复合调味粉中罂粟成分的实时荧光PCR检测方法

研究建立了复合调味粉中罂粟成分检测的实时荧光PCR方法,检出限0.1%,灵敏度10pg,与高效液相色谱法比较,检出限更低,特异性更好.该方法可作为对复合调味粉中非法添加罂粟成分鉴定的检测方法,也可为其他罂粟相关方法研究提供借鉴和参考.     

实时荧光聚合酶链式反应法检测食品中猫源性成分

根据猫线粒体烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化还原酶亚基1（ND1）基因中的保守序列设计猫特异性引物和TaqMan探针,建立食品中猫源性成分的实时荧光聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）检测方法。通过实时荧光PCR反复验证,结果表明,引物和TaqMan探针对猫源性成分的特异性良好,检测灵敏度可达1 pg,适用于食品中猫源性成分的快速鉴定。通过对随机抽取的市售肉制品的检测,尚未发现掺有猫源性成分的行为。     

肉制品中鸭源性成分TaqMan探针实时荧光PCR检测方法的建立与应用

目的 建立TaqMan探针实时荧光PCR法快速检测肉制品中鸭源性成分的分析方法。方法 以鸭生长激素(growth hormone, GH)基因为靶基因, 基于特异性保守序列设计引物和TaqMan探针, 优化反应体系和反应条件, 建立了鸭源性成分实时荧光PCR(real-time PCR)检测方法。结果 所建立的real-time PCR方法特异性强, 仅对鸭基因组DNA出现特异性扩增曲线, 对牛、羊、猪等其他异源性动物基因组DNA均无扩增曲线; 灵敏性高, 以鸭基因组DNA为模板, 检出限为1.0 pg; 重复性好, 不同浓度基因组DNA测定的Ct值变异系数小于4%。使用建立的real-time PCR方法对200份市售肉制品进行检测, 在11份肉制品中检出鸭源性成分, 同现行行业标准SN/T 3731.5—2013检测结果一致。结论 本研究所建立的real-time PCR方法检测具有特异性强、敏感性高、快速高效等特点, 适用于肉制品中鸭源性成分快速检测。     

食品和饲料中火鸡源性成分的实时荧光PCR检测方法

为对产品真实性提供技术支撑,作者建立了食品和饲料中火鸡源性成分的检测方法。采用TaqMan探针实时荧光PCR方法,对火鸡源性成分特异性、灵敏度进行检测并进行实际应用。实验表明,建立的检测方法具有特异性和高灵敏度,检测限为0.001%。通过对市售食品和饲料样品的检测,建立的方法适用于食品和饲料中火鸡源性成分的检测。     

应用LNA-TaqMan探针实时荧光PCR检测大米制品中转基因成分

大米制品中痕量转基因成分的检测需要特异和超灵敏的检测方法。本研究以行业标准中转基因大米筛查位点CaMV35S启动子、NOS终止子和Cry1A基因为目标,利用在常规TaqMan探针中掺入锁核苷酸提高探针退火温度和杂交特异性等特点,经比较以上位点不同LNA-TaqMan探针实时荧光聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）检测效果,建立了针对上述筛查位点的基于LNA-TaqMan探针的新型实时荧光PCR检测方法。该方法特异性强,检测灵敏度超高;与普通TaqMan实时荧光PCR方法相比,其反应Ct值可提前1～3 个循环（Cry1A位点除外）,检测低限可达3 pg。该检测方法可以用以检测大米制品中常规实时荧光PCR难以检测到的痕量转基因大米成分。     

