移植不同人工真皮支架对猪Ⅲ度烧伤创面血管化及瘢痕形成的影响

目的 了解移植3种人工真皮支架对Ⅲ度烧伤创面血管化及其瘢痕形成的影响.方法 采用随机数字表法将18只广西巴马小型猪分成壳聚糖支架组、磺化羧甲基壳聚糖支架组、ADM支架组,每组6只,在每只猪背部制作Ⅲ度烫伤(下称烧伤)创面4或8个,共96个.伤后48 h切痂后,前2组创面分别移植胶原-壳聚糖/硅橡胶双层人工皮、胶原-磺化羧甲基壳聚糖/硅橡胶双层人工皮,ADM支架组创面移植ADM,每组创面24个;剩余24个创面作为油纱对照组,直接覆盖油纱.于支架移植或油纱覆盖后l、2、3、4周(“4周”指植入支架或覆盖油纱后2周+移植表皮后2周),观察各组创面的大体情况;取创面中央部位组织,采用生物素-链霉亲和素-过氧化物酶染色法观察CD31、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TGF-β1、TGF-β3表达阳性的血管或细胞,并计数.对数据行单因素方差分析和LSD检验. 结果(1)大体观察可见,磺化羧甲基壳聚糖支架组创面血管化程度明显优于其余3组.(2)移植或覆盖后1～3周各组创面组织CD31阳性血管数持续增多,第4周时3个支架组均减少.各时相点4组间比较,F值分别为24.005、38.822、25.274、3.856,P＜0.05或P＜0.01;磺化羧甲基壳聚糖支架组l～3周明显多于其余3组(P值均小于0.05).(3)移植后1～3周,3个支架组创面组织α-SMA阳性血管数均持续增多,4周时下降;油纱对照组覆盖后1～4周持续增多.各时相点4组间比较,F值分别为22 637、28.087、62.651、18.055,P值均小于0.01.磺化羧甲基壳聚糖支架组各时相点均明显多于其余3组(P值均小于0.05).(4)移植或覆盖后1～4周每400倍视野下TGF-β1阳性细胞数:壳聚糖支架组分别为(127±8)、(167±19)、(170±18)、(144±10)个,磺化羧甲基壳聚糖支架组为(171±17)、(207±25)、(130±30)、(69±16)个,ADM支架组为(106±8)、(159±17)、(171±11)、(145±11)个,油纱对照组为(100±20)、(150±18)、(200±14)、(172±20)个;各时相点4组间比较,F值分别为29 675、9.503、13 107、54.515,P值均小于0.01.1、2周时磺化羧甲基壳聚糖支架组明显高于其余3组(P值均小于0.05),3、4周时其表达量下降,明显低于其余3组(P值均小于0 05).(5)移植或覆盖后1～3周,各组创面组织每400倍视野下TGF-β3阳性细胞数持续增多,4周时下降或继续升高;各时相点4组间比较,F值分别为140.612、945 850、714.037、119.147,P值均小于0.01.磺化羧甲基壳聚糖支架组各时相点明显高于其余3组(P值均小于0 05). 结论 胶原-磺化羧甲基壳聚糖真皮支架在烧伤创面愈合过程中可快速诱导血管生成和成熟,有利于创面早期修复和抑制瘢痕增生.     

利用不同支架材料构建人工真皮的研究

目的 探讨脱细胞基质、胶原蛋白基质网架、胶原凝胶的不同支架材料上构建人工真皮的可行性。方法 采用酶消化法分离幼儿包皮成纤维细胞，并进行传代培养；将第3代成纤维细胞种植于三种不同支架上，14天后利用HE染色、透射电镜和扫描电镜对构建的人工真皮结构进行鉴定。结果 ①酶消化法得到皮肤成纤维细胞，可在含有10％小牛血清的DMEM中传代培养；②成纤维细胞在三种不同支架上形成单层细胞，并可向胶原膜和胶原凝胶内部生长；③成纤维细胞在胶原膜和脱细胞基质内增殖不如胶原凝胶内活跃，但人工真皮收缩不明显，而胶原凝胶构建的人工真皮收缩明显。结论 利用脱细胞基质、胶原蛋白基质网架、胶原凝胶支架材料构建的人工真皮具有较好的组织结构，是一种较理想的皮肤替代物，可作为移植物进行深入研究。     

