离体条件下葡萄砧木'5BB'植株再生体系研究

以葡萄砧木‘5BB’组培苗为试材,研究不同外植体类型、基本培养基、植物生长调节剂的种类及其浓度组合对‘5BB’植株再生的影响。结果表明:MS基本培养基为适合叶柄不定芽再生的基本培养基;着生于顶端第2、3节位的叶柄为适宜的外植体;适于叶柄不定芽再生的植物生长调节剂种类及质量浓度组合为2.5 mg/L BA 0.05mg/L IBA;叶柄不定芽再生率最高可达到43.33%。     

李砧木Marianna离体叶片再生体系优化研究

以李砧木‘Marianna’试管苗新梢顶端第1片叶为外植体,研究激素组合、基本培养基种类及外植体类型等对不定芽再生的影响。结果表明:1/2 MS基本培养基和WPM培养基再生率显著高于MS和SH培养基;叶片附带叶柄的外植体再生率和再生不定芽数显著高于叶柄和切除叶柄的叶片外植体;最佳再生培养基为1/2MS+2.0mg/L TDZ+0.1 mg/L IBA+0.25%琼脂+3.0%蔗糖,最高再生率和再生不定芽数分别为81.7%和7.46±1.38个;最佳生根培养基为1/2MS+0.5~1.0 mg/L IBA,能获得96.7%生根率、较高的生根数和根长。     

泰山酸枣离体叶片再生体系的建立

以泰山酸枣叶片为外植体,以WPM为基本培养基,研究了植物生长调节剂种类、浓度及培养方法等因素对离体叶片不定芽再生的影响,结果表明:不定芽启动的最佳培养基激素组合为1.0 mg·L-1 TDZ+0.5 mg·L-1 IAA;不定芽诱导伸长最佳培养基的激素组合为0.1 mg·L-1 IAA+0.5 mg·L-1 GA3.暗培养是不定芽再生的必需条件,在最适宜的不定芽再生培养基上,叶片连续光培养,不定芽不能再生;叶片先进行暗培养3周后转入光下培养,叶片不定芽再生效果最好,再生率最高可达100%.     

'早红'草莓高效遗传转化受体系统的建立

本文以草莓主栽品种'早红'组培苗离体叶片和叶柄为外植体,进行叶龄、暗培养、植物生长调节剂配比及抗生素敏感性研究,建立草莓高效遗传转化的受体系统.在含3.0 mg/L 6-BA与0.1 mg/L 2,4-D的MS培养基上,30 d叶龄的叶片再生频率高达98.31%,平均每叶片再生芽数5.09个,叶柄切段的再生频率为89.25%,平均每叶柄切段再生芽数4.92个,叶片的再生频率略高于叶柄;不定芽在含0.2 mg/L 6-BA与0.2 mg/L GA_3的MS继代培养基上培养成苗.将生长状态良好的不定芽转至含0.2 mg/L IBA的1/2 MS培养基上生根,生根率达100%,平均生根数量16.27条,平均根长1.85 cm.抗生素敏感性试验表明,草莓外植体适宜的卡那霉素选择压力为25 mg/L,头孢霉素的筛选浓度为300mg/L.本研究建立的再生体系可作为草莓遗传转化的受体系统.     

提高榨菜离体培养植株再生频率

采用榨菜“浙桐1号”品种为材料,以MS为基本培养基,通过对不同植物生长调节剂的组合和不同外植体等主要因素的筛选,大幅度提高了榨菜离体培养植株再生频率。结果表明,2mg／L6．BA 0．2mg／L2,4-D的组合较为适宜,其不定芽再生频率可达50％,且外植体以下胚轴为好：而CPPU和2,4-D的适宜组合为1．5mg／L 0．2mg／L,其不定芽再生频率高达66．67％,最适外植体为带柄子叶。同时,研究结果显示,添加0．25～1mg／L的GA,对榨菜已分化的不定芽的伸长有抑制作用;子叶柄和下胚轴外植体的分化具有极性现象。     

川芎高频再生体系的建立

为建立川芎(Ligusticum chuanxiong Hort.)高频再生体系,优化了诱导和分化培养基及培养条件.以叶柄为外植体,以MS为基本培养基,KT2.0 mg/L+ IAA0.5mg/L的激素组合对不定芽分化最有利.在此基础上,针对外植体来源、培养条件和愈伤组织继代时间3个因素进行优化.结果表明:采用川芎无菌苗叶柄作为外植体,黑暗条件下诱导出愈伤组织,再在光照下继代培养15d后转入分化培养基中对不定芽诱导最为有利,分化率为44.4％.分化后得到的不定芽在含NAA0.5 mg/L和IBA 0.5 mg/L的1/2MS培养基上生根率达90％,移栽存活率为95％.     

