变形链球菌、远缘链球菌耐氟菌株与亲代菌株基因组REA的比较分析

目的：利用限制性核酸内切酶(REA)技术，对变形链球菌、远缘链球菌及耐氟菌株的基因组进行比较，判定变形链球菌、远缘链球菌耐氟突变后，遗传型是否发生改变。方法：采用REA技术，经多次实验自行确立REA反应体系，对变形链球菌、远缘链球菌及耐氟菌株的基因组进行比较。结果：变形链球菌、远缘链球菌耐氟菌株的基因组已发生改变。结论：变形链球菌、远缘链球菌耐氟突变后，已具有自身的遗传特性。     

变形链球菌和远缘链球菌耐氟菌株超微结构观察

目的：探讨变形链球菌和远缘链球菌耐氟突变后，其超微结构变化及氟化物对细菌结构的影响。方法：将变形链球菌和远缘链球菌分为3组：A为正常对照组；B为加氟孵育组；C为耐氟菌株组。透射电镜观察3组细菌的超微结构。结果：与正常亲代菌株相比，加氟孵育后的菌株及耐氟菌株菌体出现不同程度超微结构改变，包括胞浆电子密度减低，细胞肿胀，内容物外溢，远缘链球菌链状结构消失等。结论：变形链球菌和远缘链球菌与氟共同孵育及耐氟突变后，其超微结构发生了改变，表现为自溶活动及解链活动增强。     

变形链球菌和远缘链球菌耐氟菌株粘附能力的体外研究

目的：探讨变形链球菌和远缘链球菌耐氟突变后,其粘附能力的改变。方法用同位素标记方法测定变形链球菌,远缘链球菌亲代及耐氟菌株粘附至唾液包被羟基磷灰石（ＳＨＡ）表面的粘附量及粘附百分率,并比较两者的粘附能力。结果变形链球菌、远缘链球菌亲人菌株与耐菌株间粘附百分率无明显差异（Ｐ〉０．０５）;远缘链球菌与变形链球菌相比,其粘附百分率偏低,差异有显著性（Ｐ〈０．０１）结论变形链球菌与远缘链球菌耐氟菌株粘附至     

变形链球菌和远缘链球菌耐氟菌株DNA G+C含量测定

目的　探讨变形链球菌和远缘链球菌耐氟菌株基因型是否发生改变。方法　采用高效液相色谱法测定变形链球菌和远缘链球菌及相应耐氟菌株DNA碱基含量,即DNAG＋C摩尔百分比(mol%)。结果　四株耐氟菌株DNAG＋Cmol%为54.45,44.86,54.41,55.39;相应亲代菌株G+Cmol%为35.8,37.4,43.35和46.62。两者明显不同,差值大于5％。结论　变形链球菌和远缘链球菌的耐氟菌株已发生基因型改变,且可能包括多个基因的突变。     

洗必泰对变形链球菌、远缘链球菌耐氟菌株与亲代菌株生长抑制的测定

目的：通过洗必泰对变形链球菌、远缘链球菌耐氟菌株与亲代菌株生长抑制的测定，探讨一种新的防龋途径。方法：将醋酸洗必泰液稀释成不同的浓度，分别加入变形链球菌、远缘链球菌及耐氟菌株菌悬液，测得最小抑菌浓度（MIC）、最小杀菌浓度（MBC）。结果：洗必泰对变形链球菌、远缘链球菌及耐氟菌株均有抑菌、杀菌作用，4种细菌最小抑菌浓度（MIC）均值为338μg/L，最小杀菌浓度（MBC）均值为375μg/L。结论：洗必泰可有效抑制变形链球菌、远缘链球菌及耐氟菌株生长。     

变形链球菌耐氟菌株中耐酸相关基因ffh突变的检测

目的检测变形链球菌耐氟菌株中耐酸相关基因ffh是否存在突变。方法体外诱导变形链球菌耐氟菌株,碱裂解法提取细菌基因组,根据GenBank上公布的变形链球菌耐酸相关基因ffh的序列,设计一对引物进行PCR,利用PGEM-TEasy载体进行T-A克隆,构建重组质粒,酶切电泳,并测序鉴定。结果变形链球菌耐氟菌株中耐酸相关基因ffh发生了突变。结论变形链球菌耐氟菌株中耐酸相关基因ffh发生了突变,并可能与其耐酸性增强有关。     

变形链球菌耐氟菌株脱矿能力的体外研究

目的：探讨变形链球菌耐氟突变后，其致釉质片脱矿能力的改变。方法：采用原子吸收分光光度计，测定不同氟浓度条件下变形链球菌耐氟菌株培养物上清液中钙离子浓度，并与亲代菌株进行比较。结果：耐氟菌株脱矿量在无氟化物存在时，小于亲代菌株；而当０．５ｍｍｏｌ／Ｌ氟离子存在情况下，其脱矿是大于亲代菌株。差异具显著性。结论：耐氟菌株的产生将增加变形链球菌的致龋力。     

