法舒地尔对前列腺癌PC3细胞增殖与凋亡的影响

目的 观察法舒地尔对人前列腺癌PC3细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 不同浓度法舒地尔、顺铂及两药联合干预PC3细胞,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blot法检测Rock Ⅰ、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达情况.结果 与对照组相比,法舒地尔、顺铂单独或联合作用PC3细胞均可抑制细胞增殖,两药联合后抑制效果更显著;法舒地尔、顺铂联合用药可明显增强PC3细胞的凋亡;凋亡相关蛋白Bcl-2表达下调,Caspase-3表达上调,法舒地尔可明显下调Rock Ⅰ蛋白表达.结论 法舒地尔可促进PC3细胞凋亡,其作用机制可能与法舒地尔抑制Rho激酶的表达有关.     

地高辛联合姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC3生长的影响

目的 观察地高辛联合姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC3生长作用的影响及可能机制.方法 地高辛、姜黄素及两药联合作用PC3细胞,MTT法测定细胞增殖,流式细胞术测定细胞凋亡,Western Blot法检测PC3细胞中抑制低氧诱导因子-1(hypoxia-induc-ible factor-1α,HIF-1α)、血管生成因子(VEGF)蛋白的表达水平.结果 与对照组相比,联合用药组显著抑制PC3细胞的增殖(P＜0.05);地高辛、姜黄素联合较单独用药可升高PC3细胞凋亡率(P＜0.05);蛋白印迹法检测提示地高辛组、姜黄素组、联合用药组中HIF-1α、VEGF表达明显下调,联合用药组效果更显著(P＜0.05).结论 地高辛联合姜黄素可显著抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC3的增长并诱导其凋亡,并可能与下调HIF-1α、VEGF表达有关.     

喹啉衍生物PQ1联合顺铂对前列腺癌PC3细胞的增殖及细胞缝隙连接通讯的影响

目的:探讨喹啉衍生物PQ1联合顺铂对前列腺癌PC3细胞的增殖及细胞缝隙连接通讯的影响。方法:体外培养前列腺癌PC3细胞,对比空白对照组、10 mg/ml顺铂对照组及顺铂联合不同浓度(1、2、5、10、15μmol/L)喹啉衍生物PQ1各组PC3细胞增殖情况,通过RT-PCR法及Western印迹法检测各组间细胞缝隙连接相关蛋白Cx43 mRNA及蛋白表达情况。结果:喹啉衍生物PQ1浓度在1~10μmol/L联合顺铂能明显抑制PC3细胞的体外增殖,随浓度、时间的增加,抑制率相应升高。不同浓度联合药物处理PC3细胞后,Cx43 mRNA及蛋白表达也有不同程度升高。结论:喹啉衍生物可以通过上调前列腺癌PC3细胞间缝隙连接相关蛋白Cx43 mRNA及蛋白的表达水平来促进前列腺癌PC3细胞的细胞间缝隙连接功能,增强顺铂对前列腺癌PC3细胞的杀伤作用。     

小剂量阿司匹林协同干扰素-α诱导肝癌BEL-7402细胞凋亡的实验研究

目的 探讨小剂量阿司匹林协同干扰素-α(IFN-α)诱导肝癌BEL-7402细胞凋亡的作用及机制.方法 体外培养的人肝癌BEL-7402细胞经IFN-α单独或联合小剂量阿司匹林处理后,采用MTT法测定细胞的增殖情况;流式细胞术分析不同组药物对BEL-7402细胞凋亡的影响,Western blot检测BEL-7402细胞凋亡相关蛋白表达的变化.结果 MTT法检测显示,与对照组相比,作用48 h时IFN-α组和阿司匹林组的肝癌细胞增殖率分别为82.45％±1.71％和83.22％±2.26％,联合用药组为69.84％±1.18％,联合用药组细胞增殖抑制率明显低于单独用药组(P＜0.05);流式细胞术检测结果显示,IFN-α组和阿司匹林组细胞凋亡率分别为14.78％±1.93％和14.00％±0.61％,联合用药组为21.68％±1.28％,明显高于单独用药组(P＜0.05).Western blot检测发现IFN-α及小剂量阿司匹林可促进caspase-3及caspase-9的表达,而二者联合应用时caspase-3及caspase-9亦被明显激活.进一步检测显示,IFN-α单独或联合阿司匹林可促进肝癌细胞促凋亡蛋白Bax的表达(P＜0.05),而抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xl表达未见明显变化(P＞0.05).结论 小剂量阿司匹林可协同IFN-α抑制BEL-7402细胞的增殖,通过激活caspase-3及caspase-9诱导肿瘤细胞凋亡,该作用可能与促凋亡蛋白Bax表达的增高有关.     

