一种改良的组织DNA酚抽提法

随着对疾病认识的不断深入 ,人们发现许多疾病在病因上都有着其独特的遗传背景 ,对这些遗传信息的掌握无疑会对疾病的诊断和防治大有裨益 ,其中获得某个个体的基因组ＤＮＡ是进行基础研究及临床检测的先决条件。本室曾报告过适于基因检测用的血细胞ＤＮＡ处理和提取方法 ［１］,本文则对于活检或手术中采集的实质性组织样品的基因组ＤＮＡ的提取进行了研究。通过对以往方法的改进 ,力图使从组织中提取ＤＮＡ的方法变得更为快捷。１材料与方法１．１材料以大鼠组织为材料进行ＤＮＡ提取 ,为了证明所提取ＤＮＡ在临床检测上的有效性和适用性 ,…     

日本血吸虫基因组DNA的提纯与鉴定

本研究采用酚─氯仿法提纯了日本血吸虫基因组ＤＮＡ，并对基因组ＤＮＡ进行了定量分析及微电泳鉴定。结果表明，１００ｍｇ日本血吸虫成虫（湿重）可提纯出约８０μｇ的ＤＮＡ，其基因组ＤＮＡ的大小＞３１Ｋｂ。该法提取的血吸虫基因组ＤＮＡ较纯，适合于以后进行ＤＮＡ限制性核酸内切酶谱分析和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析。     

丝状真菌高分子量DNA的提取研究

为寻求一种简便高效的提取真菌基因组ＤＮＡ的方法，采用经改良的液氮研磨饱和酚抽提法及高盐沉淀法，从液体培养的鸡土从菌菌丝体中提取了高分子量的基因组ＤＮＡ。用紫外吸收光谱、限制酶切、ＲＡＰＤ—ＰＣＲ反应及琼脂糖凝胶电泳等方法进行了鉴定。结果显示，两种方法均可以获得分子量大、样品较纯的基因组ＤＮＡ，用限制酶均能有效地消化，并可有效地用于ＰＣＲ扩增。其中高盐沉淀法提取的ＤＮＡ产量高（每克菌丝体可获ＤＮＡ０．８３ｍｇ），方法简便，对人体无毒害，是较理想的提取真菌ＤＮＡ的方法     

SO—Rb50人视网膜母细胞瘤株抗癌基因及癌基因的检测

以ＳＯ－Ｒｂ５０第３２７代细胞，提取其基因组ＤＮＡ，以正常人血细胞为对照，检测其Ｒｂ抗癌基因和ｃ－ｃｙｃ癌基。结果表明，该细胞株Ｒｂ基因完全缺失，ｃ－ｍｙｃ原癌基因扩增３倍。此为以该株在体外进一步研究肿瘤生长和逆转提供依据。     

丝誊具菌高分子量DNA的提取研究

为寻求一种简便高效的提取真菌基因组ＤＮＡ的方法，采用经改良的液氮研磨饱和酚抽提法及高盐沉淀法，从液体培养的鸡从菌菌丝本中提取了高分子量的基因组ＤＮＡ。用紫外吸收光谱、限制酶切、ＲＡＰＤ－ＰＣＲ反应及琼脂糖凝胶电脉等方法进行了鉴定。结果显示，两种方法匀可以获得分子量大、样品较纯的基因组ＤＮＡ，用限制酶均能有效地消化，并可有效地用于ＰＣＲ扩增。其中高盐沉淀法提取的ＤＮＡ产量高（每克菌丝体可获ＤＮＡ０．     

高质量人体基因组DNA的提取

高质量人体基因组ＤＮＡ的提取周建中＊王申五（北京医科大学血研所，北京１０００４４）关键词脱氧核糖核酸；基因组；人类使用质量不高的ＤＮＡ进行ＰＣＲ以扩增目的基因片段较易成功；相反，用Ｓｏｕｔｈ－ｅｒｎ杂交检测单拷贝基因有否重排时，要求提取高质量的ＤＮＡ...     

