应用16S rRNA基因测序法鉴定兔支气管败血波氏杆菌的研究

应用16S rRNA基因测序法对兔支气管败血波氏杆菌Bb-1株进行了16SrRNA基因序列分析。结果表明,能够扩增出与预期结果相符合的片断。经Blastn比较,分离菌与兔支气管败血波氏杆菌RB50株（BX640449）同源性为99．8％。进一步的生化实验鉴定表明,Bb-1株生化反应结果符合兔支气管败血波氏杆菌生化反应特征。综合各种实验结果表明,分离菌Bb-1株为兔支气管败血波氏杆菌。     

鸭链球菌的分离鉴定及其16S rRNA基因序列分析

从一种表现为脚软、拉稀、死亡增多的新发鸭病病例中分离到1株细菌,命名为GDYJ2011。通过生长特性、染色特性及VITEK-32微生物鉴定系统生化试验鉴定为链球菌,进一步进行16SrRNA基因序列的测定与分析,鉴定为巴氏链球菌。进行人工发病试验,成功的复制出本病,该菌还表现出较强的致病力。结合药敏试验与临床治疗效果,提出了本病的防控措施。     

禽波氏杆菌分离株的16S rRNA基因序列分析

采用PCR方法对本实验室分离保存的10株禽波氏杆菌、3株兔支气管败血波氏杆菌及1株猪支气管败血波氏杆菌菌株,扩增其16SrRNA基因的5′端片段（783bp）,并测定所得片段的DNA序列。用DNAStar分析软件将所获得的序列与GenBank中的禽波氏杆菌序列进行比较,由此构建禽波氏杆菌菌株的系统发育树。结果显示,10株禽波氏杆菌核苷酸序列与GenBank中收录的AF177666株禽波氏杆菌核苷酸序列的同源性为82.0%～82.5%,与兔支气管败血波氏杆菌和猪支气管败血波氏杆菌核苷酸序列的同源性均为99.2%～99.9%,其中P9（山鸡波氏杆菌）、P11（兔支气管败血波氏杆菌）与P14（猪支气管败血波氏杆菌）分别发生1个核苷酸的缺失。本试验结果表明,16SrRNA序列分析是鉴定禽波氏杆菌的一种快速而准确的方法。     

鸡卡氏杆菌的分离与16S rRNA基因的分析鉴定

四川雅安某种鸡场种鸡出现消瘦,腹部膨大,肝脏肿大破裂出血,腹膜和输卵管炎为主要特征的疾病。为诊断和预防此病的发生,通过对细菌分离纯化、形态学观察、生化试验、药物敏感性试验鉴定出1株致病菌,应用通用引物对细菌的16S rRNA基因进行克隆和测序,测序结果于NCBI上进行BLAST比对,选择同源性较高的巴氏杆菌科15个属的29株细菌16S rRNA序列进行比对分析,构建遗传进化树。结果表明,分离纯化的细菌能在血平板上生长,革兰氏染色阴性短杆状,能发酵大多数糖和醇类,对头孢类抗生素敏感,16S rRNA序列与卡氏杆菌属细菌的同源性最高,在92.2%～99.5%之间,特别是与鸭卡氏杆菌同源在97.5%～99.5%之间。遗传进化树分析结果表明,该菌株与卡氏杆菌属细菌属于同一大分类群,与鸭卡氏杆菌位于同一个小分支,最终诊断该鸡场为卡氏杆菌感染。     

兔波氏杆菌的分离与鉴定

为了分离鉴定重庆市开县某肉兔场种兔和幼兔发生鼻炎的病原菌及筛选敏感的药物,试验采用细菌分离培养、形态学鉴定、生化试验、PCR扩增及基因测序、动物接种试验、药物敏感试验。结果表明:从发病种兔和幼兔鼻分泌物中分离到两株致病菌,都属支气管败血波氏杆菌;两株菌对氟苯尼考、阿奇霉素、菌必治、丁胺卡那霉素、卡那霉素高度敏感;兔场立即选用氟苯尼考注射液治疗,并实施消毒、隔离等综合防制措施,使疫情得到有效控制。     