不同人工真皮支架在修复Ⅲ度烧伤创面中创面收缩和细胞凋亡差异的实验研究

目的 探讨不同真皮支架血管化对Ⅲ度烧伤创而修复中创面收缩和细胞凋亡影响的差异.方法 将胶原-磺化羧甲基壳聚糖、胶原-壳聚糖及脱细胞基质三种真皮支架分别移植于猪Ⅲ度烧伤清创后创面,观察植入创面的修复情况,并通过免疫组化、末端脱氧核苷酸介导的生物索化的脱氧尿嘧啶DNA切口末端标记等方法对不同时间小同支架创面中表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的血管和肌成纤维细胞数量及细胞凋亡情况进行检测.结果 植入不同真皮支架的创面与无支架植入的肉芽创面不同.支架植入创面1～3周α-SMA表达阳性的血管数持续增加,支架植入2周加植表皮2周后创面血管数减少,不同时间点以胶原-磺化羧甲基壳聚糖真皮支架植入创面最多,无支架植入创面最少.α-SMA表达阳性的肌成纤维细胞以胶原-磺化羧甲基壳聚糖真皮支架植入创面最少且表达高峰为2周,其他创面表达高峰为3周,以无支架植入创面最多.不同支架植入后2～4周,创面内细胞凋亡持续大幅增多;而无支架植入创面中,3～4周才开始增加;细胞凋亡以胶原-磺化羧甲基壳聚糖真皮支架创面最多,无支架创面最少.结论胶原-磺化羧甲基壳聚糖真皮支架可增强修复细胞的迁移,获得良好的血管化,较好较快地修复皮肤全层烧伤缺损创面.     

采用人工真皮修复大面积烧伤早期手部创面的疗效观察

目的:观察早期应用人工真皮修复大面积烧伤患者手部创面的效果.方法:选取2009年1月-2010年9月就诊于北京市右安门医院的大面积烧伤患者38例,采用随机分组方法分为两组.人工真皮组19例在早期修复手部创面手术中用人工真皮覆盖创面,2周后用自体刃厚皮片覆盖.对照组19例创面早期切痂、行自体微粒+异体皮移植,后期肉芽组织...     

碳化二亚胺交联的胶原-硫酸软骨素支架材料构建人工真皮的研究

目的 探讨以胶原—硫酸软骨素支架材料构建人工真皮的可行性。方法 以碳化二亚胺(EDC)为交联剂构建胶原—硫酸软骨素(CS)支架体系。通过光电子能谱、扫描电镜、HE染色观察及力学性能测试等对材料的理化性能进行表征。同时分离培养人胚真皮成纤维细胞，将体外扩增的成纤维细胞接种在支架上，制备人工真皮。通过组织学、免疫组织化学，与传统的胶原海绵人工真皮的性质进行比较。结果 胶原—CS支架是三维多孔海绵状结构且空隙均匀，与胶原支架比较，断裂强度提高，并且材料表面极性基团增加。成纤维细胞在胶原—CS支架材料上生长良好，形成人工真皮。结论 胶原—CS人工真皮具有优越的生物学和力学性能，成纤维细胞在胶原—CS支架上黏附、增殖情况优于胶原真皮。     

