消癃通闭对小鼠前列腺上皮细胞DNA合成的影响

为了解消癃通闭对前列腺上皮细胞增生的影响，用去势昆明种雄性小鼠，皮下注射丙酸睾酮每天５ｍｇ／ｋｇ，以维持其副性腺的生长发育。消癃通闭灌胃１５天、３０天时，分别经腹注射３ＨＴｄＲ（７４ｋＢｑ／ｇ），２４小时后断髓处死，取前列腺右头叶和腹叶制片，观察前列腺上皮细胞核上标记银盐颗粒。结果显示：３ＨＴｄＲ标记呈不均一性，腺管末梢标记明显。单纯给予丙酸睾酮组标记的腺上皮明显高于其它组，用消癃通闭１５天后标记细胞减少（Ｐ＜００１），但给药３０天后组间标记细胞数无显著性差异。本研究表明：消癃通闭对小鼠前列腺的生长、再生、ＤＮＡ合成有抑制作用，同时说明了前列腺内ＤＮＡ合成局限于腺管末梢，末梢ＤＮＡ的合成待小鼠成熟后，即前列腺发育到一定限度，其合成也就相对停止。     

消癃通闭对小鼠前列腺上皮细胞DNA合成的影响

去势昆明雄性小鼠24只,皮下注的丙酸睾丸素5mg/kg·d~(-1),同时将其分为4组,分别给予高剂量消癃通闭、低剂量消癃通闭、雌二醇及睾丸素。于15天、30天时分别腹腔注射~3H TdR(20uci/g),24小时后处死,取前列腺右头叶和腹叶称重,制成石腊切片进行放射自显影,观察前列腺上皮细胞核上标记银盐颗粒。结果结示~3H TdR标记呈不均一性,腺管末梢标记明显。单纯给予丙酸睾丸素组被标记的腺上皮明显高于其它组。用消癃通闭15天后标记细胞减少,但30天后4组间无明显差异。提示消癃通闭对小鼠前列腺的生长、DNA合成有抑制作用。前列腺内DNA合成局限于腺管末梢,前列腺发育到一定程度,其合成也相对停止。     

消银颗粒联合司库奇尤单抗治疗银屑病的效果

目的 探究消银颗粒联合司库奇尤单抗治疗银屑病的效果。方法 选取2021年2月-2022年8月我院 收治的94例银屑病患者作为研究对象,采用随机数字表法分为观察组和对照组,各47例。对照组采用司库 奇尤单抗治疗,观察组在对照组基础上加用消银颗粒治疗。比较两组疾病状况（PASI评分）、炎症因子水 平以及临床疗效。结果 观察组治疗后头部、上肢、躯干以及下肢症状评分均低于对照组,差异有统计学意 义（P＜0.05）;观察组治疗后IL-17、IL-22水平均低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;观察组治 疗总有效率高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 消银颗粒结合司库奇尤单抗治疗银屑病的 效果良好,可有效降低炎症因子表达,改善患者皮肤症状,继而缓解病情,值得临床应用。     

皮敏消胶囊联合糠酸莫米松乳膏治疗寻常型银屑病的效果

探究皮敏消胶囊联合糠酸莫米松乳膏在寻常型银屑病患者中的应用效果。方法 选取河北省容城县人民医院2022年3月-2023年3月收治的86例寻常型银屑病患者为研究对象,采用随机数字表法分为对照组和研究组,每组43例。对照组采用糠酸莫米松乳膏治疗,研究组采用皮敏消胶囊联合糠酸莫米松乳膏治疗,比较两组银屑病症状改善情况、临床疗效及不良反应发生情况。结果 两组治疗3、5、8周后PASI评分均低于治疗前,且研究组低于对照组,差异有统计学意义（P ＜0.05）;研究组治疗总有效率为95.35%,高于对照组的74.42%,差异有统计学意义（P ＜0.05）;研究组不良反应发生率为2.33%,低于对照组的20.93%,差异有统计学意义（P ＜0.05）。结论 皮敏消胶囊联合糠酸莫米松乳膏治疗寻常型银屑病的效果良好,可有效改善患者的皮损情况,减轻银屑病症状,且不良反应少,应用安全性较高。     

