DC-CIK联合化疗对多发性骨髓瘤患者细胞免疫功能的影响

目的:研究树突状细胞(DC)和细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)为效应细胞的过继免疫联合化疗治疗多发性骨髓瘤(MM)的临床疗效及对患者外周血T细胞亚群、CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞的影响,从而探讨以上治疗对MM患者的细胞免疫调节功能。方法:将50例MM患者随机分为两组:化疗组24例,给予合适的化疗方案;联合组26例,除接受适合的化疗外,还给予DC/CIK免疫治疗,比较两组患者的临床疗效及外周血T细胞亚群、CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞比例,并比较两组患者细胞免疫指标(Th1/Th2比值、Ag NORs比值、TGF-β)的差异。结果:3周期治疗后,联合组患者的生活质量和临床疗效[PS评分为2.10±0.49;瘤细胞百分比为(28.55±7.11)%;β2微球蛋白表达水平为(10.21±3.03)mg/L;血清M蛋白水平为(27.11±6.87)g/L;24h尿液轻链为(9.11±3.66)mg;肌酐水平为(159.33±29.68)μmol/L]均优于化疗组患者[2.59±0.52;(37.34±12.89)%;(17.22±4.21)mg/L;(35.26±12.32)g/L;(14.87±4.06)mg;(254.19±37.46)μmol/L](P值均<0.05)。联合组CD3+CD8+比例[(24.68±7.38)%]、CD4+CD25+[(1.22±0.26)%]、CD4+CD25+/CD4+[(3.58±1.69)%]、TGF-β含量[(1.32±0.39)ng/m L]均明显低于化疗组[(27.56±6.59)%、(1.45±0.40)%、(4.67±2.77)%、(1.49±0.59)ng/m L](P<0.05);CD3+CD4+/CD3+CD8+比值[(1.46±0.33)%]、Th1/Th2比值(1.49±0.29)、Ag NOR比值[(5.06±0.69)IS%]均明显高于化疗组[(1.38±0.28)%、(1.32±0.31)、(4.37±0.67)IS%](P<0.05),提示联合治疗组对MM具有更有效的免疫调节功能。结论:DC/CIK免疫治疗联合化疗治疗MM有良好的临床疗效和应用价值,可能通过免疫调节使MM患者Th2向Th1逆转,从而增强机体抗肿瘤效应。     

多发性骨髓瘤患者外周血淋巴细胞亚群分析及与预后因子的相关性

目的 通过对多发性骨髓瘤(MM)患者外周血淋巴细胞亚群的检测以评价MM患者机体的免疫功能状态.方法 采用流式细胞术检测36例MM患者和25例健康志愿者外周血T、B淋巴细胞、NK细胞及CD4+CD25T细胞的表达.结果 与正常对照组相比,MM患者外周血的CD4、CD19细胞的表达显著下调,CD8细胞的表达显著上调,CD4/CD8比值则显著降低(P＜0.05或＜0.01);MM患者外周血的CD4+CD25T细胞占CD3+T细胞的比例明显增高(P＜0.01),且与血清中的β2-MG浓度成正相关(γ=0.56,P＜0.05).结论 MM患者体内存在淋巴细胞亚群的异常表达、CD4+CD25+Treg细胞的异常扩增,可能是MM患者体内广泛存在免疫缺陷的一个主要原因.     

50例多发性骨髓瘤患者外周血T细胞改变

多发性骨髓瘤伴有Ｔ细胞异常的５０例患者中，治疗前患者２３例，停药后复发者１２例，其末梢血ＯＫＴ＿３，ＯＫＴ＿４，ＯｋＴ＿４／ＯＫＴ＿８均低于正常对照（Ｐ＜０．００１），ＯＫＴ＿８相对增高，ＯＫＴ＿４下降与ＯＫＴ＿４／ＯＫＴ＿８比值降低在病情危重者尤甚。化疗可加深对Ｔ细胞亚群的抑制。中西医结合治疗的１６例息者ＯＫＴ＿４、ＯＫＴ＿８及ＯＫＴ＿４／ＯＫＴ＿８恢复正常水平。     

多发性骨髓瘤患者淋巴细胞亚群变化对免疫功能的影响研究

目的分析多发性骨髓瘤（MM）患者外周血T 淋巴细胞尧B 淋巴细胞和自然杀伤（NK）细胞的变化遥方法收集69 例 MM 患者及52 例健康体检人员的抗凝血,用流式细胞仪检测外周血淋巴细胞总数（Lym）尧CD3+ T 淋巴细胞尧CD19+ B 淋巴细 胞及CD16+56+NK细胞数量遥结果与对照组比较,MM 组Lym尧CD3+尧CD4+尧CD8+尧CD4+/CD8+尧CD19+等6个项目差异均有 统计学意义（约0.05）,CD16+56+差异无统计学意义（跃0.05）遥结论MM患者在疾病进程中与T淋巴细胞亚群及B淋巴细胞尧 Lym 密切相关,对评价MM 患者的免疫状况尧疾病进展和疗效等方面具有重要作用遥     

