锥兰联合茜素红染色证实保存后的兔角膜内皮细胞活性

我们应用锥兰联合茜素红染色证实保存后的兔角膜内皮细胞活性。我们随机的将离体的新西兰白兔眼球分为四组，每组５只。将房水抽空，随即前房内注入Ｃ３Ｆ８（全氟乙烷，惰性气体）气体，于湿房４℃条件下分别保存５，７，１０，１４天，然后取下带巩膜环的角膜片，内皮面向上放在角膜容器内，将０．２５％锥兰溶液滴于内皮面，１分半钟后将染料洗净，再将０．２％的茜素红溶液滴于内皮面，染色１分半钟，将染料洗净，将角膜片放于２     

从开矿和超微结构对干燥保存角膜内皮细胞活性的评价

为从形态和超微结构上观察干燥保存角膜内皮细胞是具有活性，应用０．２％茜素红和０．２５％台寺对干燥保存不同时间的兔、猴和人角膜内皮细胞分别进行活性染色，并与正常新鲜才作对照。同时，在电镜下对干燥保存角膜及其新鲜标本进行超微结构观察。结果，新鲜角膜六角形细胞边界清楚，核呈淡蓝色；干燥保存角膜，六角形细胞边界不清，但核的染色及分布密度一新鲜者几无区别。电镜下，干燥保存角肛六角形镶嵌状细胞边界看不清，但     

应用全自动角膜内皮细胞分析仪对保存兔角膜内皮细胞定量研究

目的研究保存的兔角膜内皮细胞活性四项定量指标的变化.方法应用非接触式眼库镜及计算机角膜内皮细胞形态定量分析系统对42只(84片)实验兔角膜内皮细胞进行四项指标(平均细胞面积、细胞密度、六棱细胞比率、变异系数)定量分析,并同时检测内皮细胞活性率,其结果进行对比研究.结果改良K3液组与K液对照组保存5天时,四项指标两组无显著性差异(P＞0.05),保存7、10天时,四项指标两组有显著性差异(P＜0.05).改良K3液组及K液组分别与正常兔组进行比较改良K液组在保存10天时,四项指标与正常兔组差异有显著性(P＜0.05).K液对照组在保存7、10天时,四项指标与正常兔组差异有显著性(P＜0.05).改良K3液组在保存10天时,内皮细胞活性率在93.36±1.96%,而四项指标与正常兔组差异已有显著性.K液对照组在保存7、10天时,内皮细胞活性率分别为90.84±1.9%,79.8±4.48%,四项指标均与正常兔组差异有显著性.结论完整的评价角膜植片的活性,单纯依靠既往的内皮细胞活性率测定是不全面的,在有条件的情况下应同时结合四项定量指标进行综合评价,才能确保供体角膜片的质量.     

改良Optisol角膜保存液保存兔角膜内皮细胞超微结构的观察

为提高角膜移植供体质量，我院自1996年起对Optisol保存液进行研究，对其成分进行改良称改良Optisol保存液，并对其保存兔角膜内皮细胞的超微结构进行观察。现总结如下。     

不同保存方法对角膜内皮细胞活性的影响

目的:探索简易安全的中长期保存供体角膜方法,评价不同保存方法保存后角膜内皮细胞活性,为临床提供优质角膜材料。方法:建立简易中期保存液,深低温保存法保存大鼠角膜。将30只鼠眼随即分为3组。分别为湿房保存,中期保存液和深低温保存。采用活性染色对角膜内皮细胞进行评价。判定3种方法保存的角膜内皮细胞的活性状态。结果:使用中期保存液和深低温保存后复温的角膜植片内皮细胞密度和活性率与湿房保存组比较差异无显著性(湿房组细胞密度个/mm2为2729.5±158.0,ESR%为88.9±3.5;中期保存组分别为2646.8±217.2和86.9±2.7;深低温组分别为2706.2±184和287.3±3.3,P>0.05)。结论:简易中期保存液和深低温保存后角膜具有较好的内皮细胞活性和临床应用价值。     

器官培养法保存角膜对角膜内皮细胞活性的影响

成功的角膜保存方法应能很好地维持角膜内皮细胞的活性.测定角膜内皮细胞的活性是器官培养保存角膜中最为重要的环节之一.本文总结了常用的角膜内皮细胞观察方法以及现阶段对其凋亡的研究,分析了保存液中主要成分、不同脱水剂以及保存时间对角膜内皮细胞活性的影响.     

