骨化三醇对糖尿病肾病模型大鼠肾小管间质损伤的保护作用研究

目的:探讨骨化三醇对糖尿病肾病模型大鼠肾小管间质损伤的保护作用及其可能的机制。方法:取SD大鼠随机分为正常对照组、模型组(橄榄油)、干预组(骨化三醇0.03μg·kg-1·d-1),每组8只,后2组单次腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病肾病模型,建模成功后灌胃给予相应药物,连续12周,末次给药后检测24h尿蛋白,然后处死大鼠,检测血清尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)含量及肾组织中肌成纤维细胞特异性蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和细胞外基质(ECM)重要成分纤维连接蛋白(FN)及其mRNA的表达情况,并对肾小管和小管间质损伤进行评分。结果:与正常对照组比较,模型组和干预组24h尿蛋白、BUN、Scr及α-SMA和FN蛋白、mRNA表达均明显增加(P<0.05);与模型组比较,干预组24h尿蛋白、Scr及α-SMA和FN蛋白、mRNA表达均明显减少(P<0.05),肾小管和小管间质损伤评分明显降低(P<0.05)。结论:活性维生素D3可能通过下调糖尿病肾病模型大鼠肾组织中α-SMA、FN的表达,抑制肾小管上皮细胞转分化,减轻肾小管间质的ECM沉积,进而发挥其肾脏保护作用。     

活性维生素D3对高糖诱导的人肾小管上皮细胞中α-SMA和FN表达的影响

目的 探讨活性维生素D3(Vit D3)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤维连接蛋白(FN)表达的影响.方法 培养人肾小管上皮细胞并分为正常组(N组,含5.5 mol·L-1 D-葡萄糖)、高糖组(M组,含25 mol·L-1D-葡萄糖)、高糖+低浓度活性Vit D3组(LD组,含10-8 mol·L-1活性Vit D3)和高糖+高浓度活性Vit D3组(HD组,含10-6 mol·L-1活性维生素D3),细胞免疫组化方法测定各组细胞的α-SMA和FN的蛋白表达,RT-PCR半定量方法测定各组细胞的α-SMA和FN的mRNA表达.结果 与N组比较,M组、LD组和HD组α-SMA、FN蛋白表达的水平和mRNA表达的水平明显升高(P＜0.05),与M组比较,LD组和HD组α-SMA、FN蛋白表达的水平和mRNA表达的水平明显降低(P＜0.05),其中,与LD组比较,HD组水平最低(P＜0.05).结论 活性Vit D3可下调人肾小管上皮细胞α-SMA和FN的表达,从而抑制肾小管上皮细胞转分化,对糖尿病肾病有一定防治作用,且存在剂量依赖关系.     

骨化三醇对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化影响的研究

目的观察幼年大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)肾组织中α-肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-Cad)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、骨形态发生蛋白-7(BMP-7)mRNA的表达,探讨骨化三醇对肾小管上皮细胞转分化(EMT)干预效应及机制。方法 54只雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组(A组)、UUO模型组(B组)及UUO模型干预组(C组)各18只,灌胃满3、7、14d取肾。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组α-SMA、E-Cad、TGF-β1、BMP-7mRNA表达水平。结果与A组相比,B组E-Cad、BMP-7mRNA表达明显下降(P<0.01),α-SMA、TGF-β1mRNA表达显著增高(P<0.01);C组与B组相比,E-Cad、BMP-7mRNA表达明显上调(P<0.01),α-SMA、TGF-β1mRNA表达明显下降(P<0.01)。结论骨化三醇对UUO模型大鼠肾小管上皮细胞转分化有抑制作用,这种抑制作用可能与下调TGF-β的表达及上调BMP-7的表达有关。     

罗格列酮对2型糖尿病大鼠肾小管上皮细胞中α-SMA表达的影响

目的探讨罗格列酮(rosiglitazone,RSG)对α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在2型糖尿病大鼠肾小管上皮细胞中表达的影响,揭示RSG对糖尿病肾病的保护作用。方法应用免疫组化技术及流式细胞学技术检测对照组、2型糖尿病组及RSG干预组肾小管上皮细胞中α-SMA的表达。结果免疫组化及流式定量结果显示:RSG干预组较2型糖尿病组大鼠肾小管上皮细胞胞浆中α-SMA表达减弱。结论RSG可以减弱2型糖尿病大鼠肾小管上皮细胞中α-SMA的表达,从而起到保护肾脏的作用。     