胶原-壳聚糖真皮支架原位诱导修复猪全层皮肤缺损的研究

目的 观察胶原-壳聚糖真皮支架移植于猪皮肤缺损创面后支架的血管化及血管化支架上皮肤移植的成活情况.方法 将双层人工皮肤支架移植于10只猪全层皮肤缺损创面,在植入后1、2、3周对真皮支架血管化、创面、血管化支架上皮肤移植愈合情况进行观察;同时用免疫组织化学方法,对CD34阳性信号(新生血管数目)进行检测.结果 支架植入后1周支架内可见细胞浸润和少量新生微血管形成;植入后2周,垂直于创面的新生微血管明显增多;植入后3周,大部分支架被血管化.CD34阳性信号在支架植入后3周比植入后2周明显增多,植入后2周比植入后1周明显增多.在支架植入后1、2、3周创面植中厚皮,植皮2周后皮片存活率分别为10%、70%和100%.在支架植入后1周和2周创面植表皮,1周和2周后移植表皮存活良好.结论 胶原-壳聚糖真皮支架可以诱导血管长入,明显促进创面愈合.在支架上移植表皮,可较好修复创面,在皮肤移植中有良好的应用前景.     

异体脱细胞真皮基质与自体薄皮片复合移植修复手部Ⅲ度烧伤

2003年3月~2006年12月我科以异体脱细胞真皮基质(allograft derm al m a-trix,ADM)加自体薄皮片复合移植治疗手部Ⅲ度烧伤创面30例,效果良好,报告如下:1临床资料1.1一般资料本组30例,男性26例,女性4例,平均年龄23(17~35)岁。均为手部Ⅲ度烧伤。烧伤原因:热压伤19例,手背及手腕Ⅲ度烧伤伴手掌皮肤损伤,其中5例手背伸肌腱外露,2例背侧掌骨、腕骨外露,直径1~3 cm。化学烧伤5例,手背及手腕皮肤全层坏死,其中1例桡神经腕背支损伤,外露3 cm。火焰烧伤5例。严重电烧伤1例,第一掌指骨关节部分干性坏死,拇长伸肌腱缺损2 cm×4 cm。烧伤至入院时间为…     

血管内皮细胞和成纤维细胞混合移植对人工真皮血管化的影响

目的观察同种血管内皮细胞和成纤维细胞移植对人工真皮血管化的促进作用。方法在27只Wistar大鼠背部造成2．5 cm×2．5 cm全层皮肤缺损创面(2处／只),将其分为血管内皮细胞组:将血管内皮细胞混入0．5 ml纤维蛋白胶中,按1．0×105／cm2的密度均匀喷洒于移植床;混合组:将血管内皮细胞和成纤维细胞混入等量纤维蛋白胶后,同前密度喷洒于移植床;对照组:按同样方法喷洒等量纤维蛋白胶。随后各组移植人工真皮,每组9只大鼠18处创面。于移植后5、10 d切取移植的真皮及周围组织行HE、血管内皮生长因子(VEGF)、Masson和墨汁灌注染色,观察新生血管生长情况。于移植后5 d行伊文思蓝灌注,以分光光度计定量检测法测定微血管形成情况。结果移植后5 d,HE、VEGF、Masson和墨汁灌注染色均可见各组移植床有新生血管长入。HE染色见血管内皮细胞组、混合组新生血管数量分别为(14．2±3．6)、(12．1±2．5)条,较对照组[(3．9±1．6)条]明显增多(P<0．05)。移植后10 d,人工真皮内及移植床均有微血管形成,且胶原组织的合成增加。移植后5 d,经伊文思蓝灌注,收集并检测血管内皮细胞组、混合组真皮组织溶出的上清液,吸光度值分别为0．167±0．058、0．155±0．046,均高于对照组的0．066±0．024(P<0．05)。结论同种血管内皮细胞和成纤维细胞移植可促进创面愈合过程中的血管新生,加速人工真皮移植后血管化过程,促进类真皮组织的成熟。     

不同负压材料在Ⅲ度烧伤切痂创面修复中的应用效果比较

目的:分析不同负压材料在Ⅲ度烧伤切痂创面修复中的应用效果.方法:选取2017年6月-2020年6月笔者医院烧伤整形科收治的Ⅲ度烧伤患者125例,按照随机数字表法分为A组(61例)和B组(64例),两组均应用负压封闭引流技术进行治疗,伤后第3天行切痂术,A组创面覆盖聚乙烯醇负压材料,B组创面覆盖聚氨酯负压材料,比较两种材...     

