肾缺血再灌注损伤细胞凋亡的研究进展

临床工作中,在阻断肾脏血液供应的外科手术中（如肾脏部分切除术）和肾脏外伤中肾脏都会受到缺血再灌注（ischemic reperfusionIR）损伤,对术后。肾脏功能的恢复起到不良影响,缺血再灌注性损伤也是缺血性急性肾功能衰竭（ARF）的重要损伤环节,在肾移植中缺血再灌注性损伤也是不可避免的,缺血再灌注损伤不仅会引起单纯的移植肾功能延迟恢复（delayed graft function,DGF）,而且还能通过影响免疫机制促进急性排斥反应（acute reiection AR）的发生日;     

中药抗肾缺血再灌注损伤的研究进展

根据造成肾缺血再灌注的两个主要因素-活性氧氧化损伤和炎症级联反应,综述了近年来中药在防治肾缺血再灌注损伤方面的研究进展.灯盏花素、川芎、人参、地榆、开心散等主要是通过抗氧化的作用机制对肾缺血再灌注损伤起保护作用,而木芙蓉叶、虎杖、丹红注射液等主要是通过抑制炎症反应对肾缺血再灌注起保护作用.     

肝缺血再灌注损伤大鼠P-选择素的表达

目的 通过测定肝缺血-再灌注损伤（HIRI）模型大鼠中P-选择素在肝脏组织的表达,探讨HIRI的发病机制.方法 将32只健康雌性SD大鼠随机分为四组（每组8只）：假手术组（SO组）、缺血30 min组（Ⅰ组）、缺血30 min再灌注30 min组（IR 30 min组）、缺血30 min再灌注1 h组（IR 1 h组）.采用Pringle 法制作HIRI模型.采用SP试剂盒测定肝组织中P-选择素含量.结果 缺血30 min后,肝组织中P-选择素的表达较SO组无明显差异;再灌注1 h后,P-选择素在肝组织血管内皮、肝细胞内广泛表达,较SO组差异显著.结论 在大鼠肝缺血-再灌注过程中,肝组织中P-选择素的表达逐渐升高.     

大鼠肾冷缺血再灌注损伤对肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的探讨大鼠肾冷缺血再灌注损伤对肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法封闭群SD大鼠24随机分为对照组与实验组,每组12只。2组均切除右肾,实验组左肾实施冷缺血再灌注。2组大鼠均在术后24h再次手术切除左肾进行检测。透射电镜检查肾组织形态学,原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡。结果①超微结构检查（透射电镜）：对照组肾脏组织形态结构正常,实验组呈现损伤,部分细胞核可见凋亡迹象。②细胞凋亡检测：对照组偶见肾小管上皮细胞凋亡,实验组显著增多,细胞凋亡指数实验组均显著大于对照组（P〈0.05）。结论大鼠肾脏冷缺血再灌注后肾小管上皮细胞凋亡明显增加。     

缺血再灌注心肌细胞凋亡及药物干预

目的：研究葛根素和维拉帕米对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响。方法：对５６只成年Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠建立冠状动脉左前降支（ＬＡＤ）缺血再灌注模型,其中３２只大鼠在缺血胶及再灌注前给予维拉帕米和葛根素进行干预治疗,观察大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关基因Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ的表达情况以及维拉帕米和葛根素对其影响。采用末端标记法（ＴＵＮＥＬ）进行细胞凋亡检测;应用免疫组化的检测Ｂｃｌ－２、Ｂａｘ的表达。     

丹参对肾缺血再灌注损伤细胞色素C氧化酶活性的影响

目的：研究丹参对大鼠肾缺血再灌注损伤细胞色素C氧化酶活性的影响。方法：复制大鼠肾缺血再灌注损伤模型，用丹参保护，观察分组织病理变化；测定血清MDA、BUN、CREA、SOD含量和分组织SOD、MDA含量和COX活力。结果：IRI组舌组织COX活力最低，与CON组、DS组及RI组比较均有非常显著性差异(P＜0．01)；CON组、DS组及RI组之间无差异(P＞0．05)。结论；应用丹参后肾缺血再灌注损伤细胞色素C氧化酶活性增高，脂质过氧化反应残轻，对肾缺血再灌注操作有保护作用。     

