依达拉奉对大鼠局灶性脑缺血再灌注后Caspase—3蛋白表达的影响

目的在大鼠脑缺血再灌注损伤发生后,用自由基清除剂依达拉奉对其进行治疗,监测再灌注不同时间点脑组织Cas-pase-3蛋白表达情况。研究依达拉奉对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法制作短暂、局灶性脑缺血再灌注模型。分为正常组及假手术组(对照组)、脑缺血再灌注对照组(缺血组)、依达拉奉治疗组(治疗组),分别于缺血1h后进行再灌注。治疗组于再灌注后30min腹腔内及皮下各注射依达拉奉1次(按依达拉奉3mg/kg),30min后重复一次。设再灌注后2h、6h、12h、24h、48h不同时间点,各时间点以0.4%戊巴比妥钠深度麻醉后快速断头法将大鼠处死,以4%多聚甲醛灌注固定后取脑,行免疫组化检测各时间点脑组织Caspase-3表达阳性细胞数。结果缺血组再灌注后2h在大脑额叶和顶叶皮质和海马即可见到Caspase-3蛋白表达的阳性细胞,12h达高峰,24h后开始下降。治疗组各时间点Caspase-3表达水平较对照组明显降低(P<0.01)。结论依达拉奉可抑制Caspase-3的表达,对缺血再灌注损害的脑组织有明显的保护作用。     

雷公藤多甙对局灶性脑缺血再灌注大鼠细胞凋亡的影响

雷公藤多甙(TWP)为中药雷公藤的主要成分,具有免疫抑制作用,有报道其能减少神经元迟发性损伤,降低脑梗死体积,对脑缺血有改善作用。本实验观察TWP对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤神经功能缺损程度及细胞凋亡的影响。1材料与方法选择健康Wistar大鼠60只,体重250~300 g,雌雄不拘,由河南省实验动物中心提供。TWP由上海医科大学红旗制药厂提供;尼莫地平(Nim)由山东新华制药股份有限公司出品;细胞凋亡检测试剂盒购自华美生物制品公司;其余试剂为市售,纯度为AR。将大鼠随机分为6组:(1)假手术组,(2)缺血再灌注模型(IR)组,(3)Nim组(10 mg/kg),(…     

补阳还五汤联合依达拉奉对小鼠脑缺血再灌注损伤的影响

目的研究补阳还五汤联合依达拉奉对小鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的影响。方法 50只小鼠随机分假手术组,模型组,补阳还五汤(BYHWD)组,依达拉奉(ED)组,补阳还五汤+依达拉奉(BYHWD+ED)组,每组再随机分成缺血再灌注后1、7 d组。首先制备小鼠大脑中动脉缺血模型,TUNEL法观察神经细胞凋亡率,应用免疫组化方法观察各组大脑皮质Bcl-2、Bax、Caspase-3表达阳性细胞数。结果与模型组比较,BYHWD组、ED组及BYHWD+ED组均能明显降低脑组织凋亡指数(P<0.01),升高Bcl-2阳性表达,降低Bax、Caspase-3阳性表达(P<0.01),两药联用变化趋势更明显。结论补阳还五汤与依达拉奉联用能降低脑缺血再灌注损伤模型鼠脑组织细胞凋亡基因Bax、Caspase-3的表达,增加具有神经元保护作用的Bcl-2基因表达,从而抑制神经细胞凋亡,加速神经功能的恢复,协同发挥脑保护作用。     