CDK抑制剂NSC649890联合顺铂对人骨肉瘤细胞U2-OS的抑制作用

[目的]探讨CDK抑制剂NSC 649890联合顺铂对人骨肉瘤U2-OS细胞抑制作用及可能的机制。[方法]MTT法检测分别采用50、100、200、400、800 nmol/L的NSC 649890 2、4、6、8、10μg/ml顺铂、50 nmol的NSC649890联合2μg/ml顺铂、300nmol的NSC 649890联合6μg/ml顺铂培养48 h后细胞增殖情况,金氏q值评价联合用药效应;流式细胞仪、Western blotting检测分别采用300 nmol/L的NSC 649890、6μg/ml顺铂及二者联合培养48 h后细胞凋亡及凋亡通路相关蛋白表达情况,以上实验均以单纯U2-OS细胞作为对照组。[结果]U2-OS细胞经不同浓度顺铂、NSC 649890单独处理48 h后,细胞抑制率随两种药物浓度增加而显著升高,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。在联合用药组中,顺铂与NSC 649890联合浓度(2μg/ml+50 nmol/L)组两药为协同作用,(6μg/ml+300nmol/L)组两药为相加作用。流式细胞仪检测显示,顺铂组、NSC 649890组及联合组细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05)。Western blotting检测结果显示,与对照组相比,顺铂和NSC 649890单独作用后均可下调Bcl-2蛋白、procaspase-3蛋白的表达水平及上调Bax蛋白的表达水平,差异均有统计学意义(P<0.05),而两者联合作用时效果更加显著(P<0.05)。[结论]NSC 649890能增强顺铂对人骨肉瘤U2-OS细胞的抑制作用。     

雷公藤内酯醇单独及联合硼替佐米作用于PC3细胞的研究

目的:观察雷公藤内酯醇(triptolide,TPL)单独及联合硼替佐米(bortezomib,BZM)对激素抵抗性前列腺癌PC3细胞的体外生长和凋亡的影响。方法:选用递增浓度的TPL和BZM单独及联合作用于PC3细胞,MTT法检测PC3细胞生长抑制率;流式细胞仪检测PC3细胞凋亡;RT-PCR分析血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达。结果:TPL、BZM单独对PC3细胞生长均有抑制作用且呈时间和剂量依赖性。相同浓度时,TPL单独作用强于BZM(P<0.05),两药联合可明显提高细胞生长抑制率(P<0.05);流式细胞检测发现,联合用药引起细胞凋亡也明显高于单独用药(P<0.05);TPL和BZM均能下调VEGFmRNA的表达,联合用药下调作用更加明显(P<0.05)。结论:不论是单独还是联合应用TPL和BZM均可抑制PC3细胞增殖并诱导其凋亡,两药联合作用明显强于单独用药,两者作用有协同性。     