从形态和超微结构对干燥保存角膜内皮细胞活性的评价

为从形态和超微结构上观察干燥保存角膜内皮细胞是否具有活性，应用０．２％茜素红和０．２５％台盼兰对干燥保存不同时间的兔、猴和人角膜内皮细胞分别进行活性染色，并与正常新鲜者作对照。同时，在电镜下对干燥保存角膜及其新鲜标本进行超微结构观察。结果，新鲜角膜六角形细胞边界清楚，核呈淡蓝色；干燥保存角膜，六角形细胞边界不清，但核的染色及分布密度与新鲜者几无区别。电镜下，干燥保存角膜六角形镶嵌状细胞边界看不到，细胞间连接处有空泡，但细胞轮廓可见；核染色质有皱缩，但无核溶解现象。胞浆内有空泡，但仍有细胞器存在；人的细胞膜上还可看到微绒毛。结论：干燥保存角膜无活性特征虽然明显，但也存在有活性的标志。     

远程投送对中期保存兔角膜内皮细胞的影响

目的:探讨模拟运输状态下机械振动对中期保存角膜内皮细胞(CEC)活性的影响.方法:DX中期保存液保存兔角膜片7d,实验室用摇床模拟远程运输环境,按作用不同时间、不同振动强度进行分组,分别进行CEC活性染色和CEC酶组织化学染色,对比不同组间模拟运输对角膜内皮的影响.结果:实验条件下观察指标并不随振动强度和时间变化,组间各项指标差异无显著性.结论:实验室模拟远程投送对中期保存兔CEC无明显影响.     

应用跨角膜内皮细胞膜电位评价角膜保存液的保存效果

目的角膜透明性的维持决定于角膜内皮细胞的功能，内皮细胞膜上的钠泵不断地进行着离子转运，从而维持角膜的正常水合状态，这种由离子转运所产生的电位差（跨角膜内皮细胞膜电位）直接反映着角膜内皮细胞的功能状态。本研究通过测定跨角膜内皮细胞膜电位评价角膜保存液的保存效果。方法使用Ｕｓｓｉｎｇ灌流小室分别测定了新鲜兔去上皮角膜片和保存于ＭＫ液、Ｋ液和高钾保存液不同时间的兔去上皮角膜片的跨角膜内皮细胞膜电位。结果新鲜兔角膜跨角膜内皮细胞膜电位值是０．４～０．５±０．１ｍＶ；随着保存时间的延长，３种保存液所保存的角膜片电位值均出现下降，二者呈线性关系。当保存至ｄ１２时，高钾保存液所保存的角膜其电位值最接近新鲜角膜。结论高钾保存液维持角膜内皮细胞活性的作用优于ＭＫ液和Ｋ液。     

锥兰联合茜素红活细胞染色法观察角膜中央碱烧伤内皮细胞愈合过程

目的:研究角膜碱烧伤内皮细胞的愈合过程。方法:锥兰联合茜素红内皮细胞染色法对角膜中央碱烧伤内皮细胞形态学变化进行观察。结果:伤后20分钟内皮细胞已破坏。72小时,损伤区的周边内皮细胞变形向创面内迁移。第7天后缺损区大部分范围均可见梭形细胞覆盖。结论:兔碱烧伤损伤区内皮细胞的修复由邻近内皮细胞变形,增殖和移行长入创面内完成,修复的内皮细胞具有纤维细胞特征。眼科学报1999;15:218-220。     

