多发性骨髓瘤患者miR-21和miR-32的表达及临床应用

目的探讨microRNA-21(miR-21)和microRNA-32(miR-32)在多发性骨髓瘤(MM)骨髓单个核细胞中的表达水平及意义。方法选取2010年1月至2014年1月在我院血液科及骨科就诊的多发性骨髓瘤患者46例和正常对照的骨髓标本30例作为研究对象,患者均符合多发性骨髓瘤的诊断标准,采用实时荧光定量PCR法检测骨髓单个核细胞中miR-21和miR-32的表达水平。结果 miR-21和miR-32在MM中的表达水平明显高于正常对照组,难治组miR-21和miR-32表达水平明显高于初治组,差异均有统计学意义(P0.05)。治疗缓解组miR-21和mR-32的表达水平低于初治组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 miR-21和miR-32的表达可以对MM患者疾病进展和预后进行预测。     

miR-21在多发性骨髓瘤中的表达及临床意义

检测microRNA-21(miR-21)在多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓单个核细胞(BMMNC)中表达水平,分析miR-21表达水平与临床Durie-Salmon(D-S)分期法和常用肿瘤负荷指标血浆β2微球蛋白(β2-MG)水平的相关性,探讨miR-21在MM的发生、发展及预后中的意义。收集43例MM患者及20例正常对照的骨髓标本,用D-S分期法对MM患者进行临床分期,行髂骨穿刺获取BMMNC,采用实时荧光定量PCR方法检测BMMNC中miR-21表达同步抽取外周血,检测β2-MG水平。结果表明:①miR-21在MM患者BMMNC中表达水平明显高于正常对照者,复发/难治组MM患者miR-21表达水平明显高于初治组MM患者,差异有统计学意义(P<0.05);②MM患者化疗后miR-21表达水平较化疗前明显减低(P<0.05),其中以化疗有效组减低最为明显(P<0.05),无效/进展组miR-21表达水平化疗前后无明显改变;③miR-21表达水平与患者病程D-S分期和血浆β2-MG水平有相关性。结论:miR-21过表达在MM的发病中发挥着重要的致癌基因作用,与MM肿瘤细胞的增殖、化疗效果和疾病预后有密切关系;miR-21表达水平与血浆β2-MG水平、临床D-S分期呈正相关,可能成为判断MM患者预后不良的指标之一。     

多发性骨髓瘤患者PBMC中miR-335的甲基化及其表达研究

目的探讨micorRNA-335(miR-335)表达及甲基化水平在多发性骨髓瘤(MM)诊断中的应用。方法用荧光定量PCR检测43例MM患者和30例体检健康者外周血单个核细胞(PBMC)中miR-335的表达水平,用甲基化特异性PCR(MSP)检测miR-335启动子区甲基化水平,分析其与各临床指标的相关性。结果 43例MM患者PBMC中miR-335的表达水平为34.8(15.3,84.9),显著低于健康对照组的269.4(63.3,780.2),Z=4.384,P0.05。11例MM患者(25.6%,11/43)呈现完全甲基化,其余患者均为部分甲基化,而23例体检健康者(76.7%)呈现完全非甲基化(Uc=6.62,P0.05)。初诊MM患者miR-335表达量高于复发/进展期患者(Z=2.309,P0.05),但复发/进展期患者中miR-335启动子区甲基化程度(75%)高于初诊患者(25%),T=24.5,P0.05。MM患者miR-335表达水平与轻链λ浓度呈相关性(r=0.51,P0.05)。结论 MM患者miR-335表达水平和甲基化可作为MM潜在的辅助诊断指标。     

MiR-21靶向调控KLF5促进多发性骨髓瘤细胞增殖的机制研究

目的：探讨多发性骨髓瘤（MM）细胞中miR-21的表达及其作用机制。方法：从30例MM患者及20例健康者骨髓标本中分选出浆细胞,检测miR-21的表达水平;选取MM1.S、RPMI-8226和U266细胞,用q RT-PCR方法检测miR-21的水平;转染hsa-miR-21 mimics和hsa-miR-21 inhibitor后通过CCK-8和细胞克隆实验检测MM细胞增殖情况;预测miR-21调控的靶基因,通过荧光酶素报告基因实验检测miR-21与KLF5的结合位点;利用Western blot和q RT-PCR方法检测转染hsa-miR-21 mimics和hsa-miR-21 inhibitor后KLF5蛋白的表达水平;合成缺失3′UTR的KLF5质粒转染进入过表达miR-21的RPMI-8226细胞,利用CCK-8和细胞克隆实验检测MM细胞增殖情况。结果：MM患者浆细胞中miR-21表达水平较正常对照组显著升高（P<0.001）;MM1.S、RPMI-8226和U266细胞中miR-21的表达较对照组也显著升高（P<0.05）。转染hsa-miR-21 mimic...     

