总评归一值法优选山豆根茎多糖的微波预处理-超声波提取工艺及生物活性研究

目的:研究山豆根茎多糖的微波预处理-超声波提取工艺及其生物活性。方法:以多糖得率和多糖纯度的总评归一值为评价指标,采用正交设计优选山豆根茎多糖的微波预处理-超声波提取工艺,并对其稳定性、抗氧化活性和清除亚硝酸盐活性三种生物活性进行研究。结果:最佳提取工艺条件为:解析剂比1∶5(g/m L),微波时间30 s,料液比1∶25(g/m L),超声功率140 W,提取时间20 min,该工艺条件下,多糖得率为3.27%,多糖纯度为29.49%,提取效果优于热水浸提法和超声波提取法。多糖稳定性研究表明粗多糖在温度40~70℃、Ca~(2+)或柠檬酸中较稳定,但在温度高于70℃、H_2O_2、Na_2SO_3、VC、Na~+、Al~(3+)、Cu~(2+)或Fe~(3+)的条件下稳定性较差。体外抗氧化活性研究表明粗多糖具有一定的抗氧化活性,当浓度为1.96 mg/m L时,微波预处理-超声波提取法粗多糖对·OH和O-2·的清除率分别可达78.14%和71.16%;亚硝酸盐清除研究表明粗多糖具有良好的清除亚硝酸盐活性,当添加量为20 m L(或19.60 mg)时,清除率可达82.94%,清除效果与0.32 mg VC相当;相同浓度下,微波预处理-超声波提取法所提取的粗多糖对O-2·和亚硝酸盐的清除活性与超声提取法相当,且对·OH的清除活性优于超声提取法。结论:山豆根茎中富含多糖类物质,具有良好的抗氧化活性和清除亚硝酸盐活性,粗多糖稳定性较差,建议低温避光保存。     

牡蛎多糖提取工艺的研究

优化提取工艺条件,从牡蛎中提取具有调节机体免疫、抑制肿瘤、延缓衰老、降血糖、血脂、等生物活性的多糖。采用硫酸-苯酚法测定牡蛎多糖,根据L9(34)正交试验对牡蛎多糖(Polysaccharide of Oyster)的提取条件进行优化,确定水提取多糖的工艺参数为:pH为6、提取时间5 h、提取次数为3次、水浴温度为75℃,该条件下多糖得率达2.56%。     

不同提取方法对小麦麸皮多糖化学组分及免疫调节活性的影响

目的:以小麦麸皮超微粉为实验材料,分别用酸法、碱法、水提和酶法提取获得多糖,研究不同提取方法对小麦麸皮多糖得率、提取后麸皮残渣微观形态、糖醛酸含量、硫酸根含量、蛋白质含量、单糖组成及免疫调节活性的影响。方法:采用苯酚-硫酸法测定多糖含量,硫酸-间羟基苯酚法测定糖醛酸含量,BaCl₂-明胶法测定硫酸根含量,气相色谱法测定单糖组分;采用MTT检测细胞毒性,Griess法测定细胞上清液中NO含量,Western Blot法检测细胞诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)和环氧合酶-2(COX-2)蛋白表达。结果:碱提法获得的粗多糖得率最高,为31.73%,测定提取的粗多糖中多糖含量为57.79%;小麦麸皮多糖中糖醛酸和硫酸根的含量依次为:碱提法>酶提法>酸提法>水提法;不同提取方法的小麦麸皮多糖组分中所含单糖的种类为阿拉伯糖、木聚糖及葡萄糖;MTT法检测四种小麦麸皮多糖对细胞均无毒性,其中水提多糖能促进RAW264.7细胞分泌NO因子并能促进细胞诱导型一氧化氮合成酶和环氧合酶-2蛋白的表达。结论:四种不同提取方法所得到的小麦麸皮多糖的得率、化学组成成分及生物活性各不相同,采用传统水提法工艺提取多糖更利于维持多糖的免疫调节活性。     

