应用ERIC-PCR技术分析多药耐药肺炎克雷伯菌的基因分型

目的 分析多药耐药肺炎克雷伯菌的肠杆菌科基因间重复一致序列PCR （ERIC-PCR）基因分型,为临床诊断和防治肺炎克雷伯菌感染提供依据.方法 先利用纸片扩散法检测18株临床分离的肺炎克雷伯菌对17种抗菌药物的耐药性并获得耐药谱型;再利用ERIC-PCR获得18株肺炎克雷伯菌DNA指纹图谱,通过非加权配对聚类分析（UPGMA）法构建分子进化树;最后探讨肺炎克雷伯菌ERIC-PCR基因型与其耐药性及耐药谱之间的关系.结果 18株肺炎克雷伯菌对17种抗生素呈不同程度耐药,对亚胺培南敏感性达100％.18株肺炎克雷伯菌对17种抗生素呈现12种耐药模式,并可分为9种基因型.结论 肺炎克雷伯菌耐药性及耐药谱与特定的ERIC-PCR基因型之间存在较高程度的关联.     

儿童烧伤患者感染MRSA的耐药性及分子流行病学研究

目的：调查儿童烧伤患者耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的耐药性及分子流行病学情况,为控制感染提供科学依据。方法通过PCR扩增mecA基因鉴定 MRSA菌株,K-B纸片法检测菌株耐药性,随机扩增多态性DNA（RAPD）对其进行同源性分析。结果从住院烧伤儿童临床标本分离得到的52株金黄色葡萄球菌中 MRSA占44．2％（23/52）,且对多种抗菌药物均耐药。23株MRSA经RAPD分析可分为4型,以Ⅱ型为主。结论儿童烧伤患者分离MRSA菌株具有多重耐药性,应根据药敏试验结果合理选用抗菌药物进行治疗;RAPD技术能为控制感染提供分子流行病学依据。     

医院内不同标本分离耐甲氧西林葡萄球菌的耐药性分析

目的 了解医院耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)流行状况及其耐药性相关分析.方法 收集西安医学院附属医院临床标本中分离的132株金黄色葡萄球菌(SA)和100株凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)与同期医院环境及医务人员手中分离的5株SA和40株CNS,用苯唑西林和头孢西丁(K-B法)筛选MRS,再用PBP2a胶乳凝集法检测mecA基因,MIC法检测MRS对19种抗生素的耐药性;资料用NDST统计软件Fisher确切概率法进行组间分析.结果 137株SA中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)83株,占60.58%(83/137),140株CNS中凝固酶阴性耐甲氧西林葡萄球菌(MRCNS)74株,占52.86%(74/140);其中临床分离株和环境分离株MRSA检出率分别为62.12%(82/132)和20.00%(1/5),MRCNS检出率分别为70.00%(70/100),10.00%(4/40),并对157株MRS耐药菌株检测mecA基因,阳性率96.82%(152/157),对19种抗生素耐药性检测结果显示,MRS对利奈唑胺、万古霉素和新内吉耐药性0.00%,MRS对其他抗菌药物呈多重耐药.结论 MRS在医院内有较高的流行性,应引起医院预防感染部门的重视.     

粪肠球菌耐庆大霉素基因的检测及分子流行病学研究

目的探讨患者医院内下呼吸道分离的粪肠球菌耐庆大霉素基因特点及粪肠球菌感染的分子流行病学。方法应用PCR技术检测庆大霉素高水平耐药株（HLGR）耐药基因及应用随机扩增多态性DNA分型法（RAPD）进行分子流行病学研究。结果48株下呼吸道痰标本分离的肠球菌均为粪肠球菌，其高水平庆大霉素的耐药率为87．5％，基因型均为aac（6′）-Ie-aph（2″）-Ia，为单一基因型，未发现aph（2″）-Ib、aph（2″）-Ic及aph（2″）Id基因型。对DNA的指纹图谱行聚类分析可分为3种基因型，命名为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型，3个类型各个病区均有分布。结论根据粪肠球菌耐高水平庆大霉素的基因型选择有效的抗菌药物，我院分离的粪肠球菌其基因型不一致，无明显的优势菌株。     