依达拉奉对糖尿病大鼠脑缺血再灌注海马区神经元凋亡的影响

目的探讨依达拉奉对糖尿病大鼠脑缺血再灌注海马区神经元凋亡的影响。方法健康SD大鼠28只,采用链脲佐菌素(55⁶0 mg/kg)腹腔注射诱导糖尿病,在糖尿病基础上线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注(MCAO)模型。将大鼠随机分为4组:假手术组、MCAO组、MCAO+生理盐水组、依达拉奉干预组(0.5 g/kg,2次/d);术后3 d处死动物取出海马组织,固定后进行石蜡切片,通过TUNEL评价神经细胞凋亡情况,采用免疫组化的方法检测各组大鼠海马区神经元凋亡蛋白Fas的表达。结果 TUNEL染色显示,与假手术组比较,MCAO组、MCAO+生理盐水组海马区神经元凋亡明显增多,而依达拉奉干预组海马区神经元凋亡明显减少(P<0.05);免疫组化结果,与假手术组比较,MCAO组、MCAO+生理盐水组海马区神经元凋亡蛋白Fas表达明显增多,而依达拉奉干预组海马区神经元凋亡蛋白Fas表达明显减少(P<0.01)。结论依达拉奉可能通过减少糖尿病大鼠脑缺血再灌注海马区神经元凋亡蛋白Fas表达、从而减少神经元的凋亡,起到对海马区神经的保护作用。     

依达拉奉对缺血再灌注损伤后大鼠脑caspase-3表达的影响

目的 观察脑神经保护剂依达拉奉对创伤性脑缺血再灌注大鼠脑组织的保护作用,并探讨其作用机制.方法 采用大鼠右侧大脑中动脉缺血再灌注模型,通过凋亡原位TUNEL检测评价神经细胞凋亡情况,并采用免疫组化的方法检测各组不同时段大鼠脑组织caspase-3的表达.结果 脑缺血再灌注后凋亡细胞在48 h达到高峰,治疗组和模型组比较在48、72 h差异有统计学意义(P＜0.05).caspase-3在缺血再灌注12 h起显著增加,48 h达高峰期.治疗组与模型组比较,再灌注后48、72 h可明显降低 caspase-3表达(P＜0.05).结论 脑缺血后 caspase-3表达增高,自由基清除剂依达拉奉可以保护脑组织,其作用可能与抑制caspase-3在损伤脑组织中的表达有关.     

依达拉奉对大鼠脑缺血模型MAPK表达的影响

目的探讨自由基清除剂依达拉奉对大鼠脑缺血后丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)表达的影响。方法大脑中动脉阻断法制备大鼠脑缺血再灌注模型,缺血60min后再灌注23h,术前30min及再灌注2h时尾静脉注射依达拉奉1.0mg.kg-1或0.9%氯化钠注射液2ml.kg-1。观察大鼠脑缺血后神经功能缺损症状,TTC染色法检测梗死体积,Fluoro-Jade C法检测细胞死亡,采用免疫印迹法检测MAPK家族三个主要成员:蛋白激酶P38(P38 MAPK),细胞外信号调节激酶(ERK1/2)和c-jun氨基末端激酶(JNK)的表达。结果依达拉奉改善大鼠脑缺血再灌注23h后神经功能缺损症状,减少梗死体积和细胞死亡(P<0.05);大鼠脑缺血后MAPK家族被激活(P<0.01),依达拉奉能显著降低P38MAPK和JNK的激活,但对ERK1/2的表达无明显影响。结论依达拉奉可能能够通过抑制脑缺血后细胞内P38MAPK和JNK信号传导通路,减轻大鼠脑缺血损伤。     

