结核病患者外周血中CD4~+ CD25~+调节性T细胞水平的检测

探讨CD4~+CD25~+调节性T细胞及其转录因子Foxp3在结核病发病机制中的作用。研究对象为肺结核患者22例(病例组)以及健康对照者23例(对照组)。采用FACS检测外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞的百分率,采用real-time PCR检测外周血单个核细胞Foxp3mRNA的表达以及CD4~+CD25~+调节性T细胞与CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、IFN-γ和IL-4的相关性。结核病患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞占CD4~+T细胞的百分率,病例组(3.38±1.23)%高于对照组(1.97±0.62)%,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。血清单个核细胞Foxp3 mRNA相对表达水平为134.54±6.76,高于对照组(40.98±2.34,P0.05)。CD4~+CD25~+调节性T细胞与CD4~+T细胞、CD8~+T细胞以及与IFN-γ和IL-4的表达呈负相关。结核病CD4~+CD25~+调节性T细胞数量增加、特异性转录因子Foxp3 mRNA表达上升,由此引发的免疫抑制效应可能是结核病发生发展的重要原因之一。     

SLE患者外周血中CD4~+CXCR5~+T细胞表达ICOS和PD1的相关性研究

本研究检测ICOS、PD-1在SLE患者外周血CD4+CXCR5+T细胞上的表达水平并分析其与SLE临床特征的相关性。采用流式细胞仪检测60例SLE患者及40例健康对照组外周血中CD4+CXCR5+T细胞占CD4+T细胞的比例,同时检测CD4+CXCR5+T细胞上ICOS、PD-1的表达水平,并分析其与SLE疾病活动指数(SLEDAI)、SLE肾脏损害及临床指标之间的相关性。结果显示,SLE患者外周血中CD4+ICOShighT细胞、CD4+ICOShighCXCR5+T细胞、CD4+PD1highCXCR5+T细胞比例显著高于健康对照组(P0.05);CD4+ICOShighCXCR5+T细胞比例与SLE患者的抗dsDNA抗体水平呈正相关(P0.05),与SLEDAI评分、免疫球蛋白、C3、C4、ESR、CRP无相关性(P均0.05);SLE患者血清IL-21水平较健康对照组显著升高(P0.05)。提示,循环外周血中生物标志分子高表达的CD4+CXCR5+T细胞异常,可能参与SLE的发病。     

人外周血CD4~+ IL-21~+记忆T细胞的特征

目的:探讨人外周血中白细胞介素21(IL-21)的产生细胞及其特征。方法:分离人外周血单个核细胞(PBMC),分为不刺激或anti-CD3(OKT3)、OKT3+anti-CD28、PMA+ionomycin刺激四个组,流式细胞术(FCM)检测产生IL-21的细胞亚群。PMA+ionomycin刺激PBMC、纯化CD4+、CD4+CD45RA-、CD4+CD45RA+细胞、脐带血单个核细胞(CB-MC),FCM分析产生IL-21细胞的表型特征和IL-21与Th1、Th2、Th17和Th22细胞因子之间的关系。结果:与OKT3、OKT3+anti-CD28相比,PMA+ionomycin能诱导最高量的IL-21产生。产生IL-21的主要细胞为CD4+T细胞,少数CD8+T细胞。CD4+IL-21+T细胞表达CD45RO,不表达CD45RA,其中部分细胞表达CCR6、CCR7或CXCR5。CD4+CD45RA-细胞表达IL-21远高于CD4+CD45RA+细胞。进一步研究表明,PBMC产生IL-21,而CBMC不产生。此外,大约24%的CD4+IL-21+细胞表达IFN-γ,小于10%CD4+IL-21+细胞表达IL-4、IL-17或IL-22。结论:人PBMC在多克隆刺激的条件下,可以诱导IL-21的产生。产生IL-21的主要细胞亚群具有记忆CD4+T细胞的表型。其中一部分CD4+IL-21+T细胞的表型独立于Th1、Th2、Th17和Th22细胞亚群。     

