S-甲基异硫脲抑制梗塞兔心肌诱导型一氧化氮合酶的表达

目的　研究S 甲基异硫脲 (SMT)对梗塞兔心肌组织内诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)活性的抑制作用。方法　对左房心耳和心尖中间弯曲的冠状动脉前外侧枝进行结扎 ,建立心肌梗塞模型。应用L 精氨酸转换为L 胍氨酸法测定家兔心肌梗塞区和非梗塞区诱导型一氧化氮合酶的活性 ,同时观察S 甲基异硫脲和NW 硝基 L 精氨酸 (L NNA)对诱导型一氧化氮合酶活性的抑制作用。结果　冠状动脉结扎后 48h、72h和 96h ,心肌梗塞区诱导型一氧化氮合酶活性比非手术组显著增加 (P <0 0 1) ,并在 72h达到峰值 ;梗塞后 72h左室壁cGMP含量也明显增加 (P <0 0 1) ;同时SMT能明显降低梗塞区心肌诱导型一氧化氮合酶的活性 (P<0 0 1)。结论　SMT能明显抑制梗塞兔心肌iNOS的活性 ,提示SMT对改善心脏功能和治疗急性心肌梗塞具有一定的临床效果。     

细胞因子对膀胱平滑肌细胞内诱导性一氧化氮合酶的激活作用(英文)

探讨肿瘤坏死因子α (TNFα)和γ干扰素(INFγ)对大鼠膀胱平滑肌细胞诱导性一氧化氮合酶(iNOS )的影响 .将TNFα (1nmol·L- 1)或INFγ(5 0kU·L- 1)分别或同时加入膀胱平滑肌细胞培养液 ,2 4h后测定细胞培养液中一氧化氮 (NO)水平 ,并用Western印迹方法检测iNOS的表达 .结果显示 ,TNFα或INFγ单独不能诱导iNOS表达 ,也不能引起NO水平显著提高 .但当TNFα和INFγ联合诱导细胞 2 4h ,则细胞培养液中NO水平明显升高 ,用Western印迹分析可见iNOS表达 ,说明TNFα和INFγ具有协同诱导作用 .在TNFα和INFγ加入膀胱平滑肌细胞前 30min ,加入NOS抑制剂L 氮 精氨酸甲酯 (L NAME) ,可显著抑制TNFα和INFγ对NO的生成诱导 .结果提示 ,TNFα和INFγ联合应用可激活膀胱平滑肌细胞iNOS .     

ZX-5对一氧化氮合酶表达和活性的调节作用

目的前期研究表明ZX-5中的一个异构体(R,R)ZX-5,能够促进脉络膜血流和增加NO的释放量。该研究是为了进一步阐明ZX-5是通过上调哪种一氧化氮合酶(NOS)的表达或活性而达到增加NO释放和促进脉络膜血流的作用。方法 Western blot和一氧化氮合酶活性检测试剂盒测定不同一氧化氮合酶表达和酶活性。结果 (S,S)ZX-5能够上调诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达,而不影响内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和神经型一氧化氮合酶(nNOS)表达;而(R,R)ZX-5能够上调eNOS表达,并且iNOS表达也有轻微上调作用,但是不改变nNOS的表达;酶活性测定研究发现(S,S)ZX-5仅仅能通过激活iNOS酶活而增加NO释放量;而(R,R)ZX-5也仅仅能够通过激活eNOS的酶活而增加NO释放。结论和(S,S)ZX-5相比,(R,R)ZX-5能够通过上调eNOS表达和活力,增加NO的释放,进而增加脉络膜的血流;因此(R,R)ZX-5也更加适合开发为治疗年龄相关性黄斑变性的药物。     