血清miR-424及miR-765在多发性骨髓瘤中的表达及其临床意义

目的:探讨多发性骨髓瘤(MM)患者血清miR-424及miR-765的表达及其临床意义。方法:选取2017年1月-2020年7月三亚中心医院收治的81例MM患者,依据国际分期系统分为Ⅰ期(n=16)、Ⅱ期(n=25)和Ⅲ期(n=40);根据免疫分型结果分为IgG型(n=46)、IgA型(n=19)、轻链型(n=10)和非分泌型(n=6)。另选取同期50例健康体检正常者作为对照组。检测各组血清miR-424、miR-765及胱抑素C(Cys-C)水平。应用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-424、miR-765及Cys-C水平诊断MM的价值。采用Pearson相关分析MM患者血清miR-424、miR-765水平与Cys-C的相关性。结果:MM组血清miR-424(2.74±1.30 vs 0.85±0.26)、miR-765(2.05±0.82 vs 0.63±0.17)及Cys-C[(2.18±0.86 vs 0.72±0.15)mg/L]水平均明显高于对照组(P<0.001)。MMⅢ期患者血清miR-424(5.08±2.36 vs 1.12±0.34,2.24±0...     

miR-21抑制剂对多发性骨髓瘤细胞生长的影响

多发性骨髓瘤（Multiple myeloma,MM）是浆细胞异常增生的B细胞恶性克隆性疾病,以骨髓中异常浆细胞的过度增生、骨损害及免疫缺陷为特征,约占所有恶性血液病的10％。尽管近几年基于信号通路蛋白抑制剂的靶向药物治疗取得了明显进步,但其五年相关存活率仍然较低,仅为35％左右。因此,研究其发病机制对MM诊断、治疗、预后判断至关重要。     

多发性骨髓瘤患者循环microRNA-21的表达与意义

摘要：目的：了解多发性骨髓瘤(MM)患者循环microRNA-21（miR-21）的表达情况。 方法：用荧光定量PCR法检测34例MM患者循环miR-21的表达水平,并与血清Ig的总量（IgG+IgA+IgM）、lambda轻链、kappa轻链、Ca²⁺、乳酸脱氢酶（LDH）、清蛋白(Alb)、β2-微球蛋白(β2-MG)、血红蛋白(Hb)作相关性分析。 结果:MM组循环miR-21的相对表达水平为2.01±0.27,显著高于意义不明的单克隆丙种球蛋白病（MGUS）组0.76±0.20(t=15.39,P<0.01)和健康人对照(NC)组0.43±0.11(t=27.74,P<0.01)。MM组Ⅰ期的miR-21水平显著低于Ⅱ期和Ⅲ期（t=-4.16,t=-4.32,P均<0.01）。MM组循环miR-21水平与血kappa轻链(r=0.532, P<0.05)、血lambda轻链(r=0.615,P<0.01)、Ig的总量（IgG+IgM+IgA）(r=0.625,P<0.05) 及血清β2-MG（r=0.491, P<0.05)均呈显著正相关,与血清Alb呈负相关(r=-0.585,P<0.01)。而与LDH（r=0.250,P>0.05)、Hb（r=-0.286,P>0.05)及Ca²⁺（r=-0.227,P>0.05)均无相关性。 结论:MM患者循环miR-21可以反映骨髓瘤细胞的负荷,监测MM病情进展。     

白介素2联合CP方案治疗多发性骨髓瘤21例疗效分析

目的:观察白介素2联合环磷酰胺、泼尼松(CP方案)治疗多发性骨髓瘤(MM)的临床疗效.方法:对照组32例患者予MP方案(马法兰8 mg/m2,d1-7,泼尼松60 mg/m2,d1-7,3 w一个疗程,治疗6个疗程;治疗组(白介素2联合CP方案)21例患者,白介素250万 u/d,d1-7,环磷酰胺(CTX),200 mg/d,d1-7,泼尼松60 mg/m2,d1-7,7～14 d一个疗程,治疗6个疗程.结果:对照组32例患者的总有效率21.9%(7例),CR率6.3%(2例);治疗组21例患者的总有效率52.3%(11例),CR率19%(4例).两组对照有明显统计学意义(P＜0.01).结论:白介素2联合CP方案治疗MM有效.     

伴1q21染色体扩增型多发性骨髓瘤的研究进展

多发性骨髓瘤(MM)是发生于浆细胞的恶性血液系统疾病.细胞遗传学在MM危险分层中发挥重要作用,1q21扩增是MM常见的异常染色体核型之一.研究表明,1q21扩增与MM患者预后不良相关.目前随着新药的研发、细胞免疫治疗的深入开展及造血干细胞移植技术的提升,MM的缓解深度和生存期明显延长.快速而准确地识别高危患者并根据患者...     