人参二醇组皂苷增强顺铂对人前列腺癌DU145细胞凋亡的效应

目的 探讨人参二醇组皂苷(panoxadiol saponin PDS)与顺铂(cisplatin,DDP)联合应用对DU145前列腺癌细胞增殖及凋亡的影响.方法 采用MTT比色法检测PDS与DDP联合应用对DUl45细胞增殖活力的影响;吖啶橙染色观察诱导细胞凋亡情况;流式细胞仪分析细胞周期及凋亡,并计算细胞平均凋亡率;免疫化学和Western blot技术观察细胞内激活的caspase3的表达.结果 100mg/L,PDS与0.2 u mol/L DDP联合给药:(1)48h后可使单独应用0.2 1.tmol/L DDP组其肿瘤细胞生长抑制率由16.35%提高到47.13%;(2)吖啶橙荧光染色可见细胞呈现明显凋亡形态,其凋亡率与2μmol/L DDP组相当:(3)流式细胞术结果显示,可使单独应用0.2μmol/L DDP组其诱导DU145细胞凋亡率从5.53%提高到19.39%,相当于其10倍剂量即2.0 μmol/L DDP的诱导凋亡效应(21.05%),明显高于PDS单独应用的凋亡率:(4)免疫化学和Western blot结果显示,可使单独应用O.2 μmol/L DDP组细胞内激活的caspase3阳性细胞率与2 μmol/L DDP组相当.结论 PDS能增强DDP对DU145前列腺癌细胞的致凋亡效应.     

阻断PI3K/AKT/mTOR通路增强顺铂诱导的人皮肤黑素瘤细胞株A375凋亡的机制研究

目的:本实验探讨抑制PI3K/AKT/mTOR通路对顺铂诱导人皮肤黑素瘤细胞株A375细胞凋亡作用及其机制。方法:用顺铂处理人皮肤黑素瘤细胞株A375细胞后Western blot检测细胞凋亡、PI3K/AKT/mTOR通路的活化情况以及细胞增殖-毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)。用PI3K的抑制剂LY294002(LY)和mTOR的抑制剂雷帕霉素(Rapamycin,Rap)分别预处理以研究其对顺铂处理后人皮肤黑素瘤细胞株A375细胞凋亡的协同作用。为进一步探索阻断PI3K/AKT/mTOR通路对顺铂处理后人皮肤黑素瘤细胞株A375细胞凋亡的协同作用机制,采用Western blot检测阻断PI3K/AKT/mTOR后联用顺铂处理人皮肤黑素瘤细胞株A375细胞中Bcl-2、Bcl-xl蛋白表达。结果:顺铂处理后的A375黑素瘤细胞中PARP的活化剪切体表达量水平呈浓度和时间依赖性增加,细胞活力呈浓度和时间依赖性降低(P0.05)。顺铂处理A375黑素瘤细胞后PI3K/AKT/mTOR通路的活化。阻断PI3K/AKT/mTOR通路再用顺铂联合处理A375黑素瘤细胞后PARP的活化剪切体表达量明显上调以及细胞活力明显降低(P0.05)。阻断PI3K/AKT/mTOR通路后再用顺铂联合处理A375黑素瘤细胞发现Bcl-2蛋白和Bcl-xl表达水平下调。结论:阻断PI3K/AKT/mTOR通路对顺铂诱导的细胞凋亡具有协同作用,该协同作用可能与Bcl-2和Bcl-xl蛋白下调有关。     

顺铂联合唑来膦酸对肺癌A549细胞增殖的影响及其机制

目的 观察顺铂联合唑来膦酸对肺癌A-549细胞增殖的影响并探讨其作用机制.方法 以噻唑蓝(MTT)比色法观察顺铂联合唑来膦酸对A549细胞增殖的影响,以Annexin-V/PI双染法检测细胞凋亡,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测DNA损伤检查点蛋白调节因子1(MDC1)mRNA的表达.结果 顺铂联合唑来膦酸对A549细胞增殖的抑制率(39.16±4.94)％高于顺铂(16.87±2.50)％、唑来膦酸(19.66±4.57)％;联合用药诱导A549细胞的凋亡率(32.30±0.50)％较顺铂(23.90±2.46)％、唑来膦酸(18.87±3.04)％上升;联合用药后A549细胞MDC1 mRNA的相对表达水平(0.134 ±0.037)较顺铂(0.356±0.033)、唑来膦酸(0.208 ±0.040)下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 顺铂、唑来膦酸可抑制肺癌A549细胞的增殖,诱导其凋亡;顺铂联合唑来膦酸抑制A549细胞的增殖具有协同作用;其协同作用可能与下调MDCl mRNA表达有关.     

