肺炎克雷伯菌老年患者分离株亲缘性分析

目的了解肺炎克雷伯菌菌株亲缘性状况。方法采用聚合酶链反应(PCR)法对20株肺炎克雷伯菌进行β-内酰胺酶基因,氨基糖苷类药物耐药相关基因,染色体、质粒介导的喹诺酮类药物耐药相关基因,转座子遗传标记和整合子遗传标记等49种耐药基因检测,以耐药基因为分子标记结果作聚类分析。结果20株肺炎克雷伯菌分为A、B两群,A群耐药基因较少;B群携带耐药基因较多,并存在两个克隆传播,这两个克隆已成为医院感染流行株。结论肺炎克雷伯菌可导致医院内传播,遗传标志物聚类分析方法可快速了解菌株间的亲缘关系。     

大肠埃希菌获得性耐药基因检测及指标聚类分析

目的 调查大肠埃希菌45种获得性耐药基因和7种可移动遗传元件遗传标记基因的存在状况,以及获得性耐药基因和可移动遗传元件遗传标记基因的相关性.方法 收集南京医科大学第一附属医院2006年3月-2008年10月患者尿液标本中分离的大肠埃希萄共60株,采用聚合酶链反应(PCR)法分析45种β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类获得性耐药基因和7种整合子、转座子、插入序列、接合性质粒遗传标记基因,并用指标聚类分析(SPSS法),分析β-内酰胺类、氨基糖苷类和喹诺酮类获得性耐药基因与整合子、转座子、插入序列、接合性质粒遗传标记基因的相关性.结果 60株大肠埃希菌共检测到10种获得性耐药基因(包括3种β-酰胺类获得性耐药基因、6种氨基糖苷类获得性耐药基因、1种喹诺酮类获得性耐药基因);且7种可移动遗传元件遗传标记基因均有检出,包括1种整合子基因遗传标记基因、4种转座子和插入序列基因遗传标记基因、两种接合性质粒遗传标记基因,其余35种基因均未检测到;SPSS法将上述阳性检出基因分成A和B两大簇群.结论 大肠埃希菌对抗菌药物的耐药表型与获得性耐药基因相关,且可移动遗传元件的水平转移使细菌的耐药性在同种细菌菌株之间甚至不同种细菌菌株之间得以快速传播;获得性耐药基因与可移动遗传元件遗传标记基因的指标聚类分析显示,在A簇群中,aadA5与intⅠ 1、CTX-M-55与ISEcp1、TEM-1与IS26较为相关,并有可能位于携带traA、trbC性毛基因的接合性质粒上,在B簇群中,aac(6')-Ⅰb与Tn21较为相关.     

肺炎克雷伯菌耐药基因的检测及流行病学研究

目的 研究医院临床分离的肺炎克雷伯菌的耐药基因以及流行病学特征,提高临床对其认识及诊治水平。方法 收集2012年3月-2013年5月临床分离的45株肺炎克雷伯菌,采用纸片琼脂扩散法(K-B)测定其对18种药敏纸片的耐药性,并对β-内酰胺酶、氨基糖苷类药物修饰酶等耐药基因进行PCR扩增,并用DNA测序证实。结果 45株肺炎克雷伯菌对亚胺培南/西司他丁100.0%敏感,对氨苄西林/舒巴坦、头孢西丁、氨曲南、妥布霉素、哌拉西林/他唑巴坦的耐药率均<60.0%,对其余抗菌药物的耐药率均>60.0%;45株肺炎克雷伯菌检出β-内酰胺酶基因最多的为TEM32株检出率为71.1%,其次为SHV10株检出率为22.2%;氨基糖苷类修饰酶阳性检出最多的是aac(3)-Ⅱ39株,检出率为86.7%,其次为aac(6)-Ⅰb 18株、ant(3)-Ⅰ6株,检出率分别为40.0%、13.3%;检出氨基糖苷类修饰酶基因40株,检出率为88.9%,qacE-1-sull 38株,检出率为84.4%。结论耐药基因的肺炎克雷伯菌对临床患者治疗造成了极大困难,因此,有必要加强对产ESBLs肺炎克雷伯菌的分子流行病学监测,从而更好地指导临床,控制肺炎克雷伯菌感染。     