从血细胞快速抽提DNA的方法探讨

在提取白细胞ＤＮＡ经典方法的基础上，改进从血细胞快速抽提ＤＮＡ的方法．应用２０％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００为溶血剂，以酚／氯仿／异戊醇混合液为抽提剂，能从３ｍＬ的全血中提取６０～９０μｇ的优质ＤＮＡ，具有快速、经济、在常温下操作等优点     

一种实用的基因组DNA提取方法及其应用

一种实用的基因组ＤＮＡ提取方法及其应用林长坤姜莉张励金春莲孙开来（基础医学院医学遗传学教研室，沈阳１１０００１）关键词氯化钠饱和溶液；基因组ＤＮＡ；多聚酶链式反应；杜氏肌营养不良随着聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术的创建，已建立多种方法来制备ＰＣＲ模板ＤＮ...     

人外周血细胞线粒体DNA中存在特大片段缺失突变

了解线粒体ＤＮＡ大片段缺失突变及其意义。方法采用６种方法提取人外周血细胞ＤＮＡ,,其中１种方法先分离线粒体,再抽提线粒体ＤＮＡ。以得到的人外周血细胞ＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ扩增,其产生经琼脂糖凝胶回收后与ｐＧＥＭ－Ｔ载体连接、转化、测序。结果６种方法抽提ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增后,产物电泳行为相同,发现人血细胞线粒体ＤＮＡ存在１３１６２ｂｐ特大片段缺失突变。结论此缺失首首发现的,经测序证明为人线粒体ＤＮ     

白血病细胞MtDNA RFLP分析与D—环片段的制备

从正常人胎盘组织和白血病外周血细胞分别提取线粒体ＤＮＡ，选用ＢａｍＨＩ／Ｓｐｈ Ｉ双酶切线粒体ＤＮＡ，琼脂糖凝胶电泳分离，分析酶切产物，以λ－ＤＮＡＨｉｎｄⅢ为标准分子量对照。ＲＦＬＰ结果表明，白血病人外因线粒体ＤＮＡ的酶切产物为３个片段，而正常人胎盘组织线粒体ＤＮＡ的酶切产物为两个片段，提示白血病人的线粒体ＤＮＡ发生了结构改变，同时用低熔点琼脂糖凝胶回收含Ｄ－环的线粒体ＤＮＡ片段，本实验为研究白     

一种简便的哺乳动物细胞中基因组DNA提取方法

基因组ＤＮＡ提取实验是分子生物学教学中一个最基本的实验。为了能让学生,特别是研究生在短暂的课堂上掌握ＤＮＡ提取的全过程,并力求获得高质量的ＤＮＡ,我们摸索了一个适合课堂教学、简便快速的提取哺乳动物ＤＮＡ的方法。该方法是利用在ＥＤＴＡ及ＳＤＳ一类去污剂...     

应用PCR技术进行染色体显性遗传多囊肾病家系的基因诊断

用ＰＣＲ方法对中国的常染色体显性遗传多囊肾病家系进行基因诊断。方法：提取基因组ＤＮＡ，ＰＣＲ方法扩增与ＰＫＤ１位点连锁的高多态性的微小卫星体ＤＮＡ为遗传标记。进行家系分析。     

两种家鼠蚤DNA提取方法的探讨及酶切分析初步研究

两种家鼠蚤ＤＮＡ提取方法的探讨及酶切分析初步研究研究生：陈景龙专业：寄生虫学导师：王敦清教授采用常规的苯酚、氯仿抽提ＤＮＡ的技术与方法，利用实验室生化培养箱繁殖的家鼠２种寄生蚤为材料，进行抽提和制备蚤类基因组ＤＮＡ简明流程如下：成蚤鉴定、称重、洗涤、...     