草莓高效离体叶片再生体系的建立

以草莓'明宝(Meiho)'和'红颊(Benihope)'的叶片为外植体,研究了不同基本培养基、暗培养时间、植物生长调节剂、叶龄、不同放置方式对其不定芽再生的影响.结果表明:各品种叶片不定芽离体再生的最佳条件不同.'明宝'叶片的最佳不定芽再生培养基为MS+2.5 mg/L TDZ+0.1 mg/L IBA+0.1 mg/L 2,4-D,叶片再生的最佳叶龄为30～40 d,再生率可达82.8%;'红颊'叶片的最佳不定芽再生培养基为MS+2.0 mg/L TDZ+0.1 mg/L IBA+0.1 mg/L 2,4-D,叶片再生的最佳叶龄在10～20 d,再生率可达79.8%.2个品种叶片暗培养14 d可以提高不定芽再生率;叶片正放比反放再生效果好;添加8 mg/L AgNO3和1 000 mg/L活性炭可有效提高再生率.     

川芎高频再生体系的建立

为建立川芎(Ligusticum chuanxiong Hort.)高频再生体系,优化了诱导和分化培养基及培养条件。以叶柄为外植体,以MS为基本培养基,KT 2.0 mg/L+IAA 0.5 mg/L的激素组合对不定芽分化最有利。在此基础上,针对外植体来源、培养条件和愈伤组织继代时间3个因素进行优化。结果表明:采用川芎无菌苗叶柄作为外植体,黑暗条件下诱导出愈伤组织,再在光照下继代培养15 d后转入分化培养基中对不定芽诱导最为有利,分化率为44.4%。分化后得到的不定芽在含NAA 0.5 mg/L和IBA 0.5 mg/L的 1/2MS培养基上生根率达90%,移栽存活率为95%。     

梨叶柄再生不定芽的研究

研究获得了梨品种八月红和水晶的叶柄再生不定芽,不定芽由愈伤组织分化形成。诱导叶柄再生不定芽的适宜培养基为NN69＋IBA0.5mg/L（八月红）或IAA0.5mg/L(水晶）＋TDZ1.0mg/L＋蔗糖30g/L＋琼脂6.0g.。AgNO3浓度在0.1-1.5mg/L范围对八月红梨叶柄再生有促进作用,培养基中附加AgNO30.5mg/L八月红梨叶柄再生效率最高。     

不同培养条件对南烛离体叶片不定芽再生的影响

以南烛( Vaccinium bracteatum Thunb.)组培苗离体叶片为实验材料,研究了不同培养条件对其不定芽再生状况的影响并筛选出最适培养条件。结果表明：基本培养基类型、生长调节剂种类及质量浓度、琼脂和蔗糖质量浓度、外植体类型、外植体接种方式和暗培养时间均对南烛离体叶片不定芽的出芽时间和再生率、外植体干枯率以及不定芽的生长状况有明显影响。南烛离体叶片不定芽再生的最佳培养条件为：以中脉横切2次的叶片为外植体,以近轴面面向培养基的方式接种;以1/2MS-1/2WPM为基本培养基,添加7.5 g·L-1琼脂、25.0 g·L-1蔗糖、0.5 mg·L-1 TDZ、5.0 mg·L-12ip或4.0 mg·L-1 ZT,暗培养21 d后转至光照度2000 lx、光照时间16 h·d-1的条件下培养。     

‘东红'猕猴桃高效再生体系的建立

为有力推动猕猴桃产业化种苗生产及推广,快速高效地繁育猕猴桃新种质资源,同时为猕猴桃多倍体育种、转基因育种等新兴育种技术创造新种质资源奠定基础,该研究以‘东红’猕猴桃叶片、叶柄为外植体,探讨了不同植物生长调节剂种类及质量浓度组合对不定芽诱导过程中不定芽形成的影响,并研究了不同植物生长调节剂对‘东红’组培苗不定根诱导的影响。结果表明:‘东红’再生最佳外植体为叶柄,叶柄不定芽再生最佳培养基为MS+0.5μg·mL~(-1)6-BA+0.2μg·mL~(-1)NAA,不定芽平均再生率为91.2%;不定芽经过壮苗培养(MS+0.2μg·mL~(-1)6-BA+0.05μg·mL~(-1)NAA),取2～3 cm高幼苗进行生根诱导,不定根再生率为93%,平均根数为6条;生根后,种苗移栽成活率在80%以上。初步建立了‘东红’叶柄高效再生体系,为猕猴桃快速的产业化种苗生产及推广提供了有力保证,也为后期猕猴桃育种研究提供理论依据。     