香菇多糖对巨噬细胞一氧化氦和一氧化氦合酶活性的影响

目的 研究香菇多糖(LTN)诱导巨噬细胞的一氧化氮(NO)生成和一氧化氮合酶(iNOS)的活性，探讨LTN的免疫调节作用机理。方法 采用Griess反应和荧光法测定不同剂量的LTN作用小鼠腹腔巨噬细胞后NO的生成量和iNOS活性。观察mRNA转录抑制剂、蛋白质合成抑制剂和iNOS抑制剂对巨噬细胞NO的生成和iNOS活性的影响。结果 LTN能使小鼠腹腔巨噬细胞NO生成增加，iNOS活性增高，并呈作用剂量依赖关系。3种抑制剂均能抑制LTN诱导的小鼠腹腔巨噬细胞NO的生成和iNOS活性。结论 LTN能刺激小鼠腹腔巨噬细胞提高iNOS活性和NO的生成。提示LTN的免疫调节作用机制可能与LTN刺激巨噬细胞NO生成有关。     

香菇多糖对巨噬细胞一氧化氮和一氧化氮合酶活性的影响

目的研究香菇多糖(LTN)诱导巨噬细胞的一氧化氮(NO)生成和一氧化氮合酶(iNOS)的活性,探讨LTN的免疫调节作用机理.方法采用Griess反应和荧光法测定不同剂量的LTN作用小鼠腹腔巨噬细胞后NO的生成量和iNOS活性.观察mRNA转录抑制剂、蛋白质合成抑制剂和iNOS抑制剂对巨噬细胞NO的生成和iNOS活性的影响.结果LTN能使小鼠腹腔巨噬细胞NO生成增加,iNOS活性增高,并呈作用剂量依赖关系.3种抑制剂均能抑制LTN诱导的小鼠腹腔巨噬细胞N0的生成和iNOS活性.结论LTN能刺激小鼠腹腔巨噬细胞提高iNOS活性和NO的生成.提示LTN的免疫调节作用机制可能与LTN刺激巨噬细胞NO生成有关.     

香菇多糖对巨噬细胞一氧化氮和一氧化氮合酶活性的影响

目的研究香菇多糖(LTN)诱导巨噬细胞的一氧化氮(NO)生成和一氧化氮合酶(iNOS)的活性,探讨LTN的免疫调节作用机理.方法采用Griess反应和荧光法测定不同剂量的LTN作用小鼠腹腔巨噬细胞后NO的生成量和iNOS活性.观察mRNA转录抑制剂、蛋白质合成抑制剂和iNOS抑制剂对巨噬细胞NO的生成和iNOS活性的影响.结果LTN能使小鼠腹腔巨噬细胞NO生成增加,iNOS活性增高,并呈作用剂量依赖关系.3种抑制剂均能抑制LTN诱导的小鼠腹腔巨噬细胞N0的生成和iNOS活性.结论LTN能刺激小鼠腹腔巨噬细胞提高iNOS活性和NO的生成.提示LTN的免疫调节作用机制可能与LTN刺激巨噬细胞NO生成有关.     

诱导型一氧化氮合酶抑制剂的研究进展

人体内NO由L-精氨酸在一氧化氮合酶(NOS)催化下产生,其中由诱导型一氧化氮合酶(iNOS)产生的NO与炎症关系密不可分,是炎症作用机制中重要的细胞内信使和分子标志物。与此同时NO又是重要的细胞内和细胞间的信号调节分子,维系着人体多种生理功能。因此安全有效的iNOS选择性抑制剂的研究开发备受关注。随着药物设计技术的发展,新型iNOS抑制剂不断涌现,现对近年来iNOS抑制剂的研究进展作一综述。     