组织粘合剂对兔角膜内皮细胞的影响

组织粘合剂在眼科的应用是治疗学上的一个进展。国外曾系统观察了角膜表面及实质层内使用该类粘合剂后的角膜、前房角等组织学改变，本文进一步观察国产ZA眼胶对角膜内皮细胞形态及密度的影响，以了解其毒副作用，为临床应用提供材料．材料和方法一、材料1．深圳南光医用胶公司产α-氨基丙烯酸正辛脂，商品名ZA医用眼胶。2．纯种日本大耳白家兔15只，体重24kg。3．0．25％锥兰和0．2％pH635菌素红溶液．4刀lymPus光学显微镜。二、方法1．动物模型：30只眼分3组，每组10眼。I组角膜层间涂胶组，兔戊巴比妥的静脉麻醉后在角膜中央剖切4X4m…     

高钾保存液对角膜内皮细胞存活的影响

应用流式细胞仪及细胞活性染料Ｄｉｏ，ＰＩ对高钾角膜保存液保后角膜内皮细胞的存活与Ｋ液进行了对照研究，结果表明：（１）高钾保存液组保存５、７、９、１１天的角膜内皮细胞存活率均高于Ｋ液组（Ｐ〈０．０５），（２）含钾离子浓度在１２．１５ｍＭ的高钾保存液角膜内皮细胞存活高于其它高钾组（Ｐ〈０．０５），提示低温状态下高钾角保存液对延长角膜内皮细胞的存活有一定的作用。     

神经生长因子对兔角膜内皮细胞增殖的影响

目的 探讨神经生长因子（NGF）对角膜内皮细胞增殖的影响。方法 在培养兔角膜内皮细胞的培养液中分别添加5U／ml,50U／ml和500u/ml的NGF,加药后第3,7天采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法,在酶标仪上测定570nm波长处的吸光度值来观测细胞增殖情况。结果 与对照组比较,加药后第3,7天,3组的NGF对培养的兔角膜内皮细胞增殖均促进作用（P＜0．01）,且呈剂量依赖性。其中50U／ml组及500U／ml组作用强于5U／ml（P＜0．05）,而50U／ml组和500U／ml组比较作用无差异（P＞0．05）。结论 外源性NGF对培养的兔角膜内皮细胞增殖有明显的促进作用。     

角膜内皮细胞活性的检测

具有活性的角膜内皮细胞是维持角膜生理功能的基本条件，这一连续的单细胞层所担负的物理性屏障和代谢性泵功能是保持角膜透明性方面起着重要的作用。自１９５３年Ｓｔｏｃｋｅｒ首次阐述了角膜内皮细胞的重要性以来，科学工作者就开始了对其深入，不懈地研究。本文试从３个方面，即形态学方法，功能及代谢途径的测定对检测角膜内皮细胞活性的方法进行了综述。     

改良中期保存法角膜内皮细胞的扫描电镜观察

目的:通过扫描电镜观察抽空房水、前房注入C_3F_8气体全眼球湿房保存角膜不同保存时间角膜内皮的超微结构。方法:兔眼球来源于4只新西兰白兔(即摘取眼球),实验组为右眼,对照组为左眼。实验组(兔眼4只,人眼6只)抽空房水,随即注入等量的C_3F_8气体,充填前房,然后将全眼球置4℃湿房条件下保存。4只兔眼中2只(1只用于实验性同种异体穿透性角膜移植)保存7天,其它2只分别保存10和14天;人眼球3对(6只)均为死后1小时内摘除眼球,经常规湿房保存4～7小时后转入实验组方法保存。分别保存0、3、5、7、10、14天。对照组兔眼球4只,取下带1mm巩膜环的角膜片,置于Optisol营养液中4℃保存,保存时间同实验组。保存后剪下角膜片行扫描电镜检查。结果:兔角膜保存7天内皮细胞只是轻度水肿,10及14天内皮细胞形态有改变,细胞表面微绒毛近消失,有少部分细胞溶解。人角膜保存7天内内皮细胞结构无明显改变,只是细胞增大,随着保存时间延长,内皮细胞形态及结构均有不同的改变。结论:此法保存7天的角膜内皮结构无明显改变。眼科学报 1995;11:186—188。     