甲氧西林耐药凝固酶阴性葡萄球菌手术部位感染的实验室检测与分析

目的检测MRCNS在SSI的分布和耐药情况；对SSI分离的MRCNS感染因素进行分析。方法PCR检测mecA基因，微量肉汤稀释法检测抗菌药物对MRCNS的最小抑菌浓度（MIC）。万古霉素耐药确证试验筛选万古霉素耐药MRCNS；Etest法检测万古霉素和替考拉宁对确证试验阳性株及其子代菌株的MIC，多重PCR检测其van基因。结果40株SSI分离的CNS菌中mecA基因阳性率为85％；耐药结果显示MRCNS中表皮葡萄球菌和溶血葡萄球菌对环丙沙星、红霉素、左氧氟沙星、诺氟沙星、复方新诺明有较高的耐药率（〉49％）；34株MRCNS菌中检测到1株溶血葡萄球菌为异质性万古霉素耐药株，多重PCR方法未检出van基因。结论SSI分离的MRCNS发生率较高，异质性万古霉素耐药株的检出应引起临床医师重视；采取有效的措施以及临床实验室加强对MRCNS医院感染进行监测对SSI防控是非常重要的。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药基因及其相关因素分析

目的了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）耐药现状，加强临床MRSA的监控。方法回顾性分析临床46株MRSA耐药性，并用PCR法对MRSA进行β-内酰胺类耐药相关基因mecA、氨基糖甙类耐药相关基因aac（6′）／aph（2″）、红霉素类耐药基因emr和耐消毒剂基因qac（A／B）检测。结果46株MRSA表现多重耐药和高度耐药性，并检测出相关的耐药基因。结论在临床工作中加强MRSA的监测、合理使用抗生素、严格消毒隔离制度是控制MRSA医院感染的关键。     

肠杆菌基因间重复序列PCR指纹图谱技术分析结核分枝杆菌流行情况

目的利用肠杆菌基因间重复序列为引物的聚合酶链反应（enterbacterial repetitive intergenic consensus-PCR，ERIC-PCR）分型技术分析我市结核分枝杆菌流行情况。方法收集2003年9月至2006年5月门诊痰菌阳性标本，培养并提取DNA做ERIC—PCR指纹图，并利用RAPDPHYLIP及Treeview软件对其进行聚类分析。结果122株临床分离株产生42种不同的指纹图，聚类分析结果显示可分为3簇，成簇率76、2％。指纹图谱与患者年龄、菌株的耐药性及耐药种类有关。结论ERIC—PCR具有不需已知核酸序列，分辨效果好，简便快捷等优点，是进行分子流行病学调查的有效工具。我市结核病呈高水平传播，主要为耐药菌株并以中青年患者传播为主。     

杀白细胞素pvl基因阴性MRSA对抗菌药物的耐药性研究

目的研究杀白细胞素（PVL）pvl基因阴性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）对多种抗菌药物的耐药性。方法采用头孢西丁纸片扩散法检测MRSA;用聚合酶链反应（PCR）检测m ecA基因及pvl基因;采用琼脂稀释法测定金黄色葡萄球菌最低抑菌浓度（M IC）并检测pvl基因阴性MRSA对12种抗菌药物的耐药性。结果 71株金黄色葡萄球菌中检测出33株pvl基因阴性MRSA,检出率为46.4%（33/71）;对青霉素类抗菌药物的耐药率为100.0%;对其他类抗菌药物呈多重耐药并以ECLOTGMP为主要耐药模式,占66.7%（22/33）;未发现对达托霉素、替考拉宁和万古霉素耐药的菌株。结论医院感染中以pvl基因阴性MRSA为主,并呈现多重耐药;pvl基因阴性MRSA主要耐药模式为对红霉素、环丙沙星、克林霉素、苯唑西林、四环素、庆大霉素、复方磺胺甲口恶唑和青霉素耐药,是主要流行株,要谨慎使用以上8种抗菌药物。     

