甲壳素的毒理学研究——Ⅴ.对小鼠致畸胎作用研究

甲壳素于小鼠妊娠d6～15连续ig,日剂量分别为225 mg/kg、900mg/kg和 3600 mg/kg,结果未发现有明显的胚胎毒性和致畸胎作用。     

硫芥诱导小鼠耳郭表皮角质细胞凋亡

目的　利用小鼠耳郭模型研究硫芥对角质细胞增殖动力学的影响 ,以进一步了解表皮干细胞在硫芥皮肤损伤、修复中的作用地位及探索干细胞移植的可行性。方法　固定小鼠后取 5 μL不同浓度(32 ,16 0 ,32 0g·L- 1)硫芥均匀涂抹于耳郭内表面 ,分别于 12 ,2 4 ,4 8,72 ,12 0和 16 8h后急性分离细胞。在无菌条件下取耳郭皮肤组织 ,分离内外侧皮肤 ,小心剥离内侧软骨 ,用胰蛋白酶消化皮肤 ,使表皮与真皮分离 ,进一步用胰蛋白酶消化表皮成单个细胞。采用PI染色流式细胞术观察不同剂量、不同时间细胞的凋亡率 ;PI并Hoechst33342双染活细胞Confocal观察细胞核形态变化 ;琼脂糖凝胶电泳的方法检测生化改变。结果　 32 0g·L- 1染毒 3h后肉眼可见小鼠耳郭充血、水肿和红斑 ,随着时间的延长还可看到糜烂、化脓、结痂、坏死等变化。 16 0及 32 0g·L- 1不同浓度染毒后在 72h细胞均发生了明显的凋亡 ,并呈现出一定的剂量效应和时间效应关系。凋亡的发生需要一定的时间 ,72h凋亡率达到了峰值 ,并且S期细胞对硫芥尤为敏感。同时Confocal显示细胞核染色质呈高凝集的点状结构、琼脂糖凝胶电泳DNA呈典型的梯型条带。结论　硫芥可引起表皮细胞凋亡 ,促进细胞的终末分化     

硫芥中毒小鼠微量血细胞DNA损伤的检测

目的　为探讨硫芥对小鼠外周血细胞DNA损伤的剂量 效应和时间 效应关系 ,为寻找硫芥中毒早期亚临床损伤的诊断指标 ,提供动物体内实验的数据。方法　昆明种小鼠 ,硫芥纯度 97.3% ,用1,2 丙二醇稀释成所需浓度 ,在颈背部皮下注射。随机分为丙二醇溶剂组 ,硫芥中毒组 (自身对照 ) :18mg·kg- 1(LD50 ) ,2 4mg·kg- 1(LD70 ) ,30mg·kg- 1(LD90 ) ,正常观察组和中毒观察组 ,每组 10只小鼠(18mg·kg- 1组除外 )。剪尾采血 5 μL ,采血时间为0 ,2 ,4 ,8,2 4 ,72和 12 0h。应用单细胞凝胶电泳(SCGE)技术进行制片、铺胶、裂解、电泳、染色。荧光显微镜下目镜测微尺测量 ,彗星细胞DNA迁移度(μm)和彗星细胞DNA迁移率 (% ) ,统计分析用SPSS10 .0分析软件及卡方检验。结果　①硫芥中毒后受损细胞 (即拖尾细胞 )DNA迁移率 4h达到峰值 ,低、中、高 3个剂量组分别为 35 .3% ,5 7.8% ,72 % ,显著高于自身对照 (P <0 .0 1) ,8h后逐渐降低 ,72h后低剂量组接近正常值 (P >0 .0 5 )。②DNA迁移度 (拖尾长度 ) 4h达到第一个峰值 ,低、中、高 3个剂量组分别为 (16 .0 0± 1.99) ,(2 2 .0 5± 1.0 0 ) ,(35 .90± 1.2 9) μm ,显著高于自身对照 (P <0 .0 1) ,2 4h出现第二个峰值 ,其后随时间延长逐渐下降。上述结果提示硫?     