水貂奇异变形杆菌的分离鉴定及16S rRNA基因序列分析

从辽宁某貂场发病水貂中分离到1株致病菌,命名为PMSD株,通过形态学观察和生化试验等常规鉴定发现符合奇异变形杆菌特性,进一步经VITEK 2Compact 30全自动细菌鉴定及药敏分析系统鉴定该株细菌为奇异变形杆菌。药敏试验结果显示PMSD株对氨基糖苷类药物、喹诺酮类药物等敏感,而对β-内酰胺类药物和磺胺类药物等不敏感。以细菌16SrRNA基因为模板应用通用引物进行PCR扩增,得到PMSD株的16SrRNA基因序列,长约1 504bp,提交到GenBank中,登录号:KM229530。将该序列与GenBank中序列进行BLAST比对,结果发现与其匹配度最高的均是奇异变形杆菌各株系的16SrRNA序列,均高达99%以上。选取其中前20株作为参考序列,运用生物学软件构建系统发育树并进行同源性比对,结果表明,分离菌PMSD株与20个代表菌株的同源性为98.9%~99.7%,其中与BB2000株、HI4320株、B1株和FCC141株同源性最高,为99.7%。本研究为预防和控制奇异变形杆菌引起的水貂疾病奠定了一定的基础。     

兔支气管败血波氏杆菌的分离鉴定

山东莱州某兔场饲养有2000只种兔,2007年4月份起,部分兔出现打喷嚏、流鼻涕现象;有的病兔被毛蓬松,精神不振;2~3 d后,有的病兔鼻孔发现有粘液性或脓性分泌物,呼吸困难。全场发病率约45%;发病期间,每天死亡2~5只不等,多为40日龄左右幼兔,病死率约10%。笔者对送检病兔通过病原分离鉴定和生物学特性试验,确诊为兔支气管败血波氏杆菌感染。现将试验情况报告如下。1材料与方法1.1材料①病料:山东莱州某兔场送检的病兔。②培养基:鲜血琼脂平板、麦康凯琼脂平板、马丁肉汤,按常规方法自制。③生化发酵管:购自山东省卫生防疫站。④药敏试验纸片:购自…     

兔支气管败血波氏杆菌的分离培养及初步鉴定

波氏杆菌通常寄居于多种哺乳动物的上呼吸道，常引起鼻炎和支气管肺炎，它在兔群中感染率非常高，所导致的家兔鼻炎的发病率也非常高。特别是在规模化养兔场，波氏杆菌与巴氏杆菌、葡萄球菌混合感染相当普遍，已成为兔病防治的一大难题。笔者通过对某兔场有明显鼻炎症状的兔群进行细菌学检查，就波氏杆菌的基本特性作一初步研究，为兔鼻炎的预防、诊断提供一定的理论依据。１材料与方法１．１病料的采集无菌棉拭采集病兔的鼻腔分泌物，置含１mL马丁肉汤的试管中，３７℃增菌２小时。１．２细菌分离病料增菌培养后，在含５％血清的营养琼脂…     

兔支气管败血波氏杆菌的分离与鉴定

为鉴定从临床获得的病死成年兔中分离到的一株革兰氏阴性杆菌,应用VITEK 2 Compact全自动微生物分析系统仪完成细菌生化鉴定及药敏试验,并对16S rRNA基因测序鉴定,通过MegAlign（Lasergene7.1）及Phylogenetic（Lasergene7.1）绘制进化树及同源性比较以了解该株细菌的遗传进化关系。结果表明此株细菌是支气管败血波氏杆菌,并与BX640428等序列同源性高达100%。生化试验及药敏试验结果表明谷氨酰芳胺酶pNA试验、L-脯氨酸芳胺酶试验、酪氨酸芳胺酶试验、尿素酶试验、柠檬酸盐（钠）试验、L-乳酸产碱试验、琥珀酸盐产碱试验为阳性,对头孢替坦、头孢唑啉、呋喃妥因具有耐药性。     