诱导型一氧化氮合酶抑制剂的研究进展

一氧化氮(NO)是一种信号分子及自由基,参与哺乳动物体内许多重要生理过程,而且它在炎症和肿瘤疾病中发挥着重要作用。内源性的NO由一氧化氮合酶(NOSs)催化氧化L-精氨酸产生,人类一氧化氮合酶分为三种主要类型,包括神经元型(nNOS)、内皮型(eNOS)和诱导型(iNOS)。其中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)是钙离子非依赖型的并且会被外部刺激如炎性细胞因子和氧化应激(如TNF-α、IL-1β、PS、γ-射线、氧化物)激活。由i NOS产生的过量的NO会导致多种疾病。而且证据表明,对iNOS有效的抑制在预防和治疗炎症和肿瘤疾病、免疫紊乱、组织损伤、败血性休克、糖尿病和辐射诱导的血管内皮细胞损伤等方面都是有效的。因此iNOS抑制剂作为一个新的靶点及治疗途径,具有重要的医疗价值,本文综述了当前i NOS抑制剂的研究进展。     

银杏叶提取物对糖尿病大鼠一氧化氮水平的影响

目的研究银杏叶提取物(EGb)对糖尿病大鼠心肌、睾丸、脑组织一氧化氮水平的影响。方法用链脲佐菌素制备SD大鼠糖尿病模型。测定EGb对糖尿病大鼠心肌、睾丸、脑组织一氧化氮(NO)的含量及一氧化氮合酶(NOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、结构型一氧化氮合酶(cNOS)的活性的影响。结果与正常组相比,糖尿病大鼠心肌、睾丸组织NO含量及NOS、iNOS活性升高,脑组织NO含量及NOS活性升高。与糖尿病组相比,EGb治疗组大鼠心肌、睾丸组织NO含量及NOS、iNOS活性下降。结论EGb能够对抗糖尿病大鼠过量NO对心肌、睾丸组织的损伤。     

NO和iNOS在大鼠糖尿病早期肾脏中的变化

目的:观察糖尿病大鼠早期肾脏中一氧化氮(Nitric oxide,NO)含量和诱导型一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide syn-thase,iNOS)活性变化,探讨NO/iNOS在糖尿病早期肾脏损害中的作用机制。方法:取成年健康SD大鼠60只,随机分成糖尿病组(DM组)和正常对照组(NC组),每组30只。DM组大鼠采用一次性腹腔内注射STZ制造糖尿病大鼠模型,成模后和NC组分别于第1、2、4周麻醉取左肾,用硝酸还原酶法和吸光光度法测定肾组织中NO含量、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)和iNOS活性。所有数据用SPSS11.5统计软件进行统计学处理。结果:①DM组大鼠肾组织中NO含量、NOS和iNOS活性分别较同批NC组有显著性差异(P<0.05);②各组大鼠中NO含量与NOS活性、iNOS活性呈正相关。结论:糖尿病大鼠早期肾脏中iNOS活性增强,催化生成的NO在糖尿病早期肾脏损害中发挥重要作用。     

Altered L-arginine/nitric oxide synthase/nitric oxide pathway in the vascular adventitia of rats with sepsis