人参皂甙对兔缺血再灌注肾NO含量及细胞凋亡的影响

目的：研究人参皂甙对兔肾缺血再灌注损伤的保护作用。方法：建立原位肾缺血再灌注损伤模型,分别测定正常组、缺血组、缺血再灌注组和不同剂量的人参皂甙组（15,30,60mg/kg)的下列指标：血清肌酐值、肾皮髓质病理改变和NO含量、流式细胞仪检测肾细胞周期、TUNEL法原位标记肾细胞凋亡并经Mias图象分析仪检测阳性目标数和积分光密度。结果：30mg/kg体重人参皂甙组血清肌酐值明显低于再灌注组;人参皂甙各组肾组织病理损害均轻于再灌组;正常组肾皮髓质NO含量比值为1．73,缺血组肾髓质NO含量明显升高,皮髓质NO含量比值下降至0．57,再灌注组皮髓质NO含量较快缺血组低,以髓质下降为明显,其皮髓质NO含量比值为0．94,人参皂甙组皮质NO含量均增高,髓质NO含量均下降,皮髓质NO含是比值上升,其中以30mg/kg组的比值（1．57）最接近正常值（1．73）;细胞凋亡参与缺血再灌注损伤,凋亡细胞主要集中在肾皮质区。30mg/kg和60mg/kg的人参皂甙可明显抑制肾皮质细胞凋亡。缺血再灌注组肾细胞群的主体在G0／G1期,部分样品可见亚二倍体峰（亚Go峰或Ap峰）,人参皂甙各组大多处在M期。结论：合适剂量（30mg/kg体重）的人参皂甙具有保护缺血再灌注肾功能、减轻肾组织病理损害、提高肾皮质NO含量与髓质NO含量的比值、抑制、肾皮质细胞凋亡等作用,未见明显的量效关系。     

内皮素与肾缺血再灌注损伤

内皮素(endothelin,ET)是1988年由日本学者Yanagisawa等从猪主动脉内皮细胞培养液中分离纯化出来的一种由21个氨基酸组成的具有强烈缩血管作用的血管活性肽,是调节心血管功能的重要因子,对维持基础血管张力与心血管系统稳态有重要作用.其中内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)是迄今为止发现的作用最强的缩血管物质[1].其引起的血管收缩、代谢紊乱和细胞增殖是与血管损伤有关疾病的共同致病因素.本文仅就近年来ET在肾缺血再灌注损伤(ischemic reperfusion injury,IRI)中的作用做一概述.     

热休克预处理对大鼠缺血再灌注损伤心肌P-选择素表达的影响

目的观察热休克预处理对大鼠缺血再灌注损伤心肌P-选择素(PS)表达的影响。方法成年雌性Wistar大鼠40，只，随机分为3组。热休克组予全麻后高热处理致肛温达42士O．5℃维持15min制成热休克动物模型，24小时后热休克组及对照组结扎左冠状动脉前降支(LAD)1小时，再灌注2小时制成心肌缺血再灌注损伤动物模型，假手术组只于LAD处穿线。术毕测血清CK-MB、心梗范围、热休克蛋白70(HSP70)、PS。结果热休克组HsP70表达高于对照组及假手术组(P＜O．05)，后两组比较差异无显著意义(P＞O．05)；热休克组心梗范围、血清CK-MB、PS表达皆少于对照组(P＜O．05)；HSP70的表达与Ps的表达成负相关(r=-O．560)。结论热休克预处理对心肌缺血再灌注损伤有保护作用；Ps参与了心肌缺血再灌注损伤；HSP70可能有抑制缺血再灌注损伤心肌Ps表达的作用，这或许是热休克预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的另一保护机制。     

缺血性脑卒中治疗时间窗的创新药物研究进展

缺血性脑卒中发作后,一定时间内可以通过治疗减轻脑损伤的程度、促进机能恢复、改善长期预后,这个允许的时间称为治疗时间窗。它与缺血半暗带的转归密切相关,PAF受体拮抗剂、以TXA2为靶点的药物及药物联合应用等可以延缓或逆转缺血半暗带损伤,有助于延长时间窗。本文综述了脑缺血半暗带的发病机制及近5年来抗缺血性脑卒中治疗时间窗的药物研究进展,以期为临床用药提供可靠的理论依据。     