不同辣椒材料离体再生及其影响因素的研究

以8个辣椒(Capsicum annuumL.)纯系为材料,对不同材料、外植体种类和激素组合等因素对辣椒植株离体再生的影响进行了研究。结果表明,较高的6-BA/IAA值有利于辣椒外植体的分化再生,而6-BA/IAA值较低则适合于再生芽的伸长;不同辣椒材料的再生能力差别较大;辣椒带柄子叶再生能力比下胚轴强,是较好的外植体材料;12~16 d苗龄的外植体分化频率较高;在供试的8个辣椒材料中‘2096’、‘B4’和‘B7’的再生能力较强。高频率的不定芽分化培养基为MB(MS无机成分 B5有机成分) 0.8 mg/L IAA 5.0 mg/L 6-BA 4.0 mg/L Ag-NO3;不定芽伸长的培养基为MB 0.8 mg/L IAA 2.0 mg/L 6-BA 2.0 mg/L GA3 4.0 mg/L AgNO3;高效生根诱导培养基为MB 0.2 mg/L IAA 0.1 mg/L NAA。     

濒危黄杜鹃的离体快速繁殖体系研究

以濒危野生黄杜鹃(Rhododendron molle G.Don)茎尖为试材,比较研究3种不同基本培养基和9个激素浓度组合对不定芽增殖的影响,以建立黄杜鹃的快速繁殖体系.结果表明:3种不同基本培养基对野生黄杜鹃不定芽增殖的效果差异显著;相同激素种类与浓度下,WPM培养基上的不定芽增殖系数最大,达10.5.激素种类与浓度对黄杜鹃不定芽的增殖影响差异很大,以单独使用1.0 mg/L ZT最佳,再生率达100%,不定芽增殖系数为10.5.综合分析显示,黄杜鹃不定芽增殖的最佳培养条件为WPM+ZT 1.00 mg/L;健壮、整齐一致的不定芽在1/2 WPM+0.05 mg/L NAA上生根,40 d后生根率可达86.7%,驯化成活率达92.86%.     

商陆离体再生体系的构建

目的:建立商陆离体再生体系。方法:选取商陆的幼茎、茎节、叶片、叶柄和顶芽为外植体,以MS作为基本培养基,通过添加不同浓度配比的植物生长调节剂分别进行愈伤组织、丛生芽和生根诱导,筛选商陆离体再生体系方案。结果:顶芽和幼茎为外植体诱导的愈伤组织出愈时间早,愈伤组织质量高,以培养基MS+6-BA0.5 mg/L+2.4-D 0.5 mg/L的诱导率最高,达到100%;其中,只有以顶芽产生的愈伤组织才能分化出丛生芽,芽分化培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.25 mg/L,诱导率为98%;诱导生根的适宜培养基为1/2 MS+NAA 0.3 mg/L,诱导率达100%。结论:建立和完善了商陆离体再生体系方案,为商陆遗传转化体系的构建奠定了基础。     

圆叶葡萄'Alachua'叶柄再生体系的建立

以圆叶葡萄'Alachua'的叶柄为外植体,通过对基本培养基、激素种类及浓度组合的筛选,研究圆叶葡萄Alachua再生体系的建立.结果表明:以B5 2.0 mg/L BA 0.5 mg/L 2,4-D诱导叶柄形成愈伤组织效果较好,叶柄诱导率达86%;再分化培养基以B5 4.0 mg/L TDZ效果较好,达到19.32%;诱导生根以培养基WPM 0.1mg/L IBA的效果较好,生根率达90%.移栽至珍珠岩与营养土(3∶1)的混合基质中,成活率达93%.     