罗格列酮对2型糖尿病大鼠肾小管上皮细胞中α-SMA表达的影响

目的探讨罗格列酮(rosiglitazone,RSG)对α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在2型糖尿病大鼠肾小管上皮细胞中表达的影响,揭示RSG对糖尿病肾病的保护作用。方法应用免疫组化技术及流式细胞学技术检测对照组、2型糖尿病组及RSG干预组肾小管上皮细胞中α-SMA的表达。结果免疫组化及流式定量结果显示:RSG干预组较2型糖尿病组大鼠肾小管上皮细胞胞浆中α-SMA表达减弱。结论RSG可以减弱2型糖尿病大鼠肾小管上皮细胞中α-SMA的表达,从而起到保护肾脏的作用。     

两种糖尿病肾病大鼠模型的对比研究

目的对比两种糖尿病肾病动物模型肾脏纤维化进程及其机制探讨。方法 32只雄性SD大鼠随机分成4组:正常对照组(Con组);单肾切除组(Nx组);糖尿病组(DM组);单肾切除+糖尿病组(DMNx组)。共观察16周,于16周末检测各组大鼠血糖、血压、尿白蛋白、肾重/体质量、肾脏病理。用RT-PCR检测各组大鼠肾组织α-SMA、E-cadherin mRNA表达水平。结果与DM组相比较,DM Nx组大鼠肾重/体质量比值增加,系膜基质明显增多,尿白蛋白排泄率明显增加。DM Nx组大鼠肾小管间质出现局灶性纤维化。但两组之间的血压,血糖水平差异无显著性。与Con组及Nx组相比较,DM组与DM Nx组大鼠肾脏组织中α-SMA mRNA的表达水平均显著增高,且DM Nx组较DM组升高更明显;而E-cadherin mRNA的表达水平显著降低,且DM Nx组较DM组降低更明显。结论单肾切除后STZ诱导的糖尿病肾病模型与单纯STZ诱导的糖尿病肾病模型相比,小管间质更早出现纤维化,可能与肾小管上皮细胞转分化程度更强有关。     

1,25-二羟维生素D_3对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化调节性T细胞的作用研究

目的:探讨1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化调节性T细胞(Treg)的作用。方法:54只健康雄性wistar大鼠随机分为假手术组(A组)、UUO组(B组)、1,25(OH)2D3治疗组(C组)。每组于术后第1天、第3天、第7天分批处死6只,留取肾脏组织。用HE染色观察肾脏病理变化,采用免疫组织化学染色法测定肾脏人叉头框蛋白P3(FOXP3)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果:与假手术组相比,UUO组FOXP3表达水平显著降低,α-SMA表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);与UUO组相比,1,25(OH)2D3治疗组FOXP3表达水平显著升高,α-SMA表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:调节性T细胞可能参与了肾间质纤维化的发生及发展;1,25(OH)2D3作为免疫调节剂可通过上调调节性T细胞减缓肾脏纤维化的进展。     

活性维生素D3抑制UUO模型大鼠肾间质纤维化作用的研究及其对TGF-β1,α-SMA表达的影响

目的:探讨活性维生素D3对单侧输尿管梗阻模型(UUO)大鼠肾小管间质纤维化的抑制作用,研究该病理过程中转化生长因子β1(TGF-β1),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达变化。方法:36只雄性Wistar大鼠,随机分为三组,活性维生素D3组、假手术组、模型组,每组12只。造模后活性维生素D3组给予罗盖全(骨化三醇)灌胃(3ng/100g),假手术组及UUO模型组给予等量生理盐水灌胃。三组大鼠于给药后第14天,28d分批(n=6)处死,留取造模侧肾脏。用HE染色及Masson染色法观察肾小管间质纤维化程度,用免疫组化法测定TGF-β1,α-SMA在各组大鼠造模侧肾脏的表达情况。结果:免疫组织化学显示:UUO模型组大鼠的肾脏组织中TGF-β1及α-SMA的表达显著高于假手术组(P<0.05),而在活性维生素D3治疗组中,TGF-β1及的α-SMA表达低于UUO模型组(P<0.05),肾脏组织形态学显示:模型组肾间质纤维化程度明显高于假手术组,活性维生素D3组肾间质纤维化程度明显小于模型组(P<0.05)。结论:活性维生素D3能有效抑制UUO大鼠肾间质中TGF-β1及α-SMA的表达,从而减轻UUO大鼠肾间质纤维化程度。     