肥厚型心肌病患者心肌线粒体DNA的大片段缺失

目的：研究肥厚型心肌病与线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）缺失的关系。方法：应用ＬｏｎｇＰＣＲ技术扩增１例肥厚型心肌病（ＨＣＭ）患者心肌标本和血细胞ｍｔＤＮＡ。结果：在心肌ｍｔＤＮＡ中发现至少５ｋｂ缺失，而血细胞中未见缺失。结论：这支持ｍｔＤＮＡ缺失是心肌病的一个重要病因，且具有组织差异性。     

中国人神经生长因子基因（β—NGF）的扩增,克隆及序列分析

从正常人血白细胞中提取基因组ＤＮＡ，以此基因组ＤＮＡ为模板，应用ＰＣＲ方法扩增神经生长因子基因，把得到的基因片段重组到质粒ｐＵＣ１２上，经转化、筛选和鉴定得到含有中国人神经生长因子基因（β－ＮＧＦ）的克隆。用双链末端终止法测定其全部３５４ｂｐ核苷酸顺序。测出的核苷酸与文献报道的顺序有６处不同，据此推导出的氨基酸顺序有３处变化。推测中国人神经生长因子基因具有特殊性。     

小小卫星DNA阳性克隆的鉴定及DNA指纹分析

提取四种近交系小鼠的肝脏ＤＮＡ，分别用ＨｉｎｆＩ和Ｈａｅ　Ⅲ酶切。用３３．１５和本课题组克隆的小鼠小卫星阳性克隆ＤＮＡ片断作探针，用［α－３２Ｐ］ｄＣＴＰ随机引物标记，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，获得了理想的小鼠ＤＮＡ指纹图谱。初步确定阳性克隆ＤＮＡ片断Ｖ２具有较好的多态性，可作为小鼠基因组小卫星探针，用于实验动物的遗传监测、基因连锁分析和小鼠遗传图谱的研究。     

人基因组DNA片段对胚胎小鼠脊髓培养神经元的影响

目的：研究人基因组ＤＮＡ对培养的小鼠脊髓神经元活性及突起生长的影响．方法：用酚－氯仿抽提法从人胚脑中提取人基因组ＤＮＡ片段,用此ＤＮＡ片段加至体外培养的胚胎小鼠脊髓神经元培养液中,培养３ｄ后作ＭＴＴ实验,ＮＳＥ染色,图像分析神经元突起的长度．结果：实验组的神经元突起长度明显长于对照组而活性与对照组无明显差异．结论：提示人基因组ＤＮＡ或其某些片段可促进神经元突起的生长而对神经元活性无影响     

中国人神经生长因子基因（β－NGF）的扩增、克隆及序列分析

从正常人血白细胞中提取基因组ＤＮＡ，以此基因组ＤＮＡ为模板，应用ＰＣＲ方法扩增神经生长因子基因，把得到的基因片段重组到质粒ｐＵＣ１２上，经转化、筛选和鉴定得到含有中国人神经生长因子基因（β－ＮＧＦ）的克隆。用双链末端终止法测定其全部３５４ｂｐ核苷酸顺序。测出的核苷酸顺序与文献报道的顺序有６处不同，据此推导出的氨基酸顺序有３处变化。推测中国人神经生长因子基因具有特殊性。     

PCR扩增孕妇外周血DNA进行胎儿性别诊断

从７名孕妇（妊娠８～２４周）的外周血细胞中制备基因组ＤＮＡ，通过聚合酶链反应，扩增睾丸决定因子基因（ＳＲＹ基因），进行胎儿的产前性别诊断研究。男性胎儿，可扩增出ＳＲＹ基因特异的３３６ｂｐ片段；女性胎儿，无此片段。此方法操作简便、灵敏度高、特异性强，可用于性连锁遗传病的产前性别诊断。     

一例β－地中海贫血基因的分子克隆及其突变位点的检测

以一例重症β＋地中海贫血患儿的脾ＤＮＡ组建了λ噬菌体Ｃｈａｒｏｎ２８基因文库。经β－珠蛋白基因组探针筛选出阳性克隆珠，提取其重组体ＤＮＡ，取其ＢａｍＨＩ／１．８ｋｂ片段，次级克隆至Ｍ１３ｍＰ１８。制备的单链Ｍ１３ｍｐ１８重组体ＤＮＡ经正常与异常的寡核苷酸探针杂交证明该患儿的β地中海贫血基因为β－珠蛋白基因的—２８Ａ→Ｇ突变体。