多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1表达对前列腺癌细胞顺铂耐药性的影响

探讨多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)表达对前列腺癌细胞顺铂（DDP）耐药性的影响。方法 采用转染PARP-1 siRNA抑制前列腺癌细胞中PARP-1的表达，RT-PCR和Western blot检测细胞中PARP-1以及凋亡信号通路相关蛋白的表达差异，CCK-8检测耐药指数，计算DDP IC50。结果 PARP-1蛋白在耐药细胞PC-3/DDP中的表达量明显高于亲本细胞PC-3，两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。下调PARP-1表达可增强前列腺癌细胞的DDP敏感性，逆转耐药细胞的耐药性。信号通路相关蛋白Bcl-2和pERK显著下调。结论 PARP-1在前列腺癌细胞表达水平与细胞对DDP耐药性密切相关，PARP-1表达抑制可以增强DDP对前列腺癌细胞的敏感性，其分子机制可能是通过激活凋亡通路抑制ERK磷酸化。     

大黄素提高胰腺癌细胞化疗敏感性的机制研究

目的 探讨大黄素能否提高胰腺癌细胞化疗敏感性及其作用机制.方法 设立对照组(正常人皮肤成纤维细胞/胰腺癌BXPC-3细胞),顺铂组(5 mg/L),吉西他滨组(0.5 μmol/L),大黄素与顺铂联合组(50 μmol/L、5 mg/L),大黄素与吉西他滨联合组(50 μmol/L、0.5 μmol/L).应用MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR法检测不同细胞株中多药耐药相关蛋白1(MRP1)、多药耐药相关蛋白2(MRP2)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)和P-糖蛋白(P-gp)mRNA的表达.采用t检验比较两组差异.结果 顺铂组胰腺癌BXPC-3细胞的存活率和凋亡率分别为62.44%±3.42%和27.10%±4.24%,大黄素与顺铂联合组胰腺癌BXPC-3细胞的存活率和凋亡率分别为30.53%±0.05%和66.33%±9.37%,两组比较,差异有统计学意义(t=13.20,5.35,P<0.05).吉西他滨组胰腺癌BXPC-3细胞的存活率和凋亡率分别为79.82%±2.83%和13.48%±1.65%,大黄素与吉西他滨联合组胰腺癌BXPC-3细胞的存活率和凋亡率分别为45.65%±2.46%和62.74%±10.18%,两组比较,差异有统计学意义(t=12.89,8.28,P<0.05).顺铂组和大黄素与顺铂联合组正常人皮肤成纤维细胞存活率比较,差异无统计学意义(t=2.08,P>0.05).吉西他滨组和大黄素与吉西他滨联合组正常人皮肤成纤维细胞存活率比较,差异无统计学意义(t=0.64,P>0.05).在胰腺癌BXPC-3细胞中,只能检测到MRP1 mRNA的表达,未能检测到MRP2、BCRP、P-gp mRNA的表达.顺铂组胰腺癌BXPC-3细胞的MRP1 mRNA表达水平显著降低,而大黄素与顺铂联合组胰腺癌BXPC-3细胞的MRP1 mRNA表达水平则进一步下调.结论 大黄素能够提高胰腺癌细胞对顺铂的敏感性,其机制与下调的MRP1 mRNA表达有关.     