外周血CD4+CXCR5+滤泡辅助性T细胞与慢性乙型肝炎患者高球蛋白血症相关

目的 检测外周血CD4+ CXCR5+滤泡辅助性T细胞(Tfh细胞)的频率及其表面标志,分析与慢性乙型肝炎(乙肝)患者高球蛋白血症的关系.方法 收集健康人、乙肝患者及乙肝高球蛋白血症患者的外周血,分离血浆及外周血单个核细胞(PBMC),ELISA检测血浆中IL-21、CXCL13和IFN-γ水平,流式细胞术检测PBMC中CD4+ CXCR5+ Tfh细胞的频率及其表面PD-1、ICOS及CD40L的表达情况.结果 乙肝高球蛋白血症患者外周血CD4+ CXCR5+ Tfh细胞占CD4+T细胞的百分比(22.6±4.7)％明显高于普通慢性乙肝患者(11.9±3.9)％及健康志愿者(6.8±3.9)％,CD4+ CXCR5+ Tfh细胞上PD-1和CD40L的表达水平升高,血清IL-21及CXCL13水平升高,而IFN-γ水平降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 外周血CD4+ CX-CR5+ Tfh细胞与乙肝高球蛋白血症的发病相关.     

雷公藤对哮喘豚鼠外周血淋巴细胞IL—5,粒细胞—巨噬细胞 …

目的探讨哮喘豚鼠白介素-5(IL-5)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及CD4+和CD8+T细胞在哮喘发病中的作用及雷公藤的干预作用.方法实验分为哮喘组、雷公藤治疗组(处理组)和对照组,每组各10只豚鼠,采用原位杂交方法检测豚鼠外周血淋巴细胞的IL-5、GM-CSFmRNA表达;应用免疫细胞化学方法检测外周血淋巴细胞CD4+和CD8+的表达.结果哮喘组外周血淋巴细胞IL-5、GM-CSF-mRNA表达均明显高于处理组和对照组(P＜0.01),而处理组和对照组无显著差异.哮喘组外周血淋巴细胞CD4+表达明显高于对照组和处理组(P＜0.01),CD8+表达低于对照组和处理组(P＜0.05).结论哮喘豚鼠外周血淋巴细胞IL-5、GM-CSFmRNA表达增高、CD4+表达增高,CD8+表达降低,而雷公藤甲素可降低外周血淋巴细胞IL-5、GM-CSFmRNA表达,并可提高CD8+表达,降低CD4+表达.表明雷公藤可能在抗哮喘气道炎症中发挥一定作用.     

支气管哮喘患者外周血Th17、CD4~+CD25~+Treg细胞表达特征

目的:探讨外周血Th17和CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)在支气管哮喘患者中的表达特征。方法:41例慢性持续期哮喘患者,分为间歇-轻度组(n=23)和中重度组(n=18),行肺功能检查和哮喘控制问卷(ACQ)调查,20例正常人作为对照。通过流式细胞术检测外周血Th17和CD4+CD25+Treg细胞的比例。ELISA检测血浆以及植物血凝素刺激24小时后外周血单个核细胞(PBMC)上清液中的IL-17、IL-10、TGF-β水平。结果:中重度哮喘组外周血Th17细胞比例及血浆IL-17水平高于间歇-轻度哮喘和正常人组,而外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例及血浆IL-10、TGF-β水平则降低。中重度哮喘组PBMC上清液中IL-17水平增高。哮喘患者FEV1(%预计值)与Th17细胞及血浆IL-17表达成负相关,与CD4+CD25+Treg表达成正相关。ACQ平均得分与Th17细胞和血浆IL-17表达成正相关,与外周血CD4+CD25+Treg表达成负相关。结论:中重度哮喘中外周血Th17细胞应答增强,而CD4+CD25+Treg细胞缺乏,哮喘的严重程度及症状控制与外周血Th17/Treg免疫应答失衡密切相关。     