变形链球菌耐氟菌株中耐酸相关基因dltC突变的检测及临床意义

目的 检测变形链球菌耐氟菌株中耐酸相关基因dltC是否发生突变,推测该基因对变形链球菌耐氟菌株的影响.方法 体外人工诱导变形链球菌耐氟菌株,根据GenBank发表的变形链球菌dltC基因序列设计引物,对其耐氟菌株基因组进行PCR扩增,对扩增产物用DNA回收试剂盒回收鉴定,对回收产物用PGEM-T载体进行T-A克隆,构建重组质粒并测序.结果 PCR扩增获得与预期结果一致的特异性片段,并发现dltC基因有1个碱基发生突变,突变位点在8310(A→G).提交该序列到GenBank,获得登陆序列号为DQ272518.结论 变形链球菌耐氟菌株耐酸相关基因dltC发生点突变并属于同义突变.     

变形链球菌耐氟菌株对葡萄糖摄取的体外研究

目的　探讨变形链球菌发生耐氟突变后摄取葡萄糖能力的变化。方法　采用逐步法诱导变形链球菌产生耐氟菌株 ,用葡萄糖氧化酶法测定不同PH值 ,有氟和无氟条件下变形链球菌耐氟菌株培养物上清液中葡萄糖减少量 ,并与亲代菌株进行比较。结果　在氟化物存在时 ,耐氟菌株糖摄取量大于亲代菌株 ;耐氟菌株和亲代株在有无氟化物条件下糖摄取量不同 ,差异有显著性 (P <0 .0 0 1)。结论　变形链球菌耐氟菌株具有致龋性 ;其致龋力大于亲代菌株。     

口腔微生物与免疫学

变形链球菌葡聚糖结合蛋白B基因防龋疫苗的构建及其在哺乳动物细胞中的表达，变形链球菌耐氟菌株、远缘链球菌耐氟菌株与亲代菌株基因组AP-PCR的比较，变形链球菌体外耐酸能力的实验研究，测定牙菌斑氟浓度的超微型F-ISFET电极的研制，变形链球菌变链素粗提物活性的初步研究     

变形链球菌耐氟菌株与亲代菌株质子移位膜ATP酶活性的比较

目的:通过测定并比较变形链球菌耐氟菌株及其亲代菌株体内质子移位膜ATP酶的活性,以阐明耐氟菌株耐酸能力提高的原因。方法:将变链菌株Ingbritt及其耐氟突变株Ingbritt-FR通过甲苯处理,2个循环的液氮冷冻和37℃解冻,制成透性细胞。将透性细胞悬液加到含有10mmol/LMgSO4的50mmol/LTris-maleate测试缓冲液中(pH6.0),加温至37℃,再加入5mmol/LATP(pH6.0)起动反应。分别于10、20、60min取样,测定样品中水解ATP所释出的无机磷量。采用磷钼酸比色法在紫外分光光度计上进行比色分析(660nm),所得数据采用双因素方差分析。结果:在10、20和60min时,耐氟菌株H+-ATP酶活性分别为308.48、136.67和82.80μmolPi/g细胞干重/min,显著高于亲代菌株的相应酶活性:104.77,、64.69和30.70(P<0.01)。随时间推移,两类菌株的H+-ATP酶活性均逐渐降低,在酶的作用时间差别上有统计学意义(P<0.01)。结论:耐氟菌株ATP酶活性增高为其耐酸性增高的原因;H+-ATP酶活性及耐酸性的增高将会增加变链菌耐氟菌株的致龋潜能。     

变异链球菌耐氟菌株的研究进展

氟化物作为防龋制剂,其广泛应用可能导致变异链球菌耐氟菌株的产生。为了解变异链球菌耐氟菌株致龋毒力的变化,学者们对其超微结构、黏附力、耐酸性、产酸性及脱矿能力等致龋相关特性进行了研究,并对耐氟菌株的致龋相关基因和其他分子生物学改变予以深入的研究和探讨。本文就此作一综述。     

高发龋和无龋儿童菌斑中变形链球菌及远缘链球菌的任意引物PCR检测

目的采用任意引物聚合酶链反应（arbitrarily primed-polymerase chain reaction，AP-PCR）法探讨高发龋和无龋儿童牙菌斑致龋菌的检出情况，分析变形链球菌及远缘链球菌与乳牙龋齿发生的关系。方法从20例高发龋患儿和20名无龋儿童的牙菌斑中分离、鉴定变形链球菌和远缘链球菌，以Shiroza的DNA提取方法提取细菌基因组DNA，以形态学、生化和AP-PCR的方法鉴定变形链球菌和远缘链球菌。结果AP-PCR法检测发现高发龋患儿变形链球菌和远缘链球菌的检出率分别为100％和40％，而无龋儿童两种细菌的检出率分别为75％和5％，差异有统计学意义。结论用AP-PCR法检测发现高发龋患儿变形链球菌和远缘链球菌的检出率均明显高于无龋儿童，口腔中定植的变形链球菌和远缘链球菌是乳牙龋高发的危险因素。     