维生素E联合顺铂抑制肝癌细胞BEL-7402体外增殖作用及其机制

目的 观察维生素E联合顺铂对肝癌细胞株BEL-7402体外增殖的抑制作用并探讨其作用机制.方法 将不同浓度的顺铂及维生素E作用于BEL-7402细胞,观察细胞增殖抑制率.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法分析信号转导与转录激活因子-3(STAT3)mRNA的表达.应用流式细胞术、免疫组织化学等方法检测细胞的凋亡.结果 单纯化疗对BEL-7402细胞增殖的抑制率分别为(14.3±3.2)%(24 h)、(21.9±3.5)%(48 h),联合组对BEL-7402细胞增殖的抑制率分别为(25.6±4.2)%(24 h)、(43.3±5.1)%(48 h),两者之间差异均有统计学意义(P<0.05).对照组、单纯化疗组、联合组肝细胞STAT3 mRNA表达水平分别为0.875±0.106、0.726±0.083、0.135±0.018,对照组与单纯化疗组比较差异无统计学意义(P>0.05),单纯化疗组与联合组之间差异有统计学意义(P<0.01).单纯化疗组细胞凋亡率(7.62±0.89)%、G_1期细胞比例(39.98±3.65)%,联合组细胞凋亡率(15.98±1.03)%、G_1期细胞比例(56.23±3.32)%,两者之间差异均有统计学意义(P<0.05).单纯组Fas、bcl-2蛋白表达阳性率分别为(16.8±1.3)%、(30.2±3.8)%,联合组Fas、bcl-2蛋白表达阳性率分别为(32.5±3.6)%、(15.5±1.2)%,两者之间差异均有统计学意义(P<0.05).结论 维生素E联合顺铂可显著抑制BEL-7402细胞的生长增殖,其机制可能与下调STAT3 mRNA的表达,阻滞肿瘤细胞信号转导通路有关.     

C225增敏顺铂对前列腺癌PC-3细胞的抑制作用及其机制

目的 探讨C225是否能增敏顺铂对激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3的抑制作用及其机制.方法 对比空白对照组、顺铂单药组及顺铂联合C225组三者前列腺癌细胞表皮生长因子受体(EGFR)及pEGFR表达水平间的差异,并通过噻唑蓝(MTT)、Transwell侵袭实验、细胞同质黏附实验、流式细胞技术、透射电镜等实验技术,观察药物对各组细胞增殖、凋亡、细胞周期、侵袭能力等生物学行为的影响,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中前列腺特异抗原(PSA)的含量.结果 顺铂作用于PC-3细胞株后,pEGFR表达水平明显升高(0.88±0.11比1.19±0.21),而C225联合顺铂组中,EGFR磷酸化水平明显受到抑制(0.52±0.17).与空白对照组及顺铂单药组比较,C225联合顺铂组,PC-3细胞增殖、侵袭(422.3±22.3、304.3±39.6比194.1±84.8)及黏附能力(60min:1593.8±29.3、1433.5±30.1比1120.5±43.4;90 min:1387.6±33.1、1304.9±22.4比1035.7±20.5)明显受到抑制,细胞周期被抑制在G0/G1期[(54.2±5.2)%、(66.7±4.4)%比(79.3±2.5)%],其凋亡率显著升高[早期(7.6±4.4)%、(8.3±5.0)%比(17.3±2.5)%;晚期(6.1±2.1)%、(14.6±4.1)%比(21.8±2.0)%],透射电镜发现细胞凋亡明显增多,其培养液中PSA的含量显著下降(0.0317±0.0041、0.0293±0.0025比0.0108±0.0011).结论 顺铂能诱导PC-3细胞EGFR通路激活,有可能是导致前列腺癌耐药的途径之一.EGFR抑制剂C225能抑制EGFR通路激活,从而起到化疗增敏的作用.     