强直性脊柱炎患者Th17细胞与CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞的变化及意义

目的 探讨强直性脊柱炎( ankylosing spondylitis,AS)患者Th17和CD4+ CD25+ FoxP3+调节性T细胞比例及相关细胞因子水平的变化及意义.方法 强直性脊柱炎患者40例,正常同年龄对照37例.采用流式细胞术检测外周血Th17与调节性T细胞的比例,双抗体夹心酶联免疫吸附法( ELISA)检测血清IL-6、IL-23、IL-17和TGF-β水平.结果 AS组患者外周血Th17细胞比例明显高于对照组[(1.02±0.34)％vs(0.68:±0.29)％,P＜0.05],CD+ CD25+ FoxP3+细胞比例明显低于对照组[(3.77±0.81)％ vs (4.69±1.23)％,P＜0.05].AS患者血清中IL-6、IL-23、IL-17水平明显高于对照组[ (6.15±2.71) ng/L vs(3.31±1.65) ng/L; (9.44±3.12) ng/ml vs (5.82±2.61) ng/ml;( 10.53±4.97) ng/L vs (6.78±3、26) ng/L,P均＜0.01];差异有统计学意义.与对照组相比,AS组TGF-β水平有下降的趋势[(4,76±2.15) ng/ml vs(5.16±2.02) ng/ml,P＞0.05],但差异无统计学意义.AS患者血清各细胞因子含量与临床及实验室指标无相关性.结论 强直性脊柱炎患者Th17与CD4+CD35+FoxP3+调节性T细胞比例失衡,血清IL-6、IL-23、IL-17和TGF-β水平变化,这些原因可能参与强直性脊柱炎免疫发病过程.     

C57BL/6小鼠肺组织CD103~+T细胞的免疫学特性

为了研究正常C57BL/6小鼠肺脏组织中CD103~+T细胞的数量、表型和功能等免疫学特性,本研究选取C57BL/6小鼠肺脏组织,制备冰冻切片进行免疫荧光染色,可观察到小鼠肺脏组织中CD103的表达及其分布情况;制备单细胞悬液,使用FCM检测肺CD103~+T细胞的表型特征;用佛波酯(phorbol myristate acetate,PMA)和离子霉素刺激后,检测细胞因子IL-4、IFN-γ、IL-9的分泌情况。实验结果显示,小鼠肺脏组织中CD103主要在CD8~+T淋巴细胞中表达,比例高达(51.28±10.37)%。在CD8~+CD103~+T细胞中,CD62L的表达率为(79.63±2.87)%,明显高于CD103~-T细胞(47.83±9.55)%(P0.01);但是CD103~-T细胞比CD103~+T细胞表达更高水平的IFN-γ(P0.01)和IL-9(P0.05)。以上结果表明在C57BL/6小鼠肺脏组织中存在一群表型和功能独立的CD103~+T细胞。     

CD4~+CD25~(high) Foxp3~+调节性T细胞在新生儿脐血及成人外周血的比较

目的:检测新生儿脐血及成人外周血中CD4+CD25~(high) Foxp3+调节性T细胞(Treg)的比例,探讨Treg在新生儿脐血中的临床意义.方法:采用流式细胞术(FCM)检测30例新生儿脐血单个核细胞中CD4+T细胞、CD4+CD25+/CD4~+、CD4~+CD25~(high) /CD4~+T细胞百分比以及绝对计数,进一步分析CD4~+CD25~+及CD4~+CD25~(high) T细胞中Foxp3~+的百分比,以及利用RT-PCR方法检测Foxp3 mRNA表达水平,并与27例成人外周血单个核细胞(PBMC)中的上述指标进行比较.结果:与成人PBMC比较,新生儿脐血单个核细胞中CD4~+T细胞百分比及绝对计数均增高(P＜0.01＝;CD4~+CD25~+/CD4~+及CD4~+CD25~(high) /CD4~+百分比减低(P＜0.05＝,但绝对计数增高(P＜0.01＝;新生儿脐血CD4~+CD25~+ 及CD4~+CD25~(high) T细胞中Foxp3~+表达较成人外周血减低(P＜0.01＝;新生儿脐血Foxp3 mRNA表达水平亦较成人外周血减低(P＜0.05＝.结论:新生儿脐血中存在单纯且数量较多的CD4~+CD25~(high) 调节性T细胞,但Foxp3的表达水平低于成人外周血,它们可能具有独特的免疫调节作用,但功能尚未成熟.     