参附注射液对大鼠小肠缺血-再灌注后肾损伤的影响

目的 观察参附注射液(SF)对大鼠小肠缺血-再灌注后肾结构、功能和肾组织中bcl-2、bax表达水平的影响. 方法将36只SD大鼠随机平分为假手术组 (C组),缺血-再灌注＋0.9%氯化钠溶液组(IR＋NS组),缺血-再灌注＋参附注射液预处理组(IR＋SF组),各12只. IR＋NS组和IR＋SF组夹闭大鼠肠系膜上动脉60 min后松开建立小肠缺血-再灌注模型,C组穿线但不结扎. C组和IR＋NS组分别于阻断前30 min用微量泵经股静脉恒速泵入0.9%氯化钠溶液10 mL•kg^-1,IR＋SF组同法泵入参附注射液10 mL•kg^-1. 光镜下观察肾组织结构,i-STAT自动分析仪检测血清尿素(Urea)及电解质含量,免疫组化方法检测肾组织中bcl-2、bax蛋白的表达,TUNEL法检测肾脏细胞的凋亡水平. 结果 光镜下可见IR＋NS组肾组织结构损伤较IR＋SF组严重. IR＋NS组血清Urea和 钾离子(K＋)水平分别为(15.88±1.38 )和(6.88±0.43)mmol•L^-1, C组分别为(5.82±0.39)和(4.28±0.24 ) mmol•L^-1,IR＋SF组分别为(8.03±0.77)和(5.03±0.31 )mmol•L^-1,IR＋NS组和IR＋SF组与C组比较,差异有统计学意义(P＜0.01),IR＋SF组较IR＋NS组显著降低(P＜0.01). IR＋NS组bcl-2和bax阳性细胞率分别为(0.242 5±0.036 5)%和(0.281 7±0.029 2)%,显著高于C组[分别为(0.013 7±0.008 6)%和(0.011 7± 0.009 4)%](P＜0.01), IR＋SF组分别为(0.176 3±0.030 2)%和(0.196 7±0.024 6)%,较IR＋NS组显著降低(P＜0.01). C组凋亡指数(apoptotic index,AI)为(0.014 2±0.009 0)%,IR＋NS组为(0.179 2±0.028 4)%,IR＋SF组为(0.124 2±0.026 4)%,IR＋NS组和IR＋SF组与C组比较,差异有统计学意义(P＜0.01),IR＋SF组较IR＋NS组显著降低(P＜0.01). 结论 参附注射液对小肠缺血-再灌注造成的肾损伤组织具有保护作用.     

黄芪注射液对大鼠肾缺血-再灌注损伤的影响

目的探讨黄芪注射液对大鼠肾缺血-再灌注损伤的影响。方法建立肾缺血-再灌注损伤大鼠模型,25只大鼠随机分为治疗组(n=10)和模型组(n=15)。另设假手术组(n=5)作为对照。治疗组于肾动脉夹闭时给予黄芪注射液4 mL.kg-1,静脉输入,开夹再灌注时又给予原药量的1/2;模型组同时给予等量0.9%氯化钠溶液静脉输入。另取仅作麻醉、开腹、不阻断肾血流的5只大鼠作为对照组。观察肾组织中P-选择素、ICAM-1的表达以及丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性变化,检测血清尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)的含量。结果缺血-再灌注后,模型组大鼠肾组织中P-选择素、细胞间粘附分子(ICAM-1)明显表达,MDA含量增高,SOD活性下降,BUN和Cr含量明显上升;治疗组经黄芪注射液处理后肾组织中P-选择素、ICAM-1表达受到抑制。相对模型组MDA含量降低,SOD活性增高,BUN和Cr含量降低。结论粘附分子P-选择素和ICAM-1参与肾缺血-再灌注损伤机制,黄芪注射液明显减少脂质过氧化反应,对肾缺血-再灌注损伤大鼠有保护作用。     

Standardization of in vitro Cell-based Model for Renal Ischemia and Reperfusion Injury

Renal ischemia reperfusion injury contributes patho-physiological imbalance of acute renal failure that comprises of generation of reactive oxygen species, nitric oxide and peroxynitrite and inflammation involving cytokine/adhesion molecule cascade, finally leads to cell death. Oxygen deprival associated with ischemia that in turn lead to decline ATP production is the characteristic feature usually addressed in the development of in vitro cell based ischemic model. In order to create oxygen deficit in the cell lines different approaches like chemical induction, enzymatic induction and anaerobic chamber models are widely used. However efficiencies of these models were varied and the present study was aimed to compare the suitability of these models in creating in vitro ischemia reperfusion in cell culture. In the chemical induced method we used different concentrations of rotenone, antimycin and sodium azide to inhibit electron transport chain and thereby reduced the ATP production, measured indirectly by cell viability assay. Among the chemical induced model, antimycin mediated cell injury was more reliable for ischemia reperfusion study. In the enzymatic model, comprises of glucose oxidase (3mM/s) and catalase (998 s^-1 at 10:1 ratio) was used and found to be best among the three approaches as it can create injury in short experimental time and are reproducible. However anaerobic chamber method was not suitable for ischemia reperfusion study as it need more time to induce significant cell injury.     