多发性骨髓瘤误诊21例分析

我科自 1991～ 2 0 0 1年共收治多发性骨髓瘤 5 3例 ,其中先后在院内、外误诊 2 1例 ,占 39.6 % ,误诊时间 3～ 31个月 ,分析如下。1　临床资料本组男 15例 ,女 6例 ,年龄最小 2 6岁 ,最大 6 7岁 ,平均45 .2岁。骨痛 5例 ,骨折 3例 ,水肿 4例 ,发热 3例 ,胸闷 2例 ,乏力、呕吐 2例 ,头晕 1例 ,截瘫 1例。骨骼畸形 3例 ,贫血 4例 ,颅神经损害 2例 ,两肺湿罗音 3例 ,眼睑水肿 3例 ,其他有骨压痛、舌淀粉样变、雷诺现象等。本组分型 :Ig G型 13例 ,Ig A型 5例 ,轻链型 3例。分期 : 期 1例 , 期 15例 , 期 5例。分组 :A组 12例 ,B组 9例。误…     

骨髓微环境对多发性骨髓瘤细胞microRNA-21和microRNA-30b表达的影响

目的 研究骨髓微环境对多发性骨髓瘤(MM)细胞mieroRNA(miR)-21和miR-30b的调变作用.方法培养破骨细胞,采用MACS法分选纯化CD138*骨髓瘤细胞.采用实时定量PCR的方法检测MM患者瘤细胞和细胞株以及与破骨细胞共培养的MM患者瘤细胞miR-21和miR-30b的表达量.结果 MM患者的外周血单个核细胞经破骨细胞培养基培养后10～14 d形成破骨细胞,瘤细胞与破骨细胞共培养组和未与破骨细胞共培养组相比较,细胞活力明显增高,miR-21的表达量增高了1.3～5.9倍,miR-30b表达量降低27.5%～76.9%.在正常浆细胞、MM患者瘤细胞和MM细胞株,miR-21表达水平分别为1.9±0.8、6.5±4.9和35.1±36.2,而miR-30表达分别为13.6±1.8、7.2±6.3和4.5±1.9.结论骨髓微环境可调控miR-21和miR-30b的表达,miR-21起癌基因作用,而miR-30b起抑痛基因作用.     

胃癌中高表达的miR-21对胃癌细胞生物学行为的影响

目的:研究miR-21在胃癌中的表达情况及其对胃癌细胞生物学行为的影响。方法:通过实时荧光定量PCR检测30例胃癌手术切除组织和周围正常组织中以及10株胃癌细胞中miR-21的表达情况。通过CCK8法、Annexin-Ⅴ+PI、流式细胞仪检测、划痕实验,观察过表达miR-21对胃癌细胞增殖、凋亡、细胞周期、迁移等生物学行为的影响。结果:定量real-time PCR结果显示miR-21在胃癌组织中高表达(P0.05),miR-21过表达细胞株增殖能力增强,与阴性对照组和空白对照组对比差别具有统计学意义(P<0.01),miR-21转染细胞划痕愈合速度较对照组快。结论:miR-21在胃癌中呈高表达,过表达miR-21可以促进BGC-823胃癌细胞的增殖能力和迁移能力,但对凋亡和细胞周期影响不明显。     

雪旺细胞来源的外泌体miR-21通过靶向SPRY2促进大鼠坐骨神经损伤后修复的研究

摘要目的：研究高表达miR-21的雪旺细胞（Schwann cells,SC）来源外泌体对坐骨神经损伤（sciatic nerve injury,SNI）的修复作用及机制。方法：分别采用空载慢病毒和高表达miR-21的慢病毒感染SC株,收集SC上清外泌体并进行鉴定。采用神经断端吻合术建立SNI大鼠模型,术后随机分为模型组、SC来源外泌体组和高表达miR-21的SC来源外泌体组（n=10）。其中,SC来源外泌体组和高表达miR-21的SC来源外泌体组分别采用体外收集的外泌体局部注射进行治疗,3周后行为学实验检测神经功能恢复,免疫荧光染色评价SNI后轴突髓鞘再生,RT-qPCR检测血清外泌体miR-21及神经组织中miR-21和SPRY2的表达水平,双荧光素酶报告基因实验体外验证miR-21和SPRY2之间的靶向互作。结果：与模型组相比,其余各组大鼠坐骨神经功能和神经再生情况均出现明显改善,RT-qPCR结果显示血清外泌体及神经组织中miR-21的表达水平显著升高,神经组织中SPRY2的表达水平显著降低,其中高表达miR-21的SC细胞来源外泌体组较SC来源外泌体组变化更显著;双荧光素酶报告基因实验表明miR-21靶向调节SPRY2的表达。结论：高表达miR-21的SC来源外泌体通过靶向SPRY2显著促进SNI后修复。     