依达拉奉对大鼠心肌再灌注抗凋亡作用的机制

目的：观察大鼠心肌缺血再灌注时依达拉奉抗凋亡作用的机制。方法：采用体外结扎大鼠左前降支制备大鼠心肌缺血再灌注模型。将Wistar大鼠随机分为对照组、缺血再灌注组、依达拉奉组（再灌注即刻经尾静脉注射依达拉奉3mg／kg）。分别用TUNEL染色法及免疫组化法检测心肌细胞凋亡、心肌凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果：（1）凋亡检测结果示,对照组无细胞凋亡,依达拉奉组较缺血再灌注组凋亡细胞数明品减少[（13．11±1．58）比（24．33±1．38）,P〈0．01];（2）免疫组化结果示,依达拉奉组与缺血再灌注组Bcl-2、Bax蛋白表达均明显高于对照组（P〈0．01）;依达拉奉组较缺血再灌注组Bcl-2蛋白表达明显升高[（0．2300±0．0218）比（0．0924±0．0152）],而Bax蛋白表达明显降低[（0．0249±0．0042）比（O．1312±0．0173）],P均〈0．01;缺血再灌注组Bcl-2／Bax比值较对照组明显降低[（0．6906±0．0035）比（1．1632±0．0212）],依达拉奉组Bcl-2／Bax比值（7．4752±0．5573）较缺血再灌注组和对照组明显升高（P〈0．01）。结论：依达拉奉能够减少心肌细胞凋亡,心肌细胞凋亡的减轻与下调Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达以及Bcl-2／Bax比值有关。     

自由基清除剂依达拉奉对脑缺血的治疗作用

自由基在各种缺血性损伤中起重要作用。自由基清除剂依达拉奉打破了神经保护治疗无效的悲观现状。动物实验和临床试验表明，依达拉奉在治疗缺血再灌注损伤中的有效。     

依达拉奉对老年大鼠心肌缺血再灌注后线粒体功能的保护作用

目的探讨依达拉奉(MCI-186)对老年大鼠心肌缺血再灌注(I/R)后线粒体的保护作用。方法 36只18个月龄大鼠随机分为假手术组、I/R组及治疗组,每组12只,结扎冠状动脉左前降支建立I/R模型,治疗组在再灌注开始时给予MCI-186静脉滴注(10 mg/kg)。再灌注180 min后,提取心肌组织,观察在透射电镜下线粒体形态变化,Western印迹检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及细胞色素C(cyt C)的表达水平,TUNEL法检测细胞凋亡程度,分光光度法检测线粒体膜通透性转换孔(m PTP)的开放程度。结果透射电镜下治疗组线粒体形态较I/R组规则,肿胀程度轻,嵴排列有序。治疗组Bcl-2表达明显高于I/R组,Bax及Cyt C表达明显低于I/R组(P0.05)。TUNEL染色治疗组心肌凋亡指数明显低于I/R组(P0.01)。治疗组m PTP在8~20 min开放程度明显低于I/R组(P0.05)。结论 MCI-186能够保护老年大鼠心肌I/R后的线粒体呼吸功能,维持线粒体膜的稳定性,进而减轻细胞凋亡。     

依达拉奉对脑出血大鼠细胞凋亡及NF-κB表达的影响

目的研究依达拉奉对脑出血大鼠血肿周围脑组织细胞凋亡及核转录因子（NF—κ）表达的影响．探讨其抑制脑出血后细胞凋亡的可能机制。方法36只SD大鼠随机分为依达拉奉组、出血组和假手术组。用自体血尾状核注射法建立脑出血模型;检测丙二醛（MDA）水平,以TUNEL法及免疫组化法检测神经细胞凋亡数及NF-κB蛋白表达的变化。结果．出血组MDA水平、细胞凋亡数和NF—κB表达水平均明显高于假手术组;与出血组相比,依达拉奉组上述指标均明显下降。结论依达拉奉可抑制脑出血后血肿周围神经细胞凋亡,可能与其减轻氧化应激、减少血肿周围脑组织过度表达NF-κB有关。     

依达拉奉对脑缺血再灌注大鼠脑红蛋白和14-3-3γ蛋白的影响

目的探索依达拉奉对脑缺血再灌注大鼠脑红蛋白(Ngb)和14-3-3γ蛋白的影响。方法采用大脑中动脉闭塞法建立大鼠脑缺血再灌注模型,将48只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和依达拉奉预处理组;采用酶联免疫吸附法检测血清Ngb和14-3-3γ水平,采用蛋白免疫印迹、免疫组化检测脑组织中Ngb和14-3-3γ表达。结果模型组大脑和血清的Ngb和14-3-3γ水平均高于假手术组(P<0.05),依达拉奉预处理组大脑和血清的Ngb和14-3-3γ水平均高于模型组(P<0.05)。结论依达拉奉能通过上调脑缺血再灌注大鼠血清和脑组织中Ngb和14-3-3γ水平发挥脑保护作用。     