1. In recent studies, the vascular adventitia has been established as an important source of inducible nitric oxide synthase (iNOS) and subsequent nitric oxide (NO) production, even more powerful than the media in response to certain inflammatory factors, such as lipopolysaccharide (LPS). The adventitia has an independent L-arginine (L-Arg)/NOS/NO pathway and is involved in the regulation of vascular function. In the present study, we explored the changes in and the pathophysiological significance of the L-Arg/NOS/NO pathway in the adventitia of rats with sepsis. 2. Sepsis was induced by caecal ligation and puncture in order to observe changes in L-Arg transport, NOS gene expression and activity and NO generation in the vascular adventitia to determine the mechanism of activation of the L-Arg/NOS/NO pathway. 3. Severe sepsis resulted in severe disturbance of haemodynamic features, with decreased mean arterial blood pressure, brachycardia and inhibited cardiac function (decreased left ventricular +/-dP/dt(max)). Left ventricular end-diastolic pressure was elevated threefold (P < 0.01) under anaesthesia. Rats with sepsis showed severe glucopenia and lacticaemia. Plasma levels of the inflammatory factors macrophage chemoattractant protein-1 and interleukin-8 were increased five- and 29-fold, respectively (P < 0.01). 4. In the adventitia of the thoracic and abdominal aortas, the L-Arg/NO pathway was similarly characterized: the uptake of [(3)H]-L-Arg was Na(+) independent, with the peak occurring at approximately 40 min incubation. Total NOS activity was largely calcium independent (> 90%). The V(max) of L-Arg transport in the sepsis group was increased by 83.5% (P < 0.01), but the K(m) value was not significantly different compared with controls. 5. The mRNA levels of cationic amino acid transporter (CAT)-1 and CAT-2B in the sepsis group were increased by 86 and 62%, respectively (both P < 0.01). Inducible NOS activity was increased 2.8-fold compared with controls (P < 0.01) and iNOS mRNA levels were elevated approximately sixfold (P < 0.01). The NO levels in the plasma and incubation media (incubation for 40 min) in the sepsis group were increased by 144 and 273%, respectively (both P < 0.01). 6. The Arg/NOS/NO pathway was activated in the vascular adventitia of rats with sepsis shock. The L-Arg/NOS/NO pathway in the aortic adventitia may play an important role in the pathogenesis of sepsis and septic shock.     

L-精氨酸、L-硝基精氨酸对红藻氨酸诱导大鼠癫痫及其海马结构中iNOS mRNA表达的影响

目的　观察诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)在红藻氨酸(KA)癫痫大鼠海马内的表达及L 精氨酸 (L Arg)和L 硝基精氨酸 (L NNA)慢性干预的影响。方法　采用惊厥剂量的KA(1 0mg·kg- 1 )诱导大鼠癫痫发作 ,以NOS抑制剂L NNA(50mg·kg- 1 )和NO前体L Arg(40mg·kg- 1 )进行干预 ,对大鼠的癫痫发作行为及KA后不同时间点的海马内i NOSmRNA ,通过RT PCR观察其表达。结果　KA可使动物发生时间相关性癫痫发作 ,L NNA预处理后使KA诱导的癫痫发作明显加重 ,而L Arg预处理后使KA诱导的癫痫发作减弱。iNOSmRNA在KA处理后 3h开始有微弱的表达 ,且随着时间的延长逐渐增加 ,2 4h达到最高水平 ,2d及3d时未见表达 ,但 7d时又出现高表达 ;经L NNA预处理的动物 ,KA后 1h其海马结构中未出现iNOSmRNA ,但L Arg预处理后再给予KA后 1h ,可见微弱的iNOSmRNA表达。结论　红藻氨酸给药后一定时间 ,癫痫大鼠海马结构中可出现iNOSmRNA表达 ,L Arg慢性干预也有一定影响     

羧基-D-氨基葡萄糖对食管癌裸鼠及相关基因表达的影响

目的观察羧基-D-氨基葡萄糖(COPADG)对食管癌裸鼠及相关基因表达的影响。方法建立食管癌裸鼠模型,随机分为对照组、COPADG组、氟尿嘧啶组(5-FU)和联合组(CF)。计算抑瘤率;用免疫组化法,检测细胞增殖核抗原(PCNA)、天冬氨酸半胱氨酸特异性蛋白酶(caspase3)、血管内皮生长因子(VEGF)表达和微血管密度(MVD);用流式细胞术,检测肿瘤细胞凋亡。结果 COPADG组、5-FU组和CF组抑瘤率分别为54.16%,38.78%,73.91%;以上3组VEGF和MVD表达均低于对照组(P<0.01),caspase3表达均高于对照组(P<0.01);COPADG组和CF组的PCNA表达低于对照组和5-FU组(P<0.01),以上3组的早期凋亡细胞率均高于对照组(P<0.01)。结论 COPADG通过抑制食管癌肿瘤细胞增殖和血管形成及诱导肿瘤细胞凋亡,抑制食管癌裸鼠肿瘤的生长。     