缺氧诱导因子-1α小干扰RNA联合顺铂诱导人食管鳞癌细胞凋亡

目的 观察缺氧诱导因子(HIF)-1α小干扰RNA联合顺铂(DDP)对人食管鳞癌TE-1细胞凋亡的影响.方法 人工合成HIF-1α小干扰RNA,体外培养人食管鳞癌TE-1细胞分为4组:A组用生理盐水处理,B组用DDP处理,C组用小干扰RNA处理,D组用小干扰RNA和DDP协同处理;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测HIF-1α mRNA的表达,Western blot法检测HIF-1α蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 RT-PCR法检测A、B、C和D组细胞的HIF1α mRNA表达分别为(0.5325±0.0809)、(0.5003±0.0726)、(0.0986±0.0171)和(0.0849±0.0133),Western blot法检测HIF-1α蛋白表达分别为(0.7280±0.0268)、(0.7115±0.1293)、(0.2362±0.0266)和(0.1917±0.0234),其中D组与A、B两组比较差异有统计学意义(P<0.01),与C组比较差异无统计学意义(P>0.05);A、B、C和D组的细胞凋亡率分别为(3.23±0.61)%、(29.88±3.48)%、(34.48±5.69)%、(56.37±7.99)%,其中D组与其他3组比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 HIF-1α小干扰RNA能够提高DDP的细胞毒性作用,两者联合能有效促进人食管鳞癌TE-1细胞的凋亡,显著提高化疗效果.     

siRNA介导survivin基因沉默诱导人前列腺癌PC3、LNCaP细胞凋亡的研究

目的 研究siRNA对survivin基因表达和前列腺癌PC3、LNCaP细胞凋亡的影响.方法 应用siRNA设计软件,设计针对survivin基因的2个siRNA序列,体外转录合成;PC3、LNCaP细胞培养,通过脂质体将siRNA转入PC3、LNCaP细胞;MTT法检测细胞增殖的抑制率(IR);流式细胞术检测细胞的凋亡;半定量RT-PCR检测survivin mRNA表达水平;Western Blotting检测survivin蛋白表达强度.结果 转染后siRNA 2组的PC3细胞增殖的抑制率(IR)分别为43.84％、54.31％;凋亡指数(AI)分别为22.3％、30.34％;显著高于正常对照组PC3细胞增殖的IR(2.40％)和AI(3.81％);LNCaP细胞增殖的IR分别为41.78％、53.31％;AI分别为18.33％、28.44％;显著高于正常对照组LNCaP细胞增殖的IR(1.97％)和AI(3.43％).结论 siRNA可抑制PC3、LNCaP细胞survivin的表达,诱导细胞凋亡,为前列腺癌尤其是激素非依赖前列腺癌治疗提供试验依据.     

姜黄素与LY294002联合应用对前列腺癌PC-3细胞体外生长的影响

【摘要】 目的〓探讨姜黄素与PI3K/Akt抑制剂LY294002联合应用对前列腺癌PC-3细胞体外生长的影响。方法〓根据给药不同将实验分为对照组、姜黄素组、LY294002组和姜黄素组+LY294002联合组,分别加入等量的培养基、25 μmoL/L姜黄素、25 μmoL/L的LY294002和两种混合液。采用MTS法检测各组细胞的增殖情况、流式细胞仪术检测各组细胞凋亡情况、q-PCR测定各组细胞中NF-κB、P53及caspase-9的表达情况。结果〓姜黄素组、LY组和联合组的细胞增值率均较对照组明显降低,且联合组明显低于两个单独用药组(P<0.05)。姜黄素与LY294002联合作用前列腺癌PC-3细胞后,细胞总凋亡率较姜黄素及LY294002单独使用后明显增加(P值均<0.05)。联合用药组的NF-κB表达量明显低于两单独用药组(P<0.05),而P53和caspase-9的表达量均明显高于两单独用药组(P<0.05)。结论〓姜黄素与LY294002联合使用较两种药物单独使用更能有效抑制前列腺癌PC-3细胞的体外生长,作用机制可能是通过抑制NF-κB的表达从而抑制细胞增殖,并增加P53和caspase-9的表达从而促进细胞凋亡来实现的。     