硫芥对犬外周血淋巴细胞DNA损伤的作用

硫芥是典型的双功能烃化剂 ,进入体内后产生烃化作用 ,攻击的主要靶分子是ＤＮＡ。目前 ,单细胞凝胶电泳(ＳＣＧＥ)技术发展很快 ,国内、外将该法作为ＤＮＡ损伤检测的基本方法之一。先前我们用此法进行硫芥对人外周血淋巴细胞ＤＮＡ损伤的体外实验[1 ] ,本次选用犬外周血淋巴细胞 ,观察体内、外硫芥染毒后ＤＮＡ损伤的剂量效应与时间效应关系 ,为寻找研究硫芥细胞毒性作用及中毒早期敏感的检测方法提供实验依据。1　材料与方法1 1　主要仪器设备　奥林巴斯ＢＸ - 6 0显微镜、目测微尺(日本 )、电泳仪ＤＤＹ Ⅲ 6Ｂ、电泳槽ＤＤＹ Ⅲ 34Ａ…     

复方软膏制剂对家兔硫芥皮肤染毒预防作用

目的　为筛选预防硫芥皮肤中毒的有效药物。方法　以家兔为动物模型 ,从创面形态学和组织病理学变化来观察分别含有半胱氨酸、甲壳胺、烟酸、乙二胺四乙酸 (EDTA)这 4种药物成分的软膏制剂对硫芥皮肤染毒的预防作用。结果　从创面形态学看 ,甲壳胺组、半胱氨酸组比对照组损伤面积小、恢复时间快、毛发再生早 ;从病理组织学变化看 ,这两组的创面表皮基底层基本完好 ,真皮充血、水肿、炎细胞渗出程度相对较轻。结论　甲壳胺和半胱氨酸有一定的保护作用 ,而烟酸和EDTA的效果不明显     

维生素AD滴剂对着床期小鼠的致畸作用

目的　观察在着床期给予维生素 AD滴剂对小鼠的致畸作用。方法　将查到阴栓的小鼠于受孕 d3、 d4、d5分别一次性给予维生素 AD滴剂 3.3m L· kg-1。于受孕 d18处死动物 ,进行检查。结果　与正常对照组比较 ,3个试验组胎仔的外观、骨骼、内脏均有畸形。结论　在着床期维生素 AD滴剂 (3.3m L· kg-1)可致胎仔畸形     

猪硫芥皮肤染毒防治实验

目的　为硫芥皮肤染毒防治筛选有效的治疗药物。方法　采用与人的皮肤结构相似的猪皮肤作为实验模型 ,作者选用了云南产的小香猪为实验动物 ,用不同浓度的硫芥染毒皮肤 ,染毒剂量为 5 μL硫芥 (0 .5mg·cm2 )和 10 μL硫芥 (1mg·cm- 2 )。观察皮肤损害情况及其病理变化。治疗药物选用皮肤科常用的抗炎药物烧伤宁、钙调蛋白拮抗剂三氟拉嗪、NO合酶抑制剂L 硝基精氨酸甲基酯、ADP 核糖聚合酶抑制剂尼克酰胺。结果　实验发现治疗组和对照组的红斑、水肿和糜烂出现的时间、程度和范围无明显差别。染毒后 1周 ,对照组创面表皮结构破坏 ,部分表皮纤维化 ,部分表皮坏死 ,真皮胶原肿胀变性 ,弹力纤维断裂 ,并有大量炎性细胞浸润。药物治疗组可见表皮纤维化 ,真皮层有少量炎性细胞浸润 ,染毒后用药时间组间无明显差异。染毒后 3周 ,对照组和治疗组的表皮均明显纤维化 ,部分表皮恢复 ,对照组的表皮下仍可见有少量炎性细胞浸润 ,而治疗组的皮肤结构已基本恢复。结论小香猪的皮肤为黑色 ,影响红斑、水肿症状的观察 ;且与断乳小猪相比其皮肤相对较厚 ,相同的染毒剂量对其皮肤造成的损伤也较轻。 4种治疗药物对硫芥皮肤损伤的恢复有一定的促进作用 ,但与对照组相比差异不显著 ,因此只能作为皮肤损伤后对症综合治疗措?     

