变的方法总符合率分别为100% .100% .100% .97.96% .93.62%和89.80%。两方法检测1858R(x2 =0.425,P>0.05) ,T790M(x2 = 0.089 ,P>0.05)、19De(Xx =0,P>0.05) 20ins(x2 =0.211,P>0.05)结果差异均无统计学意义。结论多 重dPCR新平台检测dDNA EGFR基因常见突变的性能较好,在评估突变丰度中具有优势,可为肿瘤精准治疗提供实验依据。     

EGFR突变晚期非小细胞肺癌患者1例

浙江省衢州市柯城区人民医院收治1例晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)。患者,女,65岁,无吸烟史,无肿瘤家族史。因右下肺癌术后13年余,来院复查入院。胸部增强CT示:两肺多发恶性肿瘤,左肺上叶最大层面约3.6cm×3.2cm,右肺最大层面约5.9c m×3.5c m,左侧第1 2肋膨胀性骨质破坏。头颅增强M R I示:双侧颞叶异常强化灶,大小约0.5 cm×0.5 cm,考虑转移。左肺穿刺病理:(左)肺非小细胞癌,倾向腺癌。免疫组织化学:CK7(+),napsin-A(+),TTF-1(+),p40(-),p63(-),Ki-67(5%+)。基因检测:EGFRE19del突变。一线予吉非替尼片(易瑞沙)靶向治疗,治疗后肺部病灶明显缩小,颅内病灶消失。16个月左右后疾病进展,进展后血液EGFRT790M突变检测阳性,使用甲磺酸奥西替尼片(泰瑞沙)治疗,疾病持续缓解中。     

TMB表达水平对EGFR突变晚期NSCLC患者预后分析

目的 探索肿瘤突变负荷（TMB）表达水平对EGFR驱动基因阳性的晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者的预后影响。方法 回顾性分析2015年1月至2021年1月首都医科大学大兴教学医院肿瘤科收治的95例EGFR敏感突变的晚期NSCLC患者的临床资料,所有患者满足诊断时已行TMB检测并可以获得完整的病历资料,一线治疗均接受EGFR-TKIs靶向治疗且至少30d以上。通过三分位法将TMB表达水平分为高TMB组和中、低TMB组,分析TMB与EGFR-TKIs一线治疗客观缓解率（ORR）及无进展生存期（PFS）之间的关系。结果 与高TMB组相比,中、低TMB组患者接受EGFR-TKIs治疗的客观缓解率更高（84.1%vs 59.4%,P=0.008）,中位无进展生存期更长（11.2mvs 7.2m,P=0.001）,具有统计学差异。结论 TMB数值的高低可以预测EGFR驱动基因阳性的晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者的预后,高TMB患者近远期预后不佳。     

奥希替尼治疗经埃克替尼一线治疗后进展并继发T790M突变的肺腺癌1例

徐州医科大学附属常熟医院收治1例埃克替尼治疗进展后继发T790M突变的肺腺癌接受二线奥希替尼治疗的女性患者。该患者70岁,反复咳嗽咳痰15年,加重半月;CT提示右肺中叶实变影,大量胸腔积液;病理报告:(胸水细胞块)转移性腺癌,倾向肺来源;血液基因检测示EGFR 19Del合并TP53突变;口服埃克替尼125 mg,每天3次,10个月后疾病进展,再次血液基因检测T790M突变,口服奥希替尼80 mg,每天1次,随访至今(9个月),疾病达到部分缓解(partial response,PR)。因此,晚期非小细胞肺癌患者治疗前应明确基因状态,对于阳性患者给与表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs)治疗,可以使患者获得更长的总生存期和更好的生活质量。     

PCR-SSCP检测肺癌EGFR基因突变

目的分析PCR-SSCP检测肺癌EGFR基因突变的敏感性。方法应用PCR-SSCP检测36例肺癌标本的突变情况并与其它文献进行比较。结果在36例肺癌标本中，有11例存在突变，突变率为30.6％（11／36），其中男性2例，女性9例。结论PCR-SSCP检测肺癌EGFR基因突变具有较高的敏感性，与其它文献报道一致。     

