幽门螺杆菌全菌抗原对母鸡的免疫原性

目的　研究幽门螺杆菌 (Hp)全菌抗原的免疫原性及Anti Hp IgY的预防和治疗作用。方法　用超声Hp波粉碎的Hp抗原免疫产蛋母鸡 ,通过IHA和ELISA间接法检测母鸡的免疫应答。用SDS PAGE分析Hp全菌抗原 ,并用抗Hp IgY做免疫印迹。结果　母鸡免疫成功率为 10 0 %。初免 45d后 ,抗Hp IgYIHA效价为 1∶10 2 4,ELISA效价超过 1∶45 0 0 0。Hp抗原的SDS PAGE显示有 2 6条蛋白染色带 ,其中主带有 10条 ,免疫印迹表明Hp的超声粉碎物特异性抗原蛋白带相对分子质量为 70 0 0 0、6 6 0 0 0、42 0 0 0、3430 0、2 95 0 0、2 70 0、185 0 0。结论　本研究为工业化制备抗Hp IgY奠定了基础     

幽门螺杆菌重组VacA蛋黄抗体的制备

目的研制高效价、高特异性的抗细胞空泡毒素VacA的鸡蛋黄抗体(IgY),为研制幽门螺杆菌(H.pylori)治疗性抗体奠定基础。方法用纯化的重组细胞空泡毒素抗原免疫22周龄洛曼产蛋母鸡,取免后所产鸡蛋,将蛋黄稀释、离心,收集上清,加硫酸铵沉淀。以ELISA间接法检测抗体效价,Bradford法检测蛋白含量,SDS-PAGE法检测相对分子质量及纯度。结果母鸡初次免疫后76d,抗体效价达到1∶6400,最高可达1∶12800。蛋黄抗体经纯化浓缩后,用SDS-PAGE分析,出现2条蛋白带,纯度可达80%以上,其含量为25·66mg/ml。结论已成功制备了抗重组细胞空泡毒素的特异性蛋黄抗体。     

IgY抗体对幽门螺旋菌菌体抗原细胞毒活性的中和作用

以超声震荡及高速离心法裂解空泡毒素基因阳性 (VacA+ )HP临床分离株 ;采用Hela细胞体外培养法分析此HP菌体蛋白的细胞毒活性及其免疫产卵母鸡制备的IgY抗体的保护作用。HP菌体抗原制备物经SDS PAGE显示至少有十余个蛋白区带 ,主要区带位于约 940 0 0和 6 70 0 0。以此HP菌体抗原包被的ELISA显示 ,球部溃疡患者血清IgG抗体滴度明显增高。体外培养中HP菌体蛋白制备物对Hela细胞具有明显的细胞毒活性 ,LD50 小于 12 μg/ml。以此抗原免疫产卵母鸡 ,提取的IgY抗体浓度依赖地阻断HP菌体蛋白的Hela细胞毒活性 ;提示局部应用抗体制剂做被动免疫 ,有可能成为治疗HP感染性疾病的有效方法     

硫糖铝对抗幽门螺杆菌重组VacA卵黄抗体的保护作用

目的观察硫糖铝对抗幽门螺杆菌重组细胞空泡毒素抗原(VacA)卵黄抗体(IgY)的保护作用,为制备能耐受胃酸和蛋白酶的IgY制剂奠定基础。方法诱导重组菌DH5α-vacA-pQE30,大量表达并纯化VacA重组蛋白,免疫洛曼母鸡,制备VacAIgY,并进行纯化。在不同pH值的IgY液中加入不同浓度的硫糖铝和不同浓度的胃蛋白酶,将含不同浓度硫糖铝的IgY反复冻融7次,将含30%硫糖铝的IgY室温放置1d～4周,ELISA法测定各实验组IgY的相对抗体活性(AT/AC)。结果在pH1.5、2.0和3.0的条件下,含30%～60%硫糖铝的IgY的相对抗体活性高于不加硫糖铝的IgY;在pH1.5条件下,60%硫糖铝可使IgY的相对抗体活性保持68.7%;在pH2.0和3.0条件下,50%和40%以上的硫糖铝几乎可完全保持IgY的相对抗体活性。在pH值为2.0和3.0时,正常胃蛋白酶浓度(0.02mg/ml)下,30%以上的硫糖铝均可有效保护IgY的相对抗体活性。30%以上的硫糖铝可增强IgY的抗冻融能力。室温放置4周后,含30%硫糖铝的IgY仍能保持80%以上的相对抗体活性。结论30%以上的硫糖铝可增强VacAIgY对低pH和胃蛋白酶的耐受能力及抗冻融能力,是较理想的IgY保护剂。     