兔支气管败血波氏杆菌的分离与鉴定

应用16S rRNA基因测序法对兔支气管败血波氏杆菌标准株和分离的5株波氏杆菌进行了16S rRNA基因序列分析。结果表明,5株分离菌与标准株同源性在99.4%~100%之间。后经Blast分析各分离株与已发表的32株波氏杆菌同源性均在98%以上。进一步的生化试验鉴定表明标准株与分离菌株生化反应结果均符合兔支气管败血波氏杆菌生化反应特征。综合各种试验结果表明5株分离菌株均为兔支气管败血波氏杆菌。     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定及16S rRNA序列分析

从云南某规模化养猪场病猪肺脏分离到1株革兰氏阴性小杆菌,经细菌生化鉴定、PCR鉴定和16S rRNA序列比对鉴定为副猪嗜血杆菌。抗生素药物敏感试验结果表明,分离菌株对四环素、红霉素、氯霉素、头孢噻吩高敏;对庆大霉素、氧氟沙星、诺氟沙星中敏;对磺胺甲唑耐药。16S rRNA分析结果表明,该分离株与GenBank中的Hps参考株AB078973(基因登录号)同源性为100%,将分离菌株鉴定为副猪嗜血杆菌。16S rRNA遗传进化关系表明,分离株与副猪嗜血杆菌3株血清5型参考株AB078972、AB078973、AB078974的16S rRNA序列位于一个分支上,遗传进化关系最近,它们之间的核苷酸同源性在99.0%~99.4%之间,初步鉴定为血清5型副猪嗜血杆菌,致病性试验结果表明,分离菌株对小白鼠有强致病性,命名为YN-1株。     

新疆某牛场大肠杆菌的分离鉴定及16S rRNA序列分析

为了调查新疆某规模化奶牛场犊牛腹泻的原因并确定病原,无菌采集15份腹泻犊牛粪样进行病原的分离培养,采用形态学观察、生化试验、血清学和致病性分析等方法鉴定分离菌株,利用大肠杆菌16SrRNA通用引物进行基因序列扩增并测序,使用DNAStar软件将分离菌株测序结果与GenBank中的其他菌株序列进行同源性比对,采用Mega...     

家养野猪副猪嗜血杆菌的分离鉴定及16S rRNA序列分析

对江西省某家养野猪场临诊疑似副猪嗜血杆菌（Haemophilusparasuis,Hps）感染的病例进行细菌分离鉴定,PCR扩增分离菌株的16SrRNA并进行测序分析,并对分离菌进行细菌形态、生化鉴定和PCR鉴定及序列比对分析。结果显示,获得1株家养野猪源Hps分离株（命名为HPJXYZ01）,该分离株与国内外参考菌株序列之闻的同源性为93．1％～99．2％,与本实验室江西省家猪源分离株的同源性为84％～92．1％。结果表明,江西省家养野猪中存在Hps感染,分离株与国内外家猪源Hps间的16SrRNA序列差异不大,Hps16SrRNA核苷酸序列比较稳定,其进化不存在明显的地域相关性。     