丹参酮ⅡA磺酸钠注射液对糖尿病大鼠肾脏的保护作用

目的探讨丹参酮ⅡA磺酸钠注射液对糖尿病大鼠肾脏损害的保护作用及其机制。方法将36只大鼠随机分为对照组、糖尿病组和丹参酮ⅡA磺酸钠注射液治疗组（治疗组），后两组制备2型糖尿病大鼠模型。采用免疫组化技术与流式细胞技术检测肾小管上皮细胞转分化过程中的标志蛋白[α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）、波形蛋白（vimentin）及转化生长因子-β1（TGF-β1）]在肾小管上皮细胞中的表达。结果治疗组α-SMA，vimentin及TGF-β1表达均较糖尿病组下调。结论丹参酮ⅡA磺酸钠注射液能延缓糖尿病大鼠的肾间质纤维化。     

罗格列酮对糖尿病肾病大鼠肾小管上皮整合素连接激酶和α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的探讨罗格列酮对糖尿病肾病大鼠肾小管上皮整合素连接激酶和α-平滑肌肌动蛋白(α-SM A)表达的影响。方法 30只健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组、阳性对照组和罗格列酮处理组,每组10只,正常对照组给予普通营养饲料喂养,阳性对照组和罗格列酮处理组给予高脂饲料喂养,连续喂养12周后,阳性对照组和罗格列酮处理组大鼠腹腔注射30 mg/kg链脲佐菌素,正常对照组给予等量枸橼酸缓冲液。成功制备DKD模型后,罗格列酮处理组大鼠给予罗格列酮3 mg/kg灌胃,正常对照组和阳性对照组给予等量生理盐水灌胃。连续给药28周后,对各组大鼠进行称重,检测FBG、Hb A1c和24 h尿蛋白水平,实时荧光定量PCR检测右肾上极皮质组织中ILK和α-SMA表达。结果罗格列酮处理组和阳性对照组大鼠体重均低于正常处理组,而相对肾重均高于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),罗格列酮处理组大鼠体重均高于阳性对照组,而相对肾重低于阳性对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);罗格列酮处理组大鼠FBG、Hb A1c和24 h尿蛋白水平均高于正常对照组,但均低于阳性对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);罗格列酮处理组大鼠右肾上极皮质组织中ILK mRNA和α-SMA mRNA相对表达量均高于正常对照组,但均低于阳性对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 DKD大鼠肾组织中ILK和α-SMA呈高表达,罗格列酮可下调DKD大鼠肾组织中ILK和α-SMA表达,可能通过抑制肾小管上皮细胞转分化发生而延缓肾小管间质纤维化。     

细胞因子信号传导抑制蛋白1对糖基化终末产物诱导的肾小管细胞转分化的影响

目的观察细胞因子信号传导抑制蛋白1(SOCS-1)对糖基化终末产物(AGEs)诱导肾小管上皮细胞(HKC)转分化及JAK/STAT信号通路的影响。方法体外培养人肾小管上皮细胞(HKC),应用脂质体2000分别转染pCR3.1/SOCS-1表达质粒和pCR3.1空质粒载体,G418筛选阳性克隆。分别采用白蛋白和AGEs进行刺激。采用Western印迹检测SOCS-1、α-SMA、E-钙黏着糖蛋白(E-cadherin)、Ⅰ型胶原(collagenI,ColI)、信号转导和转录活化因子1、3(STAT1、STAT3)及其磷酸化蛋白(p-STAT1、p-STAT3)的表达;酶联免疫吸附实验(ELISA)测定细胞上清液中转化生长因子-β1(TGF-β1)的分泌;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测α-SMA和E-cadherin mRNA的表达。结果与对照组相比,AGEs组肾小管细胞α-SMA和ColI蛋白表达明显上调,细胞培养上清中TGF-β1含量增加,α-SMA mRNA的表达增加,而E-cadherin蛋白和mRNA表达下调。SOCS-1过表达能够抑制AGEs刺激引起的HKC细胞α-SMA和ColI的表达及STAT1和STAT3的磷酸化,减少TGF-β1的含量,下调AGEs刺激引起的HKC细胞α-SMA mRNA的表达,同时能够逆转AGEs刺激引起的HKC细胞E-cadherin蛋白和mR-NA的下调表达。结论SOCS-1过表达抑制AGEs诱导的肾小管上皮细胞转分化可能是通过抑制JAK/STAT信号通路活化实现的。     