多发性硬化患者外周血记忆性T细胞亚群的研究

目的：近来研究表明中心记忆性和效应记忆性T细胞构成记忆性T细胞的两个亚群，但在多发性硬化（Multiple sclerosis，MS）中的作用尚不清楚，因此测定了MS患者外周血记忆性T细胞亚群的水平，并进一步探讨了可能导致记忆性T细胞亚群变化的机制。方法：采用流式细胞仪和酶联免疫吸附分析（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）分别检测未治疗MS、正常对照组外周血记忆性T细胞亚群的阳性率和血浆IL-15浓度。进一步根据MS临床表现分为复发-缓解型MS（Relapse-remission MS，RRMS）和慢性进展型MS（Chronic progressiveMS，CPMS）两个亚组。结果：与正常对照比较，在CD8^＋T细胞亚群中，MS患者中心记忆性T细胞（Central memory T cell，TCM）、终末效应记忆性T细胞明显增多和减少（P〈0．05和P〈0．01），RRMS患者终末效应记忆性T细胞明显少于正常对照（P〈0．05）；MS患者血浆IL-15水平较正常对照明显升高（P〈0．05）。结论：研究显示了Ms患者中CD8^＋T CM上调，可能反映了在MS早期被诱导产生的一个持续慢性炎性应答，我们推测CD8^＋T CM的异常改变可能在维持MS慢性炎症的过程中起着重要作用，而IL-15则可能参与了促进TCM分化的调节过程。     

多发性肌炎/皮肌炎患者外周血T细胞亚群的检测

一般认为 ,多发性肌炎 (ＰＭ) /皮肌炎 (ＤＭ)是一组自身免疫性疾病。关于其外周血淋巴细胞亚群的研究早有报道 ,但尚无统一结论 ,有些甚至相互矛盾[1,2 ] 。为进一步证实 ,ＰＭ/ＤＭ外周血Ｔ细胞亚群是否存在异常 ,我们应用双色荧光抗体标记、流式细胞术 (ＦＡＣＳ)进行了检测。1　对象和方法1.1　研究对象　活动期ＰＭ /ＤＭ患者 15例 ,根据Ｂｏｈａｎ的标准[3 ] 进行诊断和分类 ,参照Ｉｓｈｉｄａ[2 ] 的标准判断疾病的活动性。ＰＭ患者 5例 (男 2例 ,女 3例 ) ,年龄 17～ 5 6岁 ,平均 (35 .4 5± 14 .12 )岁 ,病程 1个月～ 6年 ,平均 1.…     

尿毒症患者透析前后外周血B细胞和T细胞及其亚群的研究

应用单克隆抗体技术检测了３５名正常人和３１例尿毒症患者外周血Ｂ细胞和Ｔ细胞亚群。结果显示：尿毒症患者外周血Ｂ细胞数显著地高于正常人（Ｐ〈０．００１）,ＣＤ３、ＣＤ４低于正常人（Ｐ〈０．０１）,ＣＤ４／ＣＤ８又非常显著地低于正常人（Ｐ〈０．００１）。因此认为,尿毒症患者为一种自身免疫调节异常的疾病。     

病毒性肝炎患者外周血T细胞亚群的变化

<正> 应用APAAP桥联酶标法,检测50例急、慢性病毒性肝炎患者在不同病期时,其外周血T淋巴细胞亚群的变化,结果如下。 材料和方法 一、病例:急性黄疸型肝炎30例,其中甲型和乙型肝炎各半。患者男性21例,女性9例,平均年龄28.7±8.8岁,总胆红质(TBil)71.74±41.31μmol/L,谷丙转氨酶(ALT)均在150u以上(正常<40u)。慢性无黄疸型乙型肝炎20例,其中慢性迁延性肝炎12例,慢性活动性肝炎8例,ALT均在150u以上,男16例,女4例,平均年龄30.1±6.4岁。同时检测10例健康人T细胞亚群,以资对比。     