烟酰胺治疗大鼠硫芥中毒的实验评价

目的　为评价多 (ADP核糖 )聚合酶 (PAD PRP)抑制剂烟酰胺 (尼克酰胺 )对SD大鼠硫芥全身中毒的治疗效果。方法　雄性SD大鼠 30只 ,体重190～ 2 30g ,分为正常对照组、中毒对照组和烟酰胺治疗组。 4mg·kg- 1硫芥中毒。中毒对照组和烟酰胺治疗组动物腰背部皮下注射硫芥 ,正常对照组给予等容量的丙二醇。中毒后 0 .5hip 5 0mg·kg- 1烟酰胺 ,每日 1次 ,连续 8d。实验动物在中毒前测 1次体重 ,以后每天定时测 1次。观察动物食欲及腹泻情况 ,记录动物死亡时间。中毒后d 4 ,d 8各测 1次血常规 ,d 8全部活杀 ,取胫骨上段做骨髓涂片 ,重点观察骨髓的细胞学分类及增生程度。结果　①中毒对照组腹泻率为 70 % ,但未见死亡 ;烟酰胺治疗组的腹泻率为 80 % ,并且在d 5出现动物死亡 ,死亡率为 10 % ,但统计学上均无显著差异。中毒对照组和治疗组动物之间体重变化无明显差异 ,而与正常对照组相比自中毒后d 3起均明显下降。②血常规变化 ,中毒后d 4 ,治疗组与中毒对照组相比 ,结果均无显著差异 ,但这两组与正常对照组相比 ,白细胞总数 (WBC)、淋巴细胞分类 (LYM )、粒细胞分类(GRAN)和血小板总数 (PLT)均明显下降 ,尤其以WBC ,LYM和GRAN为显著 ,而红细胞总数 (RBC)和血红蛋白量 (HGB)均无显著变化。中毒后d 8,治疗组与?     

硫芥对兔眼视网膜和脉络膜的影响

目的　研究硫芥全身吸收中毒可能对视功能造成的影响。方法　健康灰兔和新西兰白兔各 5只 ,各 4只给予 1个致死剂量的硫芥 (0 .0 94 %硫芥 ,1mL·kg- 1sc) ,余下各 1只给予生理盐水作对照。中毒 2d后 ,im 15 %噻胺酮麻醉动物 ,托品酰胺 /去氧肾上腺素 (美多丽 )眼液扩瞳 ,暗适应 30min ,1%丁卡因点眼 2次 ,用LKCUTAS E 2 0 0 0型视觉电生理记录仪行ERG检查 :记录暗视ERG、混合ERG、振荡电位、明视ERG和闪烁ERG。作用电极放置于角膜表面 ,参考电极和地电极分别刺入前额正中和耳背皮下。ERG检查后处死动物 ,取眼球 ,左眼作病理检查 ,右眼作透射电镜检查。结果　无论是白兔还是灰兔 ,实验组和对照组的ERG检查 5种反应均无显著差异。病理检查白兔的视网膜、脉络膜组织完整 ,未见增厚和变薄 ,锥体、杆体层未见溶解 ,外节未见变短 ,细胞核数目未见明显减少 ,色素上皮细胞少见 ,脉络膜结构未见异常。灰兔的视网膜色素上皮细胞排列整齐 ,数目未见变少 ,可见脉络膜色素颗粒 ,其余结构同白兔。光镜下 ,灰、白兔与对照组均无明显差异。电镜检查视网膜内外节盘膜排列整齐 ,密集 ,核区未见异常 ,色素上皮细胞内线粒体轻度肿胀 ,有空泡化趋势 ,但未见核固缩 ,滑面内质网未见明显扩张 ,粗面内质网未见脱粒 ;节细胞胞核?     