元芪胶囊对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用

目的:研究元芪胶囊对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用,并探讨其作用机制.方法:复制大鼠脑缺血再灌注模型,观察元芪胶囊不同剂量组对大鼠行为学、脑含水量、脑梗死面积、SOD、MDA及组织形态学变化的影响.结果:元芪胶囊可降低大鼠体征指数,减轻脑水肿,缩小脑梗死面积,改善脑组织病理形态学变化,提高SOD的活性,减少MDA的含量.结论:元芪胶囊高、中剂量组对脑缺血损伤具有明显的保护作用,其机制可能为改善自由基含量,抗脂质过氧化.     

尼莫地平对大鼠急性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的：观察尼莫地平（NIM）对大鼠急性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法：采用结扎大鼠双侧颈总动脉1h、再灌注24h模型，测各组大鼠脑组织亚细胞器丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、维生素E（Vit E)的含量。结果：脑缺血再灌注后脑组织亚细胞器MDA显著升高，SOD、Vit显著降低。NIM能显著改善这种情况。结论：NIM对急性脑缺血再灌注损伤有保护作用，其机制与降低脑亚细胞器MDA、升高SOD、Vit E有关。     

吸入给药的新进展

摘 要 目的：综述吸入给药系统最新研究进展和实践成果。方法: 根据国内外发表的文献和重要会议论文,对吸入给药的研究和应用进行综合与分析。结果: 阐明了吸入给药的优越性,并对吸入给药剂型装置的种类、优缺点、选择和使用方法以及吸入治疗的发展方向加以综述。结论:吸入给药系统具有广阔的应用前景。     

低温联合还原型谷胱甘肽对肝细胞缺血-再灌注损伤中bcl-2及bax的影响作用

目的观察低温联合还原型谷胱甘肽对缺血-再灌注诱导的L02肝细胞凋亡的影响,并探索相关分子机制。方法M1T11比色法检测低温联合还原型谷胱甘肽对细胞活力的影响;试剂盒检测低温联合还原型谷胱甘肽对细胞丙二醛（MDA）水平、乳酸脱氢酶（LDH）释放及超氧化物歧化酶（SOD）活力的影响;激光共聚焦显微镜检测细胞内活性氧簇（ROS）生成;Westernblot法检测低温联合还原型谷胱甘肽对bcl-2及bax蛋白表达水平的影响。结果低温联合还原型谷胱甘肽能明显抑制缺血-再灌注诱导的L02肝细胞活力降低（P〈0．05）;低温联合还原型谷胱甘肽处理细胞能明显抑制缺血-再灌注诱导的L｜02肝细胞MDA生成增加、LDH水平增高及SOD活力降低（P〈0．05）;低温联合还原型谷胱甘肽处理细胞能明显抑制缺血-再灌注诱导的L02肝细胞内bcl-2蛋白表达水平降低及bax蛋白表达水平增高（P〈0．05）。结论低温联合还原型谷胱甘肽可能通过上调bcl-2的表达及下调bax的表达抑制缺血-再灌注诱导的L02肝细胞凋亡发生。     

当归补血颗粒对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护机制研究

目的 研究当归补血颗粒对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用,探究可能的保护机制。方法 采用无创动脉夹阻断肾蒂血管构建大鼠肾缺血再灌注损伤模型,肾微透析技术结合HPLC测定腺苷及其代谢产物含量;免疫组化法测定肾组织Bax、Bcl-2、iNOS蛋白表达。结果 假手术组腺苷、次黄嘌呤和肌苷的含量分别为（0.57±0.11）,（3.14±0.20）,（0.16±0.03）μmol·L^-1,保持稳定并作为各实验组基准值,肾缺血再灌注损伤后90 min,模型组升高至（8.61±0.62）,（10.92±1.14）,（0.85±0.05）μmol·L^-1,而当归补血颗粒组升高至（6.91±0.67）,（6.04±0.67）,（0.61±0.13）μmol·L^-1,明显低于模型组（P〈0.05）。免疫组化显示,与假手术组比较,肾缺血再灌注损伤后各组大鼠肾组织细胞中Bcl-2、Bax、iNOS蛋白表达显著增强（P〈0.01）。再灌注后,当归补血颗粒组与模型组同时间点比较Bcl-2蛋白表达明显增强（P〈0.05）,而Bax和iNOS蛋白表达明显减弱（P〈0.05）。结论 当归补血颗粒对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护机制可能与抑制ATP降解,上调Bcl-2基因表达,下调Bax、iNOS基因表达有关。