不同提取方法猴头菇粗多糖的表征及其抗氧化活性的比较

为探究不同提取方法对猴头菇粗多糖提取效果及抗氧化活性的影响。以猴头菇子实体为原料,通过热水、超声、碱液提取法分别提取猴头菇多糖,得到猴头菇粗多糖提取物:W-He P、U-HeP和A-HeP;研究和比较了不同提取工艺对多糖得率、理化性质和抗氧化活性的影响。结果表明:粗多糖得率依次为A-HeP(4.66%)U-HeP(3.92%)W-HeP(3.29%)。红外光谱分析表明3种粗多糖均呈现出典型的吡喃型葡聚糖和β-型糖苷键吸收;紫外光谱分析表明3种粗多糖组分中均含有蛋白质,而β-消除反应表明3种粗多糖组分中均存在O-糖肽键,说明3种粗多糖中的蛋白质为含有糖链和蛋白质残留的糖蛋白。对3种粗多糖组分的还原力和DPPH·、·OH、ABTS~+·清除效果分析表明3种粗多糖均具有一定的抗氧化能力,其中A-HeP对DPPH·、·OH和ABTS~+·均有较好的清除效果,其清除率分别可达到72%(5 mg/mL)、75%(5 mg/mL)和85%(0.5 mg/mL)左右。由此可见,碱液提取效果较好,碱提猴头菇粗多糖A-HeP具有较好的清除自由基能力,可作为天然抗氧化剂开发利用。     

黄芪粗多糖提取工艺的优化

为了提高黄芪粗多糖的提取率,并且进一步深入研究其生物活性,采用单因素试验结合正交试验的方法,通过热水提取法提取黄芪粗多糖,对提取工艺进行优化。试验结果表明,黄芪多糖提取的最佳提取工艺为:料水比为1∶20(g/m L)、提取温度为60℃、提取4 h、提取2次,此条件下的多糖得率为13.7%。     

芦笋多糖提取纯化工艺及其体外抗氧化研究

目的：探讨芦笋多糖的提取纯化方法及其体外抗氧化活性。方法：采用L9(34)正交试验设计,考察提取温度、提取时间、料液比、提取次数等因素对芦笋粗多糖浸提效果的影响。进一步以酶法除蛋白纯化粗多糖,探索3种蛋白酶作用的最佳工艺条件及其除蛋白效果,用硫酸-苯酚法和DNS法定量分析粗多糖;并研究芦笋多糖对自由基的清除作用以及对红细胞溶血、肝线粒体肿大的抑制作用。结果：在提取温度100℃、提取时间3h、料液比1:20(g/mL),提取1次条件下,芦笋粗多糖的得率最高,为(8.50±1.07)%,经碱性蛋白酶纯化后,纯度可达(52.40±0.47)%。芦笋多糖在体外体系中可显著清除DPPH自由基、 ·OH、O2－ ·,并具有抑制红细胞溶血,抑制肝线粒体肿大的作用。结论：芦笋多糖具有较好的抗氧化活性。     

不同提取方式对铁皮石斛多糖及体外降血糖的影响

以铁皮石斛为原料,选用传统热水提取法、酶法提取、闪式提取法、超声波提取法、冻融提取法5种提取方式在各自最佳参数上提取铁皮石斛粗多糖,以多糖得率、平均分子质量、多糖纯度、多糖黏度、α-葡萄糖苷酶抑制率和α-淀粉酶抑制率为指标对5种提取方式进行综合评估。结果表明:冻融提取法所得铁皮石斛多糖得率和平均分子质量最高,多糖得率高达37.1%,其对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制活性相对最高,这是由于冻融辅助法较好地保留了多糖的分子结构及其生物活性。     

无花果粗多糖提取工艺及抗氧化活性研究

以无花果为试材,采用均匀设计法对无花果中多糖类物质的超声辅助提取工艺进行考察,采用U7(73×31)表进行试验,并对所提取的粗多糖样品进行抗氧化能力检测。结果表明,粗多糖的提取工艺为提取温度70℃,固液比1:16(m:V),超声功率150 W,提取时间30 min,粗多糖提取率为11.20%。抗氧化试验表明粗多糖具有较强的还原力、抑制脂质过氧化能力,对超氧阴离子自由基的清除能力达85.39%,该结果表明无花果多糖具有抗氧化活性,对化学反应生成的活性氧自由基具有显著的清除作用。     