沙利度胺对单侧输尿管梗阻后大鼠肾间质纤维化的影响

目的研究沙利度胺(Thd)对单侧输尿管梗阻(UUO)后大鼠肾间质纤维化的作用。方法 48只SD大鼠随机均分为四组,每组12只:假手术组(Sham组)、UUO模型组(UUO组)、Thd200mg.kg-1.d-1治疗组(Thd组)和洛丁新10mg.kg-1.d-1治疗组(Lot组)。术后7、14d取血检测肾功能,Masson染色观察肾间质病变,免疫组织化学和RT-PCR检测肾组织缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达。结果与Sham组比较,UUO组血尿素氮和肌酐水平、肾间质纤维化程度以及HIF-1α、α-SMA、ColⅠ蛋白及mRNA表达均明显增加(P<0.01);Thd组上述各观察指标均较UUO组减少(P<0.01);除HIF-1α表达外,Lot组其余指标均较UUO组下降(P<0.01),且与Thd组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Thd可改善肾功能,并可能通过下调HIF-1α表达而抑制肾小管上皮细胞转分化和肾间质细胞外基质积聚,进而发挥肾保护作用。     

EGCG对肾小管上皮细胞转分化过程中MMP9与Cyclin D1表达的影响及意义

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对肾小管上皮细胞转分化的作用机制。方法培养大鼠肾小管上皮细胞株NRK-52E,将其分成4组。1组:正常对照组(N),以DMEM培养液为空白对照。2组:转化生长因子(TGF-β1)诱导组;3组:EGCG200μg/L干预组;4组:EGCG400μg/L干预组。各细胞组在作用48 h后,应用免疫组化检测平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和角蛋白(CK-18),Western-blot分析胞浆蛋白细胞周期素D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶9(MMP9)含量,实时荧光定量PCR法测Cyclin D1、MMP9mRNA的相对表达量。结果 NRK细胞被TGF-β1诱导48 h后,胞浆中出现α-SMA蛋白高表达,CK-18蛋白表达明显减少;Cyclin D1、MMP9蛋白及其mRNA出现了高表达;EGCG干预组上述改变明显减轻。结论 EGCG以剂量依赖方式抑制TGF-β1诱导的NRK细胞的转分化,其机制可能是通过抑制Cyclin D1、MMP9蛋白及mRNA表达而实现的。     

波形蛋白在肾间质纤维化大鼠肾组织中表达趋势及螺内酯干预的研究

目的探讨幼年大鼠单侧输尿管结扎所致肾间质纤维化模型中,波形蛋白和α-SMA的表达趋势及其与肾间质纤维化的相关性,同时观察螺内酯干预治疗后的效果。方法采用单侧输尿管结扎的方法制备肾间质纤维化大鼠模型(UUO模型),将96只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、螺内酯治疗组。造模成功后分别在7、14、21、28d每组各取8只大鼠处死,左肾组织行Masson染色,动态观察各组肾间质损伤程度,并用免疫组织化学链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)法检测各组Vimentin和α-SMA的表达水平。结果 随着时间的推移,模型组和治疗组肾间质损伤程度逐渐增强,但治疗组损伤较模型组轻微,二者的差异有统计学意义(P<0.01);在模型组中,波形蛋白和α-SMA的表达水平随肾间质损伤程度的加重而逐渐增强,波形蛋白各时间点之间差异有统计学意义(P<0.01),肾间质纤维化程度与波形蛋白和α-SMA的表达水平呈正相关(r=0.647,P<0.01);模型组中波形蛋白和α-SMA的表达水平高于治疗组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论波形蛋白和α-SMA的异常表达可能参与了肾间质纤维化过程;螺内酯在改善肾间质纤维化的过程中起着一定作用,其机制中可能有波形蛋白和α-SMA的参与。     

前列地尔治疗糖尿病肾病25例

目的观察前列地尔治疗糖尿病肾病的临床疗效。方法选取2011年1月至12月收治的糖尿病肾病患者50例,按照随机分组法分为对照组和治疗组,各25例。对照组进行常规降压、调血脂以及降血糖治疗;治疗组在对照组基础上静脉滴注前列地尔注射液10μg,每日1次,疗程12 d。比较两组24 h尿蛋白(24 h Upro)、血尿素氮(BUN)和血清肌酐(SCr)的变化。结果治疗组治疗后24 h Upro,BUN和SCr水平较治疗前显著下降,较对照组也显著下降(P<0.05)。结论前列地尔治疗糖尿病肾病可显著改善肾功能,减少蛋白尿。     