食品中鲍鱼过敏源基因成分的检测

目的本文建立食品中鲍鱼过敏源基因成分实时荧光PCR检测方法。方法采用蛋白酶K消化法提取鲍鱼肌肉组织中基因组DNA,针对鲍鱼管家基因16S r RNA基因设计特异性引物和探针,确定实时荧光PCR反应体系和反应条件,建立了鲍鱼过敏源基因成分实时荧光PCR快速检测方法。选用鱿鱼、海参等海产品进行特异性试验;采用添加方法制备灵敏度试验样品,分别制备了鲍鱼过敏源基因成分含量分别为100%、10%、1%、0.1%、0.01%、0.001%的样品。结果对非鲍鱼类食品进行检测,结果显示出良好的特异性;灵敏度试验表明,本文建立方法的最低检测下限为0.01%。结论本文建立了特异性好,灵敏度高的鲍鱼过敏源基因成分检测方法。     

复合调味粉中罂粟成分的PCR检测方法

为了对复合调味粉中的罂粟成分进行快速检测,本方法针对罂粟物种特异基因设计引物,建立了复合调味粉中定性PCR的检测条件,通过测序验证扩增产物的特异性,并对多种香辛料验证引物的特异性。采用该法测定复合调味粉中罂粟成分,检出限达到0.1%,灵敏度达到10pg。该方法准确度和灵敏度高、操作简便,可作为对复合调味粉中非法添加罂粟成分鉴定的实用检测方法,也可以为其他与罂粟相关的方法研究提供借鉴和参考。     

食品中杏仁过敏原成分的检测

目的：建立检测食品中桃仁、杏仁过敏原成分的荧光PCR 方法,比较国外3 种ELISA 试剂盒效果。方法：针对杏仁Pru du1 基因设计引物及探针,建立荧光PCR 方法。利用杏仁过敏原参考物质对3 个品牌的ELISA试剂盒的回收率进行比较。结果：建立的荧光PCR 方法,具有很好的特异性;灵敏度为10mg/kg。结论：桃仁及杏仁过敏原成分荧光PCR 检测方法特异性好、灵敏度高,对食品中过敏原的检测有重要的实际意义。     

北极苹果结构特异性实时荧光聚合酶链式反应检测方法建立

目的为实现转基因北极苹果(Arctic~(TM) apple)目的标识管理,建立特异性实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法。方法针对转基因北极苹果特异性序列设计引物和TaqMan探针,建立转基因北极苹果实时荧光PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行检测。结果建立的转基因北极苹果实时荧光PCR特异性强,定量检测限为20拷贝,扩增效率为96%,检测重复性良好。结论建立的特异性实时荧光PCR法可应用于转基因北极苹果的鉴定。     

产气荚膜梭菌TaqMan实时荧光定量PCR特异性引物设计和方法验证

目的 建立针对水样中产气荚膜梭菌检测的TaqMan实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)方法,并测试该方法在自来水样中的检测效果。方法 选择位于该菌拟核中高度保守的plc基因,设计特异性引物和TaqMan探针,经优化后建立了针对该菌的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,结合滤膜法处理含有plc基因的标准菌株的模拟污染水样,并对所建立的方法进行测试。结果 所建立的产气荚膜梭菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法具有高度的特异性,13株食源性致病菌、3株艰难梭菌及1株腐败梭菌的Ct值大于40;该方法的最低检出限为1×10 copies/μL,具有较高的灵敏性;对模拟污染水样的最低检测限为1.0×10² CFU/mL。应用该方法对4份人工模拟污染阳性水样与90份自来水样进行检测发现,2份1.0×10² CFU/mL的模拟污染水样可检出产气荚膜梭菌,2份1.0×10 CFU/mL的模拟污染水样与90份自来水样均未检出产气荚膜梭菌。结论 所建立的产气荚膜梭菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法具有特异性好、灵敏性高的优点,对水体中产气荚膜梭菌的检...     