应用23S rRNA对禽波氏杆菌分离株的进化分析

通过PCR扩增分离保存的8株禽波氏杆菌、3株兔支气管败血波氏杆菌及1株猪支气管败血波氏杆菌菌株的23S rRNA基因的片段(710bp),分别克隆到载体pMD18-T后测序。利用BLAST工具进行同源性搜索;用DNAStar分析软件进行同源核苷酸序列的多重比较分析并构建禽波氏杆菌菌株的系统生物进化树。结果显示,8株禽波氏杆菌核苷酸序列之间同源性为99.2%～99.7%,与GenBank中收录的NC_010645株禽波氏杆菌核苷酸序列同源性为92.4%～92.5%,与兔支气管败血波氏杆菌和猪支气管败血波氏杆菌的核苷酸序列同源性均为98.5%～99.2%。国内分离的禽波氏杆菌菌株和支气管败血波氏杆菌菌株均与国外分离菌株在遗传基因上有一定的差异。结果表明,23S rRNA序列分析可以作为鉴定禽波氏杆菌的一种快速简便的方法。     

兔支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析

对从内蒙古海拉尔区某规模化兔场病死仔兔肺脏中分离到的1株病原菌进行了培养特性观察、革兰染色、生化试验与PCR鉴定,鉴定结果显示该分离菌株为支气管败血波氏杆菌。为进一步了解该菌株的耐药情况,对其进行了药敏试验及部分耐药基因的检测,结果表明分离菌株对青霉素G、阿莫西林、头孢拉啶等β-内酰胺类抗生素耐药严重,其次为四环素类抗生素,对卡那霉素、诺氟沙星等氨基糖苷类与喹诺酮类抗生素高度敏感。耐药基因检测筛选到bla TEM与tet B两种耐药基因,与分离菌的耐药表型相符。实验结果对兔波氏杆菌病的临床合理用药具有重要的指导意义。     

兔支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及其生物学特性测定

本实验对赤峰市种兔场送检的病兔进行实验室诊断。经病理剖检、病原分离培养分离到两株细菌，通过对其形态学、培养特性、生化试验鉴定为兔支气管败血波氏杆菌。而对其致病性和药物敏感性等生物学特性进行的测定结果表明，分离菌株具有较高的致病性，对青霉素类药物呈高度敏感，而对磺胺类药物敏感性较低。     

家兔支气管败血波氏杆菌的分离鉴定

从病死兔的肺部病变组织中分离到6株细菌,对其形态学、培养特性、生化试验、血清学反应、毒力测定和药物敏感性试验等进行研究。结果表明,分离菌株均属支气管败血波氏杆菌,具有较高的致病性;6株菌对四环素、左氟沙星、环丙沙星、复方新诺明、阿奇霉素等呈高度敏感。     

16S rRNA、23S rRNA及16S～23S rRNA基因在细菌分离与鉴定中的应用

在细菌的进化过程中,rRNA结构既具保守性又具高变性.保守性反映生物物种的亲缘关系,高变性则揭示生物物种的特征核酸序列,rRNA是属种鉴定的分子基础.因此,可以利用保守区设计通用引物扩增细菌的相应靶序列,再利用可变区的差异鉴别菌种,文章就16S rRNA、 23s rRNA和16S～23S rRNA基因在细菌分离与鉴定中的应用做以下综述.     

四川地区兔波氏杆菌分离鉴定及耐药性分析

为研究四川地区兔波氏杆菌的分布状况及耐药性,采用微生物学方法对2020—2021年四川地区病死兔进行波氏杆菌的分离鉴定,并采用K-B纸片琼脂法对分离鉴定的兔波氏杆菌进行耐药性分析。结果表明：共分离出35株兔波氏杆菌,分离率为26.52%(35/132)。对10大类22种抗生素的耐药率为48.57%～85.71%,其中对替加环素、氟苯尼考、妥布霉素、庆大霉素、卡那霉素、四环素、多西环素较为敏感,而对头孢匹罗、头孢噻肟、头孢拉定、恩诺沙星、左氧氟沙星、诺氟沙星、青霉素、氨苄西林、阿莫西林、林可霉素、克林霉素、红霉素、麦迪霉素、磷霉素存在较高的耐药率,耐药率为48.57%～85.71%。反应了四川地区兔波氏杆菌存在较为严重的抗生素耐药,研究结果对兔波氏杆菌病的临床合理用药具有重要的指导意义。