多耐药肺炎克雷伯菌获得性耐药基因及ompK36突变研究

目的了解1株多耐药肺炎克雷伯菌(MDRKP)获得性耐药基因和膜孔蛋白基因ompK36存在及突变状况。方法将1株对16种抗菌药物均耐药的MDRKP进行了β-内酰胺类、氨基糖苷类获得性耐药相关基因及其载体(整合子、转座子)的遗传标记检测和膜孔蛋白基因ompK36的检测。结果该株MDRKP耐β-内酰胺类药物获得性耐药基因检出TEM-1、SHV-11、KPC-2型(均经测序比对证实),耐氨基糖苷类药物获得性耐药基因检出aac(3)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ,无16S rRNA甲基化酶基因检出;Ⅰ类整合子遗传标记intⅠ1、qacE△1-sul1阳性、转座子遗传标记merA阳性;检出膜孔蛋白基因ompK36,且存在变异(GGCGAC小片段插入)。结论该株MDRKP耐β-内酰胺类、基糖苷类等抗氨菌药物与该菌携带获得性耐药基因TEM-1、SHV-11、KPC-2型、aac(3)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ基因相关;另外,该菌膜孔蛋白基因ompK36发生了变异,这可能与β-内酰胺类药物耐药有关联。     

多药耐药肺炎克雷伯菌尿液分离株检出gyrA基因新亚型

目的了解1株多药耐药肺炎克雷伯菌的遗传学背景。方法采用聚合酶链反应(PCR)的方法分析1株多药耐药肺炎克雷伯菌可能存在的65种耐药相关基因:包括β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类耐药相关基因及可移动的遗传元件(整合子、转座子、接合性质粒)遗传标记、抗菌制剂外排泵基因。结果该株多药耐药肺炎克雷伯菌耐β-内酰胺类药物基因检出blaTEM,耐氨基糖苷类药物基因检出aph(3′)-Ⅰ,耐喹诺酮类药物基因检出gyrA,Ⅰ类整合子遗传标记检出intⅠ1,转座子遗传标记检出tnp513,接合性质粒遗传标记检出trbC;抗菌制剂外排泵基因检出qacE△1-sul1,gyrA基因是新亚型(GenBank登录号:JN232083),83位密码子突变方式为TCG→TTC,导致氨基酸从丝氨酸(S)→苯丙氨酸(F);87位密码子突变方式为GAC→GCC,导致氨基酸从天冬氨酸(D)→丙氨酸(A)。结论携带多药耐药基因和抗菌制剂外排泵基因是这株肺炎克雷伯菌呈多药耐药的主要原因,携带多种可移动遗传元件使细菌的耐药性在同种细菌菌株之间,甚至不同种细菌菌株之间得以快速传播。     

泛耐药肺炎克雷伯菌的耐药基因研究

目的 了解1株对临床常用18种抗菌药物(包括亚胺培南、美罗培南)均耐药的肺炎克雷伯菌(KPN)所携带的耐药基因状况.方法 对该株KPN进行了9类耐药基因的PCR法检测,包括β-内酰胺酶基因blaTEM、blaSHV、blaLEN、blaOKP、blaCTX-M-1、2、9群、blaOXA-1、2、10群、blaCARB、blaPER、blaVEB、blaGES、金属β-内酰胺酶基因blaIMP、blaVIM、blaKPC,AmpC酶基因blaDHA、blaACT/MIR、blaCMY/MOX、blaCMY/LAT,氨基糖苷修饰酶基因aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰ b、aac(6')-Ⅱ、ant(2")-Ⅰ、ant(3")-Ⅰ,喹诺酮类耐药基因qnrA、TMP耐药基因dfrA1、dfrA17,消毒剂磺胺耐药基因qacE△1-sul1,整合子遗传标记基因intⅠ1、intⅠ2、intⅠ3,转座子遗传标记基因tnpA、merA,共计36种.结果 KPN共检出7种耐药基因,分别为β-内酰胺酶基因blaTEM,blaSHV,金属β-内酰胺酶基因blaKPC-2,氨基糖苷修饰酶基因aac(3)-Ⅱ,ant(3")-Ⅰ,消毒剂磺胺耐药基因qacE△1-sull,整合子遗传标记基因intⅠ1.结论 在该株泛耐药KPN中发现了少见的blaKPC-2金属β-内酰胺酶基因,该菌对18种抗菌药物的耐药可能与其同时携带有多种耐药基因有关,临床应对此类菌株引起重视.     