CD39分子在子痫前期患者外周血CD4+T细胞及脐静脉内皮细胞的表达及临床意义北大核心CSCD

目的：探讨CD39分子在子痫前期患者外周血CD4+T细胞、Treg、Foxp3-CD4+T细胞及脐静脉内皮细胞的表达及临床意义。方法：采集59例正常妊娠者、23例妊娠期高血压患者及65例子痫前患者(包括28例轻度子痫前期患者和37例重度子痫前期患者)外周血，流式细胞技术检测各组妊娠妇女外周血CD4+T细胞、Treg(Foxp3+CD4+T细胞)、Foxp3-CD4+T细胞比例及CD39分子表达率。随机获取胎儿分娩后的脐带(正常妊娠组18例、重度子痫前期组20例)，检测脐静脉血管内壁细胞CD31+CD39+内皮细胞群比例。结果：正常妊娠组、妊娠期高血压组、子痫前期组3组母体外周血CD4+T细胞比例[(33.71±9.80)%vs (29.59±14.22)%vs (29.63±11.11)%]及CD39表达率[2.84(0.89～5.51) vs 2.50(0.89～4.19) vs 1.39(0.79～3.51)]差异无统计学意义(P>0.05)。正常妊娠组Treg比例及CD39表达率明显高于子痫前期组[3.25(1.39～4.53) vs 1.63(1.01～2.58);33.90(22.80～59.40) vs 21.20(16.70～32.55),P<0.001]；正常妊娠组Foxp3-CD4+T细胞比例明显低于子痫前期组[94.40(93.00～96.10) vs 95.60(94.10～97.40),P=0.016]，但3组CD39表达率差异无统计学意义[1.80(0.55～4.49) vs 1.92(0.54～3.60) vs 0.92(0.49～3.24),P=0.340]。轻度子痫前期组与重度子痫前期组外周血CD4+T细胞[(32.35±10.51)%vs (27.56±11.24)%]、Treg[1.80(0.93～2.58) vs 1.44(1.03～2.58)]、Foxp3-CD4+T细胞[95.6(94.5～97.1) vs 95.6(94.0～97.6]比例差异无统计学意义(P>0.05)；轻度子痫前期组CD4+T细胞、Treg、Foxp3-CD4+T细胞CD39表达率均明显高于重度子痫前期组[2.08(1.20～5.05) vs 0.95(0.68～1.78);26.20(19.55～58.55) vs 17.60(13.90～23.15);2.14(0.78～3.69) vs 0.62(0.40～1.73),P<0.05]。重度子痫前期患者脐静脉血管内壁细胞CD31+CD39+内皮细胞群比例明显低于正常妊娠组[6.32(3.27～10.55) vs 18.95(9.90～27.48),P=0.020]。结论：母体外周血发挥免疫抑制功能的Treg数量及CD39分子表达减少可能参与子痫前期发生发展；重度子痫前期患者脐静脉血管内壁细胞CD31+CD39+内皮细胞群较正常妊娠者明显减少，可能与血管内皮损伤机制有关。     