草酸钙结晶肾损伤模型小鼠肾小管上皮细胞转分化的实验研究

目的:研究乙醛酸盐诱导所致草酸钙结晶肾损伤模型小鼠中肾小管上皮细胞转分化的发生情况。方法:选择C57BL/6J小鼠连续腹腔注射乙醛酸盐建立草酸钙结晶肾损伤模型,应用HE染色及冯库萨染色分别观察肾组织结构变化及钙盐沉积情况,并应用免疫荧光双染、Western-blot观察肾小管上皮细胞间充质转分化(epithelial mesenchymal transtion,EMT)的情况。结果:随着连续腹腔注射乙醛酸盐时间的延长,小鼠肾组织HE染色结果显示,近端肾小管管腔逐渐扩张,且肾小管上皮细胞逐渐出现肿胀及变形,基底膜逐渐裸露;冯库萨染色结果显示近端小管腔内黑色钙盐沉积逐渐增加;免疫荧光双染、Western blot结果均显示肾小管上皮标志E-cadherin及Pan-ck逐渐丢失,而间质标志α-SMA及Vimentin的表达则逐渐增加,Western blot检测结果显示随着乙醛酸盐干预的增强,Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(rho associated coiled coil forming protein kinase,ROCKI)表达也逐渐增加,且在干预第3天即达高峰。结论:乙醛酸盐诱导所致草酸钙结晶肾损伤模型早期即出现EMT,启动了肾间质纤维化的进程。     

应用原代培养的小鼠肾小管上皮细胞建立体外模拟缺血再灌注损伤模型

目的 原代培养小鼠肾小管上皮细胞(TEC),建立小鼠TEC体外模拟缺血再灌注(IR)的模型.方法 切取C57BL/6J小鼠肾脏外侧髓质,用Ⅰ型胶原酶消化后进行原代培养,采用免疫组织化学法进行鉴定.将贴壁生长的TEC用石蜡油覆盖模拟缺血过程,60 min后更换全培养基模拟再灌注过程.在更换培养基后不同时间点收集细胞,抽提RNA,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-6 mRNA的表达;在再灌注后24 h收集细胞培养上清液,采用酶联免疫吸附试验检测各细胞因子蛋白的表达.结果 经过原代培养的小鼠TEC呈上皮细胞特有的“铺路石”状,细胞胞浆内高表达细胞骨架蛋白18.与对照组相比,IR组TEC在更换培养基后TNF-α、IL-1β和IL-6的转录水平均明显增高.TNF-α mRNA表达量在更换培养基后0.5h达峰,约为对照组的(24.45±6.51)倍(P＜0.01),随后逐渐下降;在更换培养基后IL-1β mRNA表达量呈逐渐上升的趋势,更换培养基后6h约为对照组的(15.27±4.29)倍(P＜0.05);IL-6 mRNA表达量在更换培养基后3h达峰,约为对照组的(11.19±4.55)倍(P＜0.01).与对照组相比,IR组TEC在更换培养基后24 h,上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6的蛋白表达均明显增高.结论 小鼠肾脏外侧髓质经分离、消化后可获得高纯度的原代培养TEC;应用石蜡油可以成功建立小鼠TEC体外模拟IR的模型.     

人输卵管上皮细胞共培养系统对小鼠胚胎体外系统的影响

为了检测人输卵管上皮细胞对早期胚胎体外分裂与生长的影响，将２１０个小鼠２细胞期胚胎与传代的人输卵管上皮细胞进行共培养，另以１４５个胚胎培养在单纯的培养液中作为对照。共培养的胚胎有８９．０％发育到桑椹胚，８７．１％形成囊胚，而对照组仅为６３．４％和４９．０％（Ｐ〈０．０１）。共培养胚胎发育速度也较对照组快，且发育过程中，共培养胚胎出现碎片及不规则分裂率明显低于对照组。提示人输卵管上皮细胞共培养系统可     

皮敏消胶囊联合糠酸莫米松乳膏治疗寻常型银屑病的效果

的 探讨对寻常型银屑病患者采用皮敏消胶囊联合糠酸莫米松乳膏治疗的临床效果。方法 选取公安县中医医院皮肤科2018年8月-2022年7月收治的100例寻常型银屑病患者为研究对象,通过随机数字表法分为对照组和观察组,每组50例。对照组采用糠酸莫米松乳膏治疗,观察组采用皮敏消胶囊联合糠酸莫米松乳膏治疗,比较两组中医症状积分、皮损严重程度、炎性因子水平及不良反应发生情况。结果 观察组治疗后红斑瘙痒、烦躁乏力、舌红苔白评分及PASI评分均低于对照组（P＜0.05）;观察组治疗后IL-10、IL-17水平均低于对照组（P＜0.05）;观察组不良反应发生率为2.00%,低于对照组的18.00%（P＜0.05）。结论 皮敏消胶囊联合糠酸莫米松乳膏治疗寻常型银屑病的效果良好,不仅能够有效改善患者的临床症状,减轻其皮损严重程度,还能有效抑制炎性因子水平,降低不良反应的发生几率。     