肺结核并发肺部感染凝固酶阴性葡萄球菌的耐药性及耐药基因mecA分析

目的探讨肺结核并发肺部感染凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)的耐药性及耐药基因mecA的分布情况,为抗结核并发感染提供指导。方法收集该院2014年11月至2016年3月肺结核患者痰标本中分离的CNS 30株,经美国BD公司的PHOENIX-100型全自动微生物鉴定仪对菌落进行菌种鉴定及药物敏感性试验,同时采用PCR方法检测其耐药基因mecA。结果药物敏感性试验分析结果显示,30株肺结核并发肺部感染的CNS均为耐苯唑西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS),检出率100.0%。青霉素、阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林耐药率100.0%;红霉素、环丙沙星、利福平、庆大霉素和复方磺胺甲噁唑的耐药率均在75.0%以上;妥布霉素和克林霉素的耐药率在50.0%以上;耐药率在30.0%以下的抗菌药物较少,只有阿米卡星、呋喃妥因、奎奴普丁/达福普汀、四环素、替考拉宁;未发现耐万古霉素的CNS。采用PCR扩增法检测30株肺结核并发感染CNS中检出mecA基因30株,检出率为100.0%;耐药表型与耐药基因型的检出率高度一致。结论肺结核并发肺部感染的CNS具有严重的耐药性,携带耐药基因mecA与耐药性相关性密切。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性、mecA及6laTEM基因检测

目的 了解临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicinin-resistant Staphylococcu8all—reus，MRSA）耐药性、mecA及6laTEM基因存在状况。方法采用ATBStaph药敏试验板微量肉汤法对40株MRSA进行15种抗菌药物敏感性测定，采用聚合酶链反应（PCR）技术检测mecA和6laTEM基因。结果 所有菌株对万古霉素、替考拉宁、呋西地酸和奎奴普丁-达福普汀均敏感。对青霉素、庆大霉素、红霉素、克林霉素、四环素、诺氟沙星和左旋沙星均耐药，对利福平、呋喃妥因、复方新诺明和米诺四环素的耐药率分别为5．0％、2．5％、97．5％和97．5％。mecA和blaTEM基因阳性率分别100．0％和37．5％。结论 临床分离的MRSA多重耐药性十分严重；金黄色葡萄球菌对甲氧西林耐药均由mecA基因介导．blaTEM基因阳性率较高；治疗MRSA引起的感染。应以药敏试验结果为依据。     

头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌的临床应用评价

目的用PCR法检测葡萄球菌的mecA基因为参比方法,评价头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的临床应用价值。方法临床分离的163株葡萄球菌,分别用头孢西丁、苯唑西林纸片扩散法、PCR法检测mecA基因,以PCR扩增法检测mecA基因作为参比方法进行比较。结果163株临床分离的葡萄球菌经PCR法检测mecA基因,阳性率为81.0%,其中,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的发生率分别为74.1%和83.8%。头孢西丁、苯唑西林纸片扩散法用于检测MRSA与PCR法检测mecA基因有很好的一致性,其敏感性和特异性均为100.0%,而对于凝固酶阴性葡萄球菌,头孢西丁纸片扩散法比苯唑西林纸片扩散法检测MRS的敏感性和特异性高,敏感性分别为100.0%和94.3%,特异性分别为96.0%和88.0%。结论头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌具有很高的灵敏度,但对于mecA基因阴性的凝固酶阴性葡萄球菌,用头孢西丁纸片法检测,约有5%菌株要误报为MRCNS。由于头孢西丁纸片扩散法操作简单,较苯唑西林纸片扩散法检出MRS的敏感度和特异性高,结果与PCR法检测mecA基因有很好的相关性,不需特殊仪器设备,可在临床微生物实验室常规开展。     

