坐骨神经源性因子对培养中成年青蛙背根节神经元的作用

目的 探讨离断的坐骨神经分泌的可溶性因子对培养中的成年青蛙背根神经节（ｄｏｒｓａｌ ｒｏｏｔ ｇａｎｇｌｉｏｎ,ＤＲＧ）神经突起生长及形态学的影响。方法 分离成年青蛙ＤＲＧ神经元培养于含有离断的ＳＮ条件性培养基（ＳＮＣＭ）中,检测ＳＮＣＭ促进神经突起生长的量效和时效作用及对生长的神经突起形态学的影响。结果 在０．１－５ｍｇ／Ｌ蛋白质量浓度范围内,ＳＮＣＭ促进神经突起生长的作用有蛋白质量浓度依赖关系     

大鼠坐骨神经施万胶质细胞条件培养液促进背根节神经元的生长

从大鼠坐骨神经分离、纯化施万胶质细胞 ,再经培养后收集施万胶质细胞的无血清条件培养液。用盖玻片培养法与快速自动比色微量分析法研究施万胶质细胞条件培养液对背根节神经元生存以及神经元活动的影响。结果发现施万胶质细胞条件培养液能够明显提高背根节神经元的体外存活率 ,以及增强其神经元的活力。表明施万胶质细胞具有很强的神经营养性作用大鼠坐骨神经施万胶质细胞条件培养液促进背根节神经元的生长@朱道立$南京师范学院生命科学与技术系!南通226007坐骨神经;;施万胶质细胞;;细胞培养;;神经营养因子;;大鼠     

坐骨神经损伤与再生过程中背根节神经元基因表达模式分析

目的：探讨坐骨神经损伤与再生过程中,背根节神经元轴突再生的分子调控模式和机理。方法：采用表达谱芯片分析坐骨神经离断后,14-6背根节神经元基因表达的变化,并分析差异基因所反映的核心生物学过程的变化。结果：（1）坐骨神经离断后,近端坐骨神经差异基因的数量表现为先上升再下降的趋势,但背根节神经元呈现为波浪形的增加。（2）核心生物学过程的差异基因数量变化：刺激检测、G-蛋白偶联受体信号通路、细胞表面受体连接信号转导均呈波浪形变化。防御反应、炎症反应、免疫反应、轴突生成表现为持续性增加。（3）与轴突生成相关的差异基因表达变化结果显示：Lhx4、Nkx2-9、Efnb3、Titfl、Apoa4表现为波浪形增加。Mapk8ip3、Zfp312、Gap43在长时间点表达增加。Tnn、Efnbl-开始降低,Notchl、Nefl、Bmprlb等基因表现为长时间点表达降低。结论：坐骨神经离断后,背根节神经元差异基因和核心生物学过程的变化趋势,反映了周围神经损伤与再生过程中轴突再生的分子调控模式。     

背根节压迫大鼠脊髓背角广动力神经元电生理学特性研究

目的探讨大鼠腰4、5背根神经节慢性压迫（chronic compression of dorsal root ganglion,CCD）损伤后,脊髓背角广动力（widedynamicrange,WDR）神经元电生理学特性的改变。方法健康SD大鼠随机分为正常组和CCD组（每组12只）,分别检测机械痛敏和热痛敏行为,并利用在体细胞外电生理学方法记录脊髓背角WDR神经元放电。结果CCD术后大鼠出现了机械痛敏和热痛敏行为。与正常组大鼠相比,CCD组大鼠脊髓背角WDR神经元兴奋性增高,表现为有自发放电的神经元比例增加、放电频率增加,对外周感受野轻刷、钳夹等刺激的反应性增强。36．36％（12／33）的CCD组大鼠WDR神经元对Aβ纤维刺激出现后放电现象。结论大鼠腰4、5背根节慢性压迫后引起WDR神经元的兴奋性增加,其可能参与神经病理性疼痛的发生。     

针刺对背根节神经元GDNF表达的影响

目的 研究部分去背根及针刺对背根神经节神经元胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）表达的影响。方法 制作猫备用背根模型并针刺备用根支配区的两组穴位，足三里和悬钟，伏兔和三阴交。针刺7d后取备用背根节用GDNF抗血清（1：1000）行免疫组织化学染色。分别计数各组大，中，小阳性神经元的数值。结果 非手术组GDNF阳性神经元数量为55％。其中大神经元为25％，中神经元为14％，小神经元为16％，术后非针刺组，阳性神经元总数为35％，较非手术组明显下降（P＜0．05），主要为大神经元（5％）减少，而阳性少（13％），小神经元（17％）数量变化不明显，但染色明显加深。针刺组GDNF阳性神经元数量又明显增加至90％，其中阳性大神经元28％，中神经元17％，小神经元45％。结论 背根节GDNF阳性大神经元数量在去部分背根术后7d显著下降，而针刺可逆转这种变化。GDNF阳性中，小神经元数量在术后7d并无明显变化，但针刺后表达显著增加。     