法舒地尔对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的 观察法舒地尔对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响并探讨其机制。 方法 将实验性Wistar大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组、法舒地尔治疗组。3个月后处死动物,PAS染色法观察肾小球病理变化,Masson染色法观察肾间质病理变化;免疫组化观察肾脏皮质ROCKⅠ、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、E钙黏蛋白（E-cadherin）的变化和β连环蛋白（β-catenin)的细胞定位改变;Western印迹法观察肾脏皮质p-MYPT1、α-SMA、E-cadherin、胞膜β-catenin蛋白的变化;实时定量PCR法观察ROCKⅠ、E-cadherin和总β-catenin的mRNA变化。 结果 法舒地尔治疗可改善肾间质纤维化状况。与正常对照组相比,糖尿病组大鼠肾皮质内p-MYPT1、α-SMA蛋白表达增强（均P < 0.01）;E-cadherin、胞膜β-catenin的蛋白表达减弱（均P < 0.01）;ROCK1、总β-catenin mRNA表达增强（均P < 0.01）;E-cadherin mRNA表达减弱（P < 0.01）。与糖尿病组相比,治疗组p-MYPT1、α-SMA蛋白表达减弱 （均P < 0.01）;E-cadherin、胞膜β-catenin的蛋白表达增强（均P < 0.05）;ROCK1、β-catenin mRNA表达减弱（均P < 0.01）;E-cadherin mRNA表达增强（P < 0.01）。 结论 法舒地尔可能通过抑制Rho激酶活性减轻糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转分化和肾间质纤维化,该作用可能与法舒地尔恢复肾小管上皮细胞的黏附特性与紧密连接复合体有关。     

消癃通闭对大鼠前列腺上皮细胞凋亡的影响

目的研究中药消癃通闭对前列腺上皮细胞凋亡的影响。方法将大鼠分为消癃通闭组、保列治组、去势组、空白组,采用免疫组化原位末端标记染色法,分别在实验后第7、14、21天时,检测各组大鼠前列腺上皮细胞的凋亡百分率。结果消癃通闭组及保列治组在实验第7天时,凋亡百分率达到高峰,分别为9．27％、5．65％,第14天时稍减少,第21天时有所恢复。去势组在第7天时凋亡即出现,到第14天时凋亡百分率达到高峰,与其它组相比差异显。结论中药消癃通闭可在较短时间促进大鼠前列腺上皮细胞凋亡,为该药治疗前列腺增生提供了理论依据。     

人输卵管上皮细胞共培养系统对小鼠胚胎体外发育的影响

为了检测人输卵管上皮细胞对早期胚胎体外分裂与生长的影响，将２１０个小鼠２细胞期胚胎与传代的人输卵管上皮细胞进行共培养，另以１４５个胚胎培养在单纯的培养液中作为对照。共培养的胚胎有８９．０％发育到桑椹胚，８７．１％形成囊胚，而对照组仅为６３．４％和４９．０％（Ｐ＜０．０１）。共培养胚胎发育速度也较对照组快，且发育过程中，共培养胚胎出现碎片及不规则分裂率明显低于对照组。提示人输卵管上皮细胞共培养系统可以促进胚胎体外发育，能在体外获得数量较多的高质量胚胎。     

消癃通闭对大鼠前列腺上皮细胞DNA合成的影响

为了进一步了解中药消癃通闭对前列腺上皮细胞增生的影响,用去势wistar大鼠,每天皮下注射丙酸睾酮5mg/kg,以维持其副性腺的发育。消癃通闭2g/kg灌胃20天时断头处死,取前列腺相同部位腹叶,匀浆,PI染色,采用流式细胞技术对大鼠前列腺上皮细胞DNA合成进行定量检测,结果显示:消癃通闭可抑制G2+M期DNA的合成(P<0.005),即该药可能抑制了前列腺上皮细胞的有丝分裂。     