抗金黄色葡萄球菌及溶血性链球菌IgY的制备及临床疗效观察

目的制备抗金黄色葡萄球菌及溶血性链球菌鸡卵黄IgG(IgY),并观察其治疗急性咽炎的临床疗效。方法将金黄色葡萄球菌及溶血性链球菌混合免疫母鸡,使用水稀释法、超滤法、西曲溴胺除脂法和硫酸铵盐析法提取、纯化IgY后,经全面检定,对110例急性咽炎进行临床疗效观察,治疗组60例,使用0·2%IgY口腔喷剂治疗7d;对照组50例,口服双黄连胶囊7d。结果IgY粗提物和纯化物纯度分别为41·6%和96·0%,效价分别达1∶1024和1∶8192;IgY粗提物在pH2·07~11·71条件下7d,效价基本不变;2·5~10·0mg/ml的纯化物抑制率为20·81%~68·11%。治疗组治愈率为26·67%,显效率为36·37%,有效率为30·00%,无效率为6·67%,总有效率为93·33%;对照组治愈率为12·00%,显效率为18·00%,有效率为44·00%,无效率为26·00%,总有效率为74·00%,差异有非常显著意义(P<0·005)。治疗组未见毒副作用。结论金黄色葡萄球菌及溶血性链球菌能够诱导母鸡产生特异性抗体,治疗急性咽炎疗效显著、安全。     

《牙膏生产技术理论》系列讲座 第五讲 牙膏原料技术理论(下)(待续)

正12.6卵黄免疫球蛋白(IgY抗体制剂)12.6.1基本特性鸡卵黄免疫球蛋白G抗体是一种7S免疫球蛋白,与哺乳动物IgG略有不同。分子量约为180 kDa,含2个亚单位,即67~70 kDa的重链和22~30 kDa的轻链,又称IgY(Yolk Immunoglobulin),存在于免疫后母鸡的卵黄中。IgY的性质与哺乳动物的IgG相似,正常鸡的IgY等电点约为5.2,具有典型的免疫球蛋白的空间构象~([7])。12.6.2抗龋齿的作用机理IgY可直接抑制导致龋齿产生的细菌菌群(如变异链球菌),使其失去粘附性能,同时影响其产酸,使牙面的pH保持在6.0以上。IgY可从源头上帮助预防龋齿。     

抗甲型肝炎病毒卵黄免疫球蛋白的制备及应用

目的制备抗甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)卵黄免疫球蛋白(immunoglobulin of yolk,IgY),并建立双抗体夹心ELISA法,用于测定甲肝疫苗中的HAV抗原含量。方法用纯化的HAV免疫健康产蛋母鸡,制备抗HAV IgY,采用多步骤分离纯化IgY,紫外分光光度法测定纯化IgY的蛋白含量,还原型SDS-PAGE分析IgY的相对分子质量及纯度,间接ELISA法检测IgY的效价、特异性及其热稳定性和酸碱稳定性。以纯化的IgY作为包被抗体,HRP标记的抗HAV单克隆抗体作为二抗,建立双抗体夹心ELISA法,对疫苗生产过程中的HAV抗原含量进行测定,并与市售ELISA试剂盒的检测结果进行比较。结果亲和层析纯化后的抗HAV IgY浓度为3.67 mg/ml;重链和轻链的相对分子质量分别为66 000和27 000,纯度为96.78%;效价最高为1∶16 000;纯化的抗HAV IgY只与HAV呈阳性反应,与脊髓灰质炎病毒和肠道病毒71(enterovirus 71,EV71)均不反应;纯化的抗HAV IgY在25⁷0℃条件下处理15 min及经pH 3.070℃条件下处理15 min及经pH 3.0¹0.0的Tris-HCL缓冲液处理2 h,其抗体效价基本无影响。建立的双抗体夹心ELISA法HAV浓度在15.6210.0的Tris-HCL缓冲液处理2 h,其抗体效价基本无影响。建立的双抗体夹心ELISA法HAV浓度在15.62² 000.00 ng/ml范围内,HAV浓度的对数值与A450值之间呈线性相关,R2=0.935,最低检测量为7.81 ng/ml,与市售试剂盒检测结果具有良好的相关性,相关系数为0.952 7。结论制备的抗HAV IgY浓度、纯度、效价均较高,特异性较强,稳定性良好,建立的双抗体夹心ELISA法可用于检测甲肝疫苗生产过程中HAV的抗原含量。     