T790M突变与TKI获得性耐药的晚期肺腺癌患者预后的相关性

目的 前瞻性分析T790M突变与一代TKI获得性耐药的晚期肺腺癌患者预后的相关性。方法 选择符合条件入组的肺腺癌患者93例,经二代测序(NGS)测出表皮生长因子受体(EGFR)敏感突变及T790M的突变状态,分二线或三线使用奥希替尼作为EGFR-TKI治疗方案,对照选择化疗和或放疗治疗方案。评估二三线治疗的客观缓解率(ORR), 疾病控制率(DCR)和无疾病进展生存期(PFS)。结果 T790M阳性和阴性患者组中的ORR差异无统计学意义( P=0.084),而DCR差异有统计学意义(P=0.01)。将治疗线数分开,二线使用奥希替尼在T790M的两种不同状态下,ORR和DCR差异均有统计学意义(ORR :P =0.022;DCR:P =0.016)。三线使用奥希替尼在T790M的两种不同状态下,同样发现差异也具有统计学意义(ORR: P=0.016;DCR: P=0.011)。通过Mann-WhitneyU检验提示,T790M的突变状态与PFS显著相关,其中所有人群中(P<0.01)、二线治疗人群中(P=0.022)和三线治疗人群中( P=0.016)。对所有的患者进行KM生存分析,观测到总体的PFS与T790M的突变状况有关(P<0.01)。在T790M阳性组中,患者基因检测中出现EGFR19外显子和21外显子的PFS差异有统计学意义(P=0.05)。多因素Cox比例风险回归分析,21外显子 vs 19外显子(HR=0.551, 95%CI =0.357~0.853, P=0.007);T790M阳性 vs T790M阴性( H R=2.972, 95% C I=1.643~5.379, P<0.01)。肿瘤直径≥5 cm vs 肿瘤直径<5 cm (HR=0.575, 95%CI =0.373~0.085, P=0.012)。结论 T790M突变阳性患者预后优于T790M突变阴性患者。对于T790M阳性的患者二线或三线使用奥希替尼未观测到PFS差异。晚期肺腺癌T790M阳性患者可在一代EGFR-TKI药物耐药后应用三代EGFR-TKI治疗。     

江西地区非小细胞肺癌EGFR基因突变分析

目的探讨江西地区非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)基因突变类型、突变率及其与临床特征的关系。方法收集2014年3月至2015年6月南昌大学第一附属医院非小细胞肺癌患者石蜡包埋组织78例,采用等位基因特异性扩增-聚合酶链反应(ARMS-PCR)方法,对非小细胞肺癌患者肿瘤组织EGFR基因18~21外显子突变进行检测,并分析其突变类型、突变发生率及其与临床特征之间的关系。结果在78例非小细胞肺癌患者中,共有27例发生EGFR基因突变,总突变率为34.6%。其中,第18、19、20、21号外显子突变率分别2.6%(2/78),12.8%(10/78),3.9%(3/78),14.1%(11/78)。一例既有21号外显子突变,又有20号外显子突变,其中,19号外显子的突变均为第746~750密码子的碱基缺失,21号外显子突变类型以L858R为主,且19号外显子的突变率与21号外显子的突变率无统计学差异(P0.05),女性EGFR基因的突变率显著高于男性,不吸烟者显著高于吸烟者,腺癌患者显著高于鳞癌患者(P0.05),而EGFR基因的突变率与非小细胞肺癌患者的年龄、临床分期无相关性(P0.05)。结论江西地区的非小细胞肺癌EGFR基因突变以19、21号外显子为主,常见于女性、不吸烟、腺癌的非小细胞肺癌患者。     

EGFR基因T790M突变COLD-PCR扩增体系的Tc值筛选

目的筛选表皮生长因子受体(EGFR)基因T790M突变PCR扩增体系的Tc值并初步建立具T790M突变富集效果的低变性温度下的复合聚合酶链反应(COLD-PCR)体系,同时探讨Tc值的筛选策略以及注意事项。方法以肺癌MSTO-211H、NCI-H1975细胞为T790M突变野生型和突变型标准样品,通过目标片段关键变性温度筛选实验、COLD-PCR反应模式比较实验以及Tc值的验证实验,确定COLD-PCR体系的Tc值并初步验证其效果。结果本实验体系T790M突变的目的扩增片段关键变性温度低于野生型片段,据此体系反应模式选择为快速COLD-PCR反应模式,同时确定Tc值为89.6℃,验证实验显示本体系可检出1%的T790M突变,较常规PCR提高5倍。至此T790M突变富集COLD-PCR扩增体系已成功建立。结论成功完成体系Tc值的筛选并建立T790M突变富集COLD-PCR扩增体系。     