板栗种仁多糖的提取纯化及体外抗肿瘤活性筛选

以燕山地区板栗为原料,利用加压溶剂萃取法提取板栗种仁粗多糖,以多糖得率为指标,通过单因素结合响应面法优化提取工艺条件。将最优提取条件下得到的粗多糖经除蛋白、脱色素、透析后得到纯化多糖,继而借助制备型高效体积排阻色谱得到板栗多糖的高分子量组分(YCP-H),分析了其形貌特点、结构特征和单糖组成,并针对8种人体肿瘤细胞模型进行了体外抗肿瘤活性筛选。结果表明,高压溶剂萃取法提取板栗种仁粗多糖的最佳提取条件为:当投料量为10 g,静态提取次数为3次时,设定温度60 ℃、时间9 min、压力6 MPa,多糖得率可达19.78%±0.27%。组分YCP-H是具有β-吡喃构型的酸性多糖,重均分子量范围为217~5900 kDa,在扫描电镜下呈现纤维状的微观形貌,单糖组成包含阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖和岩藻糖。YCP-H对人肝癌细胞HepG2的增殖具有显著(P<0.05)的抑制作用,其半数抑制浓度可达0.08 μg/mL。此外,YCP-H对人结肠癌细胞HCT-116和肺癌细胞A-549的增殖也有较强的抑制作用。     

厚壳贻贝多糖的提取工艺优化及体外生物活性研究

以抗氧化和抗肿瘤活性为指导优化提取工艺,分别采用热水提取,两步联合酶解法（木瓜蛋白酶和胰蛋白酶）从厚壳贻贝中提取和分离纯化具有生物活性的贻贝多糖,对其进行基本理化性质分析和DEAE-Cellulose 52 柱层析分离纯化并进行体外抗氧化、抗肿瘤生物活性研究。通过对热水提取法,单一酶提法和联合酶提取法得到的贻贝多糖粗品进行理化性质分析和活性筛选,发现联合酶解提取得到的贻贝粗多糖在得率、纯度和生物活性上均优于其他方法提取得到的粗多糖,其提取粗多糖的得率为23.69%。联合酶提粗多糖体外抗氧化研究表明其对DPPH自由基、超氧阴离子自由基和脂质过氧化物清除的半最大效应浓度（concentration for 50% of maximal effect,EC50）分别为3.75、5.01 mg/mL和2.41 mg/mL;对体外前列腺癌DU-145细胞48 h,IC50为2.93 mg/mL。通过分离纯化后对各组分的得率和组成分析表明：联合酶提可提高贻贝多糖类糖胺聚糖（MT3）的含量,并达到13.5%,单糖组成主要为Man、GlcN、GlcUA、Gal和Fuc,分子质量约为18 kD。和其他组分相比,MT3 组分表现出良好的体外抗肿瘤活性,对体外前列腺癌DU-145细胞48 h,IC50 为2.71 mg/mL。通过活性追踪和工艺优化结果表明,热水提取后酶解工艺不仅可以降解蛋白提高多糖的纯度,而且还可以显著提高贻贝多糖中类糖胺聚糖的含量,而贻贝类糖胺聚糖是贻贝多糖的主要活性组分,具有良好的抗肿瘤活性。     

南方红豆杉多糖的含量测定及体外降血糖活性研究

采用水提醇沉法提取南方红豆杉多糖,硫酸-苯酚法测定多糖含量;采用HepG2细胞和α-葡萄糖苷酶作为体外受体模型,研究南方红豆杉多糖的降血糖效果.结果表明:南方红豆杉药材中多糖的含量为1.75％,无水葡萄糖在1.507～13.563 μg/mL内呈良好线性关系,平均回收率97.54％,RSD为1.60％;以二甲双胍和阿卡波糖作为阳性药,南方红豆杉粗多糖对胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗具有促进作用,对α-葡萄糖苷酶具有较好的抑制活性,粗多糖抑制活性(IC50 38.61 mg/L)明显高于阳性对照药(IC50 1081.41mg/L),且呈现剂量依赖性.     