凝固酶阴性葡萄球菌mecA基因检测及耐药性分析

[目的]探讨不同方法检测凝固酶阴性葡萄球菌（Coagulase Negative Staphylococcus,CNS）的药物敏感性,并对其耐药性进行分析。[方法]对收集的26株CNS进行头孢西丁纸片法耐药表型筛选以及PCRmecA基因检测,并用WHONET4软件进行耐药性分析。[结果]在26株CNS中,共分离出6种葡萄球菌。表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌检出率最高,分别为42．3％、38．5％。科室分布依次为ICU、神经内科、外科。耐药分析显示：表皮葡萄球菌对氨苄青霉素、青霉素、红霉素明显耐药（〉90％）。对环丙沙星、克林霉素头孢唑林、阿莫西林、耐药率在50％-80％之间。溶血葡萄球菌对β-内酰胺酶类、喹诺酮类、大环内脂类等耐药,耐药率在60％-100％之间。本次实验未发现万古霉素耐药菌株。[结论]CNS对各种抗菌素均产生高耐药,给医院感染造成很大压力,临床医生应了解抗菌素的应用指征以防止对其滥用,根据药敏结果选择对病原菌敏感的药物,重视药敏试验对临床的指导意义。     

一起MRSA医院感染暴发的调查与控制

目的调查一起耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)医院感染暴发的原因,探索有效的控制措施。方法通过现场调查及对标本的病原学检测,了解发病原因,提出有效控制措施。结果该医院在较短时间内连续发生13例MRSA感染病人,为一起MRSA医院感染暴发事件。从13例患者标本中所分离的MRSA除对利奈唑胺和万古霉素全部敏感之外,对其他10种临床常用抗菌药物全部耐药。经细菌基因分析证明13例患者感染的MRSA具有同源性,同时也同环境标本分离的MRSA具有同源性。结论该医院发生一起MRSA医院感染暴发事件,感染的发生与医务人员手及诊疗用品接触传播有关,经积极采取有效控制措施使疫情得到及时控制。     

头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌

目的以PCR法检测葡萄球菌的mecA基因(mecA基因法)为标准，评价头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法和苯唑西林盐平板法检测葡萄球菌中耐甲氧西林葡萄球菌的灵敏度和特异性。方法PCR扩增葡萄球菌的特异性mecA基因片段，头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法和苯唑西林盐平板法检测葡萄球菌中耐甲氧西林葡萄球菌，药敏试验方法按标准K—B(Kirby-Bauer)法进行。结果在190株临床分离的葡萄球菌中金黄色葡萄球菌(金葡菌)138株，表皮葡萄球菌30株，溶血葡萄球菌22株，经。PCR法检测mecA基因，金葡菌中耐甲氧西林金葡菌(MRSA)和凝固酶阴性葡萄球菌中耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的发生率分别为81.2％(112／138)、96．1％(50／52)。头孢西丁纸片扩散法检测金葡菌中MRSA和CNS中MRCNS的发生率分别为81.2％(112／138)、94．2％(49／52)，与mecA基因法结果相比较，头孢西丁纸片扩散法检测葡萄球菌中MRS的灵敏度和特异度分别为99．4％(161／162)、100．0％(28／28)，两者符合率为99．5％(189／190)。2种方法所获得的结果经统计学处理，两者差异无显著性。结论头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌具有很高的灵敏度和特异度，适合在临床微生物实验室中进行推广。     

深圳东部地区耐甲氧西林葡萄球菌SCCmec基因型分析

目的 了解深圳东部地区耐甲氧西林葡萄球菌的流行现况,并探讨分析MRS所携带SCCmec主要的基因亚型,为MRS流行病学调查及其防控提供理论依据.方法 头孢西丁琼脂稀释法对MRS进行筛查,PBP2a进行表型确证,并用PCR法进行SCCmec分型,确认MRS所携带的SCCmec亚型.结果 1 093例葡萄球菌临床分离株中共检出127例为MRS,占11.62%,除氨苄西林、青霉素、万古霉素3种抗生素外,MRS对其他抗生素的耐药性均较甲氧西林敏感葡萄球菌高,且有66.9%的MRS表现为多重耐药.SCCmec基因分型共检出Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ 3个亚型,检出例数分别为20株(15.75%)、97株(76.38%)和10株(7.87%),Ⅱ、Ⅲ型菌株对多种β-内酰胺类抗生素耐药,对利福平的耐药率均较低,对万古霉素完全敏感,其中Ⅲ型MRS菌株有76例表现为多重耐药,耐药率明显高于Ⅱ、Ⅳ型MRS菌株.结论 本地区临床分离的MRS所携带的SCCmec基因以Ⅲ型为主,且具有对抗生素多重耐药的特性.     