实时荧光定量PCR法检测非小细胞肺癌EGFR基因突变的总结分析

目的:采用实时荧光定量PCR法检测临床送检的非小细胞肺癌(NSCLC)标本中表皮生长因子受体(EGFR)基因的突变情况,分析其突变率、突变特征及其与临床病理间的相关性。方法:将101例石蜡包埋NSCLC标本行显微切割后抽提DNA,采用实时荧光定量PCR法检测EGFR基因酪氨酸激酶编码区第19和21号外显子的突变。结果:101例NSCLC标本中共检出EGFR基因第19号、第21号外显子突变21例(20.8%),突变率分别为61.9%(13/21)和38.1%(8/21),其又以19 del-E746-A750和21 L858R为主要突变类型,发生率分别为42.9%(9/21)和38.1%(8/21)。EGFR基因总突变率与年龄无关(P>0.05);但女性患者中EGFR基因突变率(27.3%,12/44)高于男性患者(15.8%,9/57;P     

宁夏某医院225例非小细胞肺癌患者EGFR基因突变检测结果分析

目的分析宁夏某医院非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)基因突变检测结果。方法选择2014年1月至2017年12月在宁夏医科大学总医院住院的NSCLC患者225例进行回顾性分析,用扩增阻滞突变系统-聚合酶链反应(ARMS-PCR)检测EGFR基因突变情况。结果 EGFR基因总突变率50.22%(113/225),最常见突变位点为19外显子19-del及21外显子L858R,突变率分别为21.33%及17.78%,20外显子T790M耐药突变率及20-Ins插入突变(非敏感突变)的突变率分别为3.56%及1.33%;EGFR各外显子双突变共10例;EGFR基因突变率在性别、年龄、民族、季节、标本类型之间差异无统计学意义(P>0.05),在年份、病理类型之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ARMS-PCR可有效应用于临床病理石蜡标本基因突变检测,EGFR基因在19和21外显子存在较高的突变率,其突变亚型能指导小分子表皮生长因子酪氨酸酶抑制剂(EGFR-TKI)的肿瘤靶向治疗。     

表皮生长因子受体（EGFR）基因突变检测质控品制备及应用

目的　制备模拟临床样本的表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor EGFR）基因突变检测质控品,评估其临床适用性。方法　选择含EGFR 不同突变位点和无EGFR 突变位点细胞,培养收集后制作成蜡卷。用三种临床常用试剂盒检测,并评估其均一性和稳定性。将含不同突变型5 份样本的样本盘,随机编码后发送至参评实验室,评价回报结果。结果　三种不同试剂检测样本盘结果一致。结果显示质控品均匀, 室温放置可稳定12 个月。28 家实验室5 个样本符合率分别为92.88%,96.43%,78.57%,96.43% 和100%,突变型样本和野生型样本的符合率分别为91.07%（102/112）和100%（28/28）。结论　研制的EGFR 基因突变质控品具有较好的临床适用性,可用于室内质量控制和室间质量评价。     

桂西地区壮族非小细胞肺癌患者EGFR基因突变与临床病理特征的相关性分析

目的 分析桂西地区壮族非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)基因突变与临床病理特征的相关性。方法 以右江民族医学院附属医院2018年1月至2021年3月收集的NSCLC标本269例为研究对象,采用突变扩增系统聚合酶链反应(ARMS-PCR)法检测EGFR基因18～21号外显子的突变情况,分析基因突变情况与临床病理特征的相关性并做生存分析。结果 269例桂西地区壮族NSCLC患者中EGFR基因总突变率为40.5%(109/269),其中女性突变率高于男性(51.4%vs. 33.5%),腺癌突变率高于肺鳞癌(45.5%vs. 8.3%),差异有统计学意义(P<0.05)。常见突变位点为19外显子19-Del,占总突变的55.0%(60/109);21外显子21-L858R,占总突变的29.4%(32/109);Logistic回归分析显示,性别、组织分型是EGFR突变的影响因素(P<0.05),与其他临床病理因素无关。EGFR突变型的肺癌患者经靶向治疗后,总生存率高于EGFR野生型(P<0.001)。结论 桂西地区壮族NSCLC的女性、肺腺癌患者EG...