中国经采供血HIV感染长期不进展者CD4~+T淋巴细胞趋化因子受体表达研究

目的:了解中国经采供血HIV感染长期不进展者CD4+T淋巴细胞趋化因子受体表达,分析其与疾病不进展的关系。方法:收集43例经采供血HIV感染长期不进展者、82例无症状HIV感染者、35例AIDS病人及40例健康对照的抗凝全血,用流式细胞仪检测趋化因子受体CCR5、CXCR4的表达,并分析其与病毒载量、CD4+T淋巴细胞绝对值及T淋巴细胞活化的相关性。结果:长期不进展组CD4+T细胞表面CCR5的表达明显低于无症状HIV感染组及AIDS组(P0.01),与健康对照无显著差异;CD4+T细胞表面CXCR4的表达各组无显著差异。CD4+T细胞表面CCR5的表达与CD4+T细胞数量显著负相关(r=-0.498,P0.05),与病毒载量无显著相关性。CD4+T细胞表面CCR5的表达与HLA、CD38在CD4+、CD8+T细胞的表达水平显著正相关(P0.001,CD38在CD4+T细胞的表达除外),CD4+T细胞表面CXCR4的表达与HLA在CD4、CD8+T细胞的表达水平显著负相关(P0.01)。结论:HIV感染长期不进展者CD4+T细胞趋化因子受体CCR5表达维持较低水平,与疾病不进展相关。     

哮喘急性发作期患儿外周血Th17水平及其功能初步研究

目的:观察哮喘急性发作期患儿外周血Th17水平和功能状态,初步探讨Th17在儿童哮喘发病中的作用.方法:以正常儿童(对照组,n=20)为对照,流式细胞术(FCM)检测哮喘急性发作期患儿(哮喘组,n=26)外周血Th17以及Th1,Th2细胞百分率,ELISA方法检测外周血单个核细胞(PBMC)体外培养上清IL-17,IFN-γ以及血浆IL-17,IL-23,IgE水平.结果:(1) 哮喘组和对照组外周血CD4+T中CD4+IL-17+T比例[(1.25±0.66)% vs (1.27±0.66)%(P>0.05)];CD4+IL-4+T比例[(2.40±2.55)% vs(2.52±1.26)%(P>0.05)];两组比较无统计学意义.哮喘组CD4+IFN-γ+T比例低于对照组[15.79±7.48 vs 24.10±12.70(P<0.05)].(2) PHA活化的PBMC体外培养72 h上清中,哮喘组IL-17水平为17.53(0～245.57)ng/L,低于对照组101.74(25.12～500.60)ng/L(P<0.01);IFN-γ水平与对照组比较无统计学意义[3507±2788 ng/L vs 3027±2737 ng/L];两组血浆中IL-17均<2 ng/L,IL-23均<15 ng/L.(3) 哮喘组血浆总IgE 499.26(2.3～945.1)IU/mL,高于对照组54.57(1.7～318.26)IU/mL(P<0.001);IgE阳性(>150 IU/mL)和阴性(<150 IU/mL)哮喘患儿体外PBMC培养上清中IL-17,IFN-γ水平比较无统计学意义.结论:哮喘急性发作期患儿外周血Th1细胞以及PHA活化的IL-17表达水平降低,Th1水平和Th17功能异常的机制及其在儿童哮喘发病中的作用值得进一步研究.     

