细胞外信号调节激酶在多囊卵巢综合征患者子宫内膜中的活化及意义

目的 通过测定子宫内膜中胰岛素的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路中ERK1/2(表示ERK1和ERK2,下同)的表达及其活化程度,探讨其在多囊卵巢综合征(PCOS)子宫内膜增生及癌变形成中的作用及意义,以及影响其表达及活化程度的因素.方法 选择2007年1月-2008年6月天津医科大学总医院行诊断性刮宫的PCOS患者52例(PCOS组),相匹配的非PCOS患者(良性卵巢肿瘤)32例为对照组.测定所有观察对象的空腹血糖及胰岛素水平;所有观察对象均行子宫内膜病理检查,按子宫内膜病理结果将PCOS组患者分为子宫内膜增生及癌变组(19例)和正常子宫内膜组(33例);根据是否存在胰岛素抵抗将PCOS组患者分为胰岛素抵抗组(38例)和非胰岛素抵抗组(14例).蛋白印迹法(western blot)检测子宫内膜中ERK1/2及其活化形式--磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白的表达水平.结果 (1)PCOS组患者子宫内膜中p-ERK1/2蛋白的表达水平[(61±13)%]高于对照组[(44±10)%],两组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).(2)子宫内膜增生及癌变组子宫内膜中p-ERK1/2蛋白的表达水平[(70±11)%]高于正常子宫内膜组[(55±10)%],两组比较,差异有统计学意义(P＜0.01);胰岛素抵抗组子宫内膜中p-ERK1/2蛋白的表达水平[(63±13)%]高于非胰岛素抵抗组[(55±7)%],两组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).(3)空腹胰岛素水平、胰岛素曲线下面积、体质指数与PCOS组患者子宫内膜中p-ERK蛋白的表达水平相关,相关系数分别为0.447、0.456、0.381(P均＜0.01).结论 PCOS患者子宫内膜存在MAPK/ERK信号通路的过度活化,与子宫内膜增生及癌变的发生有关;胰岛素抵抗及高胰岛素血症有促进ERK活化的作用.     

P38蛋白激酶抑制剂SB203580对多囊卵巢综合征卵巢颗粒细胞PI3K通路的影响

目的:通过研究P38蛋白激酶抑制剂SB203580对多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞PI3K通路的影响,探讨PCOS胰岛素抵抗发生的受体后机制。方法:收集在我院行体外受精/卵细胞内单精子注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)助孕并伴有PCOS不孕患者的卵泡黄素化颗粒细胞进行体外培养(n=10),将每份细胞样本分种于两个培养瓶,一份采用P38丝裂原活化的蛋白激酶信号转导通道(MAPK)抑制剂SB203580处理(PCOS+IN组),一份未加抑制剂(PCOS组)。另收集行IVF/ICSI-ET助孕的非PCOS患者的卵泡黄素化颗粒细胞作为对照组(N-PCOS组,n=10)。Western blot法检测各组颗粒细胞中p-P38MAPK、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)/Akt以及葡萄糖转运蛋白-4(GLUT-4)表达。结果:PCOS组的p-P38MAPK蛋白表达显著高于N-PCOS组,p-Akt/Akt、GLUT-4蛋白表达量较N-PCOS组显著降低(P0.05);SB203580处理后p-P38MAPK蛋白表达明显降低;p-Akt/Akt、GLUT-4蛋白表达量仍较N-PCOS组低,但较SB203580未处理组表达量高(P0.05)。结论:PCOS患者的卵巢颗粒细胞中P38/MAPK通路活性升高,磷脂酰肌醇-3激酶途径/Akt(PI3K/Akt)途径活性降低;卵巢颗粒细胞中P38/MAPK途径与PI3K/Akt途径存在相互联系,P38/MAPK通路阻滞剂SB203580可能通过阻断P38MAPK途径的表达,从而提高卵巢颗粒细胞PI3K/Akt通路的活性,提高GLUT-4表达。     

