外用重组人粒细胞-巨噬细胞刺激因子凝胶对烧烫伤动物的疗效

目的观察外用重组人粒细胞-巨噬细胞刺激因子(rhGM-CSF)凝胶对实验性动物烧烫伤的治疗作用。方法采用电烙铁方法建立实验性大鼠烫伤创面,烫伤部位分别采用外用rhGM-CSF凝胶基质、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)喷雾剂、外用rhGM-CSF凝胶高(20μg/cm2)、低(5μg/cm2)剂量进行治疗,观察外用rhGM-CSF凝胶对烫伤创面的治疗作用,包括烫伤皮肤的病理学检查、烫伤创面的愈合情况、烫伤创面的感染情况及烫伤动物的死亡情况。采用凝固气油烧灼建立实验性小鼠Ⅲ°烧伤模型,烧伤部位分别采用rhGM-CSF凝胶基质、bFGF喷雾剂和外用rhGM-CSF凝胶进行治疗,观察小鼠死亡数量、感染情况及创面愈合后生毛时间。结果与凝胶基质对照组比较,外用rhGM-CSF凝胶高、低剂量治疗大鼠烫伤后的皮肤愈合时间明显缩短。病理检查结果显示,外用rhGM-CSF凝胶高、低剂量治疗大鼠烫伤创面的愈合程度明显优于凝胶基质对照组。外用rhGM-CSF凝胶对小鼠Ⅲ°烧伤具有保护和抗感染作用。烫伤创面愈合后生毛时间明显短于凝胶基质对照组。结论外用rhGM-CSF凝胶对实验性动物烧烫伤具有较好的治疗效果。     

重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子壳聚糖-海藻酸钠微囊的制备

目的以壳聚糖和海藻酸钠为原料,制备重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)微囊,探讨开发口服蛋白多肽类药物的可行性。方法以rhGM-CSF为药物模型,通过壳聚糖与海藻酸钠聚电解质的络合反应制备rhGM-CSF壳聚糖-海藻酸钠微囊,观察微囊的形态大小,测定其包封率,不同pH值下的膨胀度和体外释放率。结果制备的rhGM-CSF壳聚糖-海藻酸钠微囊呈均匀、完整的圆球形,平均直径1mm左右;包封率达80%以上;在模拟肠液(磷酸盐缓冲液,pH7.4)中浸泡3h,膨胀度可达600%,药物释放率达85%以上。结论壳聚糖-海藻酸钠微囊具有肠溶控释作用,有望成为rhGM-CSF等蛋白类口服药物的控释载体。     

重组人粒细胞集落刺激因子的氨基酸组成分析

目的分析重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)的氨基酸组成。方法应用氨基酸分析仪,采用离子交换色谱茚三酮柱后衍生法对rhG-CSF进行氨基酸组成分析。样品采用常规酸水解处理后,以氨基酸标准溶液外标法进行测定。结果系统对标准溶液各个氨基酸组分均有良好的分离。3支rhG-CSF样品的9次测定结果除Met外,均较接近,变异系数较小,与理论值基本一致。结论采用氨基酸自动分析仪柱后衍生法分析氨基酸组成重复性好,误差较小,可用于rhG-CSF的质量控制。     

重组人粒细胞刺激因子注射液比活性的对比分析

目的评估国产重组人粒细胞刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulating factor,rhG-CSF)注射液比活性的总体水平。方法收集2009及2017年国家抽验性评价部分批次rhG-CSF样品的比活性数据,并与近5年进口注册检验部分批次rhG-CSF样品进行比较分析。结果 2009部分批次rhG-CSF样品比活性均值为0. 74×10⁸IU/mg,标准差为0. 10×10⁸IU/mg;2017部分批次rhG-CSF样品比活性均值为0. 83×10⁸IU/mg,标准差为0. 15×10⁸IU/mg;进口注册批次比活性数据的均值为0. 93×10⁸IU/mg,标准差为0. 17×10⁸IU/mg。结论国产rhG-CSF注射液质量不断提升,与进口制品间的差距在逐渐缩小,部分企业制品的质量已达到进口药品水平。     