一株携带四种β一内酰胺酶肺炎克雷伯菌的检测

多耐药肺炎克雷伯菌(multi-drug-resistance Klebsiella pneumoniae,MDRKP)已是最常见的医院感染病原菌之一.本研究对分离自我国内地的1株MDRKP菌进行β-内酰胺类、氨基糖苷类获得性耐药相关基因及其载体(整合子、转座子)的遗传标记检测,发现该株菌同时携带4种β-内酰胺酶.     

耐药肺炎克雷伯菌湖北襄阳分离株获得性耐药元件研究

目的调查耐药肺炎克雷伯菌获得性耐药元件基因的携带情况及菌株间的亲缘关系,为临床治疗提供参考依据。方法收集2016年1-10月医院住院患者痰液标本分离15株耐药肺炎克雷伯菌,用K-B法测定9种抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析35种β-内酰胺类获得性耐药基因,21种氨基糖苷类获得性耐药基因和10种可移动遗传元件遗传标记;阳性耐药基因测序后直接作BLAST比对,耐药基因检测结果作样本聚类分析。结果 15株耐药肺炎克雷伯菌对β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类耐药率高;15株菌每株均检出β-内酰胺酶基因,总阳性率达100.0%,共检出7种β-内酰胺酶基因,其中仅检出1种β-内酰胺酶基因1株,占6.7%,同时检出2种9株,占60.0%,同时检出3种5株,占33.3%;样本聚类分析可见有一定的聚集性,并可分为A与B二个群;除A群有2个菌株属克隆传播,其余菌株亲缘关系稍远。结论本组15株耐药肺炎克雷伯菌同时携带β-内酰胺类药物获得性耐药基因、氨基糖苷类药物获得性耐药基因和可移动遗传元件遗传标记,是对β-内酰胺类和氨基糖苷类产生耐药的重要原因。     

多药耐药肺炎克雷伯菌耐药元件检测的样本聚类分析

目的研究多药耐药肺炎克雷伯菌(MDRKP)的菌株亲缘性,为临床预防其感染提供参考依据。方法收集2008年8月-2010年5月浙江省杭州市和湖州市6所医院共47株MDRKP,进行102种耐药元件的PCR法检测,包括β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类、四环素、利福平与磺胺甲噁唑/甲氧苄啶药物耐药相关基因及可移动遗传元件,并对检测结果作样本聚类分析。结果 47株MDRKP中共检出34种耐药元件,检出阳性率为2.1%~100.0%;样本聚类分析1、6和13~15号菌株为杭州市A医院的克隆传播;18~20号菌株为源自杭州市B医院的克隆传播;29、32和31、33号菌株为杭州市D医院的克隆传播;35、37、38号菌株为湖州市E医院的克隆传播;39~42、45~47号菌株为杭州市F医院的克隆传播。结论对耐药元件检测结果进行样本聚类分析,是对跨地区和(或)跨年度的菌株进行亲缘关系研究的一种简捷方法,为追溯耐药菌传播途径提供了有效手段。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的分子流行特点及耐药机制

目的目前,耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)在全球很多地区医院中的分离率越来越高,引起WHO及国内外同行高度关注,在抗菌药物的选择性压力下,碳青霉烯酶耐药基因可位于不同的移动元件,在相同及不同种属细菌之间播散,给临床感染防控带来极大挑战,笔者拟通过对CRKP分子流行病学特点、碳青霉烯酶基因及整合子介导的耐药机制研究进展进行综述,为CRKP感染的预防和控制提供依据。     