IGF—I和Bcl-2蛋白在多囊卵巢综合征胰岛素抵抗患者子宫内膜中的表达

目的通过对子宫内膜中胰岛素样生长因子-I（insulin—like growth factor—I,IGF—I）和Bcl-2基因蛋白表达的研究,探讨多囊卵巢综合征（PCOS）患者胰岛素抵抗对子宫内膜增生的作用机制。方法采用免疫组织化学ABC法检测92例PCOS胰岛素抵抗患者子宫内膜中IGF-1及Bcl-2的表达。结果PCOS体胰岛素抵抗患者子宫内膜中IGF-I表达量（203．54±18．29）较非胰岛素抵抗组的表达量（187．22±15．46）明显升高,差异有统计学意义（P〈O．001）;胰岛素抵抗组Bcl-2的表达量（200．94±15．43）与非胰岛素抵抗组（188．69±18．72）比较,差异有统计学意义（P〈O．01）;IGF—I与Bcl-2在子宫内膜中的表达呈正相关关系（r=0．42,P〈0．001）。结论PCOS胰岛素抵抗患者子宫内膜增生的发病可能与IGF—I及Bcl-2蛋白的表达有关。     

色素上皮衍生因子通过抑制PI3K/Akt通路降低宫颈癌HeLa细胞活性和侵袭相关蛋白表达

目的：探讨色素上皮衍生因子（PEDF）通过抑制磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路,从而下调人宫颈癌HeLa细胞的活性和侵袭相关蛋白c-Met表达的相关机制。方法：选取本院病理已确诊的40例宫颈癌样本及对应的40例癌旁正常组织样本,通过免疫组织化学法检测PEDF、PI3K和p-Akt蛋白的表达。在细胞水平分为正常宫颈上皮细胞HCerEpiC组、HeLa组、HeLa+PEDF组、HeLa+PEDF+PI3K/Akt激活剂组和HeLa+PI3K/Akt抑制剂组。通过蛋白质印迹（Western blotting）检测各组细胞内PEDF、PI3K、p-Akt、Akt及c-Met蛋白的表达水平,CCK-8法检测各组细胞的活性。结果：宫颈癌样本和HeLa细胞中的PI3K/Akt通路显著激活,且PEDF表达显著下降（P＜0.01）。PEDF可以显著抑制HeLa细胞中PI3K/Akt激活和细胞活性以及侵袭相关蛋白水平的增加（P＜0.01）。Akt激活剂可以逆转PEDF对HeLa细胞活性和侵袭蛋白表达的影响,而激活PI3K无法改变PEDF的作用。单纯的药物抑制PI3K/Akt通路不足以模拟PEDF对HeLa细胞的作用。结论：PEDF通过PI3K/Akt双重抑制作用降低HeLa细胞活性和侵袭相关蛋白表达,这为临床上PEDF治疗宫颈癌提供了新的思路和理论依据。     

PCOS患者外周血miR-21与PI3K/AKT通路的关系及其临床意义#br#

目的研究多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者外周血微小RNA-21(micro RNA-21,miR-21)与PI3K/AKT通路的关系及其临床意义。方法选择2018年6月至2020年12月在上海市浦东新区人民医院就诊的156例PCOS患者作为研究对象。按是否存在胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)分为86例IR PCOS组及70例非IR PCOS组。另取同期在本院体检的70例健康女性作为对照组。检测所有受试者空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、空腹胰岛素(fasting insulin,FINS)及胰岛素抵抗指数(HOMA insulin resistance index,HOMA-IR)、荧光定量PCR检测外周血miR-21 mRNA、PI3K mRNA、AKT mRNA表达水平,Western blot检测内膜组织的p-PI3K、p-AKT表达及miR-21下游靶基因的预测。结果与对照组比,非IR PCOS组和IR PCOS组外周血的mi R-21m RNA、PI3Km RNA、AKTm RNA、HOMA-IR、FBG及FINS,内膜p-PI3K、p-AKT表达均明显增高(P<0.05),与非IR PCOS组比,IR PCOS组外周血的mi R-21m RNA、PI3Km RNA、AKTm RNA、HOMA-IR、FBG及FINS,内膜p-PI3K、p-AKT表达均明显增高(P<0.05)。外周血mi R-21m RNA与HOMA-IR呈正相关关系(r=0.646,P<0.05),外周血PI3K mRNA、AKT mRNA、子宫内膜p-PI3K、p-AKT与HOMA-IR呈负相关关系(r=-0.546、-0.567、-0.578、-0.643,均P<0.05)。根据Targetscan检索,miR-21的靶基因为PI3K/AKT通路基因。结论PCOS患者miR-21表达增加可过度激活PI3K/AKT通路,导致IR。     