重组人粒细胞集落刺激因子的生物学活性分析

目的评价近年重组人粒细胞集落刺激因子(Recombinant human grenulocyte colony-stimulatiny factor,rhG-CSF)的生物学活性及其检测方法的应用情况。方法采用mNFS-60细胞/MTT比色法对41批不同来源的rhG-CSF进行生物学活性检测,对中国食品药品检定研究院与各生产企业的检测结果进行比较,评价中国食品药品检定研究院检测rhG-CSF生物学活性结果的可信性。结果 37批国产rhG-CSF的生物学活性检测结果均符合《中国药典》三部(2010版)质量要求,4批进口rhG-CSF的生物学活性均符合进口拟定质量标准(JS20070016)要求。中国食品药品检定研究院与各企业的rhG-CSF生物学活性检测结果差异均无统计学意义(P>0.05)。结论近年上市的rhG-CSF生物学活性达到《中国药典》三部(2010版)质量要求;该制品的生物学活性检测方法在全国范围内应用情况良好。     

重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子溶瘤2型单纯疱疹病毒注射液(Vero细胞)的药效学分析

目的分析重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)溶瘤2型单纯疱疹病毒(oncolytic herpes simplex virus type 2,OH2)的体内、外药效。方法按不同感染复数(MOI)=0.002、0.01、0.05、0.25、1.25分别感染人结肠癌细胞(Lo Vo)和人喉癌细胞(Hep2),MTT法检测OH2在体外的溶瘤作用。经BALB/c-nu正常小鼠右侧肋腹皮下分别注射Lo Vo细胞和Hep2细胞,当肿瘤平均体积100 mm~3时,试验组于肿瘤内分别注射高、中、低剂量的OH2(1×10~7、1×10~6、1×10~5 CCID_(50)/m L),同时设阳性对照组(5 mg/m L的5-FU)及阴性对照组(DMEM/F12培养基),于第0、3和6天进行注射。首次注射后第0、3、6、9、12、15、18天测量肿瘤长径(a)和宽径(b),计算肿瘤体积(tumor volume,TV)及相对肿瘤增殖率。结果 OH2在较小浓度下(MOI分别为0.168和0.063)即可较好地杀伤Lo Vo和Hep2细胞。与阴性对照组比较,两种肿瘤模型的OH2高、中、低剂量组及阳性对照组均有显著抑瘤效果(P0.05);Lo Vo肿瘤模型中,OH2高剂量组的抑瘤效果明显优于中、低剂量组(P0.05);Hep2肿瘤模型中,OH2高、中、低剂量组的抑瘤效果差异无统计学意义(P0.05)。结论 OH2在体外和体内实验中均显示较好的溶瘤作用,具有新生物药开发前景,为临床前研究提供了实验依据。     

表达人粒细胞集落刺激因子大肠杆菌的优化

通过对hG CSF重组基因表达效率和工程菌遗传稳定性的比较 ,建立的一种全新的双质粒双重诱导的原核高效表达体系。构建了pGP1 2 pJGW1 hGCSF DH5α工程菌 ,经 42℃热诱导 ,hG CSF的表达率达 2 7%以上 ,经典质粒遗传稳定性实验 (140代 )证实 ,具有良好的遗传稳定性。     

重组人粒细胞集落刺激因子预防恶性肿瘤患者化疗期感染的效果

目的　观察重组人粒细胞集落刺激因子预防恶性肿瘤患者化疗期感染的效果。方法　分析 67例(112例次 )小细胞肺癌、非小细胞肺癌和肠癌患者化疗期辅用或不辅用重组人粒细胞集落刺激因子的感染情况。结果　 2组患者化疗期感染 40例次 (感染率 3 5 .7% ) ,其中非重组人粒细胞集落刺激因子组 (5 0 .0 % )是重组人粒细胞集落刺激因子组 (2 6.5 % )的近两倍 ,在不同性别、年龄和临床分期方面 ,重组人粒细胞集落刺激因子组患者感染率只有男性组明显低于非重组人粒细胞集落刺激因子组。但 2组感染后治疗效果差异无显著性意义。结论　重组人粒细胞集落刺激因子可明显减少恶性肿瘤患者化疗期感染的机会 ,从而使其所导致的死亡率降低。同时可缩短患者住院时间 ,减少住院费用 ,提高患者的生活质量     