花色素苷诱导小鼠巨噬细胞一氧化氮生成及其机制

目的研究花色素苷对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮(NO)合成的诱导作用及其机制。方法用CCK-8试剂检测花色素苷对小鼠脾细胞增殖的影响;硝酸盐还原酶法检测小鼠腹腔巨噬细胞NO含量;荧光法检测一氧化氮合酶(NOS)活性;RT-PCR检测iNOS mRNA的表达。结果花色素苷可促进小鼠脾细胞增殖,诱导小鼠腹腔巨噬细胞合成NO,提高NOS活性,其中矢车菊素-3-葡萄糖苷能够诱导iNOS mRNA的表达。结论花色素苷能够促进脾细胞的增殖,诱导小鼠腹腔巨噬细胞合成NO,使巨噬细胞激活,具有一定的免疫调节活性。     

灵芝多糖肽对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮产生的影响

目的　研究灵芝多糖肽 (GLPP)对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮产生的影响并探讨其作用机制。方法　以Griess法 ,观察GLPP对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮(NO)产生的影响 ;以免疫组化法检测诱导型一氧化氮合成酶 (iNOS)的表达 ,观察GLPP对iNOS的影响。结果　GLPP(2 5～ 2 0 0mg·kg-1)灌胃给药 5d或体外给药 (3 12 5～ 2 0 0mg·L-1)均可促进巨噬细胞NO释放 ,但对LPS刺激NO的释放影响不大 ;GLPP(10 0mg·kg-1)灌胃给药 5d或体外给药 (10mg·L-1)均可使巨噬细胞iNOS含量增加。结论　GLPP可增加小鼠腹腔巨噬细胞NO产生 ,其机制可能与其促进巨噬细胞iNOS合成有关。     

In situ generation of nitric oxide by myenteric neurons but not by mononuclear cells of the human colon

1. Production of nitric oxide (NO) is implicated in the pathogenesis of inflammatory bowel disease. However, the cells responsible for the production of NO in situ in the human colon remain unknown. 2. Surgical samples from 12 patients with ulcerative colitis, eight patients with Crohn's disease and 10 controls were studied. Possible generation of NO was visualized by reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) diaphorase activity in human colon. Immunohistological staining for various NO synthase (NOS) isoforms (endothelial, neuronal and inducible), nitrotyrosine and interleukin-2 was also performed. 3. Reduced NADPH diaphorase activity was not found in lamina propria mononuclear cells, but was found in colonic epithelium, endothelium and myenteric neurons and their processes. 4. The NADPH-diaphorase activity positive processes were significantly less common in colon from patients with Crohn's disease compared with control colon. 5. Endothelial NOS was constitutively expressed on colonic endothelium. 6. Neuronal NOS was constitutively expressed on myenteric neurons. 7. Expression of inducible NOS (iNOS) was increased in the epithelium and endothelium of the colon of patients with ulcerative colitis. 8. No correlation was found between expression of iNOS and NADPH diaphorase activity. 9. Nitrotyrosine was expressed by lamina propria leucocytes, but not by epithelium. 10. Interleukin-2 was expressed on both leucocytes and myenteric neurons. 11. Colonic epithelium, endothelium and myenteric neurons synthesize NO. Myenteric neurons were principally responsible for NO production and NO may act as a neurotransmitter in the enteric nervous system.     