依达拉奉和甘露醇联合应用对老年大鼠脑缺血再灌注损伤的保护

依达拉奉（3-methyl-1-phenyl-pyrazolin-5-one）作为一种自由基清除剂与脱水降颅压药物甘露醇联合应用治疗缺血性脑卒中已经有了较深入的基础和临床研究，但两种药物联合应用是否优于单药目前国内未见报道。我们于2005年3月至2005年4月通过分析依达拉奉、甘露醇及两药联合应用对局灶性脑缺血再灌注损伤后老年大鼠脑组织神经细胞凋亡数及一氧化氮（NO）含量的影响，探讨其脑保护作用。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后Caspase-9蛋白的表达

目的 研究Caspase-9蛋白在大鼠脑缺血再灌注损伤过程中表达水平的动态变化.方法 建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,应用HE染色和免疫组织化学方法观察神经细胞死亡情况,再灌注6 h、12 h、24 h后缺血皮层Caspase-9蛋白表达.结果 与假手术组比较Caspase-9蛋白表达在各手术组明显升高,并随着缺血再灌注时间的延长Caspase-9表达逐渐升高,于再灌注24 h到达最高(P<0.01).结论 Caspase-9蛋白参与了脑缺血再灌注损伤过程.     

脑缺血再灌注后依达拉奉联合黄芪对大鼠神经元的保护作用及机制

目的探讨脑缺血再灌注后依达拉奉联合黄芪对大鼠神经元的保护作用及机制。方法将SD大鼠随机分为假手术组、缺血对照组、黄芪组、依达拉奉组、依达拉奉与黄芪联合组及溶剂组。采用焦油紫染色、免疫印迹检测大鼠缺血再灌注后海马神经元损伤和脑组织JNK1／2、bad（ser 128）和c-Jun的磷酸化情况。结果各给药组与缺血再灌注组和溶剂组相比,海马神经元损伤减轻,脑组织JNK1／2、c-Jun和bad（ser 128）磷酸化降低,其中联合组效果更明显（P均〈0．05）。结论依达拉奉、黄芪两药联用比单用更能减少海马神经元损伤及脑组织JNK1／2、c-Jun、bad（ser 128）的磷酸化程度。     

利莫那班对局灶性脑缺血/再灌注损伤大鼠的保护作用

目的 探讨大麻素1(CB1)受体拮抗剂利莫那班对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的保护作用.方法 线栓法制备大鼠局灶性脑缺血/再灌注模型.36只雄性大鼠随机分为假手术组、手术组、尼莫地平对照组、利莫那班低剂量组、中剂量组和高剂量组.再灌注24 h后进行神经功能评分(NFS),TTC染色测定梗死面积,HE染色检测脑组织病理变化,免疫组化染色观察P-erk1/2和caspase-3免疫阳性表达,并检测大鼠脑组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)变化.结果 利莫那班能明显改善大鼠的神经行为,缩小梗死面积,并使脑组织病理改变减轻,SOD活性明显升高,MDA含量明显降低,下调caspase-3的表达,上调P-erk1/2的表达.结论 利莫那班对局灶性脑缺血/再灌注大鼠有明显的保护作用,其机制可能与拮抗大麻素受体、抑制细胞凋亡有关.     