±托泊苷联合紫杉醇对前列腺癌细胞株生长的协同抑制作用

目的 研究单独或联合使用±托泊苷(ETOP)和紫杉醇(TAXOL)对前列腺癌细胞株生长和细胞凋亡的影响.方法 前列腺癌细胞株经过不同浓度的ETOP 和TAXOL 单独或联合用药处理后,用MTT 法检测细胞抑制率,荧光显微镜观察细胞染色质形态的改变,DNA 梯度定性检测细胞凋亡的变化.结果 单独利用ETOP 或TAXOL 和联合用药,均能抑制前列腺癌细胞生长,并呈浓度和时间±赖关系,其中联合用药组抑制率明显高于单独用药组(P<0.05).ETOP 、TAXOL 及联合用药组细胞核出现典型的凋亡形态学的改变,细胞数目明显少于对照组,联合用药组细胞数目最少.ETOP、TAXOL 及联合用药组处理后的前列腺癌细胞的DNA,经琼脂糖凝胶电泳均出现典型"梯形"DNA 条带,联合用药组改变最明显.结论 ETOP 和TAXOL 均能够抑制前列腺癌细胞生长,联合用药能产生协同抑制作用.     

微小核糖核酸miR-370-5p对前列腺癌细胞增殖影响的研究

目的 探讨微小核糖核酸miR-370-5p对前列腺癌细胞系PC3和DU145细胞增殖的影响.方法 将前列腺癌细胞系PC3和DU145分为2组:阴性对照组-转染随机序列(dsCon-trol);实验组-转染miR-370-5p或miR-370-5p+siP21.实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测各组细胞中p21 mRNA的表达及前列腺癌细胞系中miR-370-5p的基础表达情况;蛋白质印迹法检测p21蛋白的表达;集落形成实验检测各组单个细胞克隆增殖情况;细胞增殖实验检测转染后各组细胞的增殖能力.结果 与正常前列腺上皮细胞(RWPE-1)比较,前列腺癌细胞系PC3和DU145中miR-370-5p表达下降;与阴性对照组相比,实验组PC3和DU145细胞中p21 mRNA的相对表达量分别提高了(2.457±0.392)倍和(1.844±0.295)倍.实验组PC3和DU145细胞中p21蛋白的相对表达分别为(0.52±0.09)和(0.63±0.14),阴性对照组为(0.18±0.06)和(0.24±0.05),两组比较,差异有统计学意义(P<0.05).阴性对照组和实验组中PC3和DU145细胞的集落形成数目分别为(0.281±0.024)、(0.084±0.016)、(0.293±0.017)和(0.310±0.041)、(0.088±0.019)、(0.300±0.032),实验组在转染miR-370-5p后,细胞集落形成数目均较阴性对照组少;而在miR-370-5p+siP21共转染后,与转染miR-370-5p组相比较,PC3和DU145细胞集落形成数目均显著恢复,差异均有统计学意义(P<0.05).细胞增殖实验结果显示,实验组转染miR-370-5p后,PC3和DU145细胞在48、72、96 h的存活情况(用吸光度OD值表示)分别为(0.395±0.040)、(0.691±0.042)、(0.874±0.045)和(0.437±0.044)、(0.700±0.051)、(0.875±0.052),与阴性对照组相比,实验组细胞增殖能力明显下降(P<0.05);miR-370-5p+siP21共转染后48、72、96 h,PC3和DU145细胞的OD值分别为(0.675±0.041)、(1.072±0.124)、(1.323±0.136)和(0.633±0.106)、(1.072±0.167)、(1.337±0.102),与转染miR-370-5p比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 miR-370-5p能够通过上调p21蛋白的表达抑制前列腺癌细胞的增殖.     