1,25-（OH）2-D3对进展性肾炎大鼠肾小管间质胶原蛋白Ⅲ表达的影响

目的探讨1,25-（OH）2-D。对进展性肾炎大鼠肾小管间质胶原蛋白m（Colm）表达的影响。方法将实验动物按随机数字表法分为3组（n=7）：假手术组（对照组）、进展性肾炎组（模型组）、6ng／（100g·d）1,25-（OH）,D,干预组（ta疗组）。除对照组外,其余组均采用右肾切除并2次注射IgG（OX-7）鼠抗人Thyl．1单克隆抗体,制备进展性肾炎大鼠模型。1,25-（OH）2-D,干预8周后,检测各组大鼠24h尿蛋白、血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）及电解质的变化,Masson染色观察。肾组织病理改变。免疫组织化学检测肾小管间质Col III的表达。结果与模型组比较,1,25-（OH）2-D3治疗不仅使大鼠24h尿蛋白及BUN均明显降低（．P〈0．05）,还能使Colm表达显著下调（P〈0．05）。肾组织病理损害明显减轻。结论1,25-（OH）2-D3可能通过明显降低进展性肾炎大鼠肾小管间质ColⅢ的表达,减轻肾小管间质纤维化而发挥。肾脏保护作用。     

红景天苷对转化生长因子-β1诱导人肾小管上皮细胞逆向分化的影响

目的：阐释红景天苷对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导人肾小管上皮细胞（HKC）表型转分化的效应,探讨其对I型（colⅠ）和Ⅲ型（ColⅢ）胶原蛋白表达的影响。方法：体外培养HKC,应用不同浓度红景天苷处理经TGF-β1诱导活化的HKC细胞,显微镜观察细胞形态改变,免疫组化法检测角化蛋白-18和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达：应用酶联免疫吸附法（ELISA）检测ColⅠ型和ColⅢ型胶原蛋白表达。结果：HKC细胞经过TGF-β1诱导,细胞角化蛋白．18表达明显下调,α-SMA、ColⅠ、ColⅢ型胶原表达明显上调,与空白对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。经红景天苷干预后,其表达有所下降,与TGF-β1诱导组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：红景天苷可抑制TGF-β1诱导的HKC表型转分化,同时可以抑制肾小管上皮细胞外基质成分ColⅠ、ColⅢ型胶原的合成,在一定程度上具有阻止肾小管间质纤维化的作用。     

Hirudin improves renal interstitial fibrosis by reducing renal tubule injury and inflammation in unilateral ureteral obstruction (UUO) mice

Renal interstitial fibrosis (RIF) often occurs in many chronic kidney diseases (CKD). Hirudin now is applied to treat fibrosis in some organs. In this study, we verified the treatment effects of hirudin on RIF in vivo and in vitro with the underlying mechanism. The RIF in vivo was the unilateral ureteral obstruction (UUO) model and RIF in vitro was the renal tubular epithelial cells induced by TGF-β. The renal pathological changes and renal fibrosis were observed by hematoxylin and eosin (H&E) staining and Masson staining. The α-SMA in renal tissues was detected by immunohistochemistry. The inflammatory factors were analyzed by the ELISA assay. The cell apoptosis was observed by TUNEL assay. The related proteins of fibrosis, epithelial-mesenchymal transition (EMT) and apoptosis were assessed by western blot analysis. The experimental data demonstrated that hirudin decreased fibrosis, EMT, inflammation and cell apoptosis in renal tissues of UUO rats and TGF-β-induced renal tubular epithelial cells. Furthermore, hirudin also reduced the expression of collgen-I, FN, α-SMA, N-cad, slug, E-cad, IL-1β, IL-6 and TNF-α in mice serum and TGF-β-induced renal tubular epithelial cells. The apoptosis related proteins (pro-caspase3, pro-caspase9, bcl2 and bax) expression was also down-regulated in renal tissues of UUO rats. In conclusion, hirudin depressed the fibrosis in renal tissues and renal tubular epithelial cells by inhibiting the inflammation, regulating the related proteins of fibrosis and ETM and decreasing the apoptosis of renal tubular epithelial cells. These findings may offer an effective treatment method for RIF.