硫芥中毒复合四肢火器伤的初步实验研究

目的　通过对硫芥中毒复合枪弹伤伤情观察 ,了解硫芥中毒复合伤伤情特点。方法　动物分为假手术组、中毒组、中毒复合枪伤骨折、中毒复合骨折中毒急救、中毒复合骨折中毒急救及手术救治。将兔四肢关节伸展位固定在架上 ,枪击点位于右大腿中下 1/ 3前外侧 ,皮肤硫芥染毒 5min后 ,枪击造成兔右股骨开放性粉碎性骨折 ,立即进行中毒急救及手术救治。假手术组动物以生理盐水替代硫芥 ,相同部位行假手术 (即切开显露股骨 ,不作骨折固定 )。观察 2 4h存活率及伤情变化。结果　假手术组及单纯中毒组 2 4h死亡率均为 0 % ,中毒复合骨折动物未经救治死亡率为 10 0 % ,经手术急救后死亡率为 2 5 %。死亡兔与创伤重及骨折部位大出血有关。结论　硫芥中毒复合火器伤骨折 ,先挽救危及生命的骨折出血 ,同时洗消解毒     

硫芥诱导Hela细胞发生凋亡及坏死

目的 研究硫芥诱导的Ｈｅｌａ细胞凋亡的作用。方法 生长在ＤＭＥＭ培养基中的Ｈｅｌａ细胞与不同浓度的硫芥作用３小时,凋亡用电镜,电泳及流式术检测。结果 低浓度硫芥（１μｍｏｌ．Ｌ＾－１）抑制细胞生长;较高浓度（１－１００μｍｏｌ．Ｌ＾－１）俣细胞主要在Ｇ１期阻滞,发生典型的凋亡形态改变,提了细胞ＤＮＡ进行琼脂糖凝胶电泳,出现“ＤＮＡＬａｄｄｅｒ”,流式术观察表明硫芥处理３小时后,细胞撤药培养１２小时     

间苯二酚致畸,致突变研究

间苯二酚对SD大鼠无致胎鼠畸胎作用;Ames试验TA_(98)和TA_(100)加S_9与不加S_9均阴性;大小鼠染色体畸变和微核试验阴性;接触间苯二酚工人淋巴细胞染色体畸变率未增高;人外周血淋巴细胞体外培养染色体畸变率与对照组比较有非常显著的升高。     

二巯基丙磺酸钠对大鼠硫芥全身吸收中毒疗效初探

目的　为评价二巯基丙磺酸钠对SD大鼠硫芥全身吸收中毒的治疗作用。方法　以SD大鼠为动物模型 ,硫芥中毒剂量为 4mg·kg- 1sc。治疗组动物在中毒 30min后 ,ip 30mg·kg- 1二巯基丙磺酸钠 ,当日2次 ,之后每日 1次 ,连续应用 5d。通过观察 1周内动物腹泻率和死亡率、体重变化、血常规指标变化来评价药物疗效。结果　与中毒对照组相比 ,药物治疗组的腹泻率、动物体重等均无显著差异 ,d 4开始中毒对照组和治疗组均出现动物死亡 ,至d 7死亡率分别为 70 %和 4 0 % ,有显著性差异。中毒初期 ,治疗组某些血液学指标的改变与正常组相比无显著性差异 ,但与中毒组差异显著。中毒期内 ,治疗组与中毒组的各项指标均与正常组间存在显著差异 ,但两组之间的差异不显著。在恢复期 ,治疗组的红细胞总数、血红蛋白量已恢复至与正常组无异 ,白细胞总数、淋巴细胞数虽与正常组有差异 ,但也显著好于中毒组 ,而中毒组的大部分指标仍与正常组有较大差异。结论　在硫芥全身中毒的综合治疗方案中 ,选用合适剂量的二巯基丙磺酸钠是有利的     

硫芥中毒复合腹部穿透伤的初步实验研究

目的　观察硫芥中毒复合枪弹伤伤情 ,以了解硫芥中毒复合伤伤情特点 ,为临床救治提供帮助。方法　实验兔分中毒复合火器伤组及假手术组。中毒复合伤组 :兔正中切 1～ 2cm小口入腹 ,提起胃窦部缝扎固定于腹壁 ,固定于枪击架上 ,左侧腹部硫芥染毒 5min后 ,5 4式手枪距腹部 2 0cm枪击 ,立即进行中毒急救及手术救治。假手术组 :兔以生理盐水替代硫芥中毒 ,剖腹探查 (进腹 ,不做胃手术 )时间同实验组。 2 4h后观察存活率。结果　假手术组及单纯硫芥中毒组 2 4h死亡率均为 0 %。中毒复合枪伤的手术急救组 2 4h死亡率为 2 5 % ,未进行手术急救的死亡率为 10 0 %。死亡兔为腹腔内出血较多及创伤较重有关。结论　硫芥中毒复合火器伤的救治应在局部消毒、清创的同时以首先抢救火器伤情为主。     