消癃通闭对大鼠前列腺上皮细胞分裂周期的影响

目的：进一步了解中药消癃通闭对前列腺上皮细胞增殖的影响。方法：用去势Ｗｉｓｔａｒ大鼠，每天皮下注射丙酸睾酮，消癃通闭每天灌胃，于２０ｄ时断头处死，取前列腺各叶称重及测体积，取相同部位腹叶，采用流式细胞技术对大鼠前列腺上皮细胞分裂周期进行定量检测。结果：消癃通闭高剂量组的前列腺体积、腺重量及腺重与体重的比值均明显小于睾酮组，Ｐ＜００１；前列腺上皮细胞分裂Ｇ２＋Ｍ期所占比例亦明显长于睾酮组，Ｐ＜０００５。结论：消癃通闭可抑制前列腺上皮细胞的有丝分裂，从而抑制了前列腺细胞的生长     

氧化应激对胰腺上皮细胞骨架的影响及其机制

目的 应用过氧化氢模拟体内氧化应激反应,观察活性氧对三维培养过程中胰腺上皮细胞形态变化及相关信号分子的表达.方法 应用Matrigel构建胰腺上皮细胞的三维培养模型,用浓度分别为l或200 μmol/L的H2O2处理15 min,然后分别于15 min、1h和4h后观察细胞形态的变化;上述细胞经过免疫荧光染色后,用激光共聚焦显微镜观察细胞骨架的变化;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上述细胞核提取物中的核因子(NF)-κB含量变化.结果200 μmol/L H2O2可以在15 min后诱导细胞收缩,1h后细胞形态有所恢复,但4h后细胞收缩更加明显.免疫荧光染色发现,细胞内微丝和微管结构在H2 O2处理后快速消失,但1h后恢复正常结构.4h后,细胞骨架纤维变得模糊并最终解体.1 μmol/L H2O2对胰腺上皮细胞的形态和细胞骨架未造成任何影响.随着时间的延长,200 μmol/L过氧化氢处理组NF-κB的活性逐渐升高,而1μmol/L过氧化氢处理组NF-κB的活性变化不大.结论 氧化应激可以诱导胰腺上皮细胞早期发生可逆性的细胞收缩和细胞骨架去极化现象,并且与NF-κB的活性升高相关.     

小牛血清及维生素对小鼠生精上皮细胞冻存的影响

目的 :探讨维生素C(VC)、维生素E(VE)及小牛血清 (NBS)对冻存小鼠生精上皮细胞的影响。　方法 :在DMEM培养液 10 %二甲基亚砜 (DMSO)的基础上 ,分别添加 0～ 2 0 %NBS ,以及在DMEM培养液 10 %DMSO 10 %NBS的基础上 ,分别添加 15 0 μg/mlVC及 5 0 μg/mlVE,冷冻保存 7d龄小鼠生精上皮细胞 ,37℃水浴复苏 ,锥虫蓝染色检查细胞复苏率。　结果 :冻存液中分别含 0、5 %、10 %及 2 0 %NBS时 ,细胞复苏率分别为 83.4 %、84 .7%、85 .7%及 83.6 % ,各复苏率之间差异无显著性 (P >0 .0 5 )。冻存液中分别含 15 0 μg/mlVC及 5 0 μg/mlVE时 ,细胞复苏率分别为 88.0 %及 82 .9% ,其复苏率与未加维生素的冻存液组 (85 .7% )相比差异无显著性 (P >0 .0 5 )。　结论 :在冻存液中添加不同浓度的NBS及添加抗氧化剂VC或VE,对小鼠生精上皮单细胞冻存没有明显的保护作用 ,不能显著提高细胞复苏率     

上皮细胞条件培养液对BMSCs分化的影响

目的 探讨上皮细胞条件培养液(epithelial cell conditioned medium,ECCM)体外诱导犬BMSCs向上皮细胞分化的可行性.方法 成年健康雄性比格犬1只,体重10 kg.于犬髂后上棘采用骨髓穿刺法取骨髓5 mL,分离培养BMSCs.取犬口腔黏膜下组织,剪成约4 mm×4 mm大小,制备ECCM.取第2代BMSCs以2×104个/孔细胞密度接种,实验组于ECCM中培养,对照组于低糖DMEM完全培养基中培养.观察两组细胞形态特征,MTT法绘制生长曲线,诱导培养21 d免疫组织化学染色鉴定上皮细胞特异性标志物--细胞角蛋白19(cytokeratinl9,CK-19)和细胞角蛋白AE1/AE3,透射电镜观察细胞超微结构.结果 倒置相差显微镜下见两组细胞均呈长梭形,均匀分布,折光性较强,增殖迅速.两组细胞生长曲线均呈"S"形,实验组生长曲线较对照组右移,提示ECCM对细胞增殖有抑制作用.实验组CK-19和细胞角蛋白AE1/AE3免疫组织化学染色均呈阳性反应,对照组呈阴性.透射电镜下实验组细胞胞浆内可见紧密连接.结论 ECCM体外有诱导同种BMSCs向上皮细胞分化的作用.     

