新的HCV蛋白酶抑制剂可有效抑制HCV复制

据Medscape．com 5月15日报道（原载Gastroenterology 2007；132：1270—1278；1611—1615），一种新的口服HCV蛋白酶抑制剂SCH 503034耐受性好，而且可能会有效地抑制丙型肝炎病毒（HCV）基因型-1，采用干扰素治疗HCV基因Ⅰ型效果不佳。SCH 503034是一种特异性的NS3蛋白酶抑制剂，NS3蛋白酶在HCV复制中起非常重要的作用。[第一段]     

HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶和NS5B RNA聚合酶抑制剂的临床研究进展

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus.HCV)NS3/4A丝氨酸蛋白酶和NSSB RNA依赖的RNA聚合酶是病毒蛋白前体加工成熟和复制过程中十分重要的两个酶,是抗HCV治疗的理想靶点.近年来,关于HCV NS3/4A蛋白酶和NSSBRNA聚合酶抑制剂的研究是抗HCV研究最为活跃的方向,本文综述了他们在临床试验中的最新研究进展.     

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3致肝癌机制的研究进展

大量研究显示丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)持续感染肝细胞能导致肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC),但其致癌机制目前还不十分清楚.HCV是一种RNA病毒,其基因组不能整合到宿主染色体中引起基因突变,可能是通过其表达的蛋白质引起细胞转化.由于HCV NS3含有多种蛋白酶活性,因而推测HCV NS3在肝细胞癌的形成过程中具有重要作用,本文就HCV NS3致癌机制的研究进展作一综述.     

抗HCV药物及其体内外模型研究进展

美国Chiron公司的研究人员Choo等于1989年首次成功地克隆了非肠道传播的非甲非乙型肝炎病毒cDNA,正式将该病毒命名为丙型肝炎病毒(Hepatitis Cvirus,HCV),并建立了测定血清HCV抗体的酶联免疫吸附试验。流行病学研究表明,HCV感染是引起输血后肝炎的最主要病原体,随着HCV诊断技术在献血员筛选中的应用,我国辅血后肝炎的发生率已降低了80％。尽管如此,HCV感染的防治仍将是摆在我们面前的一个十分艰巨的任务,因为除通过输血和血液制品     

四川省丙型肝炎患者HCV基因分型及基线HCV NS5A耐药突变位点分析

目的检测四川省丙型肝炎患者HCV基因分型及HCV NS5A耐药突变位点的分布特征。方法收集2017年-2018年在四川省人民医院确诊的来自四川省的丙型肝炎患者160例,采集外周静脉血标本,使用Sanger测序法鉴定每一样本的HCV基因型及其亚型和HCV NS5A的基因序列。结果 160例丙型肝炎患者共测出1、2、3、6四种基因型和1b、2a、3a、3b、6a、6n六种基因亚型,其中以1b亚型检出率最高,占86.25%(138/160),其次为3b、6a亚型,均各占3.75%(6/160),余下6n型占2.50%(4/160),2a、3a型均各占1.875%(3/160)。在HCV 1b亚型丙型肝炎患者在中,HCV NS5A基因耐药突变检出率为18.84%(26/138),其中以Y93H耐药突变率较高,占17.39%(24/138),其次L31M耐药突变率为1.45%(2/138)。结论分析四川省丙型肝炎患者HCV基因型及HCV NS5A耐药突变位点的分布特点,可为该地区丙型肝炎患者基因型分布及耐药性研究和个体化抗病毒治疗提供指导依据。     

慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞中HCV RNA和NS5抗原的检测

目的 研究丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染外周血个核细胞（ＰＢＭＣ）的情况及其意义。方法 运用非核素原位杂交法（ＮＩＳＨ）和抗生蛋白链菌素－生物素法（ＳＡＢＣ）分别检测２０例慢性丙型肝炎患者ＰＢＭＣ中的ＨＣＶ ＲＮＡ和ＮＳ５抗原。结果 ２０例患者中有８例（４０％）,ＰＢＭＣ中ＨＣＶ ＲＮＡ呈阳性,其中６例（３０％）ＰＢＭＣ中ＮＳ５抗原同时呈阳性。ＨＣＶＲＮＡ主要分布于胞浆中,而ＮＳ５抗原还可以出现在胞膜     