山楂多糖提取工艺优化及其降血糖、降血脂活性

本文优化了山楂多糖的微波辅助提取工艺,并对其降血糖降血脂活性进行了研究。在考察固液比、提取温度、微波功率、提取时间对山楂多糖提取量影响的基础上,采用Box-Behnken响应面法对提取工艺进行优化。通过测定初步纯化的山楂粗多糖对α-葡萄糖苷酶、胰脂肪酶抑制率和DPPH·清除率,评价山楂多糖的降血糖、降血脂活性。结果表明,山楂多糖的最佳提取工艺条件为:提取温度63 ℃,微波功率500 W,提取时间7 min,在此条件下山楂多糖提取量为(147.10±0.32) mg/g。山楂粗多糖对α-葡萄糖苷酶、胰脂肪酶抑制率和DPPH·清除率的IC₅₀分别为(99.22±0.89) μg/mL、(22.50±0.79) mg/mL、(185.80±0.64) μg/mL,表明山楂粗多糖具有一定的降血糖、降血脂作用。     

春生田头菇粗多糖超声辅助提取及抗氧化性测定

目的:为高效利用洞庭湖特色芦苇食用菌资源,开发食用菌多糖功能性食品。方法:以芦苇食用菌春生田头菇为试验原料,以多糖提取率为指标,采用超声辅助热水提取法进行粗多糖提取,以液料比、超声时间、超声功率、热水浸提温度、热水浸提时间为单因素条件进行试验,依据Box-Behnken中心组合试验设计建立数学模型,优化春生田头菇粗多糖的提取工艺条件,并考察春生田头菇粗多糖对DPPH自由基、ABTS自由基的清除能力。结果:结合实际,最佳提取工艺条件为料液比1∶50 (g/mL)、超声提取时间20 min、超声功率150 W、热水浸提温度80℃、热水浸提时间4 h。在此工艺条件下,春生田头菇粗多糖提取率为5.08%。提取的粗多糖对DPPH自由基和ABTS自由基清除率分别为55.05%,58.47%,半抑制浓度IC₅₀为1.03,0.28 mg/mL。结论:春生田头菇多糖在超声辅助热水提取法最佳工艺参数下,提取得率较高,同时该粗多糖具有一定的体外抗氧化能力。     

鳞柄小奥德蘑多糖提取工艺的优化及抗氧化活性

研究鳞柄小奥德蘑多糖的最佳提取工艺及其体外抗氧化活性。采用正交实验法优化提取工艺,蒽酮-硫酸法和3,5-二硝基水杨酸法(DNS法)测定多糖含量,分别采用普鲁士蓝法、水杨酸法和邻苯三酚自氧化法测定鳞柄小奥德蘑多糖的抗氧化能力。研究结果显示,影响鳞柄小奥德蘑粗多糖得率的主次因素为:料液比提取时间提取温度提取次数,多糖的最佳提取工艺为:料液比1∶40,提取时间1 h,提取温度90℃,提取次数3次。在最佳提取工艺条件下,水提法提取鳞柄小奥德蘑粗多糖的得率约8.84%。体外抗氧化活性测定结果表明,鳞柄小奥德蘑粗多糖对·OH的清除效果比较明显,随着质量浓度的升高,清除效果越发显著(p0.05),4 mg/m L的粗多糖对·OH的清除率达48.94%±12.32%;鳞柄小奥德蘑粗多糖具有一定的还原能力;对O-2·的清除能力较弱。因此,鳞柄小奥德蘑中粗多糖的含量较高且具有一定的抗氧化能力,可用于开发研制多糖药物和保健性食品等深加工产品。     

不同提取方法对黄精多糖理化特性和生物活性的影响

为比较不同提取方法对黄精多糖理化特性和生物活性的影响,该文以黄精根茎为原料,分别用水提法(Water Extraction,WE)、酶解法(Enzyme Extraction,EE)、超声辅助法(Ultrasonic-assisted Extraction,UE)提取黄精多糖(Polygonatum sibiricum Polysaccharides,PP),比较了不同提取方法对黄精多糖得率、化学组成、理化特性(持油力、醇溶性、吸湿性)、生物活性(抗氧化活性、α-葡萄糖甘酶抑制活性、α-淀粉酶抑制活性)、单糖组成及分子量大小的影响。结果表明：酶解法较其他两种提取方法相比,具有较高的得率(8.11%)、总糖含量(52.79%)、持油力(5.67 g/g)、吸湿率(25.28%)和重均分子量(5.343×10⁵ g/mol)。三种提取方法得到的多糖对2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS+)的半数抑制质量浓度IC₅₀(mg/m L)分别为0.41、0.23、0.25;对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)的半数抑制...     