哮喘患儿外周血CD3~+TCRvα24~+NKT细胞亚群分析

目的比较支气管哮喘急性发作期患儿和正常小儿外周血CD3+TCRvα24+NKT细胞频率;CD4+、CD8+、CD4-CD8-(DN)3个亚群比例;各亚群细胞胞内IL-4、IFN-γ水平及其表面活化分子CD69的表达情况。探讨NKT细胞在哮喘发作过程中的作用和机制。方法收集12例哮喘急性发作期患儿和10例健康小儿外周血,分离其中单个核细胞(PBMCs),对其表面分子CD3、TCRvα24、CD4、CD8、CD69及胞内分子IL-4、IFN-γ进行染色,流式细胞仪分析检测。结果哮喘患儿和健康小儿外周血CD3+TCRvα24+NKT细胞频率分别为0.42%、0.32%。哮喘组CD4+、CD8+、DN 3个亚群比例分别为:71.60%、14.90%、12.55%,正常对照组为:63.00%、13.12%、22.78%。哮喘患儿较正常小儿外周血CD4+NKT细胞比例上升,而DN NKT比例下降。3个亚群的NKT细胞均检测到了CD69、IL-4和IFN-γ的表达。总体而言,CD4+亚群和DN亚群胞内IL-4、IFN-γ水平较CD8+亚群高,DN NKT表面CD69表达高于其它2个亚群。但各亚群CD3+TCRvα24+NKT细胞CD69、IL-4和IFN-γ水平在哮喘组及正常对照组中未检测出明显差异。结论哮喘患儿急性发作期外周血CD3+TCRvα24+NKT细胞CD4+亚群频率上升,DN亚群频率下降。NKT细胞亚群比例的改变可能参与或介导了哮喘患儿急性期气道炎症反应。     

哮喘患者急性加重期滤泡辅助型T细胞的分化水平及临床意义

目的观察滤泡辅助型T细胞(Tfh细胞)在支气管哮喘患者急性发作期和治疗后的分化水平,探讨Tfh细胞是否在哮喘中存在分化异常及其临床意义。方法采用流式细胞术检测健康志愿者、哮喘患者急性发作期及治疗后外周血单个核细胞中CD4~~+CXCR5~~+T细胞、CD4~~+ICOS~+T细胞、CD4~~+CXCR5~~+ICOS~~+T细胞的比例;反转录PCR法检测CD4~+T细胞中Bcl-6mRNA的水平;ELISA检测血浆白细胞介素21(IL-21)的水平;采用直线回归统计学分析IL-21与患者第一秒用力呼气容积/用力肺活量百分比(FEV1/FVC)及第一秒用力呼气容积/预计值百分比(FEV1/Pre)之间的相关性。结果哮喘患者CD4~~+CXCR5~~+细胞、CD4~~+CXCR5~~+ICOS~~+T细胞比例、Bcl-6 mRNA表达水平、IL-21水平均显著高于正常对照组;治疗后哮喘患者CD4~~+CXCR5~~+细胞、CD4~~+ICOS~~+细胞、CD4~~+CXCR5~~+ICOS~~+T细胞表达比例、Bcl-6 mRNA表达水平、IL-21水平均显著低于急性发作时;哮喘患者IL-21表达水平与患者FEV1/FVC、FEV1/Pre存在负相关。结论 Tfh细胞在哮喘急性期存在分化增强,治疗后Tfh细胞分化减弱,提示Tfh细胞可能参与哮喘的炎症反应,其水平可能反映哮喘患者气道受限程度。     

过敏性哮喘患者外周血CD4+T细胞中miR-155的表达及临床意义

目的:探讨过敏性哮喘患者外周血CD4+T细胞中miR-155及其前体基因BIC的表达及临床意义.方法:应用实时荧光定量聚合酶链反应检测不同严重程度哮喘患者50例及健康对照20例外周血CD4+T细胞中BIC及miR-155的表达水平,并且与哮喘患者临床指标进行相关性分析;运用过表达或抑制,探讨miR-155在CD4+T细胞体外分化中的作用.结果:哮喘患者组BIC及miR-155的表达较对照组显著降低(P＜0.01),中、重度哮喘患者的BIC表达均低于对照组(P＜0.05),轻、中、重度哮喘患者的miR-155表达显著低于对照组(P＜0.01);组间比较发现,轻、中、重度哮喘患者的BIC表达无统计学意义,而重度哮喘患者miR-155的表达较轻度哮喘组有明显下降(P ＜0.05);miR-155的表达与用力呼气第1秒量之间呈正相关(P＜0.01);miR-155过表达促进CD4+T细胞向Th1分化,而抑制miR-155的表达则促进CD4+T细胞向Th2分化.结论:过敏性哮喘患者外周血CD4+T细胞中miR-155表达下调,其表达水平与哮喘严重程度相关,提示miR-155调控CD4+T细胞分化在哮喘中发挥重要作用.     