鲍氏不动杆菌临床分布及耐药分析

目的 调查鲍氏不动杆菌在医院感染中的分布及对常用抗菌药物的耐药情况,为合理使用抗菌药物提供科学依据.方法 收集2009年至2011年医院内感染标本150例鲍氏不动杆菌,用K-B法进行药物敏感试验.结果鲍氏不动杆菌对常用药物已呈现不同程度的耐药,亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、奈替米星、头孢吡肟、环丙沙星、阿米卡星耐药率低,在0%~22%之间.其中亚胺培南为100%敏感,其他抗菌药物耐药率为32%~100%.结论 医务人员应合理使用抗菌药物,加强细菌耐药的监测工作,防止多药耐药菌株医院感染暴发流行.     

多重聚合酶链反应检测耐甲氧西林葡萄球菌

目的应用一种敏感快速的多重聚合酶链反应（ＰＣＲ）,检测耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）和凝固酶阴性葡萄球菌（ＭＲＣＮＳ）。方法临床分离的北京地区金黄色葡萄球菌１２３株,ＭＲＣＮＳ１２２株,用溶壁素和蛋白酶Ｋ制备模板ＤＮＡ,设计葡萄球菌甲氧西林耐药的决定基因,金黄色葡萄球菌独有的一个辅助基因和细菌中均有的１６ＳｒＲＮＡ基因引物,通过多重ＰＣＲ技术对标本进行扩增。结果１２３株金黄色葡萄球菌的ｆｅｍＡ基因１００％（１２３／１２３）阳性,ｍｅｃＡ基因阳性的占１８．７％（２３／１２３）,１２２株ＭＲＣＮＳ的ｆｅｍＡ１００％（１２２／１２２）阴性,ｍｅｃＡ阳性的占２４．６％（３０／１２２）。１６ＳｒＲＮＡ基因片断在多重ＰＣＲ中作为内部参照避免了假阴性结果的出现。结论建立的多重ＰＣＲ技术检测ＭＲＳＡ和ＭＲＣＮＳ具有敏感、快速、特异的特点,是一种可靠的实验诊断手段。     

皖北地区MRSA耐药基因研究

目的了解皖北地区临床分离的耐甲氧西林金葡菌(MRSA)所携带5类药物的7种耐药基因状况,并探讨其耐药特性。方法应用PCR方法检测64株MRSA中mecA、gyrA、qacA/B/C、qacA、ermA/B/C、ermB、tetM耐药基因。结果 64株MRSA中,mecA基因携带率为100%,tetM、gyrA、qacA/B/C、qacA、ermA/B/C、ermB基因携带率分别为95.3%、81.3%、34.4%、15.6%、39.1%、28.1%;基因组合以mecA+tetM+gyrA模式最多,为26.5%。MRSA对万古霉素无耐药,对氯霉素、磷霉素、利福平的耐药性较低,对多种药物表现出较高的耐药性。结论皖北地区MRSA中,mecA、tetM、gyrA基因携带率较高,而qacA/B/C、qacA、ermA/B/C、ermB基因携带率相对较低。     

重复序列引物聚合酶链反应追踪金黄色葡萄球菌所致医院感染

目的 利用重复序列引物聚合酶链反应（rep-PCR）追踪我院一起由金葡菌所致的医院感染。方法 分离得到的50株金葡菌用PHOENIX-100微生物自动鉴定系统鉴定，苯唑西林-盐琼脂筛选MRSA表型；PCR检测其耐药基因mecA；rep-PCR作金葡菌基因分型。结果 50株金葡菌中，22株mecA阳性，其中19株分离自患者标本。采用rep-PCR，50株金葡菌均出现9～11条带的电泳图谱，从而可分成11个不同的基因型。结论 rep-PCR是一种快速、简便、可靠的基因分型方法，是在分子水平追踪医院感染病原菌较理想的工具。