抗氯霉素卵黄抗体的制备及其分离纯化

将合成的氯霉素(CAP)与牛血清白蛋白(BSA)的偶联物(CAP-BSA)作为免疫抗原注射到母鸡体内得到氯霉素卵黄抗体(IgY). 比较了不同的提取方法,用优化的辛酸-硫酸铵沉淀法从卵黄液中初步提取卵黄抗体. 选用3,3￠-二氨丙基亚胺(DADPA)作为亲和凝胶与配基氯霉素之间的"间隔臂",合成了分离纯化抗氯霉素特异性IgY的亲和层析柱. 将IgY粗品经过亲和层析柱,得到的特异性IgY的抗体活性提高了10倍,收率约为3.3%.     

加在牙膏内的IgY活性检测方法的初步摸索

抗龋免疫球蛋白胨(IgY)是从免疫母鸡所产鸡蛋的卵黄中提取的抗体物质。将此物质添加到牙膏中，通过．日常刷牙将IgY直接与牙齿接触，使致龋的变形链球菌失去活力不能再生，使龋病在根本和源头上得到抑制，不需添加氟化物，避免儿童在刷牙时因误吞而带来的氟危害，是真正意义上的安全牙膏。建立牙膏中IgY活性检测方法，对产品的评估有着重要意义。     

抗胃癌基因产物的IgY抗体的研究

将人胃癌细胞系MGC803细胞中,由癌基因编码的P_(110)蛋白提纯作为抗原免疫产卵母鸡,从该鸡所产卵的卵黄中提出一种对人胃癌具有特异性的IgY抗体。该抗体与人胃癌组织的免疫组化反应率为80％,明显高于其他癌组织及正常胃组织。将该抗体与蓖麻毒素A链交连成IgY-Riein A,分别攻击培养中的人胃癌及其他癌细胞,结果IgY-RicinA对人胃癌细胞的TCID_(50)为0.01mg/ml,明显低于其他癌细胞。表明所制备的IgY是一种较好的抗肿瘤多克隆抗体。     

Association of lunch meat consumption with nutrient intake,diet quality and health risk factors in U.S. children and adults: NHANES 2007–2010

Oral administration of preformed specific antibodies is an attractive approach against infections of the digestive system in humans and animals in times of increasing antibiotic resistances. Previous studies showed a positive effect of egg yolk IgY antibodies on bacterial intoxications in animals and humans. Immunization of chickens with specific antigens offers the possibility to create various forms of antibodies. Research shows that orally applied IgY’s isolated from egg yolks can passively cure or prevent diseases of the digestive system. The use of these alternative therapeutic drugs provides further advantages: (1) The production of IgY’s is a non-invasive alternative to current methods; (2) The keeping of chickens is inexpensive; (3) The animals are easy to handle; (4) It avoids repetitive bleeding of laboratory animals; (5) It is also very cost effective regarding the high IgY concentration within the egg yolk. Novel targets of these antigen specific antibodies are Helicobacter pylori and also molecules involved in signaling pathways in gastric cancer. Furthermore, also dental caries causing bacteria like Streptococcus mutans or opportunistic Pseudomonas aeruginosa in cystic fibrosis patients are possible targets. Therefore, IgY’s included in food for human consumption may be able to prevent or cure human diseases.     