转移性宫颈癌细胞衍生的外泌体miR-21-5p促进宫颈癌侵袭及转移

目的 探讨转移性宫颈癌组织的旁分泌作用对肿瘤细胞扩散的影响。方法 选择22例转移性宫颈鳞癌患者的手术标本（癌组织和癌旁组织）和血清标本,以及22名健康体检者的血清标本,采用逆转录-实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-21-5p在癌组织和癌旁组织中的表达水平;分别转染miR-21-5p模拟物/抑制剂到宫颈癌SiHa细胞,采用RT-qPCR、细胞集落形成实验、Transwell迁移实验、噻唑蓝（MTT）比色法、蛋白免疫印迹法、双荧光素酶报告分析差异;采用高速离心法提取血清外泌体;采用纳米颗粒跟踪分析（NTA）技术、蛋白免疫印迹法、透射电子显微镜（TEM）对外泌体进行表征鉴定;采用RT-qPCR 检测宫颈鳞癌患者和健康体检者血清外泌体中miR-21-5p的表达差异;采用受试者操作特征（ROC）曲线分析血清外泌体中miR-21-5p对肿瘤转移的诊断效能。结果 miR-21-5p在转移性宫颈鳞癌组织中表达上调;miR-21-5p过表达能促进宫颈鳞癌SiHa细胞集落形成以及细胞增殖与迁移（P均< 0.01）;双荧光素酶报告显示,miR-21-5p可以靶向快速发育生长因子同源蛋白2抗体（SPRY2）,对SPYR2的表达水平进行调控;miR-21-5p模拟物转染的SiHa细胞中,磷酸化丝裂原和应激激活的蛋白激酶、磷酸化核糖体S6蛋白激酶、磷酸化原癌基因C-RAF、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）激酶和磷酸化MAPK蛋白的表达均上调（P均< 0.05）。miR-21-5p在宫颈鳞癌患者的血清外泌体中上调（P < 0.05）。血清外泌体评估宫颈癌转移的ROC曲线下面积为0.9375。结论 转移性宫颈鳞癌患者组织中miR-21-5p通过外泌体传递促进肿瘤转移,其机制可能与靶向SPRY2/细胞外调节蛋白激酶/MAPK信号通路有关。     

多发性骨髓瘤患者外周血单个核细胞微小RNA-202的表达及意义

目的 建立SYBR Green Ⅰ FQ-PCR检测人外周血单个核细胞(PBMC)中miR-202表达的方法,并初步探讨其检测MM的意义.方法 采用特异miR-202茎环引物逆转录后,用FQ-PCR对21例MM患者及20名健康人PBMC中miR-202表达水平做相对定量分析;结果用Mann-Whitney法进行两组间miR-202表达差异比较.此外,用1份1∶125稀释标本重复检测5次;及同一标本连续检测3d,每天检测1次,每次重复5管,根据循环阈值(Ct)计算标准差和变异系数(CV),以评价所建方法的重复性.结果 FQ-PCR检测PBMC中miR-202的扩增曲线呈标准的S型,熔解曲线峰值单一,未见杂峰,显示其特异性较好.批内CV为1.2％,批间CV为3.2％,当标本miR-202浓度被稀释为12.8 pmol/μl时,仍可稳定地得到扩增曲线.FQ-PCR检测MM组中miR-202表达量为1.844(0.162 ～3.966),健康对照组表达量为0.014(0.007～0.221),MM组中miR-202表达明显高于健康对照组(U=48.000,P＜0.01).结论 FQ-PCR是一种快速简便、特异性和重复性较好的检测miR-202的方法,MM患者PBMC中miR-202表达升高,其可能参与MM的发生过程,并有可能成为MM诊断和治疗的新指标.     

miR-21和miR-93表达水平与三阴性乳腺癌发生发展的相关性研究

目的探讨miR-21和miR-93的表达水平与三阴性乳腺癌(TNBC)发生发展的相关性。方法选择行乳腺癌根治术的女性患者86例,收集癌组织与正常乳腺组织,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-21和miR-93的相对表达量,并分析其与临床病理特征的相关性。结果 miR-21和miR-93在TNBC组织中相对表达量高于癌旁组织;TNBC组织中,miR21高表达54例,占62.79%,miR-93高表达50例,占58.14%;miR-21和miR-93在肿瘤直径5 cm、临床分期为Ⅲ~Ⅳ期以及淋巴结转移的患者中高表达率显著增高(P0.01);miR-21和miR-93的表达水平与患者年龄、月经状态、病理分级无明显相关性。癌组织中miR-21与miR-93表达水平呈显著正相关(r=0.761,P0.01)。结论 miR-21与miR-93在TNBC中表达异常增高,且与肿瘤直径、临床分期、淋巴结转移有关,可作为TNBC诊断及判断预后的辅助指标。