早期电动磨痂结合不同种敷料覆盖修复小儿深Ⅱ度烧伤创面的疗效观察

目的：观察小儿深Ⅱ度烧伤创面早期电动磨痂后结合不同种敷料覆盖的治疗效果.方法：将2010年1月-2012年1月收治的60例四肢和躯干热液烫伤患儿随机分为凡士林油纱组、生物敷料组和负压封闭引流（VSD）组,每组20例.各组患儿在磨痂后,根据分组的不同,分别应用凡士林油纱、异种脱细胞真皮基质或VSD覆盖创面.术后观察创面愈合时间、愈合质量、换药次数、治疗费用.结果：生物敷料组、VSD组的创面愈合时间分别为（16.3±1.9）d和（16.9±1.8）d,明显短于凡士林纱布组[（19.2±2.5）d,P＜0.05];生物敷料组、VSD组反映瘢痕增生程度的温哥华评分分别为（4.5±0.7）分和（4.1±0.8）分,明显低于凡士林油纱组[（8.6±1.2）分,P＜0.01];VSD组的换药次数[（3.0±0.5）次]明显低于凡士林油纱组[（6.9±0.7）次,P＜0.05]和生物敷料组[（7.2±0.8）次,P＜0.01];凡士林油纱组的住院费用[（6 560.34±1 230.00）元],明显低于生物敷料组[（12 028.24±1 380.00）元,P＜0.01]和VSD组[（14 125.40±1 560.00）元,P＜0.01].结论：早期磨痂应用异种生物敷料和VSD覆盖较普通油纱覆盖能明显促进小儿深Ⅱ度烧伤创面愈合,缩短住院时间,显著提高创面愈合质量,减少换药次数,减轻患儿痛苦,但住院费用较高,临床上应根据患儿具体情况,灵活选择磨痂后创面覆盖物.     

Role of acellular dermal matrix allograft in minimal invasive coverage of deep burn wound with bone exposed--case report and histological evaluation

A sandwich graft was applied to the debrided cortical bone layer of the tibia in the case of a 72-year-old male patient with full-thickness necrotic burn injury. The combined graft consisted of a dermal template material and autologous split thickness skin graft. After application, the graft was found totally accepted and provided good functionality with acceptable appearance. Histopathologic evaluation revealed a complete take with revascularisation of the implant. Supporting lamellar bony trabecules were also seen in the deep dermal dermis representing a connection to the underlying bone. The use of the dermal matrix in deep burn exposing the bone provides a satisfactory functional result and good cosmetic appearance.     

人工真皮结合角质形成细胞修复猪皮肤缺损

目的探索胰蛋白酶分离香猪角质形成细胞膜片的最佳方案,在胶原-壳聚糖人工真皮支架创面上进行角质形成细胞体内培养,明确该方法修复猪创伤全层皮肤缺损的实用性。方法用不同皮肤厚度、胰蛋白酶浓度和分离温度分离出角质形成细胞,把有活力的角质形成细胞接种于人工真皮支架植入后1周的全层皮肤缺损创面,2周后对创面愈合进行观察并作病理检测。结果在37℃条件下用0.20%的胰蛋白酶消化1mm厚度皮片100分钟为最佳分离方案。2周后肉眼和病理切片均显示接种的角质形成细胞膜片成活并完全覆盖修复创面。结论应用角质形成细胞体内培养加人工真皮支架制成＂人工皮肤＂能较好的修复猪创伤全层皮肤缺损,抑制创面收缩和瘢痕形成。     