粒细胞集落刺激因子动员对供者外周血细胞树突状细胞亚群的影响

目的：研究粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员对外周血单个核细胞（PBMNC）中树突状细胞（DC）亚群及其功能的影响。方法：以CD34^-Lin^- HLA-DR⁺细胞群设门4色荧光分析方法检测25例无关供者G-CSF动员前、后外周血细胞DC亚群；ELISA检测其血清相关细胞因子IL-12p40、IL-10、IFN-γ、IL-4活性，并分析DC₁/DC₂（CD11c⁺CD123^- /CD11c^-CD123⁺）比值与CD34⁺细胞含量的相关性。结果：G-CSF动员后, 供者PBMNC 的DC₁/DC₂比值显著低于动员前（P<0.05）；DC₁/DC₂与CD34⁺细胞含量呈负相关（r=-0.438, P<0.05），CD34⁺细胞/MNC≥0.4%时， DC₁/DC₂倒置；而血清相关细胞因子IL-12p40、IL-10、IFN-γ、IL-4水平无显著改变（P>0.05）； DC₂ HLA-DR表达上调而CD83不表达。结论： G-CSF动员后，供者外周血CD34⁺细胞数量增加的同时，DC₂数量也增加，这些DC₂尽管HLA-DR表达上调，但仍处前体细胞状态，不直接分泌或调节Th2细胞分泌免疫抑制因子。     

Idiotype vaccination using dendritic cells after autologous peripheral blood progenitor cell transplantation for multiple myeloma.

The idiotype (Id) determinants on the multiple myeloma immunoglobulin can serve as tumor-specific antigens. An anti-Id immune response may stem the growth of the malignant clone. We report on 26 patients treated at our institution with high-dose chemotherapy and peripheral blood progenitor cell transplantation (PBPCT) and vaccinated with the Id protein. The patients received chemotherapy and PBPCT to establish a minimal residual disease state. After high-dose therapy, the patients received a series of monthly immunizations consisting of 2 intravenous infusions of dendritic cells (DCs) pulsed with either Id protein or Id coupled with keyhole limpet hemocyanin (KLH) as an immunogenic carrier protein, followed by subcutaneous boosts of Id-KLH conjugates. DCs were obtained in all patients from a leukapheresis product 3 to 9 months after PBPCT. Patients were observed for toxicity, immune responses, and tumor status. The DC infusions and the administration of Id-KLH boosts were well tolerated, with patients experiencing only minor and transient side effects. Of the patients, 24 of 26 generated a KLH-specific cellular proliferative immune response. Only 4 patients developed an Id-specific proliferative immune response. Three of these immune responders were in complete remission at the time of vaccination. A total of 17 patients are alive at a median follow-up of 30 months after transplantation. Id vaccination with autologous DCs is feasible for myeloma patients after transplantation. Id-specific cellular responses can be induced in patients who are in complete remission. Further studies are needed to increase the rate of anti-Id immune responses in patients who do not achieve complete remission.     

HBsAg脉冲的树突状细胞对CIK细胞功能的影响

目的:探讨HBsAg脉冲的树突状细胞(DC),对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)的增殖和杀伤作用的影响。方法:选择慢性乙肝患者23例,用常规方法分离外周血单个核细胞(PBMC),经HBsAg脉冲后培养为特异性的DC,用3H-TdR掺入法检测该细胞对CIK细胞增殖的刺激作用,用乳酸脱氢酶释放法检测特异性CIK细胞对HepG2215细胞的特异性杀伤作用。结果:HBsAg脉冲的DC对CIK细胞的增殖具有刺激作用。由HBsAg脉冲的DC所诱导的特异性CIK细胞对HepG2215细胞的特异性杀伤作用增强。结论:HBsAg脉冲的DC可增强CIK细胞的杀伤活性。     

G-CSF对外周血树突状细胞亚群比例的影响

目的 :了解G CSF对小鼠外周血树突状细胞 (DC)亚群比例的影响。方法 :以不同剂量 (0、5 .0、10 .0或 15 .0 μg)的G CSF ,分别皮下注射于BALB/c小鼠 ,连续 6d ,每天 1次。第 6天分离外周血DC ,用流式细胞仪检测DC1(CD11c+ CD8a-)和DC2 (CD11c+ CD8a+ )的比例并计算其绝对值。结果 :经不同剂量的G CSF刺激后 ,外周血DC1的绝对值无显著变化 ,而DC2的绝对值增加 5倍 (9.6× 10 6/Lvs 5 5 .1× 10 6/L ,P <0 .0 1) ,DC1/DC2比值降低 (4.2vs 0 .7,P <0 .0 1)。结论 :G CSF在体内可提高外周血DC2的绝对数 ,对DC1的数无明显影响 ,从而使DC1/DC2的比例倒置     