针刺对备用背根节神经元TrkC表达的影响

目的：探讨针刺对备用背根节（DRG）TrkC表达的影响。方法：将成年雄猫分为三组，即假手术组、单侧部分背根切除术组、单侧部分背根切除术并针刺组。通过免疫组化ABC法，观察各组L6DRG中TrkC免疫反应（TrkC-IR)神经元数量。结果：在假手术组TrkC-IR主要定位于L6DRG的大神经元及少数中小神经元胞浆内：部分背根切断后，TrkC-IR大神经元数量明显减少，而中小神经元数量则明显增多（P＜0．05）；针刺后，TrkC-IR大神经元数量较手术组又明显增多，且反应强度明显增加（P＜0．05），而对中小神经元TrkC阳性细胞数无明显影响。结论：针刺促进TrkC在大神经元的表达上调，提示TrkC可能与脊髓可塑性有关。     

部分背根切断对备用背根节神经元EGF表达的影响

目的研究部分去背根对备用背根节神经元表皮生长因子(EGF)表达的影响。方法制作猫备用背根模型,在3d、7d及14d时取备用背根节用EGF抗血清(1∶200)行免疫组织化学ABC法染色。分别计数各组大、中小及总阳性神经元的数量。结果EGF在备用背根节的大、中小神经元均有表达。EGF总、大、中小阳性神经元数3d时较正常均明显减少(P<0.05),7d时,总阳性神经元与正常相比无差异,大阳性神经元较正常明显增加(P<0.05),而中小阳性神经元较正常继续减少(P<0.05),14d时均又与正常无差异。结论部分背根切断对备用背根节神经元EGF总、大及中小阳性神经元的表达有不同的影响。但都经历了3d时较正常减少,14d恢复至正常水平的变化趋势。     

大鼠背根节内两类兴奋性神经元的放电特征

目的:观察大鼠背根节(DRG)神经元兴奋性分类的放电特征.方法:在新鲜分散的中、小型大鼠背根节神经元运用全细胞膜片钳技术,观察给予胞内去极化,超极化电流刺激引起细胞放电的特征.结果:根据大鼠背根节神经元的放电特征可将它们区分为两类兴奋性.1类:神经元兴奋性与刺激强度相关,逐渐增强的去极化刺激可引发频率由低到高的动作电位.一般于超极化刺激后不产生反跳动作电位.动作电位的幅值一致,符合"全或无"定律.2类:神经元的兴奋性与去极化刺激强度关系不明显,神经元放电频率比较稳定,不随刺激强度的增强而增加,放电前后有规律的膜电位振荡.于较弱的超极化刺激后可产生反跳动作电位.动作电位的幅值不一致.结论:大鼠DRG两类兴奋性神经元各具不同的放电特征.     

大鼠坐骨神经损伤后ATP对背根节神经元兴奋性的影响

目的　应用膜片钳全细胞记录技术 ,探讨ATP对坐骨神经损伤所引起的背根节神经元兴奋性的影响。方法　Wistar大鼠分为对照组和损伤组 ,损伤组建立大鼠坐骨神经离断模型 ,采用酶加机械分离方法急性分离背根节神经元 ,应用膜片钳全细胞记录技术测定神经元被动膜电特性 ,观察坐骨神经损伤后背根节神经元兴奋性的变化及ATP对其作用的影响。结果　与对照组比较 ,坐骨神经损伤后 1、10、10 0 μmol LATP引起神经元产生动作电位的去极化反应上升幅度比率分别为 45 8%、187%、75 %(P <0 0 1)。结论　坐骨神经损伤后背根节神经元兴奋性提高 ,ATP受体对ATP反应敏感性增强     

嗅觉神经元凋亡及其与嗅觉障碍关系的研究进展

凋亡是一种不同于坏死的细胞死亡方式。国外近10年来的研究表明：嗅觉神经元在很多种情况下都存在凋亡，凋亡与嗅觉障碍关系密切。随着凋亡研究以及嗅觉神经元凋亡研究的不断深入，可用综合手段干预凋亡的启动或中间环节，使嗅觉神经元细胞的凋亡减少，神经元再生增加，从而有利于治疗与嗅觉障碍相关的疾病。     

大鼠坐骨神经损伤后DRG神经元P2X3受体表达的变化

目的 应用免疫组织化学技术,探讨大鼠坐骨神经损伤后不同时间段L4～L5节段DRG神经元P2X3受体表达的变化.方法 实验动物分为对照组、损伤2d组和损伤7d组,分别建立大鼠坐骨神经离断模型,在2d、7d后按照组化方法常规取材、切片、染色,观察坐骨神经损伤后不同时间段DRG神经元P2X3受体表达的变化.结果 对照组、损伤2d组、损伤7d组DRG神经元P2X3受体阳性神经元百分比率分别为31.73%、35.26%、42.93%.坐骨神经损伤2d后DRG神经元P2X3受体表达差异无统计学意义(P＞0.05);而坐骨神经损伤7d后DRG神经元P2X3受体表达差异有统计学意义(P＜0.05).结论 坐骨神经损伤后不同时间段DRG神经元P2X3受体表达发生了不同的变化.     