烧伤变性脱细胞真皮基质可再生利用的实验研究

目的 探讨烧伤变性脱细胞真皮基质(DADM)作为真皮替代物用于创面修复的可行性. 方法 (1)取12只Wistar大鼠,其中9只背部造成深Ⅱ度烫伤(以下称烧伤)创面,分别于伤后1、2、3d(每时相点3只)取创面全厚皮肤,用2.5 g/L胰蛋白酶-体积分数0.5％ Triton X-100行脱细胞处理制成DADM,相应称为DADM-1 d、DADM-2 d、DADM-3 d;余下3只大鼠不致伤,同法制备ADM作为对照.对ADM和各DADM行大体、组织学观察及微生物学和生物力学检测(极限抗拉强度、最大拉力、断裂伸长率、应力-应变关系).(2)另取64只Wistar大鼠,按随机数字表法分为ADM组、DADM-1d组、DADM-2 d组、DADM-3d组,每组16只.于各大鼠背部制作一2.0 cm×1.8 cm大小皮瓣,将前述ADM和DADM-1 d、DADM-2d、DADM-3 d切制成1.8cm×1.5 cm大小后分别埋植于皮瓣下.术后1、3、5、9周,每组每时相点取4只大鼠,肉眼观察创面愈合情况及埋植物的变化,并对埋植物行组织学观察.对数据行单因素方差分析及t检验. 结果 (1)新鲜制备的各DADM呈乳白色,质地柔软有弹性,韧性较ADM弱.光学显微镜下见ADM和各DADM中均无上皮结构和细胞存在,DADM胶原纤维增粗程度不均匀,排列紊乱,嗜伊红性增强.各DADM微生物学检测结果均为阴性.DADM-1d、DADM-2 d、DADM-3 d之间极限抗拉强度、最大拉力、断裂伸长率和应力-应变关系比较,差异均无统计学意义(F值为0.088～3.591,P值均大于0.05);其中DADM-3d此4项指标值最高,分别为(13.0±2.4) MPa、(61 ±4)N、(173±7)％、(45 7±2.0)％.ADM此4项指标各为(19.0±2.6) MPa、(95±4)N、(201±5)％、(62.5±2.2)％,与3种DADM两两比较均偏高(t值为6.424 ～17.125,P值均小于0.01).(2)埋植术后1周,各组大鼠创面无渗出或红肿,埋植物未收缩或卷曲;创面有炎性细胞浸润并有Fb及毛细血管长入.术后3周时,DADM-1d、DADM-2 d、ADM组埋植区毛发生长正常,DADM-3 d组埋植区毛发较稀疏;各组炎性细胞减少,Fb增多,有新生小血管长入,DADM-3 d组炎性细胞减退稍延迟.术后第5周,各组埋植区毛发恢复正常,埋植物收缩、变薄,表面纤维膜包裹紧密,有较大血管束长入;各组真皮基质与周围正常组织融合.术后第9周,ADM和DADM均为薄、软白色组织片,与皮瓣内面连接紧密;各组无炎性细胞浸润,胶原纤维排列规则、致密,与正常胶原组织融合. 结论 烧伤DADM无明显免疫原性,生物相容性好,经离体改造有望成为创面修复治疗中的真皮替代物.     

无细胞真皮基质与自体皮复合移植愈合过程的观察

目的 :为改善植皮区外观和功能 ,并同时减轻供皮区瘢痕增生。方法 :应用自制的无细胞真皮基质与薄的刃厚自体皮复合移植应用于 2例切削痂后的烧伤创面。结果 :未发现对复合移植物的排异反应。创面愈合后 ,大体观察发现移植网状自体皮的网状形式已变得不明显 ,自体小皮片的轮廓基本消失 ,均反应了愈合过程的特殊性。光镜和电镜观察发现复合移植区基底膜清晰、连续且完整等。与对照部位相比 ,复合移植区瘢痕增生减轻 ,未见明显挛缩 ,皮肤弹性较好。结论 :至少到目前为止的观察期 (3～ 4个月 )内 ,较薄的刃厚自体皮与无细胞真皮基质复合移植后外观和功能等同或优于单纯刃厚自体皮移植     