组织蛋白酶B抑制剂对小鼠急性肝功能衰竭的保护作用及机制

目的 探讨组织蛋白酶B抑制剂对小鼠急性肝功能衰竭的保护作用及机制.方法 将雄性昆明种小鼠45只分为对照组、模型组和保护组,每组各15只.模型组和保护组一次性腹腔注射脂多糖/D-氨基半乳糖(LPS/D-GalN),保护组于造模前30 min予组织蛋白酶B抑制剂(CA-074me)腹腔注射,而模型组、对照组分别注射同等体积的0.5％氯化钠溶液作为对照,给药后6h分别取血清、肝组织标本.检测肝功能变化及凝血酶原时间(PT),观察肝脏病理改变,末端转移酶标记技术(TUNEL)检测肝细胞凋亡,免疫组织化学分析细胞色素c表达,RT-PCR检测肝组织中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达.另取75只小鼠按上述方法分组处理,每组25只,比较各组小鼠24 h存活率.统计学处理采用f检验和x2检验.结果 保护组小鼠24 h存活率明显高于模型组分别为76％(19/25)和36％ (9/25)(x2=8.12,P＜0.05);保护组小鼠血清ALT[(568.50±45.68)U/L比(1394.55±78.58) U/L]、AST[(755.16±51.14) U/L比(1 488.72±64.62) U/L]、TBil[ (22.82±2.04)μmol/L比(52.08±4.10) μmol/L]和PT[(14.26±0.32)s比(17.40±0.30)s]水平均明显低于模型组(均P＜0.05);与模型组比较,保护组小鼠肝组织炎性细胞浸润明显减少,肝细胞坏死程度明显减轻,凋亡指数明显下降[(18.4±2.6)％比(30.4±2.8)％,P＜0.05];保护组小鼠肝组织中细胞色素c[(0.19±0.02)比(0.33±0.05)]和Caspase-3 [(0.18±0.03)比(0.34±0.05)]表达水平明显低于模型组(均P＜0.05).结论 CA-074me对小鼠急性肝功能衰竭具有保护作用,可减轻肝细胞炎性反应、坏死和凋亡,降低急性肝功能衰竭的病死率,其机制可能与CA-074me下调细胞色素c和Caspase-3的表达有关.     

不同HCV感染者各区段抗HCV体的反应性及HCV—RNA检测结果分析

利用丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）不同区段抗原的单片段酶免疫（ＥＩＡ）试剂及反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，对不同ＨＣＶ感染者血清不同区段抗ＨＣＶ抗体及丙型肝炎病毒核糖核酸（ＨＣＶ－ＲＮＡ）进行检测。结果显示，慢性为患者各抗体检出率及Ｓ／Ｃｏ（Ｓ为样品光密度值，Ｃｏ为临界值）值均高，肝癌患者各抗体检出率及ＨＣ生率均较低；ＡＬＴ正常而抗ＨＣＶ阳性者各区段抗体阳性率低于急、慢性肝炎患者，而其ＨＣ 性率     

丙型肝炎病毒核酸疫苗NV-HC/NS3的免疫预防和治疗效应研究

目的 研究丙型肝炎病毒（HCV）核酸疫苗NV－HC／NS3接种BALB／c小鼠后,对相应靶抗原攻击的特异性免疫预防和治疗效应。方法 以HCV核酸疫苗NV－HC／NS3接种BALB/c小鼠,分别在疫苗接种前后种植能表达靶抗原的BALB／c小鼠骨髓瘤细胞株SP2／0,观察疫苗接种对肿瘤生长及小鼠寿命的影响。结果 种植肿瘤前先接种NV－HC／NS3的小鼠,荷瘤阻抑率达40％;长出肿瘤的小鼠与未接种疫苗的对照组小鼠相比,生存时间延长,生存率提高。先荷瘤后免疫的小鼠,核酸疫苗的接种则能提高小鼠的生存率。结论 NV－HC／NS3能诱导小鼠产生针对靶抗原的特异性免疫应答,发挥预防甚至治疗效应。     

Mechanisms of hepatitis C virus NS3 proteinase inhibitors

The NS3 serine proteinase is regarded as one of the preferred targets for the development of therapeutic agents against hepatitis C virus (HCV). Possible mechanisms of NS3 inhibitors include: (i) interference with the activation of the enzyme by its NS4A cofactor; (ii) binding to the structural zinc site; and (iii) binding to the active site. These mechanisms have been explored in detail by structural analysis of the enzyme.
(i) The NS4A cofactor binds to the amino-terminal β-barrel domain of the NS3 proteinase bringing about several conformational changes that result in enzyme activation. The interaction betweeen NS3 and NS4A involves a very large surface area and therefore it is not a likely target for the development of inhibitors.
(ii) The NS3 proteinase contains a structural zinc binding site. Spectroscopic studies have shown that changes in the conformation of this metal-binding site correlate with changes in the specific activity of the enzyme, and the NS3 proteinase is inhibited by compounds capable of extracting zinc from its native coordination sphere.
(iii) Based on the observation that the NS3 proteinase undergoes inhibition by its cleavage products, potent, active site-directed inhibitors have been generated. Kinetic studies, site-directed mutagenesis, and molecular modelling have been used to characterize the interactions between the NS3 proteinase and its product inhibitors.     

The HCV NS5B nucleoside and non-nucleoside inhibitors

This article introduces one of the most diverse classes of direct-acting antivirals for hepatitis C, the nucleoside and non-nucleoside NS5B polymerase inhibitors. Through a systematic review of the published literature, we describe their structure, mechanism of action, issues with resistance, and clinical effectiveness shown in the latest clinical trials. Direct-acting antiviral combination trials that have already shown some early promising results even in the setting of interferon-sparing antiviral regimens are discussed.     