BiP、CHOP和p-JNK在多囊卵巢综合征患者血白细胞中的表达

目的:探讨内质网应激(ERS)标志性蛋白中免疫球蛋白结合蛋白(BiP)、C/EBP同源蛋白(CHOP)及磷酸化-氨基末端激酶(p-JNK)在多囊卵巢综合征(PCOS)患者血白细胞中的表达。方法:选择PCOS不孕就诊的患者44例(PCOS组)和因男方因素或输卵管因素不孕就诊的患者50例(对照组)为研究对象。PCOS组根据胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)分为胰岛素抵抗组(22例)与非胰岛素抵抗组(22例)。应用RT-PCR和Western Blotting方法检测患者血白细胞中BiP、CHOP、JNK、磷酸化-氨基末端激酶(p-JNK)的表达水平。结果:PCOS组BiP mRNA水平(1.67±1.02)及蛋白水平(0.76±0.12)均明显高于对照组(分别为1.04±0.54、0.65±0.09),差异有统计学意义(P0.05)。PCOS组CHOP mRNA水平(0.79±0.49)及蛋白水平(0.75±0.30)均较对照组(分别为0.63±0.47、0.71±0.25)有增高趋势,但差异无统计学意义(P0.05)。PCOS组JNK蛋白水平与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。PCOS组p-JNK蛋白水平(0.87±0.17)明显高于对照组(0.71±0.09),差异有统计学意义(P0.05)。PCOS患者中胰岛素抵抗组和非胰岛素抵抗组的BiP、CHOP mRNA水平及蛋白水平比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论:PCOS患者血白细胞中ERS标志性蛋白BiP、p-JNK的表达异常,提示ERS可能通过活化JNK信号通路参与PCOS的发病。     

GOLPH3通过PI3K/Akt信号通路调控上皮性卵巢癌细胞增殖与凋亡的研究

目的:探讨GOLPH3基因对上皮性卵巢癌细胞增殖及凋亡的影响及作用机制。方法:siRNA干扰技术沉默SKOV3细胞株中GOLPH3基因表达,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测PI3K/Akt信号通路相关基因Akt、p-Akt 473、p-Akt 308及Bcl-2表达。PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002处理卵巢癌SKOV3细胞后,检测SKOV3细胞的增殖能力及凋亡情况。结果:siRNA干扰SKOV3细胞株中GOLPH3基因,GOLPH3表达下调,细胞增殖减少,凋亡增多;PI3K/Akt信号通路相关基因p-Akt 473、p-Akt 308、抗凋亡基因Bcl-2蛋白表达水平均下降,Akt蛋白水平表达无显著变化。LY294002处理SKOV3细胞后,细胞增殖率降低,凋亡率升高。结论:GOLPH3基因可能通过激活PI3K/Akt信号通路促进卵巢癌细胞增殖,并抑制其凋亡的作用。     