树突状细胞对脐血来源细胞因子诱导杀伤、自然杀伤细胞杀伤活性及CD45RO表达的影响

目的:探索同一来源脐血树突状细胞(DCs)对细胞因子诱导杀伤(CIK)、自然杀伤(NK)细胞杀伤活性和CIK细胞上CD45RO表达的影响。方法:通过细胞因子组合诱导、扩增脐血来源的DCs、CIK和NK细胞,杀伤效应细胞分为两组:A组为接受DCs共孵育6d刺激的CIK、NK细胞,B组为未接受任何刺激的CIK、NK细胞,了解DCs对相应效靶比下CIK、NK细胞杀伤K562、HL-60细胞株细胞毒活性的影响;通过流式细胞术检测两组CIK细胞上CD45RO、CD45RA的表达率。结果:随着效靶比的升高,脐血CIK、NK细胞对肿瘤细胞株的杀伤力增加。在20∶1、10∶1效靶比下,A组CIK、NK细胞对HL-60的杀伤率分别为76.77％±5.76％、55.87％±2.09％,B组为61.14％±3.72％、49.96％±1.51％,A组对HL-60的杀伤明显高于B组;在20∶1效靶比下,A组对K562的杀伤明显高于B组;而在10∶1效靶比下两组之间的杀伤活性未见显著差异;A组CIK细胞上CD45RO表达率显著高于B组。结论:DCs与CIK、NK细胞共孵育可提高CIK、NK细胞的细胞毒活性及增加CIK细胞上CD45RO的表达。     

胃癌干细胞抗原负载树突细胞与细胞因子诱导的杀伤细胞

BACKGROUND:As the existence of tumor stem cells, it is difficult to completely eliminate tumors in clinic. OBJECTIVE:To explore the tumor-killing effect of gastric cancer stem cells as antigen to stimulate dendritic cells combined with cytokine-induced killer cells. METHODS:Side population cells from human gastric cancer cell lines were isolated, and tumor antigen was prepared by freeze thawing method. After coculture with dendritic cells, dendritic cells combined with cytokine-induced killer cells, gastric cancer cell antigen, and gastric cancer stem cell antigen, killing rates of gastric cancer cells were detected using MTT assay. Expression rate of CD83, a mature dendritic cell surface marker, was also detected. RESULTS AND CONCLUSION:The CD83 expression level and killing rate of gastric cancer cells were both significantly lower in the gastric cancer stem cell antigen group than the other groups (both P < 0.05). These results indicate that gastric cancer stem cells as antigen to stimulate dendritic cells combined with cytokine-induced killer cells can promote the proliferation of gastric cancer cells and elevate the ability to killing gastric cancer cells.     

Lymphocyte subsets in the peripheral blood of patients with multiple myeloma and benign monoclonal gammopathy

Summary A panel of monoclonal antibodies that identify various antigens present on T and B cells was used to characterize circulating blood lymphocyte subsets in multiple myeloma [(MM) - 13 patients] and benign monoclonal gammopathy [(BMG) - 5 patients]. In MM and BMG an increase in B cell proportions (BA 1 positive cells) was observed, whereas T cells (Lyt 3 positive cells) were reduced compared to normal controls. However, with respect to the T cell subset distribution, a marked diversity between MM and BMG was noted. This may help to differentiate BMG from MM. In MM a relative decrease in inducer/helper T cells (OKT 4 positive cells) and increase in suppressor/cytotoxic T cells (OKT 8 positive cells) as well as in NK/K T cells (Leu 7 positive cells) was observed. On the other hand, in BMG the relative T cell subset distribution was comparable to those seen in normal subjects.Supported in parts by the Deutsche Forschungsgemeinschaft (Ru 215/2)     

慢性乙型肝炎患者外周血细胞因子诱导的杀伤细胞的动态观察

目的:动态观察慢性乙型肝炎患者细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞的增殖及杀伤活性。方法:抽取10例健康人及20例慢性乙型肝炎患者的外周血,常规分离单个核细胞(PB-MC),加IFN-γ、IL-2及抗人CD3单克隆抗体(mAb)后培养,诱导CIK细胞形成。于培养后3、6、12、24及30 d,取培养的 细胞,用流式细胞仪检测CIK细胞表面CD3、CD4和CD8以及CD4、CD25、CD3、CD56和CD95、CD28分子的表达水平、增殖及杀伤活性。结果:慢性乙型肝炎患者CIK细胞的增殖及杀伤活性均低于正常对照组。培养不同时间乙肝患者CIK细胞的增殖倍数、杀伤活性和上述表面标志的表达水平,均较培养前明显增高,于培养后12 d达高峰。结论:慢性乙型肝炎患者CIK细胞的增殖倍数、杀伤活性均低于正常人,但明显高于培养前;这可能是导致HBV感染持续发展的原因之一。     

人外周血树突状细胞对LAK细胞杀伤活性的影响

从人外周血中分离出树突状细胞，体外观察了其对ＬＡＫ细胞活性的影响。发现：５×１０２～１×１０４／ｍｌ树突状细胞对ＬＡＫ细胞活性起增强作用，而５×１０４～１×１０５／ｍｌ树突状细胞却抑制ＬＡＫ杀伤活性。这说明人外周血树突状细胞对ＬＡＫ细胞活性起双相性调节作用。