69株碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌耐药基因检测分析

目的了解耐碳青霉烯类抗生素的肺炎克雷伯菌耐药基因的携带情况。方法收集69株浙江省人民医院住院病人耐碳青霉烯的肺炎克雷伯菌株,改良Hodge试验进行KPC型碳青霉烯酶初筛检测,PCR法进行HSV、OXA-1群、OXA-2群、OXA-10群、GES、VEB、IMP、VIM、SME、KPC、IMI/NMC、NDM基因检测,并对部分阳性基因进行测序。结果 69株肺炎克雷伯菌改良Hodge试验阳性48株,阳性率63.8%。PCR检测结果为56株(81.2%)携带KPC基因,60株(87%)携带HSV,20株(29.0%)携带OXA-3基因;3株(4.35%)肺炎克雷伯菌携带OXA-1基因。对KPC基因测序结果为KPC-2亚型。结论本次检测的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌携带KPC-2基因为主,应加强院感监测和预防。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶基因检测

目的 对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌进行耐药性分析及碳青霉烯酶基因检测,为临床正确选择抗菌药物提供依据.方法 采用K-B法检测15株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌对18种抗菌药物的耐药性,以WHONET5.5软件分析细菌耐药表型,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶,以聚合酶链反应检测blaKPC、blaIMP、blaVIM、balNDM基因并进行测序.结果 2008年1月-2009年12月共分离到非重复耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌15株,改良Hodge试验检出14株含碳青霉烯酶,检出率为93.3％;PCR结果显示14株携带blaKPC,未检出blaIMP、blaVIM、blaNDM基因,与改良Hodge试验一致.结论 blaKPC是肺炎克雷伯菌耐碳青霉烯类药物主要原因,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶具有很好的敏感性.     

肺炎克雷伯菌临床分离株的流行病学及耐药特性

目的 探讨医院肺炎克雷伯菌(KPN)临床分离株的流行病学及耐药性,为临床医师合理选用抗菌药物提供参考依据.方法 对266株肺炎克雷伯菌的标本来源和临床科室分布进行调查;细菌鉴定按照《全国临床检验操作规程》,采用常规方法鉴定;药敏试验采用K-B法进行,依据CLSI最新折点判读结果;数据处理应用WHO-NET软件分析.结果 医院肺炎克雷伯菌主要分离自呼吸道标本,占60.5％;以呼吸内科、ICU、脑外科、神经内科分离率较高,分别占20.7％、19.2％、15.8％、14.3％;肺炎克雷伯菌临床株对碳青霉烯类抗菌药物亚胺培南、美罗培南敏感率为100.0％,但对其他常用抗菌药物均产生了不同程度的耐药性.结论 医院应继续坚持细菌耐药性的监测工作,预防与控制多药耐药细菌医院感染的暴发流行.     

粪便中分离肺炎克雷伯菌的血清型与毒力基因检测

目的了解粪便标本分离肺炎克雷伯菌（KPN）的血清型与毒力基因分布,为临床治疗提供依据。方法收集2013年11月—2014年6月某院健康体检者及住院非腹泻患者粪便标本分离KPN,检测其黏液表型、 6种荚膜血清型（K1、K2、K3、K5、K54和K57)及6种毒力基因（rmpA、fimH、Aero、mrkA、wabG和ironB）,分析不同黏液表型、不同人群来源菌株荚膜血清型与毒力基因分布情况。结果收集粪便标本510份,其中健康体检者92份,住院非腹泻患者418份,分离KPN 107株（健康体检者19株,住院非腹泻患者88株）,粪便标本KPN总分离率为20.98%,其中高黏液表型菌24株,非高黏液表型菌83株。分离的KPN中6种血清型和6种毒力基因均有检出,以K1、K2、K57、K54血清型为主(48.60%);毒力基因mrkA和wabG检出率最高（分别为90.65%、83.18%）,rmpA+fimH+Aero +mrkA +wabG基因同时检出最常见（30.84%）,主要分布于K1、K2、K57、K54血清型中。rmpA和Aero毒力基因主要在K1、K2、K57、K54血清型中检出。健康体检者KPN血清型以K1型为主（26.32%）,未检测到K3和K57型;住院非腹泻患者6种血清型均有检出,以K1、K2、K57、K54为主。高黏液表型菌同时携带4种毒力基因以上者占83.33%（20/24）,高于非高黏液表型菌的32.53%（27/83）（χ2=19.51,P＜0.01）。高黏液表型菌中K1、K2、K57、K54血清型总检出率为91.67%（22/24）,高于非高黏液表型菌的36.14%（30/83）; rmpA、Aero毒力基因的检出率均为95.83%,均高于非高黏液表型菌组（分别为31.32%、30.12%）（均P＜0.05）。结论粪便中分离的KPN均检测到强毒力荚膜血清型和多种毒力基因,尤其在高黏液表型菌和住院患者分离菌中,应引起临床重视。     