色素上皮衍生因子通过抑制PI3K/Akt通路降低宫颈癌HeLa细胞活性和侵袭相关蛋白表达

目的:探讨色素上皮衍生因子(PEDF)通过抑制磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路,从而下调人宫颈癌HeLa细胞的活性和侵袭相关蛋白c-Met表达的相关机制。方法:选取本院病理已确诊的40例宫颈癌样本及对应的40例癌旁正常组织样本,通过免疫组织化学法检测PEDF、PI3K和p-Akt蛋白的表达。在细胞水平分为正常宫颈上皮细胞HCerEpiC组、HeLa组、HeLa+PEDF组、HeLa+PEDF+PI3K/Akt激活剂组和HeLa+PI3K/Akt抑制剂组。通过蛋白质印迹(Western blotting)检测各组细胞内PEDF、PI3K、p-Akt、Akt及c-Met蛋白的表达水平,CCK-8法检测各组细胞的活性。结果:宫颈癌样本和HeLa细胞中的PI3K/Akt通路显著激活,且PEDF表达显著下降(P0.01)。PEDF可以显著抑制HeLa细胞中PI3K/Akt激活和细胞活性以及侵袭相关蛋白水平的增加(P0.01)。Akt激活剂可以逆转PEDF对HeLa细胞活性和侵袭蛋白表达的影响,而激活PI3K无法改变PEDF的作用。单纯的药物抑制PI3K/Akt通路不足以模拟PEDF对HeLa细胞的作用。结论:PEDF通过PI3K/Akt双重抑制作用降低HeLa细胞活性和侵袭相关蛋白表达,这为临床上PEDF治疗宫颈癌提供了新的思路和理论依据。     

胰岛素抵抗及子宫内膜增殖大鼠模型中脂肪因子和PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达

目的:观察有胰岛素抵抗及子宫内膜增殖大鼠模型中血浆脂联素(Adipo)等脂肪因子的水平,检测Adipo和脂联素受体(AdipoR)在大鼠子宫组织中的表达,并探讨其分子生物学机制。方法:选取8周龄Sprague-Dawley(SD)大鼠45只(每组9只),分别给予普通饮食(StD组)和高脂饮食(HFD组)40周。将StD组分为对照C组(普通饮食+假去势手术+对照溶剂)、NO组(普通饮食+去势手术+对照溶剂)、NE组(普通饮食+去势手术+17β-雌二醇灌胃),HFD组分为FO组(高脂饮食+去势手术+对照溶剂)和FE组(高脂饮食+去势手术+17β-雌二醇灌胃)。应用酶联免疫吸附(ELISA)检测小鼠血浆中脂肪因子水平,实时荧光定量PCR、Western Blotting和免疫组化检测子宫内膜中脂肪因子的水平,免疫组化检测子宫内膜中PTEN、AMPK和PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达。结果:①与NE组大鼠相比,FE组大鼠子宫腔上皮细胞和腺上皮细胞的高度、肌层的厚度显著增加(P<0.05)。②与对照C组相比,子宫内膜增生组(NE组和FE组)大鼠血浆Adipo水平显著降低(P<0.05),FO组大鼠血浆Adipo显著升高(P<0.05)。③在雌激素的作用下(NE组和FE组)子宫组织中Adipo mRNA的表达增多:与NO组大鼠相比,NE组大鼠子宫组织中Adipo mRNA水平显著升高(P<0.05);与FO组大鼠相比,FE组大鼠Adipo mRNA水平也显著升高(P<0.05)。大鼠子宫中AdipoR1 mRNA和AdipoR2 mRNA水平在各组之间差异无统计学意义(P>0.05)。与对照C组相比,FE组大鼠子宫组织中Adipo蛋白的表达明显降低(P<0.05)。④FE组子宫PTEN和p-AMPK蛋白的表达显著低于对照C组(P<0.05),PI3Kp85α、p-AKT蛋白表达显著高于对照C组(P<0.05)。结论:长期高脂饮食诱导大鼠的胰岛素抵抗可协同17β-雌二醇刺激子宫内膜增殖;胰岛素抵抗和雌激素影响血浆Adipo的水平;胰岛素抵抗和雌激素的协同作用使大鼠子宫内膜PTEN的表达降低、AMPK通路可能被抑制、PI3K/AKT信号通路可能被激活。     