LSD1影响CD4~+T细胞Th1/Th2分化的机制研究

目的探讨LSD1的脱甲基酶活性对人外周血CD4+T细胞Th1/Th2分化格局的影响及其分子机制。方法 anti-CD3/28刺激活化人外周血CD4+T细胞48 h后,shLSD1和反苯环丙胺(TCP)抑制LSD1的表达,流式细胞术检测细胞内细胞因子IFN-γ、IL-4的表达情况;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和实时荧光定量PCR(RQ-PCR)检测不同浓度TCP对T细胞IFN-γ、IL-4、Tbet mRNA表达的影响;Western blot观察LSD1、T-bet、STAT1和pSTAT1蛋白表达情况。结果 shLSD1和TCP组细胞IFN-γ+T细胞比例[(26.13±1.89)%和(27.01±1.18)%]明显高于对照组[(14.67±0.65)%,(P0.05)],而IL-4+T细胞比例与对照组无显著变化(P0.05);RT-PCR检测显示,shLSD1和TCP组IFN-γmRNA表达明显高于对照组(P0.05),IL-4基因表达则没有改变(P0.05);转染shLSD1或TCP处理引起T-bet、pSTAT1表达明显高于对照组(P0.05),而STAT1表达无明显变化(P0.05)。结论下调LSD1表达可以促进人CD4+T细胞向Th1方向分化,对Th2方向细胞无影响。其分子机制涉及T-bet/STAT1信号通路。     

银耳多糖改善脓毒症小鼠调节性T 细胞的免疫活性

目的:探讨银耳多糖(TPS)对脓毒症小鼠外周血调节性T细胞免疫调节的作用。方法:雄性BALB/c小鼠(20±1)g,采用烧伤后腹腔注射铜绿假单胞菌制作脓毒症并予以TPS干预,随机分成5组,分别为正常对照组(未做任何处理),未刺激组(烧伤后铜绿假单胞菌感染未经TPS处理组),TPS低剂量组(烧伤后铜绿假单胞菌感染+50 mg/kg治疗组),TPS中剂量组(烧伤后铜绿假单胞菌感染+100 mg/kg治疗组),TPS高剂量组(烧伤后铜绿假单胞菌感染+200 mg/kg治疗组),从各组的外周血中分离调节性T细胞,并体外培养。自烧伤即刻(PBD0)起,至烧伤后4 d每天监测培养上清液中IL-10、IFN-γ、IL-4的水平。磁珠孵育和磁性分离小鼠外周血的调节性T细胞( CD4~+CD25~(high)Tregs)和CD4~+T细胞,分别加入TPS后进行培养,以不加TPS的细胞作为对照,流式细胞仪分析 CD4~+CD25~(high)Tregs的表型,ELISA法检测细胞因子的表达。结果:与对照组相比,TPS能显著降低未刺激组小鼠的IL-10和IL-4的分泌,并显著增加IFN-γ的分泌,并且IL-10的分泌水平与TPS浓度呈剂量效应关系。体外培养试验中,与正常对照组相比,未刺激组的CD4~+T细胞增殖和IFN-γ水平显著降低(P0.05),IL-4水平显著升高(P0.05);与未刺激组相比,TPS刺激组的CD4~+T细胞增殖和IFN-γ水平显著升高(P0.05),IL-4水平显著降低(P0.05);与未刺激组相比,TPS刺激+抗体1组CD4~+T细胞增殖和IFN-γ水平显著升高(P0.05),IL-4水平显著降低(P0.05);与未刺激组相比,TPS刺激+抗体2组的CD4~+T细胞增殖和IFN-γ、IL-4水平无显著性差异。结论:TPS可以通过降低IL-10的分泌抑制 CD4~+CD25~(high)Tregs对CD4~+T淋巴细胞增殖和极化的影响,并诱导CD4~+T淋巴细胞向Th1分型,从而使机体免疫活性增强。     