AXL表达在前列腺癌细胞多西他赛耐药中的作用研究

目的:观察AXL表达在前列腺癌PC-3和DU145细胞多西他赛化疗耐药中的作用及可能机制。方法:应用Western印迹测定多西他赛刺激PC-3和DU145后AXL蛋白表达,通过多西他赛浓度递增间断刺激PC-3和DU145细胞,建立耐药细胞PC-3-DR和DU145-DR,应用Western印迹测定PC-3和DU145细胞耐药前后AXL,AXL磷酸化蛋白激酶(p-AXL)及配体蛋白生长阻滞特异性因子-6(Gas6)蛋白表达。用脂质体Lipofectamine 2000将经过筛选证实有效的AXL-shRNA序列和阴性NCshRNA序列转染PC-3和DU145细胞,应用CCK8和流式细胞仪检测转染前后加入多西他赛后的细胞增殖和凋亡情况。应用MTT和流式细胞仪检测加入AXL抑制剂MP470和多西他赛单独及联合应用的细胞增殖率、凋亡率和细胞周期分布。Western印迹检测AXL抑制剂R428,多西他赛单独或联合处理耐药细胞后ABCB1的表达情况。结果:多西他赛刺激PC-3和DU145细胞后,AXL表达上升(P0.05);与PC-3和DU145细胞相比,PC-3-DR和DU145-DR中AXL,p-AXL蛋白表达明显上升,Gas6蛋白表达明显下降(P均0.05)。AXL转染PC-3和DU145后的细胞经多西他赛处理48 h,细胞增殖率分别为(51.03±3.16)%和(57.39±2.37)%,明显高于未转染细胞(36.41±4.28)%和(45.5±3.93)%(P0.05),转染后细胞凋亡率分别为(42.37±3.43)%和(39.54±2.39)%,明显低于未转染细胞(65.48±3.16)%和(54.98±2.84)%(P0.05)。MP470可明显抑制细胞增殖和促进耐药细胞凋亡,MP470与多西他赛联合应用后的耐药细胞增殖抑制率和凋亡率明显高于单独应用,联合应用后G2/M期细胞百分数亦明显高于单独应用(P均0.05)。R428可明显降低耐药细胞的ABCB1表达,与多西他赛联用后,ABCB1的蛋白表达水平明显低于单独用药组(P均0.05)。结论:AXL表达上调可促进前列腺癌PC-3和DU145细胞耐药,AXL抑制可增加细胞对多西他赛的敏感性,这一作用可能与G2/M期细胞凋亡率升高和ABCB1表达降低有关。     

奥沙利铂联合低分子柑橘果胶对结肠癌细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨奥沙利铂联合低分子柑橘果胶（LCP）对人结肠癌细胞的增殖及凋亡的影响。方法采用MTT法分别检测各浓度奥沙利铂单药和奥沙利铂联合低分子柑橘果胶对人结肠癌细胞（HT29）增殖的影响．计算两药物相互作用指数（CDI）。流式细胞仪检测IC50浓度奥沙利铂单药及联合用药处理HT29细胞的凋亡比例,采用Westernblot分析凋亡相关蛋白procaspase．3、8、9、PARP的变化。结果奥沙利铂单药与联合LCP用药对HT29细胞生长均有抑制作用,其效应呈时间和浓度依赖性：联合组对HT29细胞的生长抑制作用更为显著（P〈0．01）．两药物CDI小于1。单药与联合用药均能使HT29细胞凋亡比例增加,药物作用6、24、48h后单药组细胞凋亡率分别为（9．76±0．47）％、（20．45±0．74）％和（28．70±3．29）％,联合组细胞凋亡率为（20．63±0．69）％、（34．35±1．02）％和（49．47±3．04）％,联合用药组较单药组细胞凋亡更加显著（均P〈0．01）。单药组与联合组HT29细胞的凋亡相关蛋白procaspase-3、8、9、PARP蛋白的表达均下调,联合组较单药组procaspase-3、9、PARP蛋白表达下调更为显著．但两组细胞procaspase-8表达基本相同。结论LCP能增加奥沙利铂的细胞增殖抑制和诱导凋亡能力．该效应可能与活化线粒体凋亡途径有关。