重组人粒细胞刺激因子化学稳定性的影响因素探讨

重组人粒细胞刺激因子是一种非常重要的重组蛋白质药物,它容易发生蛋白质氧化。采用反相色谱法测定37℃加速试验和4℃长期稳定性试验中该产品的纯度变化,研究其保藏过程中的化学稳定性。考察了添加氧化剂和还原剂对产品的短期和长期稳定性作用,结果表明所有氧化剂包括过氧化氢和亚硝酸盐都具有较强的浓度效应而还原剂具有较强的pH依赖性。当亚硝酸盐浓度大于0.1 ppm时,具有明显的氧化作用。进一步考察了不同包装材料和过渡态金属离子对化学稳定性的作用。安瓿瓶火焰融封时会导致过渡态金属离子的溶出,结果表明亚铁离子催化活性最强,在0.05 ppm浓度下就具有明显的氧化作用。加入抗氧化剂L-Met能在一定程度上降低长期保藏过程中化学不稳定性,而添加金属螯合剂EDTA二钠能够明显提高该重组蛋白药物的化学稳定性。     

重组牛碱性成纤维细胞生长因子治疗Ⅱ度烧伤的临床疗效

目的 观察重组牛碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对烧伤创面愈合的治疗作用。方法 选择浅Ⅱ度和深Ⅱ度烧伤病例共920例,分别用bFGF治疗其烧伤创面,用药剂量为144U/cm2观察伤后8d（浅Ⅱ度）和15d（深Ⅱ度）创面愈合率,以及创面完全愈合时间。结集8d愈合率总体治疗组为77.6％±24.4％,对照组为51.7％±26.4％;完全愈合时间总体治疗组为9.6±2.4d,对照组为12.6±2.9d。15d愈合率总体治疗组为75.2％±26.3％,对照组为53.3％±25.4％;完全愈合时间总体治疗组为17.5 ±4.5d,对照组为21.9±5.5d。结论 bFGF具有明显的促进Ⅱ度烧伤创面愈合的作用。     

重组人角质细胞生长因子异构体抗实验性肝纤维化的作用

目的观察重组人角质细胞生长因子(rhKGF)异构体(K102)对实验性肝纤维化的预防和治疗作用。方法取90只Wistar大鼠,随机分为K102大剂量组(2.0mg/kg),K102小剂量组(0.5mg/kg)和模型对照组,用50%CCl4与精制花生油按1:1(v/v)比例混合,灌服大鼠,每周2次,同时K102大、小剂量组皮下注射相应剂量的K102,模型对照组皮下注射等量溶媒,分别连续用药6周和8周。另取36只大鼠,随机分为3组,复制肝纤维化模型后,再给予相应药物6周,同时设正常大鼠对照组(12只)。实验结束后处死各组动物,并采集血液和肝脏组织,检测肝功、肝组织羟脯氨酸含量,并进行肝脏病理和胶原特殊染色观察。结果 K102能明显改善大鼠的肝功,降低肝组织羟脯氨酸含量,与模型对照组比较,差异有统计学意义。肝脏病理观察显示,K102治疗组较模型对照组病变轻微;胶原特殊染色显示,K102治疗组中仅见少量胶原纤维。结论 K102对实验性肝纤维化有一定的预防和治疗作用,为临床研究提供了依据。     

重组人酸性成纤维细胞生长因子滴眼液的制备及其稳定性

目的制备重组人酸性成纤维细胞生长因子(rhaFGF)滴眼液,并进行稳定性检测。方法在rhaFGF中添加复方保护剂,并以透明质酸钠作为保湿剂,制备rhaFGF滴眼液,对其进行鉴定和体外药效学检测,并进行稳定性试验。结果制备的3批滴眼液各项质量指标均合格,可促进碱烧伤家兔角膜细胞和鸡胚绒毛膜血管增殖。在4℃保存12个月,-20℃保存18个月,(25±2)℃保存6个月,滴眼液各项质量指标与0月基本一致。结论制备的rhaFGF滴眼液稳定性良好,可促进损伤角膜细胞修复。     