HIV/HCV合并感染者和HCV单纯感染者NS3/4A蛋白酶、NS5A抑制剂的天然耐药变异分析

目的 通过对抗病毒治疗前HIV/HCV合并感染者和HCV单纯感染者HCV NS3/4A蛋白酶、NS5A抑制剂相关耐药位点进行检测,探讨上述患者天然耐药变异的差异。方法 收集2016年1月—2020年1月在广州医科大学附属市八医院住院或门诊就诊的246例HIV/HCV合并感染者和HCV单纯感染者的血清标本,使用Illumina二代测序平台进行测序,比较已在中国获批准的NS3/4A蛋白酶、NS5A抑制剂相关耐药变异在两组患者的差异,纳入分析的药物包括阿舒瑞韦/达拉他韦（ASV/DCV,基因1b型）,艾尔巴韦/格拉瑞韦（EBR/GZR,基因1b型）和格卡瑞韦/哌仑他韦（GLE/PIB,泛基因型）。符合正态分布的计量资料两组间比较采用t检验,不符合正态分布的计量资料两组间比较采用Mann-Whitney U检验。计数资料两组间比较采用χ²检验或Fisher精确检验。结果 本研究纳入的246例患者的血清样本中,239例（97.2%）成功进行PCR扩增并测序,包括102例HIV/HCV合并感染者和137例HCV单纯感染者。对ASV/DCV和EBR/GZR相关耐药变异分析结果提...     

HCV细胞培养系统研究进展

我国丙型肝炎患病率高,目前临床使用干扰素┼利巴韦林治疗,但仅对50%的HCV基因1型患者有效,因此急需有效的治疗方法。由于HCV在被感染组织和血清中浓度较低,且病毒变异高,目前对HCV机制的研究仍处于初级阶段,至今尚未建立可靠、稳定的HCV动物模型及感染细胞系统。如能建立一个有效的体外复制系统,对研究HCV的附着、融合、内吞、入胞、复制、释放和发病机制等有重要意义。本文就近年来国内外出现的HCV体外感染细胞系统的研究新进展进行综述,重点对稳定性较好的HCV体外细胞培养模型和HCV假病毒感染颗粒加以阐述。     

Natural prevalence of HCV minority variants that are highly resistant to NS3/4A protease inhibitors

Summary. Minority drug‐resistant hepatitis C virus (HCV) variants may go undetected yet be clinically important. NS3/4A protease resistance substitutions V36A and A156S/T/V were selected in patients treated with protease inhibitors. The aim of this study was to investigate whether these substitutions pre‐existed in HCV infected patients. An allele‐specific PCR protocol that detected the NS3/4A protease resistance substitutions V36A and A156S/T/V was used to determine the prevalence of naturally occurring variants in 45 patients. All patient samples were infected with HCV of genotype 1b and were naïve for pegIFNα/ribavirin treatment. Thirty samples (67%) had at least one HCV PI‐resistant variant. A156T (23, 51%) was detected more frequently than A156V (13, 29%) or A156S (1, 2%). V36A was detected in 12 samples (27%). These results demonstrate the high prevalence of minority drug‐resistant NS3/4 protease resistance substitutions. Our results also demonstrate that allele‐specific PCR can be used to detect minor HCV NS3 protease resistant variants in pretreatment samples and to study in detail the evolution of mutant viruses during targeted antiviral therapy.     

神经氨酸酶抑制剂的研究进展

流感病毒感染所致的急性呼吸道疾病(流感)是一种严重危害人类健康的传染病,在全世界范围流行,患病率和病死率均居高不下.由于流感病毒抗原变异性和特异性的疫苗研制的滞后性,常规的疫苗不能有效地预防流感暴发与流行.因此,抗病毒药物就成为了抗病毒的第一道防线.目前被批准上市的抗病毒药物有M2离子通道阻滞剂和神经氨酸酶抑制剂(neuraminidase inhibitors,NAIs)两大类.M2离子通道阻滞剂不良反应大,且只能防治甲型流感病毒,对乙型流感病毒无效;NAIs可以抑制高致病性的甲型和乙型流感病毒,已成为目前抗病毒药物研究的热点.目前已经上市的NAIs有奥司他韦、扎那米韦和帕拉米韦.本文介绍了NAIs的作用机制、药效学、药动学并着重对NAIs的临床研究进展进行综述.     

Drug resistance against HCV NS3/4A inhibitors is defined by the balance of substrate recognition versus inhibitor binding

Hepatitis C virus infects an estimated 180 million people worldwide, prompting enormous efforts to develop inhibitors targeting the essential NS3/4A protease. Resistance against the most promising protease inhibitors, telaprevir, boceprevir, and ITMN-191, has emerged in clinical trials. In this study, crystal structures of the NS3/4A protease domain reveal that viral substrates bind to the protease active site in a conserved manner defining a consensus volume, or substrate envelope. Mutations that confer the most severe resistance in the clinic occur where the inhibitors protrude from the substrate envelope, as these changes selectively weaken inhibitor binding without compromising the binding of substrates. These findings suggest a general model for predicting the susceptibility of protease inhibitors to resistance: drugs designed to fit within the substrate envelope will be less susceptible to resistance, as mutations affecting inhibitor binding would simultaneously interfere with the recognition of viral substrates.