硫芥对小鼠造血干细胞自我更新和分化功能的影响

用2次移植法测定不同剂量硫芥sc小鼠骨髓CFU_0的自我更新和分化功能。硫芥小剂量(15mg/kg)杀伤下,约半数剩余的CFUs的更新潜能仍保持正常。加大硫芥剂量(25mg/kg)使CFUs严重耗竭,残存的CFUs仅为正常值的8％,但其自我更新能力却高达正常的2.5倍,并历时30d而不减退。在上述剂量作用下,不论近期或远期测定,残存的CFUs主要表现为向粒系分化的提高和向巨核系分化的减少。硫芥作用下残存的CFUs具有良好的自我更新功能,是其染毒后造血功能得以迅速恢复的根本原因。然而,造血干细胞向巨核系分化的相对减少,可能影响血小板的生成量是应该引起注意的问题。     

锂盐、氟哌啶醇、吩噻嗪类药物的致畸作用

妊娠动物一次投予大剂量锂盐或抗精神病药对胎仔有明显致畸作用,可出现唇裂、腭裂、发育迟缓、无脑畸形及肢体畸形等。孕妇妊娠早期服用这类药物时,畸形儿发生率增高。可见双侧畸形足、腰脊膜膨出、外耳道畸形、上颌骨发育不全,心血管畸形和无脑畸形等。分析了致畸作用的可能因素。提出孕妇妊娠头3mo尽量避免使用这些精神药物。     

尼卡地平对SD大鼠硫芥全身中毒疗效评价

目的　为评价钙拮抗剂尼卡地平对SD大鼠硫芥全身中毒的治疗作用。方法　以SD大鼠为动物模型 ,硫芥中毒剂量为 4mg·kg- 1sc。治疗组动物在中毒后 30min即ip 0 .15mg·kg- 1尼卡地平 ,每日2次 ,连续 5d。通过观察 1周内动物腹泻率和死亡率、体重变化、血常规指标变化来评价药物疗效。结果　与中毒对照组相比 ,药物治疗组的腹泻率、死亡率、动物体重等均无显著差异。中毒初期 ,治疗组某些血液学指标的改变与正常组相比无显著性差异 ,但与中毒组差异显著。中毒期内 ,治疗组与中毒组的各项指标均与正常组间存在显著差异 ,但两组之间的差异不显著。在恢复期 ,治疗组的红细胞总数、血红蛋白量已恢复至与正常组无异 ,白细胞总数、淋巴细胞数虽与正常组有差异 ,但也显著好于中毒组 ,而中毒组的大部分指标仍与正常组有较大差异。结论　硫芥全身中毒的综合治疗方案中 ,在掌握合适剂量情况下 ,尼卡地平能起到一定的辅助治疗作用。     

硫芥诱导HeLa细胞坏死和凋亡的超微结构变化

硫芥是一种细胞毒药物，能烃化生物体内一系列大分子物质，其中核酸是硫芥作用最敏感的靶分子．它还是首次证实有致突变的化学物质［１］．硫芥损伤的短期效应是引起ＤＮＡ断裂，细胞死亡；长期效应是致畸，致癌，致突变．硫芥对人体各种组织都有损伤作用，对皮肤，眼睛，...     

硫芥染毒大鼠肺组织内皮素-1及ETAR转录表达的变化

目的　探讨内皮素 1(ET 1)和内皮素A型受体 (ETAR)在硫芥中毒后病理生理中的作用。方法应用免疫组化及逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术 ,观察大鼠硫芥中毒后肺组织ET 1和ETAR各自转录表达变化、相互关系及其与组织损伤程度的关系。结果　硫芥中毒后大鼠肺组织ET的含量明显增加 ,2h达峰值 ,但在 12h后下降到低于正常组 ;中毒后肺组织ET 1及ETAR的mRNA表达均增加 ,ET 1mRNA在 2 4h仍高于正常 ,ETARmRNA在 2 4h低于正常组。结论　ET 1及其受体ETAR在硫芥中毒后肺部病理生理进程中可能起一定作用