细胞因子对异种脱细胞真皮基质免疫调节作用的临床研究

目的　探讨烧伤患者接受异种 /异体脱细胞真皮基质 (xeno /allo ADM )移植后全身和局部多种细胞因子与移植物近期转归的关系。　方法　在大面积烧伤患者的四肢切痂创面上 ,移植xeno ADM (12例 ,19块 )或allo ADM(15例 ,18块 ) ,其上覆盖自体超薄断层皮片 ,并以 6例单纯移植自体中厚断层皮片 (auto TTS)的烧伤患者为对照。移植物成活后 4～ 8周 ,收集局部组织标本、血清和xeno ADM排斥后的创面渗出液 ,采用免疫组织化学染色与酶联免疫吸附法 (ELISA) ,检测白细胞介素 (IL) 1β、IL 4、IL 6、肿瘤坏死因子α(TNF α)和γ型干扰素 (IFN γ)的含量。　结果　免疫组织化学染色结果显示 ,移植物内IL 1β、IL 4、IL 6、TNF α和IFN γ的阳性细胞密度或着色强度相比较 ,xeno ADM >allo ADM >auto TTS (P <0 .0 5 )。ELISA检测结果显示 ,xeno ADM被排斥后创面渗出液中IL 4、IL 6、TNF α和IFN γ水平明显高于自体血清 ,但其血清IL 4与IFN γ水平分别低于和高于未排斥时。xeno ADM移植后血清中IL 4、IFN γ水平明显高于allo ADM和auto TTS(P <0 .0 5～ 0 .0 1)。　结论　xeno ADM移植后可在局部检测到高水平的IL 1β、IL 4、IL 6、IFN γ ,可能与细胞杀伤和细胞因子介导的免疫放大作用有关。这些细胞因子的动态变     

激光微孔猪脱细胞真皮基质制备及创面移植的观察

目的 制备激光微孔猪脱细胞真皮基质（PADM），寻找其与自体刃厚皮复合移植的最佳孔间距。方法 采用胰蛋白酶法制备PADM，用激光加工机打孔，制备孔间距为0．8、1．0、1．2、1．5mm的激光微孔PADM。在144只SD大鼠背部制作全层皮肤缺损创面，分为微孔Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组，依次采用前述4种孔间距的激光微孔 PADM＋自体刃厚皮移植；网状组采用网状PADM＋自体刃厚皮移植；对照组单纯移植自体刃厚皮。每组24只大鼠。观察移植后2、4、6周各组创面愈合情况，计算移植物成活率和创面收缩率，并行组织学观察。结果 移植后2、4周，微孔Ⅰ、Ⅱ组移植物成活率均低于对照组（P〈0．05），但与网状组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；移植后6周，微孔Ⅰ、Ⅱ组成活率明显高于网状组（P〈0．05）。移植后4、6周微孔Ⅰ、Ⅱ组创面收缩率较对照组显著降低（P〈0．05），移植后6周[（16．0±2．6）％、（15．1±2．4）％]明显低于网状组[（19．3±2．4）％，P〈0．05]。组织学观察见各微孔组上皮化良好，胶原纤维排列整齐，基底膜结构完整。结论 孔间距为0．8mm或1．0mm的激光微孔PADM与自体刃厚皮复合移植可提高创面修复质量，其中孔间距1．0mm效果最佳。     

Influence of hyaluronic acid on wound healing using composite porcine acellular dermal matrix grafts and autologous skin in rabbits

This study aims to explore the influence of hyaluronic acid (HA) on wound healing during xenogeneic porcine acellular dermal matrix (PADM) composite skin grafting. The results will facilitate the development of methods for improving graft contracture and poor elasticity of composite transplantation. Exogenous HA was added to composite PADM grafts and to thin autologous skin grafts during rabbit full‐thickness skin wound repair. The influence of HA on wound healing was evaluated according to its contracture rate and its expression of collagen types I and III. The possible mechanism was then explored based on HA metabolism and vascularisation in the skin graft. The results show that exogenous HA relieves graft contracture on rabbit wound surfaces, increases collagen I and III expression and decreases the ratio between collagen types. HA stimulates the generation of more CD44 receptors to strengthen its enzymolysis. The resulting metabolites promote the vascularisation of the wound surface, which are conducive for mitigating graft contracture, and further improve the composite grafting effect.