Effects of olfactory ensheathing cells on hydrogen peroxide- induced apoptosis in cultured dorsal root ganglion neurons

Background Olfactory ensheathing cells （OECs） can promote many kinds of neuron growth and axonal extension. The aim of the study was to investigate the effects of co-culturing with OECs on neuron apoptosis in vitro. Methods Apoptosis was induced by treatment of cultured dorsal root ganglion neurons with 1 mmol/L hydrogen peroxide （H2O2）. Cells were randomly arranged into the following treatment groups. In group 1, OECs at different density （10^4/ml to 8×10^5/ml） were added immediately after H2O2 treatment and cells were co-cultured for 24 hours. In group 2, OECs were added at different time points （0, 4, 8, 12 and 24 hours） after H2O2 treatment. Apoptotic cell death was determined by Hoechst 33258 staining and flow cytometry （FCM）. Cell viability was determined by using methyl thiazoleterazolium （MTT） assays. Results The results showed in the Hoechest 33258 staining, FCM and MTT that OECs have both the density-dependent protection and time-dependent protection on neuron apoptosis. The apoptosis decreased and the dorsal root ganglion neuron viability increased, when the density of OECs was increased in co-culture groups. But further increasing OEC density above 2×10^5/ml （i.e. 8×10^5/ml） failed to exert additional protection. As the interval between adding H2O2 and adding OECs was increased, the amounts of apoptosis cells were also increased. When OECs were added 24 hours after H2O2, no significant protection was observed. Conclusion These results indicated that OECs could protect dorsal root ganglion neurons from apoptosis induced by H2O2 in a density- and time-dependent manner.     

炎性痛大鼠脊髓和背根节P2X_3受体的表达变化

目的观察足底皮下注射角叉菜胶致炎后大鼠行为学及脊髓背角和背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)P2X3受体表达的变化。方法通过热辐射刺激法及von Frey纤维丝测定大鼠痛阈,应用免疫组化技术观察足底皮下注射角叉菜胶后不同时间其相应节段(L4～L6)脊髓及背根神经节P2X3受体表达的变化。结果足底皮下注射角叉菜胶后动物出现热痛敏和机械性痛敏,热痛阈和机械痛阈均下降,于12 h达最低,72 h后恢复至正常水平。免疫组化显示相应节段(L4～L6)脊髓背角P2X3受体免疫反应在注射角叉菜胶24 h后明显增强(P<0.01),72 h表达强度最高,168 h恢复至正常,并且相应节段背根神经节P2X3受体阳性神经元数12 h开始明显增加(P<0.01),持续至72 h,168 h恢复至正常。结论角叉菜胶所致炎性痛大鼠,脊髓背角和背根神经节P2X3受体活化,表达明显上调,表明P2X3受体在炎性痛的发生、发展中起重要作用。     

Noradrenaline depolarization and hyperpolarization mediated by alpha-adrenergic receptors in the soma of dorsal root ganglion neurons

Summary Intracellular recordings were made on perfused preparation isolated from toad dorsal root ganglion (DRG). Of the 51 neurones examined, 46 were of type A, and the remaining 5 of type C cell. The resting membrane potential of these two types of cells was ™60.06±1.30 mV ( ±SE). When the preparations were superfused with noradrenaline (NA; 10⁻⁴ ™ 10⁻³M), the changes of Rp were as follows: 1) hyperpolarization, with amplitude of 8.38 ± 1.42mV ( ±SE; 20/48); 2) depolarization, with amplitude of 9.39±1.24mv ( ±SE; 23/48); 3) no effect (5/48). The alteration in membrane potential mentioned above could be neither mimicked by application of isoproterenol, nor blocked by propranolol. Therefore, the possibility of the effect being mediated by β-adrenoceptor could be excluded. Application of phenylephrine and clonidine induced depolarization and hyperpolarization of membrane potential respectively, while application of prazosin eand yohimbine blocked depolarization and hyperpolarization response induced by NA, respectively. From the results mentioned above, it may be concluded that depolarization and hyperpolarization induced by NA are mediated by α₁- and α₂-adrenoceptors on the soma of DRG neurones respectively.     