人重组生长激素对豚鼠心室肌细胞动作电位钙通道的作用

目的 探讨人重组生长激素正性肌力作用的机制。方法 利用Langendorff模型以及膜片钳技术研究心肌细胞内向钙电流。结果 受到人重组生长激素作用10min后,动作电位平台期延长,APD50、APD90分别由261.14±15.42ms至354.65±31.22ms和311.23±13.7至401.33±18.13ms。最大内向峰电流(Ica)由 2.03±0.09升至2.85±0.11PA,增加约40％。结论 人重组生长激素延长动作电位平台期,促进正常豚鼠心肌细胞L-Ca2+通道开放。     

注射用重组人B淋巴细胞刺激因子受体-抗体融合蛋白对大鼠生育力及早期胚胎发育的毒性作用

目的观察注射用重组人B淋巴细胞刺激因子受体-抗体融合蛋白(RCT-18)对大鼠生育力及早期胚胎发育的毒性作用。方法将SD大鼠随机分为4组,分别经皮下注射RCT-18 129、37、11 mg/(kg.d)和0.9%NaCl注射液,每2 d给药1次。雄鼠连续给药5周、雌鼠连续给药2周后,按雌雄1∶1的比例合笼交配,合笼期为2周,计算交配率。雄鼠继续给药至交配成功,雌鼠继续给药至妊娠第6天。实验过程中观察动物的一般反应、体重及摄食量变化。确定雌鼠受精后处死雄鼠,解剖检查睾丸和附睾等生殖器官。于妊娠第15天解剖孕鼠,综合评价妊娠及胚胎形成和早期发育等情况。结果 RCT-18高、中、低剂量组雌性和雄性大鼠均未出现明显的母体毒性反应。各组大鼠各脏器均未见肉眼可见的异常。各剂量RCT-18对大鼠的交配率、妊娠率、生殖系统脏器重量和系数以及早期胚胎发育均无明显影响。结论RCT-18对SD大鼠的生育力及早期胚胎发育无明显毒性作用。     

针刺分离术联合重组人α2b干扰素球结膜下注射治疗包裹性囊状滤过泡的疗效

目的观察针刺分离术联合滤过泡旁注射α2b干扰素治疗小梁切除术后包裹性囊状滤过泡的疗效。方法对12名小梁切除术后并发包裹性囊状滤过泡的患者行针刺分离术,术后滤过泡旁注射α2b干扰素。随访观察眼压和滤过泡形态。结果治疗前平均眼压为(27.67±2.96)mmHg,治疗后为(15.25±3.02)mmHg,治疗前后眼压比较,差异有显著意义。治疗后Ⅰ型滤过泡3眼,Ⅱ型滤过泡8眼,Ⅲ型滤过泡1眼。结论针刺分离术联合干扰素可以治疗早期治疗失败的滤过泡,增加滤过手术的成功率,值得临床上推广应用。     

重组人干扰素α2b阴道泡腾片抗豚鼠单纯疱疹病毒性阴道炎的疗效

目的观察重组人干扰素α2b阴道泡腾片对单纯疱疹病毒性阴道炎动物模型的疗效。方法采用单纯疱疹病毒感染建立豚鼠实验性阴道炎模型,并分别用重组人干扰素α2b阴道泡腾片600、3 000和15 000 IU/只进行治疗。以阿昔洛韦(无环鸟苷)和干扰素α2b栓剂15 000 IU/只作为对照。对治疗前后豚鼠阴道外观及组织切片进行评分。结果应用重组人干扰素α2b阴道泡腾片对豚鼠实验性单纯疱疹病毒性阴道炎进行治疗后,豚鼠阴道外观病变与组织切片病变评分均显著降低,其中15 000 IU/只效果最好。同样剂量的α2b泡腾片药效优于栓剂。结论重组人干扰素α2b阴道泡腾片对实验性单纯疱疹病毒性阴道炎有明显的疗效。