模拟远程投送对甘油长期冷冻保存兔角膜内皮细胞的影响

目的:探讨在实验室模拟远程运输状态下机械振动对改良后甘油长期保存兔角膜内皮细胞(CEC)活性的影响。方法:通过改良后的甘油保存角膜的方法,实验室中保存兔角膜片3mo,实验室用摇床模拟远程运输环境,结合实际按不同时间、不同振动强度进行分组,分别进行CEC活性染色并行实验性PKP术,对比各组间模拟运输对角膜内皮的影响。结果:实验条件下观察指标并不随振动强度和时间变化,组间各项指标差异无显著性。结论:实验室模拟远程投送对甘油长期保存兔角膜的CEC无显著性影响。     

保存兔角膜内皮细胞形态学的研究

保存不同时间的兔角膜内皮细胞,SEM:六角形边界不清,仅可见细胞轮廓,细胞有水肿,细胞间连接处有空泡。TEM:核膜尚完整,胞浆内有空泡,还有细胞器存在。术后48天及11个月植片,可见六角形边界的内皮细胞,呈镶嵌型排列,细胞核膜完整,细胞器丰富。提示:保存角膜内皮细胞形态学上的改变在活体房水中的再水合作用或培育下是可以恢复的。     

高糖对兔角膜内皮细胞的形态学影响

目的：研究高糖环境下兔角膜内皮细胞形态学的变化。方法：用细胞培养的方法模拟体内高糖环境,原代培养兔角膜内皮细胞,用倒置相差显微镜和扫描电镜对高糖组及地照组进行形态学观察及分析比较。结果：高糖组角膜内皮细胞出现肿胀、六边形细胞比例减少、细胞间隙增大、细胞表面出现裂纹、微绒毛消失、细胞核皱缩等一系列的形态学改变,且这种改变程序与葡萄糖浓度基本呈正相关。结论：高糖对角膜内皮细胞存在影响,提示糖尿病病人角膜内皮细胞的修复和代偿能力下降,故当糖尿病病人进行眼部手术或存在眼部病变、损伤时,注意保护角膜内皮细胞非常重要。     

EDTA对兔角膜内皮细胞增殖的影响

目的 观察不同浓度的EDTA对免角膜内皮细胞(corneal endothelial cells,CECs)增殖的影响.方法 采取揭取角膜后弹力层联合酶消化法分离培养兔CECs;分别用0.5 mmol·L-1、2.5 mmol·L-1、5.0 mmol·L-1的EDTA作用于体外培养的免CECs 1h然后于24 h、48 h、72 h、96 h观察不同浓度的EDTA对免CECs的影响.采用CCK-8检测方法测定在450 nm处各吸光度(A值)来判断CECs的增殖状况采用流式细胞检测仪对各组细胞周期进行检测同时采用倒置显微镜观察细胞形态的变化.结果 揭取带内皮细胞的后弹力层联合酶消化法培养的兔CECs可很快贴壁、增殖,并在4～5 d融合为单层 CCK-8检测结果显示0.5 mmol·L-1、2.5 mmol·L-1、5.0 mmol·L-1的EDTA作用后各个时间点均能使CECs的吸光度发生改变,同一时间点0.5 mmol·L-1的EDTA对细胞增殖的作用最为显著,各摩尔浓度的EDTA对兔CECs作用后96h吸光度改变最明显(A值分别为:2.595 2±0.053 0、2.090 4±0.159 2、0.939 1±0.077 2).作用48 h后0.5mmol·L-1组兔CECs的S+C2/M期细胞所占比例(A值为1.292 5±0.018 3)与阴性对照组比较,差异有统计学意义,而2.5mmol·L-1、5.0 mmol·L-1组与阴性对照组(A值为0.921 2±0.084 8)比较,差异均无统计学意义.结论 0.5 mmol·L-1的EDTA作用于兔CECs 1 h后的不同时间均有明显的促进增殖的作用.