丹红注射液对大鼠脑缺血再灌注神经细胞凋亡的影响

目的观察丹红注射液对大鼠脑缺血再灌注（I/R）后大脑皮质缺血灶周围区Caspase-3、Survivin的时相表达及对神经细胞凋亡的影响。方法将Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、丹红注射液治疗组（治疗组）时检测,应用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞（MCAO）再灌注模型。假手术组于术后,模型组、治疗组于缺血2 h后再灌注6 h2、4 h、48 h、72 h时检测,应用免疫组化技术和原位末端标记法（TUNEL）检测不同时相各组缺血灶周围脑区Caspase-3、Survivin和TUNEL阳性细胞的表达。结果大鼠I/R后在缺血灶周围区各个时间点均可见到Caspase-3、Survivin和TUNEL阳性细胞的表达,治疗组与模型组比较,两组Caspase-3、Survivin和TUNEL阳性细胞的表达趋势基本一致,Caspase-3和TUNEL阳性细胞的表达高峰在I/R后24 h,Sur-vivin的表达高峰在I/R后48 h。治疗组各时间点Caspase-3和TUNEL阳性细胞的光密度值较模型组明显降低（P〈0.05）,Sur-vivin的光密度值较模型组明显升高（P〈0.05）。结论丹红注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤有保护作用,其作用机制可能与丹红注射液促进Survivin的表达,抑制Caspase-3表达,减轻迟发性神经元的凋亡有关。     

脑缺血再灌注后热休克蛋白70的表达及与细胞凋亡关系的实验研究

目的　研究大鼠局灶性脑缺血再灌注后热休克蛋白70(Hsp70)的表达及与细胞凋亡的关系。方法　用线栓法制备MCAO模型,用免疫组化法测定Hsp70阳性细胞及用TUNEL法测定凋亡细胞。结果　缺血2h即有Hsp70阳性细胞,6～24h明显,3d消失。TUNEL阳性细胞于再灌注后2h出现,24～48h达高峰,72h减弱。结论　脑缺血再灌注后早期即有Hsp70表达及细胞凋亡发生。     

依达拉奉对大鼠癫痫持续状态神经元细胞凋亡的影响

目的:研究自由基清除剂依达拉奉对大鼠癫痫持续状态(SE)后神经元细胞凋亡的影响.方法:采用氯化锂-匹罗卡品大鼠癫痫持续状态模型,实验Wistar大鼠随机分为实验组(72只)和对照组(C组,6只),实验组分为模型组(M组)、依达拉奉单药治疗组(ED组)、联合地西泮治疗组(ED+DI),每组按照时间点分为4个亚组(12h、24h、72h、7d).免疫组化法检测大鼠脑组织的Bcl-2蛋白表达,及TUNEL法检测细胞凋亡的情况.结果:Bcl-2蛋白表达与对照组相比,M组12h达高峰,24h开始减少,7d减至基础水平(P<0.05).而依达拉奉单药和联合地西泮治疗组与之比较,变化趋势相同但Bcl-2表达增多(P<0.05);M组TUNEL染色阳性细胞极多,12h开始上升,48h达高峰,之后有下降趋势(P<0.01).ED组TUNEL染色阳性细胞数值变化趋势相同但低于M组(P<0.01),高于ED+DI组;ED+DI组与C相比仍有统计学意义(P＜0.05).结论:依达拉奉对氯化锂-匹罗卡品大鼠癫痫持续状态所致脑损伤具有保护作用,其机制可能通过清除自由基上调Bcl-2蛋白表达及减少神经元细胞凋亡,联合地西沣治疗效果更显著.     

黄芩苷对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠行为学和梗死体积的影响

近年研究表明，黄芩苷(BC)在发挥抗炎作用的同时还有抗氧化、促凋亡以及Ca^2 通道阻滞作用，且在脑脊液中浓度高，可明显减轻内毒素导致的脑水肿。我们通过阻断大鼠大脑中动脉(MCAO)制备局灶性脑缺血再灌注损伤模型，研究BC对缺血性脑损伤的保护作用，以期为缺血性脑卒中急性期的治疗寻找有效药物。