远缘链球菌6715及其耐氟菌株适应性耐酸能力的比较研究

目的：探讨远缘链球菌6715（Streptococcus sobrinus 6715，以下简称S．6715）及其耐氟菌株的适应性耐酸能力。方法：在含有不同氟浓度的TSA上逐步诱导S．6715产生耐氟突变株（以下简称S．6715-FR）。通过测定在各种酸性pH值培养基中预酸化2h后，能否使S．6715及其耐氟突变株抵抗致死性pH杀伤而存活及存活率，来测定其适应性耐酸能力的有无及大小。结果：S．6715属强适应性耐酸能力类菌株，最大生存率9．98％出现在pH5．5预酸化组，其耐氟突变株S．6715-FR亦具有强适应性耐酸能力，最大生存率10．55％出现在pn值5．0预酸化组。结论：在亚致死性pH值中生长能引发远缘链球菌6715及其耐氟菌株的某些生理变化，产生适应性耐酸能力，抵抗酸性环境的杀伤。     

Penicillin-induced lysis in fluoride-resistant mutants of Streptococcus mutans

First- and second-step sodium fluoride-resistant mutants of Streptococcus mutans GS-5 were treated with penicillin under optimal lysis conditions to determine if their lytic responses differed from that of the parental strain. First-step mutants demonstrated lysis values ranging from 54 to 65%, similar to that of the parental strain (64%). Second-step mutants demonstrated much reduced levels of lysis ranging from 19 to 46%. Since the generation times of the fluoride-resistant mutants varied, analyses of variance were performed to determine if the observed levels of lysis correlated with the generation times. When the parental strain was grown under conditions resulting in different generation times, there was a statistical correlation between level of penicillin-induced lysis and generation time. However, no statistical correlation existed between level of lysis and generation time with the fluoride-resistant mutants. This may indicate that the reduced levels of penicillin-induced lysis seen in second-step mutants are associated with the fluoride resistance itself.     

随意引物PCR用于口腔链球菌基因分型的初步研究

目的：探讨口腔链球菌基因分型，比较细菌相互间基因差异。方法：设计２对１０碱基随意引物，提取变链球菌、血链球菌染色体ＤＮＡ，分别用一对引物进行ＰＣＲ扩增。结果：变链球菌、血链球菌扩增的ＤＮＡ基因片段有较大区别。设计不同序列引物，扩增的ＤＮＡ片段亦不同，可以分辨不同的基因位点。结论：随意引物ＰＣＲ检测方法稳定，可作为细菌基因分型较好的方法     

同一口腔中c血清型变形链球菌高、低毒力株的筛选

目的：由同一高龋者口腔中分离出c血清型变形链球菌高致龋毒力的菌株和低致龋毒力的菌株，为变形链球菌的比较基因组研究奠定基础。方法：从4个方面比较24株c血清型变形链球菌临床分离株对唾液包被羟基磷灰石的黏附能力、产酸和耐酸能力以及合成胞外多糖的能力。结果：筛选出位于同一口腔中的高、低毒力株。结论：同一口腔中存在着2株或2株以上致龋能力不同的c血清型变形链球菌。     

Mutacin production in Streptococcus mutans genotypes isolated from caries-affected and caries-free individuals

Relationships between genetic diversity and mutacin production in Streptococcus mutans were evaluated in 319 clinical isolates from eight caries-affected and eight caries-free individuals. The isolates were submitted to mutacin typing and AP-PCR (arbitrarily primed polymerase chain reaction) assay. The mutacin production was detected for 12 Streptococcus sp. indicator strains. Results showed significant variations in the mutacin production profiles and the inhibitory spectra of both groups. A possible association was seen between mutacin activity and the distinct patterns of Streptococcus sp. colonization in the two groups. Genotyping by AP-PCR using the primers OPA-02 and OPA-13 revealed 101 distinct genotypes against 48 phenotypes identified by mutacin typing. No correlation was observed between the inhibitory spectra of mutacin and genotypic similarities based on AP-PCR analyses. According to our results, strains of the same S. mutans genotype showed different mutacin profiles, suggesting a high degree of interstrain diversity. In conclusion, mutacin production seems to be of clinical importance in the colonization of S. mutans and is highly diversified in the S. mutans species.