核仁相关嗜银蛋白及增殖细胞核抗原在卵巢子宫内膜异位症癌变中的表达意义

目的 探讨核仁相关嗜银蛋白(AgNOR)及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达在卵巢子宫内膜异位症癌变过程中的意义.方法 应用免疫组化法和AgNOR染色检测1986年1月至2006年8月浙江大学医学院附属妇产科医院收治的30例卵巢子宫内膜异位症患者的子宫内膜异位组织、15例卵巢异位子宫内膜腺上皮不典型增生组织、30例卵巢子宫内膜异位症癌变组织中PCNA的表达及AgNOR评分.结果 癌变组及不典型增生组AgNOR评分和PCNA评分[分别为5.64±0.15和(49.22±3.97)%;4.37±0.20和(34.66±2.11)%]显著高于子宫内膜异位症组[1.04±0.26;(12.17±2.89)%];癌变组AgNOR和PCNA评分显著高于不典型增生组,P均＜0.05.癌变组内AgNOR和PCNA评分比较结果显示癌变区＞移形区＞子宫内膜异位症区;不典型增生组内结果显示不典型区＞子宫内膜异位症区(P＜0.05).AgNOR和PCNA评分与肿瘤期别显著相关(P＜0.05).AgNOR评分＞5.64和PCNA评分＞49.22%的患者预后明显差于AgNOR评分＜5.64和PCNA评分＜49.22%者(P＜0.05).结论 AgNOR及PCNA评分在鉴别子宫内膜异位症良恶性肿瘤及在判定肿瘤期别中起一定的作用;细胞增殖参数可能有助于对子宫内膜异位症癌变预后的判断;部分子宫内膜异位症和不典型增生可能是卵巢癌的癌前病变.     

High level of visfatin and the activation of Akt and ERK1/2 signaling pathways are associated with endometrium malignant transformation in polycystic ovary syndrome

Abstract

This study aimed to assess the clinicopathological significance of serum levels and endometrium tissue expression of visfatin in polycystic ovary syndrome (PCOS) patients. A total of 80 PCOS patients and 80 matching controls were included in this study. We analyzed the relationship between the expression of visfatin in endometrium and clinicopathological characteristics in PCOS patients. The correlation between the expression of visfatin and p-Akt, Akt, p-ERK1/2, and ERK1/2 in PCOS tissues was evaluated as well. Visfatin expression in PCOS endometrial tissues were significantly higher than those in controls (p?=?.001). The expression of phosphorylation of Akt and ERK1/2 were significantly higher in PCOS endometrium tissues compared to controls (p?<?.05). Moreover, a high expression of tissue visfatin in PCOS tissues was positively correlated with the expression of p-Akt (p?=?.015), and p-ERK1/2 (p?=?.013). Western blotting revealed that protein expression of visfatin in PCOS patients with endometrial hyperplasia and cancer was higher than that in patients with normal endometrium tissues, and the difference was statistically significant (p?=?.027). The expression of p-Akt (p?=?.018) and p-ERK1/2 (p?=?.035) in PCOS patients with endometrial hyperplasia and cancer was significantly higher than that in patients with normal endometrium tissues. Visfatin may be a potential biomarker for endometrial malignant transformation in PCOS patients.     

抑制PI3K/Akt信号通路拮抗胰岛素诱导的子宫内膜癌细胞增殖

目的:研究抑制磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/Akt信号通路对胰岛素诱导的子宫内膜癌细胞增殖的拮抗作用。方法:将无血清饥饿的子宫内膜癌Ishikawa3-H-12细胞分为空白对照组、10-6mol/L胰岛素单独刺激组以及不同剂量PI3K抑制剂-LY294002预处理后再用胰岛素刺激组。Western blot检测各组Akt磷酸化(p-Akt)水平,MTT试验观察细胞增殖情况。结果:胰岛素可引起内膜癌细胞Akt活化,刺激15min后p-Akt/Akt比值显著高于空白对照组(68.68%vs 26.21%,P<0.001)。LY294002以浓度依赖方式抑制胰岛素引起的Akt磷酸化。MTT试验显示,在药物处理24h,48h和72h 3个时间点,不同组别570nm吸光度值(OD570nm)均有显著差异(F=156.329,700.973,812.224,均P<0.001)。胰岛素组OD570nm值均高于同时间点的空白对照组(均P<0.001),胰岛素促内膜癌细胞增殖作用于48h时最为显著。LY294002可抑制胰岛素的增殖促进作用,此抑制作用具有浓度依赖性。不同剂量LY294002抑制作用的时间依赖性不同,48h时小剂量(0.1、1、10μmol/L)的抑制作用最为显著,72h时胰岛素重新呈现一定的促增殖作用;而50μmol/L LY294002可以持久抑制胰岛素的促增殖作用。结论:PI3K抑制剂LY294002可以通过抑制Akt磷酸化阻断胰岛素信号传导,拮抗后者促子宫内膜癌细胞增殖的作用。     