201株肺炎克雷伯菌耐药性分析及其gyrA基因分析

目的 了解肺炎克雷伯菌的耐药性及耐药基因gyrA的分布,给临床用药提供依据.方法 收集2003-2009年临床分离的肺炎克雷伯菌201株,采用琼脂稀释法进行药敏检测;利用引物特异性PCR结合测序识别gyrA基因耐药基因.结果 201株肺炎克雷伯菌对甲氧苄啶和氨苄西林有很高的耐药性,但是对亚胺培南和阿米卡星较为敏感;同时,检测到60株占29.9％存在gyrA基因突变.结论 随着抗菌药物的大量使用,肺炎克雷伯菌耐药性较严重,易导致肺炎克雷伯菌产生多药耐药性,给临床抗感染治疗带来了严峻的挑战.     

肺炎克雷伯菌耐药表型的分布及其耐药性分析

目的 调查肺炎克雷伯菌(KPN)临床株产不同β-内酰胺酶株分布情况、表型特征及耐药现状,指导临床合理使用抗菌药物.方法 采用VITEK-2 Compact对肺炎克雷伯菌进行鉴定和药敏试验.结果 291株KPN表型主要分为3类:产ESBLs类、产获得性青霉素酶类、野生型;其中产ESBLs株占48.1％;产获得性青霉素酶类占35.1％;野生株占14.4％;此外产碳青霉烯酶菌株7株,占2.4％,产酶总阳性率为85.6％;产ESBLs菌株对多数抗菌药物的耐药性明显高于非产ESBLs菌株.结论 应高度重视对KPN产酶株的监控,合理使用抗菌药物,控制耐药株的产生与扩散.     

新生儿肺炎克雷伯菌感染及耐药分析

目的了解新生儿肺炎克雷伯菌感染及耐药情况,为指导临床治疗提供依据。方法对汕头大学医学院第二附属医院新生儿病区2011—2012年的临床样本中分离培养出的106株肺炎克雷伯菌进行调查,并分析其耐药情况。结果106株肺炎克雷伯菌中,超广谱13内酰胺酶（ESBL）阳性菌株为60株（56．60％）。药敏结果显示,菌株对左氧氟沙星、头孢他啶、哌拉西林／他唑巴坦、头孢替坦、阿米卡星、头孢吡肟、亚胺培南、厄他培南的敏感率较高（81．13％-97．17％）,对氨苄西林、复方磺胺甲嗯唑、氨苄西林／舒巴坦、头孢唑林和头孢曲松耐药率较高（58．49％-100．00％）。新生儿患者院内感染病例所占的比例为20．75％,高于普通儿科患者的1．27％,差异有统计学意义（X^2=28．96,P〈0．05）。引起新生儿肺炎克雷伯菌医院感染的菌株多数为耐药菌株（ESBLs阳性率77．27％）。ESBLs阳性菌株感染者的住院时间和住院费用分别为（26．02±10．16）d和（31982．55±19386．10）元,高于阴性菌株感染者（t：7．31、4．57,P〈0．01）。结论肺炎克雷伯菌是引起新生儿感染的常见细菌,其中ESBL阳性菌株对多种抗菌药物呈现耐药,引起的疾病负担较重。