慢性HBV感染者CD4~+T细胞高表达CD95与活化相关

目的检测HBV感染者CD4~+T细胞CD95、CD38、HLA-DR的表达水平,探讨HBV感染者CD4~+T细胞免疫活化和免疫耗竭的意义。方法根据外周血HBV DNA水平将HBV感染者分为高病毒载量组(38例)与低病毒载量组(32例),并设健康对照组(16例);采用流式细胞术对HBV感染者外周血CD4~+T细胞CD95、CD38、HLA-DR的表达进行检测分析。结果与健康对照组比较,慢性HBV感染者CD4~+T细胞CD95、HLA-DR的表达显著升高(P0.05),CD95、CD38和HLA-DR两两共表达显著升高(P0.05);慢性HBV感染者CD4~+T细胞CD95水平与CD38负相关,与HLA-DR正相关(P0.01)。结论慢性HBV感染者CD4~+T细胞CD95表达上调;CD4~+T细胞耗竭的原因可能与活化诱导的细胞凋亡有关。     

CRTH2~+CD4~+T细胞在特应性皮炎儿童外周血中的表达和意义

探讨CRTH2~+CD4~+T细胞在特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)儿童外周血中的比例变化及意义。选取2015年6月至2015年10月间我院皮肤科门诊就诊的AD患儿22例和同龄正常对照组儿童30例,采用流式细胞术检测两组儿童外周血中CRTH2~+CD4~+T细胞的比例和该细胞分泌的IL-4、IFN-γ水平;采用粉尘螨刺激PBMC,利用CCK-8增殖试验结合流式细胞术检测两组CRTH2~+CD4~+T细胞的比例变化。结果显示,AD组儿童外周血中CRTH2~+CD4~+T细胞比例明显高于对照组(P0.05),且在AD组中这一比例大小与血清IgE浓度呈正相关(r=0.602,P0.05);CRTH2~+CD4~+T细胞主要分泌IL-4,基本不分泌IFN-γ;粉尘螨刺激后,PBMC中CRTH2~+CD4~+T细胞比例升高,并且AD组的刺激前后细胞比例差值明显高于对照组(P0.05),提示CRTH2~+CD4~+T细胞参与了儿童特应性皮炎的发病过程。     

支气管哮喘患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞变化及其尘螨过敏状态的测定

目的通过对支气管哮喘患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平变化和尘螨过敏状态的测定,探讨调节性T细胞在过敏性支气管哮喘发病中的作用。方法用流式细胞仪测定CD4+CD25+Tr占CD4+T细胞的比例,采用过敏原皮试点刺方法测定支气管哮喘患者的尘螨过敏状态。结果 25例正常对照组和支气管哮喘发作组患者外周血CD4+CD25+Tr水平分别为8.66%±1.61%和4.81%±2.76%,两组有显著差异(P<0.01)。14例粉尘螨或屋尘螨(+～++)阳性组和11例粉尘螨或屋尘螨(+++)及以上阳性组的CD4+CD25+Tr水平分别为6.45%±2.08%,和2.73%±2.03%,两组有显著差异。结论哮喘患者体内存在Tr细胞免疫功能平衡失调,CD4+CD25+Tr细胞处于低水平,CD4+CD25+Tr数量和抑制功能减弱或呈低反应性可能是导致支气管哮喘发病的原因之一。粉尘螨或屋尘螨重度过敏患者的外周血CD4+CD25+Tr水平明显低于轻度过敏者,提示CD4+CD25+Tr可能与支气管哮喘的过敏状态有关。