人巨细胞病毒增殖性感染新生乳鼠大脑皮质神经细胞

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)AD169株在体外增殖性感染新生乳鼠大脑皮质神经细胞。方法在长成单层的Balb/c新生乳鼠的大脑皮质神经细胞培养物上,接种TCID50为5×103/3ml的HCMVAD169株感染的HF细胞上清液。通过相差显微镜、PCR、RT-PCR、间接免疫荧光、TCID50、透射电镜等方法观察和鉴定HCMV在神经细胞内的感染状况。结果接种病毒的大脑皮质神经细胞在感染后第1天即可观察到特征性细胞病变效应,且随着感染时间的延长病变逐渐加重;HCMVIE和UL83DNA及mRNA检测均可见阳性条带;HCMVpp65蛋白免疫荧光检测亦为阳性,蛋白质表达量随着培养时间的延长明显提高;TCID50检测随着感染时间的延长病毒滴度逐渐上升;在神经元胞浆内通过透射电镜观察到病毒颗粒。结论HCMVAD169株可能具有增殖性感染乳鼠大脑皮质神经细胞的能力。     

人巨细胞病毒先天性感染对ICR鼠胚胎生长及脑组织发育的影响

目的　探索人巨细胞病毒 (HCMV )先天性感染对胎鼠胚胎生长及脑组织发育的影响。方法　 10周龄的ICR♀♂鼠按 1∶1配对 ,实验组于交配前及妊娠 3天 (E3 )、7天(E7)、15天 (E15)腹腔内接种HCMV悬液 ,对照组接种HF细胞上清液。于E0 、E3 、E6、E9、E12 、E15、E19称取孕鼠体重。临产时剖腹取胚胎的大脑皮质 ,用常规组织切片及HE染色 ,检测组织的病理变化 ,同时取部分组织进行病毒分离。结果　各实验组 (除E15组 )孕鼠自E15后体重较对照组明显降低。组织病理学检查发现 ,各实验组ICR胎鼠大脑皮质血管扩张、充血、出血 ,脑实质有单核细胞浸润 ,部分神经细胞变性坏死或凋亡及噬神经细胞现象 ,软化灶形成 ;受染的神经细胞核内出现HCMV特征性包涵体。E0 、E3 、E7、E15实验组大脑皮质病毒分离阳性率分别为 6 0 %、6 2 %、6 7%、2 5 % ,组间差异显著 (χ2 =13 475 ,P <0 0 5 ) ,E15组低于其他3组。结论　不同孕期ICR胎鼠大脑皮质均可先天性实验感染HCMV且大脑皮质损伤明显 ,胚胎发育迟缓     

人巨细胞病毒p52蛋白基因的克隆及表达

制备人巨细胞病毒Ｐ５２蛋白特异性抗原。方法用ＰＣＲ技术扩增ＨＣＭＶＰ５２蛋白ＩｇＭ抗原决定簇编码区ＤＮＡ片段，克隆表达载体ＰＢＶ２２０中，转化Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５ａ株，用氨苄青霉素抗性和质粒酶切图谱分析法筛选阳性克隆，经温控诱导基表达。     

HCMV先天性感染胎鼠脑组织中iNOS基因的表达

目的　研究人巨细胞病毒 (HCMV)先天性感染小鼠及在不同剂量诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)抑制剂和促进剂的干预下脑组织中的iNOS基因表达情况。方法　将 6～ 8周龄BALB/c小鼠分为 6组 ,每组 6只 ,♀♂各半。A组腹腔注射HCMV 1 0ml,B组、C组腹腔注射HCMV 1 0ml后2d ,分别每天腹腔注射氨基胍 (AG) 2 0 0mg/kg、2 0mg/kg ,D组、E组腹腔注射HCMV 1 0ml后 2d ,分别每天腹腔注射左旋精氨酸 (L Arg) 30 0mg/kg、30mg/kg ,F组为DMEM对照组 ,每天每只 0 2ml。持续 17d。以上各组在孕鼠受孕第19天 ,剖腹取胎鼠 ,观察各组胎鼠生长发育及体重 ,有无皮下出血、淤血等情况 ,同时取胎鼠脑组织 ,作以下检测 :①硝酸还原酶法测定脑组织匀浆中NO代谢产物亚硝酸盐的含量。②RT PCR测iNOSmRNA的转录。结果　HCMV感染各组孕鼠在孕 19d ,其体重明显低于对照组 ,有部分胎鼠发育迟缓并可见明显的出血现象。感染各组胎鼠脑组织匀浆NO代谢产物明显高于DMEM对照组 (P <0 0 0 1) ,以B组尤为明显 ,A、C、E组间无差异显著性。RT PCR在感染各组均扩增出iNOSmRNA特异性条带表达 ,B组信号量最高 ,D组信号最弱。DMEM对照组未检测到iNOS特异性条带。结论　HCMV先天性感染可刺激胎鼠脑组织iNOS的表达 ,其表达产物NO可能参与了脑组织病理损伤     