恒温隔绝式PCR快速检测蜡样芽孢杆菌方法的建立及应用

该研究以编码旋转酶B亚基的gyrB基因为靶基因,利用恒温热隔绝式PCR（Insulatedisothermal PCR,IiPCR）,建立一种快速检测蜡样芽孢杆菌的方法。同时,将建立的方法与聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）和实时荧光定量PCR（SYBER Green Ⅰ荧光染料法和TaqMan探针法）检测方法相比较,并应用于不同类型零售食品中的蜡样芽孢杆菌检测。结果表明建立的检测方法能在40 min内迅速判定出结果（+、-、？）;与大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌、肠炎沙门氏菌等均无交叉反应,显示出良好的特异性;方法的最低检出限为1.5×102 CFU/mL,优于普通PCR,与实时荧光定量PCR检出限相当;对42份零售食品进行检测,共发现45.23%的样本被蜡样芽胞杆菌污染（19/42）。这一结果与常规PCR检测结果一致,但检测时间至少节省了4 h以上。该研究为蜡样芽孢杆菌提供了一种快速、便捷、特异性强、灵敏度高、适用于现场实时检测的检测方法。     

肉制品中表皮葡萄球菌实时荧光PCR检测方法的研究

根据表皮葡萄球菌16S基因片段序列,用Primer express 3.0设计一对特异性引物和一个TaqMan探针,建立表皮葡萄球菌实时荧光PCR检测方法。通过对梯度含量的表皮葡萄球菌标准菌液样品DNA和多种细菌的DNA进行实时荧光PCR检测,来检测其灵敏度和验证引物和探针的特异性。实验结果表明,只有表皮葡萄球菌产生扩增曲线,其他细菌无扩增,说明引物及TaqMan探针特异性较好,检测灵敏度为1×10~3CFU/mL。该方法具有很好的研究价值和应用前景。     

实时荧光PCR法测定婴幼儿谷类辅助食品中麸质过敏原成分

目的建立实时荧光PCR法检测婴幼儿谷类辅助食品中麸质过敏原成分的含量。方法样品加入淀粉酶液化后,采用试剂盒方法提取样品DNA,考察大麦Hordein基因、小麦Gliadin基因、黑麦Secl基因和燕麦Avenin基因检测方法的特异性、灵敏度和检出限,幵应用于检测实际样品。结果确定了实时荧光PCR反应体系条件,各个基因的检测方法具有特异性强且灵敏度高,检出限为0.1%。结论该方法操作简便,准确率高,适用于婴幼儿谷类辅助食品中麸质成分的检测。     

基于TaqMan实时荧光PCR检测鲜肉及加工肉制品中的驴源性成分

根据出入境检验检疫行业标准SN/T 3730.4—2013《食品及饲料中常见畜类品种的鉴定方法 第4部分：驴 成分检测 实时荧光PCR法》合成引物和探针,利用TaqMan实时荧光聚合酶链式反应（polymerase chain reaction, PCR）技术检测鲜肉及加工肉制品中的驴源性成分。首先对13 种不同动物鲜肉组织的DNA进行驴源性成分特异 性检测,然后对驴源性DNA模板原液进行梯度稀释,检测方法灵敏度,最后在加工肉制品中检测方法的适用性。 结果表明：本研究建立的方法特异性强,除驴肉外,牛、羊、猪、马、骆驼、鹿、狗、兔、鸡、鸭、鸽子、鹌鹑 12 种动物鲜肉组织均无特异性扩增;方法的灵敏度较高,驴组分DNA的检出限可达100 fg/μL,灵敏度可达0.01%; 方法的适用性较广,可以用于加工肉制品中驴源性成分的检测。     

2种食源性致病菌多重荧光PCR检测方法的建立

文章旨在建立一种可同时快速检测食品中沙门氏菌和副溶血弧菌的TaqMan双重荧光定量聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction, PCR)检测方法。分别针对沙门氏菌的inv A基因和副溶血弧菌的tlh基因序列的保守片段,设计了特异性检测引物和探针,并优化其使用浓度及反应退火温度,建立双重荧光定量PCR检测体系,并对方法的灵敏度、特异性及稳定性进行评估。结果显示：建立的双重荧光定量PCR检测法可特异性扩增沙门氏菌和副溶血弧菌,其他菌株无扩增。沙门氏菌检测灵敏度最低检测值可达1 copies/μL,副溶血弧菌检测灵敏度为10 copies/μL。批内批间变异系数均<2%,重复性和稳定性较好,与传统方法检测结果一致,检测时长大幅度缩短。综上表明,建立的双重荧光PCR检测方法能够快速、准确地检测出食品中沙门氏菌和副溶血弧菌,为食品中食源性致病菌的快速检测提供技术支持。     