白细胞介素1与多囊卵巢综合征肥胖的相关性

目的 探讨炎症细胞因子——白细胞介素1(IL-1)β亚型(IL-1β)和IL-1受体拮抗剂(IL-1ra)与多囊卵巢综合征(PCOS)患者肥胖发生的关系.方法(1)2006年10月至2007年1月,选择在北京大学第三医院生殖医学中心就诊的PCOS患者118例,根据WHO国际肥胖特别工作组2000年提出的亚太地区肥胖标准[体质指数(BMI)≥25 kg/m2]分为PCOS肥胖组56例,PCOS非肥胖组62例.采用PCR技术检测IL-1β基因-511位点、第5外显子位点和IL-1 ra基因第2内含子的基因多态性.(2)随机抽取PCOS肥胖组患者29例和PCOS非肥胖组患者31例,采用ELISA法检测血清IL-1β、IL-1ra水平,并测定空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、超敏C反应蛋白水平和白细胞计数.结果(1)基因型和等位基因频率:PCOS肥胖组患者IL-1β基因-511位点T/T基因型频率及T等位基因频率分别44.6％和63.4％,PCOS非肥胖组患者分别为11.3％和39.5％,两组分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);PCOS肥胖组患者IL-1 ra基因Ⅰ/Ⅴ基因型频率及Ⅴ等位基因频率分别为19.6％和9.8％,PCOS非肥胖组分别为3.2％和1.6％,两组分别比较,差异也均有统计学意义(P＜0.05).(2)血清学检测结果:PCOS肥胖组患者血清IL-1β水平为(149±36)ng/L,高于PCOS非肥胖组患者的(96±42)ng/L,PCOS肥胖组患者IL-1 ra水平为(284±97)ng/L,高于PCOS非肥胖组患者的(208±84)ng/L,两组分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).PCOS肥胖组患者FBG、FINS、超敏C反应蛋白水平和白细胞计数分别为(5.1±0.7)mmol/L、(17±9)mU/L、(1.5±0.6)mg/L、(7.0±2.3)×109/L,PCOS非肥胖组患者分别为(4.9±0.5)mmol/L、(11 ±8)mU/L、(0.9 ±0.4)mg/L、(5.9±1.3)×109/L,两组间各项指标分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).(3)IL与BMI的相关性:PCOS患者血清IL-1β(r=0.673)、IL-1ra(r =0.557)与BMI呈线性正相关(P均＜0.05).结论 炎症因子IL-1β和IL-1ra与PCOS患者肥胖的发生明显相关,IL-1β基因-511位点携带T等位基因和IL-1ra基因携带等位基因Ⅴ的PCOS患者更有发生肥胖的倾向.     

Polycystic ovarian syndrome, insulin resistance and thickness of the endometrium

INTRODUCTION: Disorders possibly associated with insulin resistance (IR) are hyperandrogenemia, hirsutism, irregular menstrual cycles, central obesity and polycystic ovarian syndrome (PCOS). It is known that PCOS is related to a high risk of endometrial hyperplasia after many years of estrogen stimulation from anovulation. OBJECTIVES: The purpose of the study was to estimate the thickness of the endometrium in women with IR without a diagnosis of PCOS and in women with PCOS without IR. STUDY DESIGN: Three groups of women included in the study: 15 women diagnosed as IR without PCOS, 16 women diagnosed as PCOS without IR and 20 women used as controls matched for age and body mass index (BMI) with the previous patients. Thickness of the endometrium was estimated in all cases with a transvaginal ultrasound in three consecutive measures during a cycle. RESULTS: The mean thickness of the endometrium was statistically higher in the PCOS group (11.1mm), and in the IR group (9.6mm), compared with the control group (6.2mm) (F=13.1, p<0.001). CONCLUSIONS: It is concluded that both in women diagnosed as having insulin resistance without PCOS, and in women with PCOS without insulin resistance, the ultrasonographically estimated thickness of the endometrium is relatively high and a closer follow-up of these women is required in order to detect those in risk to develop hyperplasia and/or atypia.     