人输卵管上皮细胞培养液对人精子活力的影响

哺乳动物输卵管是精子获能、受精和早期胚胎发育的重要场所，并通过其分泌的物质协助完成上述过程。为了解其对精子活力的影响，我们观察了月经中期人输卵管上皮细胞培养液和管腔液对人精子活动率、平均运动速度、高活力精子比例及活动指数的影响。结果在共育不同时间后对上述指标均有显著促进作用，输卵管上皮细胞培养液的作用强于管腔液。说明人输卵管上皮细胞培养液可提高人精子活动能力和生存能力。     

结缔组织生长因子对人肾小管上皮细胞转分化影响的研究

目的 探讨结缔组织生长因子(CTGF)在人类肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法 将体外培养的人近曲小管上皮细胞(HKC)分为3组:(1)对照组;(2)小剂量CTGF组:培养液中加入重组人CTGF(rhCTGF),终浓度为2.5ng/ml;(3)大剂量CTGF组:rhCTGF终浓度为5.0ng/ml。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定HKCα-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤连蛋白(FN)mRNA水平的变化。间接免疫荧光方法检测HKC α-SMA的表达。流式细胞仪检测α-SMA阳性细胞百分率。ELISA方法测定培养液上清中FN的浓度。结果 不同浓度rhCTGF作用于HKC 24h后,α-SMA和FN mRNA水平显著升高(P<0.01)。刺激48h后,胞浆α-SMA蛋白表达明显增强,流式细胞仪测得3组细胞α-SMA阳性百分率依次为:2.4%、38.9%、65.5%(P<0.01);ELISA结果显示,rhCTGF能促进HKC分泌FN,且呈剂量依赖性(P<0.01)。结论 CTGF在体外能刺激肾小管上皮细胞向肌成纤维细胞(MyoF)转分化,并促进其合成细胞外基质(ECM)。     

黄芪甲苷对肾小管上皮细胞诱导单核细胞分化的影响

目的本研究通过体外细胞共培养,观察肾小管上皮细胞对单核细胞分化影响及中药组分黄芪甲苷对单核细胞分化的影响。方法体外建立单核细胞(U937)与人近端肾小管上皮细胞(human proximal tubular epithelial cell line,HK-2)共培养系统,实验分3组:对照组(U937细胞组),实验组(U937+HK-2细胞组),干预组(U937+HK-2细胞+黄芪甲苷组)。观察黄芪甲苷对HK-2细胞诱导U937细胞分化及其Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)的表达以及黄芪甲苷对U937细胞TBK/IRF3信号通路的影响。应用Real-time PCR观察黄芪甲苷对HK-2细胞诱导的U937细胞分化影响,应用流式细胞仪及WR观察U937细胞表面Toll样受体4(Toll-like receptors4,TLR-4)的表达,应用Real-time PCR及WB观察黄芪甲苷对U937细胞TBK/IRF3信号通路的影响。结果黄芪甲苷通过抑制U937细胞TLR-4表达[对照组、实验组、干预组TLR-4表达分别为(27.32±1.34)、(34.67±1.23)、(30.12±1.67)]抑制TBK/IRF3信号通路[对照组、实验组、干预组TBK分别为(0.60±0.05)、(1.10±0.12)、(0.80±0.21),对照组、实验组、干预组IRF3分别为(0.92±0.08)、(1.35±0.23)、(1.10±0.27)],从而抑制U937细胞iNOs mRNA表达[对照组、实验组、干预组iNOs mRNA表达分别为(0.80±0.15)、(1.18±0.23)、(1.00土0.11)],上调Arg-1 mRNA表达[对照组、实验组、干预组Arg-1 mRNA表达分别为(1.10±0.23)、(0.56±0.24)、(0.78±0.23)],从而抑制U937细胞发生M1型转化。结论黄芪甲苷可能通过抑制U937细胞TLR-4表达减弱TBK/IRF3信号通路,从而抑制U937发生M1型转化,进一步抑制炎症因子产生,阻断肾脏纤维化。