NOV在嗅鞘细胞中的表达及活性检测

目的检测肾母细胞瘤过度表达基因(nephroblastoma overexpressed gene,nov)所编码产物(NOV蛋白)转染嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)后在OECs中的表达以及活性.方法本研究用nov转染原代培养大鼠OECs,用G418筛选,经过Western blot检测c-myc-NOV的表达以及通过背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)与NOV转染后OECs联合培养来对表达的nov活性进行鉴定.结果①Western-blot结果显示,转染了NOVcDNA的OECs总蛋白c-Myc抗体检测可见约28×103条带,即c-myc-NOV融合蛋白.未转染质粒的OECs总蛋白做对照,结果为阴性,无条带出现.②与nov修饰的OECs联合培养DRG有许多DRG细胞向外迁移,细胞折光性强,突起较长而纤细,并形成复杂的网络.未修饰的OECs组只有少量的细胞迁移和突起生长,细胞迁移和突起生长都很局限.空白对照组DRG仅有细胞迁移.结论nov转染OECs后,并能促进与OECs联合培养的DRG细胞的迁移生长,表明产生了具有促神经细胞生长活性的蛋白.     

Ionic basis of noradrenaline depolarization and hyperpolarization in toad dorsal root ganglia neurones

Summary The membrane conductance and reversal potential were estimated for neurones in toad dorsal root ganglia with intracellular recording technique during depolarization or hyperpolarization induced by noradrenaline (NA). The effects of blocking agents for potassium or calcium ion current on NA-induced membrane potential responses were observed as well. The NA depolarization was accompanied by a 32.6% decrease of membrane conductance. In a few neurones, the membrane conductance showed an initial increase and a following decrease. The NA hyperpolarization was associated with an increase of membrane conductance by 16.2%. The mean reversal potential of NA depolarization was -88.5 ± 0.9mV. The NA hyperpolarization responses were nullified at -89 to -92 mV of membrane potential. TEA superfusion enhanced NA depolarization amplitude by 73.7 ± 11.9% and depressed NA hyperpolarization amplitude by 40.5%. CsCl (intracelluar injection) increased phenylephrine depolarization by 34.5 %. MnCl₂ superfusion decreased the amplitudes of NA depolarization by 50.5 ± 9.9%, and of NA hyperpolarizalion by 89.5±4.9% respectively. The results suggest that depolarization or hyperpolarization induced by NA might be mediated by the alteration of K or Ca channels.     

隐神经部分结扎大鼠背根神经节P2X3受体表达的变化

目的观察隐神经部分结扎（saphenous partial ligation,SPL）大鼠背根神经节P2X3受体表达的改变。方法麻醉下。制备大鼠SPL模型;测定SPL大鼠机械异常性疼痛和热痛敏的变化;应用免疫组化技术观察SPL大鼠损伤相应节段（L3、L4）的背根神经节P2X3受体表达的变化。结果SPL大鼠可产生热痛敏和机械异常性疼痛;SPL术后第7、14d,损伤同侧的L3、L4节段背根节P2X3免疫阳性神经元数量明显增加。结论SPL是一种适合于病理性神经痛机制研究的模型,SPL可导致损伤同侧相应节段的背根节神经元P2X,受体表达增加。     

福尔马林足底炎性疼痛大鼠模型的建立及其背根神经节辣椒素受体表达水平

目的 评价福尔马林足底炎性疼痛大鼠模型的疼痛行为学表现,并对该模型大鼠背根神经节辣椒素受体表达水平进行分析.方法 SD大鼠24只,随机分为2组,即对照组（n=12）及福尔马林模型组（n=12）.对照组不予处理,福尔马林模型组于左后足底注射5％福尔马林0.1 mL,观察造模后大鼠疼痛行为学反应,并以Dubuisson评分方法进行记录比较;2组大鼠在指定时间点取出L3-6节段背根神经节,运用RT-PCR、蛋白质印迹（Western blot）检测辣椒素受体在大鼠背根神经节中的表达水平.结果 福尔马林模型组大鼠呈典型的双相伤害性行为反应,大鼠疼痛反应120 min内积分在5～1,对照组无疼痛反应.福尔马林模型组大鼠背根神经节辣椒素受体表达水平显著增加,与对照组比较有显著性差异（P＜0.05）.结论 福尔马林足底炎性疼痛大鼠模型可以产生持续的、可信的痛觉过敏,并诱导大鼠背根神经节辣椒素受体表达水平增加,是研究组织损伤诱发炎性疼痛机制的较佳模型选择.     

鸡胚背根神经节感觉神经元体外培养的聚集作用

体外培养鸡胚背根神经节感觉神经元时观察到，分散的神经元细胞具有显著的重新聚集倾向，１０％血清或０．５％牛血清白蛋可以防止细胞的重新聚集。背根神经节感觉神经元聚集倾向的机制尚不清楚，可能与神经元细胞上Ｔｒｋ受体的Ｉｇ样结构域有关