Mitogenic and anti-apoptotic effects of insulin in endometrial cancer are phosphatidylinositol 3-kinase/Akt dependent

Objective

To determine serum insulin levels, expression and phosphorylation of InsR, IRS-1 and Akt in endometrial cancer (EC) tissues, and to explore the correlation between them. To investigate if insulin-induced mitogenic and anti-apoptotic effects are PI3K-dependent in EC cells.

Methods

Serum insulin levels were measured by radioimmunoassay. We performed RT-PCR and western blotting to evaluate the expression and activation of key proteins of PI3K/Akt pathway in 63 EC tissues. The proliferation and apoptosis rates were determined with MTT, BrdU and annexin V/PI assays.

Results

Serum insulin levels and InsR, IRS-1 and Akt expression and phosphorylation were significantly elevated in patients with EC compared to those without EC. Additionally, levels of p-InsR, p-IRS-1, and p-Akt were significantly higher in patients with high-grade, advanced stage, deep myometrial invasion, and lymph-node metastasis. The expression and activation of InsR, IRS-1, and p-Akt were positively related with the levels of serum insulin. The insulin-induced mitogenic and anti-apoptotic effects in EC cells were blocked when cells were pre-incubated with LY294002. Ishikawa 3-H-12 cells showed increased p-Akt levels after treatment with insulin at 10^− 8 M for 15 min. The insulin-induced Akt activation was inhibited by LY294002 in a dose-dependent manner.

Conclusion

Insulin played an essential role in EC tumorigenesis. Activation of InsR, IRS-1, and Akt was associated with features of aggressive EC. Insulin was a mitogenic and anti-apoptotic agent for EC cells, and these effects were dependent on PI3K/Akt pathway. Decreasing insulin level and blocking the InsR-IRS-PI3K-Akt pathway could be viable preventive and therapeutic strategies for EC.     

子宫内膜癌组织中胰岛素受体底物1的表达与活化及其临床意义

目的 研究子宫内膜癌组织中胰岛素受体底物1(ⅡlS-1)mRNA、蛋白的表达水平及酪氨酸磷酸化程度,并探讨其临床意义.方法 选择63例子宫内膜癌(内膜癌组)、21例子宫内膜不典型增生(不典型增生组)及22例正常子宫内膜(正常内膜组)患者进入本研究.收集其临床病理资料,酶联免疫法检测空腹血清胰岛素C肽水平,RT-PCR技术和蛋白印迹法分别检测子宫内膜组织中1RS.1 mRNA及蛋白的相对表达量,免疫共沉淀法检测IRS-1酪氨酸磷酸化程度.结果 内膜癌组患者血清C肽水平为(3.2±1.1)μg/L,高于正常内膜组[(2.5±0.7)μg/L],两组比较,差异有统计学意义(P=0.007).内膜癌、不典型增生及正常内膜组IRS-l mRNA、蛋白的相对表达量比较,差异均无统计学意义(F=0.695、0.003,P=0.502、0.997).内膜癌组IRS-1酪氨酸磷酸化程度[(62±36)%]高于不典型增生及正常内膜组[分别为(53士34)%、(35±33)%],分别比较,差异均有统计学意义(P=0.048、0.002);不典型增生组与正常内膜组比较,差异也有统计学意义(P=0.045).子宫内膜样腺癌患者IRS-1酪氨酸磷酸化程度[(69±33)%]高于非内膜样癌[(34±31)%],两者比较,差异有统计学意义(t=2.300,P=0.025).高手术病理分期、细胞分化不良、深肌层浸润及盆腔淋巴结转移者IRS-1酪氨酸磷酸化程度增高(P均<0.05).子宫内膜组织中IRS-1酪氨酸磷酸化程度与空腹血清C肽水平呈正相关关系(r=0.491,P=0.001).结论 子宫内膜癌组织中IRS-1的表达无明显变化,但存在IRS-1酪氨酸磷酸化程度增加,并与手术病理分期高、细胞分化不良、深肌层浸润及盆腔淋巴结转移等不良的临床病理特征相关.