NO和iNOS在肝硬化患者肝组织中的表达及与门静脉压力的关系

目的：观察NOS-NO系统在肝硬化患者肝组织中的表达及与门静脉压力的关系，以探讨其在肝硬化门脉高压中的作用。方法：随机抽取20例正常志愿者及20例肝硬化患者，在B超引导下经皮经肝穿刺分别测定门静脉压力、抽取门静脉血和外周血并留取肝组织，测定血液中NO浓度，观察肝组织iNOS的表达。结果：肝硬化患者下腔静脉及门静脉血中NO浓度、肝组织iNOS的表达及门静脉压力均分别显著高于正常对照组。正常对照组的外周血和门静脉血中NO浓度水平接近．差异无统计学意义；但肝硬化患者的门静脉血NO浓度显著高于外周血NO浓度。门静脉压力与外周静脉血NO浓度、门脉血NO浓度及肝组织中iNOS的表达呈直线相关关系。结论：门静脉压力与门脉血NO浓度、肝组织中iNOS的表达密切相关。     

雷公藤内酯醇联合5-氟尿嘧啶对结肠癌的作用研究

目的研究雷公藤内酯醇（TPL）与5-氟尿嘧啶（5-Fu）联合应用对结肠癌细胞增殖、凋亡及瘤体生长的影响并观察其在结肠癌化疗中的毒副作用。方法常规培养HT-29细胞，应用四甲基偶氮唑蓝比色法、流式细胞术检测TPL、5-FU联合应用对人结肠癌细胞增殖和凋亡的影响；中效原理评价两药的联合作用；建立裸鼠荷人结肠癌动物模型，分别及联合应用0．25mg／（kg·d）TPL和12mg／（kg·d）5-FU对其进行治疗，观察荷瘤裸鼠一般情况、瘤体的生长及化疗毒副作用。结果（1）TPL和5-FU分别及联合应用，在一定浓度范围内对结肠癌细胞有明显的增殖抑制和诱导凋亡作用，并且联合用药作用明显强于单独用药，48h凋亡率高达（41．71±1．38）％；（2）TPL和5-Fu单独应用均可抑制结肠癌瘤体的生长，肿瘤抑制率分别为78．53％、84．16％；2者联合应用时作用更为明显，肿瘤抑制率达96．78％；（3）整个化疗过程中除偶尔出现全身散在红斑、丘疹外，未见明显造血系统、肝肾功能损害等毒副作用。结论TPL与5-Fu联合应用比单独应用对结肠癌细胞株增殖抑制作用更强；TPL与5-FU在小剂量联合应用时协同抑制肿瘤细胞增殖，抑制瘤体生长，并能促进结肠癌细胞凋亡，在体外实验中毒副作用小。     

腺苷对猪缺血再灌注心肌组织一氧化氮合酶同工酶的影响

目的:评价缺血再灌注后一氧化氮合酶(NOS)同功酶的变化以及腺苷对其的影响。方法:中华小型猪24只,随机分成缺血再灌注模型组、腺苷组和假手术组,每组8只。冠状动脉结扎180min,松解60min制备缺血再灌注模型。检测缺血前5min,缺血后5,180min和再灌注后5,60min血NO的含量并观察正常、缺血和无再流区心肌组织内NOS同功酶及其mRNA的表达。结果:(1)与缺血前比较,缺血后180min、再灌注后5min和60min的血NO水平均显著降低(均P<0.01),然而再灌注后5min和60min的血NO水平比缺血后180min有显著升高(均P<0.01)。而腺苷组缺血后180min血NO降低幅度显著低于模型组(P<0.05)。再灌注后5min和60min的血NO水平与缺血后180min相比无显著变化(P>0.05)。(2)与正常区心肌组织相比较,模型组和腺苷组一样,缺血区和无再流区心肌组织中结构型一氧化氮合酶(cNOS)活性及其mRNA表达均显著减低,诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性及其mRNA表达均显著升高(均P<0.01),而无再流区cNOS活性及其mRNA表达减低和iNOS活性及其mRNA表达的升高比缺血区均更显著(P<0.05或P<0.01)。与模型组相比较,腺苷组仅缺血区心肌组织中iNOS活性及其mRNA表达显著降低,cNOS活性及其mRNA表达显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:NOS的变化可能是无再流发生的重要机制之一。腺苷可能通过升高cNOS活性,降低iNOS活性起到了减少无再流的作用。