正交法优选党参粗多糖水提工艺

采用正交试验法优选党参粗多糖的水提工艺,研究浸泡时间(A)、提取时间(B)和提取温度(C)等三个因素对党参粗多糖提取率的影响,用苯酚一硫酸法测定多糖含量.以粗多糖得率为指标,各因素对党参多糖提取效果的影响程度依次为提取温度(C)＞提取时间(B)＞浸泡时间(A),结果显示党参粗多糖水提工艺条件为:浸泡时间2 h,提取时间3 h,提取温度100 ℃.     

响应面法优化南海鸢乌贼墨汁多糖提取工艺

目的:为探索南海鸢乌贼墨汁多糖的最佳提取工艺,利用响应面分析法对南海鸢乌贼墨汁多糖提取工艺进行优化。方法:在单因素实验基础上选取因素与水平,根据中心组合实验设计原理采用三因素三水平的响应面分析法,以获得多元二次线性回归方程,以Y(多糖含量(%)×粗多糖得率(%)×104)为响应值分析各因素的交互作用。结果:鸢乌贼墨汁多糖提取的最佳工艺条件:料液比1∶2、浸提液p H5.5、加酶量1.00%,此条件下,粗多糖得率为0.91%,多糖含量为9.8%,与理论预测值接近。结论:采用响应面法优化鸢乌贼墨多糖提取工艺,取得最佳提取工艺,且具有可行性。     

超声波辅助杂多酸提取竹叶多糖工艺优化及其生物活性研究

以竹叶为原料,采用磷钨酸耦合超声波提取竹叶多糖,通过单因素实验结合响应面试验优化竹叶多糖的提取工艺。利用傅里叶红外光谱(FT-IR)、电子扫描显微镜(SEM)和高效阴离子色谱(HPAE),对竹叶多糖结构、单糖组成进行了初步的表征和检测,并研究了竹叶多糖的体外相关生物活性。结果表明,提取竹叶多糖最优条件为超声温度80℃、提取时间2 h、料液比1:20 g/mL、磷钨酸质量分数4.50%、超声功率300 W,该条件下竹叶多糖的得率为9.89%。竹叶多糖是一种具有α-型吡喃糖苷键结构的杂多糖,由L-岩藻糖、L-鼠李糖、L-阿拉伯糖、D-葡萄糖、D-半乳糖和D-木糖组成。竹叶多糖对还原力、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐自由基(ABTS)和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH)均具有一定的抑制作用,且体外抗氧化活性的能力与竹叶多糖的质量浓度呈现正相关。在0.25~4.00 mg/mL范围内,随着竹叶多糖质量浓度的增加,其对癌细胞HepG-2的增殖抑制率逐渐增大。当竹叶多糖质量浓度为4.0 mg/mL时,对肿瘤细胞HepG-2增殖的抑制率达到半抑制浓度,说明竹叶多糖具有一定的抗肿瘤活性。     

桦褐孔菌纯化多糖体外降血糖活性研究

采用水提醇沉法得到桦褐孔菌发酵粗多糖,将粗多糖过DEAE-52纤维素柱分离纯化得到两种多糖(EIOP1、EIOP2),本文以α-葡萄糖苷酶抑制活性、正常HepG2细胞及胰岛素抵抗HepG2细胞的单位细胞葡萄糖消耗量为主要指标,探究桦褐孔菌两种纯化多糖不同浓度(10、20、40、80、160和320 μg/mL)的降血糖活性,其中α-葡萄糖苷酶抑制活性以阿卡波糖作为阳性对照,葡萄糖消耗实验以二甲双胍作为阳性对照。结果表明,EIOP1、EIOP2的α-葡萄糖苷酶抑制活性均高于阳性对照组阿卡波糖与粗多糖,IC₅₀值分别为39.18、29.87 μg/mL。EIOP1在浓度为80 μg/mL时,对HepG2细胞的葡萄糖消耗量极显著高于对照组,促进效果最好,比对照组提高了30.62%(P<0.01);EIOP2在浓度在40 μg/mL时,葡萄糖消耗量极显著高于对照组,比对照提高了75.99%(P<0.01);对胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗实验发现EIOP1在浓度为40 μg/mL时,促进效果最好,比胰岛素抵抗组提高了30.00%,EIOP2在浓度为80 μg/mL时,促进效果最好,比胰岛素抵抗组提高了90.49%,高于Met组(P<0.01)。因此,桦褐孔菌纯化多糖对正常HepG2细胞和胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗均具有促进作用,对α-葡萄糖苷酶的抑制活性显著高于粗多糖。