基于实时荧光PCR技术鉴别梅花鹿

目的建立基于TaqMan实时荧光PCR技术鉴别梅花鹿的分析方法。方法通过对梅花鹿线粒体D-loop基因序列比对分析,选取梅花鹿D-loop基因特异位点作为扩增靶序列,设计梅花鹿特异性的引物和TaqMan探针,并用已知样本对引物和TaqMan探针的物种特异性、灵敏性进行验证。结果该引物和探针对梅花鹿成分检测具有较强的特异性,与其他物种DNA无交叉扩增,该方法的检测灵敏度为0.01ng/μL。结论本方法具有较高的特异性和灵敏度,适用于对肉类以及其他梅花鹿产品的物种的鉴别。     

TaqMan荧光PCR法快速检测太平洋鳕鱼源性成分

目的建立TaqMan荧光PCR法检测太平洋鳕鱼源性成分的方法。方法以太平洋鳕鱼线粒体细胞色素氧化酶CoxⅠ检测靶标,设计特异性引物和探针,进行特异性和灵敏度试验,并对市售样品进行检测。结果该方法引物探针特异性和灵敏度较好,可以良好区分近属鳕鱼和其他科鱼类,灵敏度达到0.04 ng/μL。市售样品中, 90.9%太平洋鳕鱼切片及71.4%太平洋鳕鱼罐头中检出太平洋鳕鱼成分。结论该方法的特异性和灵敏度较好,适合用于大多数制品中太平洋鳕鱼成分的真实性甄别。     

食品中鹅源性成分实时荧光PCR检测方法的建立

为了建立快速鉴别食品中掺假鹅源性成分的改良实时荧光PCR方法,根据Gen Bank中的鹅线粒体DNA基因片段序列,针对鹅线粒体基因组的保守序列,设计特异性引物和Taq Man探针,建立一种检测鹅源性成分的实时荧光PCR方法。该方法能够有效的对鹅源性成分进行快速检测,具有较强的特异性,灵敏度达到0.01%,可用于食品中鹅源性成分的鉴定。     

食品中牛奶过敏原成分LAMP检测方法的建立

目的 建立食品过敏原牛奶成分LAMP检测方法,并与实时荧光PCR(real-time PCR)检测方法比对。方法 针对牛线粒体细胞色素b(cyt-b)基因设计LAMP引物并建立反应体系,在特异性和灵敏度方面与real-time PCR检测方法比对。结果 本研究建立的LAMP方法检测9份不同品牌的牛奶和羊奶及其加工制品,没有出现交叉反应,具有良好的特异性。通过添加试验方法的检测灵敏度为0.5 %,与real-time PCR方法检测灵敏度相当。检测了69份实际样品,检测结果与real-time PCR检测结果一致。结论 本研究建立的食品过敏原牛奶成分LAMP检测方法简单经济,检测结果可靠,可有效缩短检测时间,适用于过敏原牛奶成分的检测,具有良好的应用前景。     

肉制品中蜡样芽胞杆菌实时荧光PCR检测方法的研究

根据蜡样芽胞杆菌肠毒素基因片段序列,用Primer express 3.0设计一对特异性引物和一个TaqMan探针,建立蜡样芽胞杆菌实时荧光PCR检测方法。通过对梯度含量的蜡样芽胞杆菌标准菌液样品DNA和多种细菌的DNA进行实时荧光PCR检测,来检测其灵敏度和验证引物和探针的特异性。实验结果表明,只有蜡样芽胞杆菌产生扩增曲线,其他细菌无扩增,说明引物及TaqMan探针特异性较好,检测灵敏度为1×10~3CFU/m L。该方法具有很好的研究价值和应用前景。