酸性条件下糖对抗HpaAIgY的保护作用

目的探讨酸性条件下5种糖对抗HpaA蛋黄抗体(IgY)的保护作用,为寻找提高IgY耐酸性的保护剂,制备口服防治幽门螺杆菌(H.pylori)感染的IgY制剂提供理论依据。方法建立检测抗HpaAIgY的间接ELISA法,用不同pH值的模拟胃液分别配制IgY液(IgY终浓度为1.0mg/ml),以pH1.0、2.0和3.0的模拟胃液分别配制含20%菊糖、山梨醇、葡萄糖、蔗糖、葡聚糖的IgY液(IgY终浓度为1.0mg/ml),用pH2.0的模拟胃液分别配制含不同浓度的菊糖、山梨醇的IgY液(IgY终浓度为1.0mg/ml)。上述IgY液均于37℃孵育2h,采用间接ELISA法测定IgY的抗体效价。结果 IgY的活性随着模拟胃液pH值的降低而明显下降;在酸性环境下,5种糖对IgY均有一定的保护作用,以山梨醇和菊糖的保护作用较强;在pH2.0时,40%山梨醇和30%菊糖对IgY的保护作用最强,分别能保存80.3%和73.4%的IgY活性。结论在酸性条件下,糖对IgY均有一定的保护作用,菊糖和山梨醇可作为特异性IgY的保护剂。     

Passive Immune-Protection of Litopenaeus vannamei against Vibrio harveyi and Vibrio parahaemolyticus Infections with Anti-Vibrio Egg Yolk (IgY)-Encapsulated Feed

Vibrio spp. are major causes of mortality in white shrimp (Litopenaeus vannamei) which is lacking adaptive immunity. Passive immunization with a specific egg yolk antibody (IgY) is a potential method for the protection of shrimp against vibriosis. In this study, immune effects of the specific egg yolk powders (IgY) against both V. harveyi and V. parahaemolyticus on white shrimp were evaluated. The egg yolk powders against V. harveyi and V. parahaemolyticus for passive immunization of white shrimp were prepared, while a tube agglutination assay and an indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) were used for detection of IgY titer. Anti-Vibrio egg yolk was encapsulated by β-cyclodextrin, which could keep the activity of the antibody in the gastrointestinal tract of shrimp. The results showed that the anti-Vibrio egg powders had an inhibiting effect on V. harveyi and V. parahaemolyticus in vitro. Lower mortality of infected zoeae, mysis, and postlarva was observed in groups fed with anti-Vibrio egg powders, compared with those fed with normal egg powders. The bacterial load in postlarva fed with specific egg powders in seeding ponds was significantly lower than those fed with normal egg powders in seeding ponds. These results show that passive immunization by oral administration with specific egg yolk powders (IgY) may provide a valuable protection of vibrio infections in white shrimp.     

水稀释硫酸铵盐析法纯化卵黄抗体

以人的免疫球蛋白G1(IgG1)为抗原对无特定病原体(SPF)级来航鸡进行免疫,在34周内采集血清并收集所产鸡蛋,采用水稀释硫酸铵盐析法从鸡蛋卵黄中纯化得到了抗人IgG1的鸡卵黄抗体(IgY),测定了纯化工艺中每一步的蛋白收率,并对免疫周期内不同时间卵黄中抗体的质量浓度、亲和能力及特异性进行了考察。结果显示蛋白总收率为4.90%,其中超滤和沉淀是影响总收率的主要因素;血清和卵黄中抗体的质量浓度在第22—23周达到最大值;亲和常数在第8周达到最大,为1.1×109L/mol;IgY抗体与其他种属的IgG抗原不发生结合,是一种高特异性的抗体。该纯化方法不仅能够制备出纯度很高的抗体,而且工艺简单、经济,易于大规模生产。     

防龋卵黄抗体的研制

应用本室构建的龋齿疫苗工程菌株及 GTF抗原免疫母鸡 ,取鸡卵黄以水 -硫酸铵 -离子交换层析法提取纯化蛋黄抗体 (Ig Y ) ,以放免法测定血清及蛋黄中的抗体。结果用上述 2种抗原免疫的鸡 ,在血清及蛋黄中均能检出抗 GTF抗体。提纯的蛋黄抗体 ,经 SDS- PAGE电泳检测 ,相对分子质量约为 2 2 0 0 0 0 ,纯度达到 97.9% ,经 2 -巯基乙醇处理后 ,分为重链和轻链 ,相对分子质量分别约为 76 0 0 0和 2 80 0 0。经免疫印迹分析 ,具有良好的免疫学特异性。