不同植物生长调节剂对铁皮石斛(Dendrobium candidum)再生的影响

本实验以铁皮石斛无菌苗茎段为外植体,通过添加不同浓度的植物生长调节剂,诱导铁皮石斛愈伤组织形成与分化,建立铁皮石斛组织培养再生体系。结果表明,外植体接种5 d后,在改良MS培养基上添加2 mg/L PBU和0.05 mg/L IAA,可达到100%的愈伤诱导率。将愈伤组织接种在MS培养基上,添加0.1 mg/L NAA和0.5 mg/L 6-BA,不定芽诱导率为90.8%。适合铁皮石斛芽增殖培养基为:MS+7 g/L琼脂+30 g/L蔗糖+100 mg/L Vc+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA。PBU浓度为0.5 mg/L,NAA浓度为0.05 mg/L时,芽苗生长情况良好,最适合用于不定芽伸长。铁皮石斛最适生根的培养基为:MS+7 g/L琼脂+30 g/L蔗糖+100 mg/L Vc+0.5 mg/L IBA,生根率可高达94.1%。本研究成功建立了铁皮石斛高效再生体系。     

樱桃砧木Colt离体叶片再生

以樱桃砧木Colt试管苗的叶片为外植体 ,通过先诱导愈伤组织分化不定芽以及叶片直接分化不定芽两种途径诱导再生。结果表明 :在MS附加NAA 1 0mg/L、KT3 0mg/L、ZT0 2 5mg/L培养基中 ,愈伤诱导率可达 1 0 0 % ;诱导的愈伤在MS附加NAA 0 2mg/L、IAA0 5mg/L、6 BA 0 5mg/L、KT 1 0mg/L、GA 0 5mg/L培养基中 ,不定芽分化率为 2 1 3% ;在MS附加 6 BA 6 0mg/L、NAA 1 0mg/L、GA 0 5mg/L中 ,叶片 -叶柄不定芽诱导率可达 48 3%。     

观赏羽衣甘蓝高频再生体系的建立

观赏羽衣甘蓝是一种赏食兼用的耐冻优良景观植物.为了通过基因工程手段赋予其抗虫性,并进一步提高其低温耐受性,获得新的抗性种质,本研究以优良育种品系为试材,详细探讨了影响离体培养不定芽再生的因素,建立了高效再生体系.以8份不同类型羽衣甘蓝基因型的带柄子叶、子叶、下胚轴为外植体,研究了不同基因型、不同外植体、不同的培养基激素浓度配比及添加AgNO3对不定芽诱导的影响.结果表明:无论基因型及使用的培养基,带柄子叶均为最佳外植体;不同的基因型、不同外植体其最佳的芽诱导培养基不同;筛选出两份材料,其带柄子叶分别在L6(MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1mg/L)及L3(MS+6-BA 1.5 mg/L)培养基中不定芽诱导率为100%,下胚轴诱导率最高也能达88.33%;培养基中添加4 mg/L AgNO3不利于羽衣甘蓝的不定芽诱导;再生株生根以MS+NAA 0.1 mg/L效果好,生根率可达100%.     

桃下胚轴高频离体再生体系的建立及优化

以6个桃品种的下胚轴为外植体,研究不同基因型、不同基本培养基及植物生长调节物质组合等对桃下胚轴离体再生不定芽的影响.结果显示:不同基因型桃下胚轴再生率差异显著;QL为'97-8-4'和'甜桃王'的最适基本培养基,MS为'金童5号'的最适基本培养基;植物生长调节物质用2.0 mg/L BA+0.04 mg/L NAA或单独使用2.0 mg/L BA的再生效果好.'97-8-4'在QL+2.0 mg/L BA+0.04 mg/L NAA+100 mg/L肌醇的培养基中再生率最高,为94.44%;'甜桃王' 在QL+2.0 mg/L BA+0.04 mg/L NAA+100 mg/L肌醇+500 mg/L CH的培养基中再生率最高,为80.42%;'金童5号'在QL+2.0 mg/L BA+0.04 mg/L NAA+200 mg/L肌醇的培养基中再生率最高,为78.00%.     

白皮松成熟胚的离体培养研究

以白皮松成熟胚为外植体诱导再生小植株.试验结果表明,成熟胚不定芽诱导以MS培养基最佳,附加0.294 mg/L的NAA和3.56 mg/L的6-BA时,诱导率接近100%;MS培养基附加NAA(0.05 mg/L)时,平均增殖系数可达6.3以上.不定芽增殖率最大值(10)出现在SH培养基上,此时NAA浓度为0.05 mg/L、6-BA浓度为4 mg/L.MS培养基中加入适量活性炭和GA3能促进不定芽生长,随着活性炭和GA3浓度的增加,有效嫩梢(≥2cm和≥4 cm)的比率显著增高;当活性炭和GA3浓度过高时(分别超过2.75 g/L和4.1 mg/L),不定芽的伸长与生长受到抑制.在离体培养条件下,以种胚为外植体获得了无根苗.