巨细胞病毒先天性感染对ICR鼠胚胎生长及脑组织发育的影响

目的探索人巨细胞病毒（HCMV ）先天性感染对胎鼠胚胎生长及脑组织发育的影响。方法 10周龄的ICR ♀♂鼠按1∶1配对,实验组于交配前及妊娠3天（E3）、7天（E7）、15天（E15）腹腔内接种HCMV悬液,对照组接种HF细胞上清液。于E0、E3、E6、E9、E12、E15、E19称取孕鼠体重。临产时剖腹取胚胎的大脑皮质,用常规组织切片及HE染色,检测组织的病理变化,同时取部分组织进行病毒分离。结果各实验组（除E15组）孕鼠自E15后体重较对照组明显降低。组织病理学检查发现,各实验组ICR胎鼠大脑皮质血管扩张、充血、出血,脑实质有单核细胞浸润,部分神经细胞变性坏死或凋亡及噬神经细胞现象,软化灶形成;受染的神经细胞核内出现HCMV特征性包涵体。E0、E3、E7、E15实验组大脑皮质病毒分离阳性率分别为60%、62%、67%、25%,组间差异显著（χ2=13.475,P＜0.05）,E15组低于其他3组。结论不同孕期ICR胎鼠大脑皮质均可先天性实验感染HCMV且大脑皮质损伤明显,胚胎发育迟缓。     

人巨细胞病毒与妊娠期感染

孕妇感染人巨细胞病毒后，可导致宫内传播，引发早产、流产、胎儿畸形等不良妊娠结局，存活会留有听力缺陷，智力发育障碍等后遗症，严重影响人口出生质量。本对人巨细胞病毒妊娠期感染的发病情况、诊断及防治进行简要综述。     

人巨细胞病毒活动性感染的分析

目的：调查人类巨细胞病毒（HCMV）活动性感染人群的分布及流行病学特征，为预防和诊治HCMV活动性感染提供证据。方法：用ELISA法测定血清中HCMV活动性感染的特异性抗体HCMV-IgM，并对HCMV-IgM检测人群进行分析。结果：90例健康人群血清HCMV活动性感染率为0，5315例孕妇血清HCMV-IgM检测中有303例为阳性，HCMV活动性感染率平均为5.70%,但孕妇HCMV活动性感染率有逐年下降趋势；51例不明原因的黄疸患者，16例器官移植患者、3例发热待查患者，HCMV活动性感染率分别为3.92%，12.5%。结论：移植患者、孕妇、不明原因的黄疸患者易受HCMV活动性感染，临床上应将其作为高危人群常规筛查HCMV-IgM。     

人巨细胞病毒先天性中枢神经系统感染小鼠模型的建立

将人巨细胞病毒 (HCMV)接种至 8～ 12周龄 BAL -B/ c雌雄小鼠腹腔后合笼交配。待雌鼠临床产时剖宫取出胎鼠脑双侧大脑皮层 ,进行病毒分离、病理学检测及用地高辛标记的 HCMV寡核苷酸探针对大脑皮层细胞压印片进行原位分子杂交检测。病理学研究结果证实 ,鼠脑为侵袭性脑膜炎性病理改变 ,并在神经细胞内发现病毒特征性的大的核内嗜碱性包涵体 ;原位杂交结果显示 ,病毒核酸存在于受染神经细胞及神经胶质细胞核内及胞浆内 ;在鼠脑组织上清液中分离出HCMV。且感染组雌鼠血清特异性 Ig M抗体阳性率为73.9% ,Ig G抗体阳性率为 95 .7% ;而对…     

临床低传代人巨细胞病毒株UL148开放阅读框mRNA的表达与鉴定

目的 研究广州地区人巨细胞病毒(HCMV)临床病毒株特有基因UL148的结构,分析其结构多态性与HCMV先天性感染致病的关系;研究UL148的表达情况,探讨其产物可能的功能及在致病机制中的可能作用.方法 采集广州地区新生儿HCMV感染患者尿液标本进行病毒分离培养,从分离的病毒株中提取病毒DNA,扩增鉴定UL148基因片段;TA克隆,基因测序;抽提病毒总RNA,用RT-PCR方法鉴定UL148基因mRNA表达情况.结果 成功分离到HCMV低传代临床株,获得UL148基因全序列.RT-PCR产物检测582 bp大小的特异性条带,证实了UL148基因mRNA的表达.结论 广州地区临床低传代HCMV分离病毒株存在UL148基因结构,证实UL148开放阅读框是具有mRNA水平表达的基因结构.     

先天性HCMV感染胎鼠大脑皮层ET-1 mRNA的研究

目的　对先天性人巨细胞病毒 (HCMV)感染的胎鼠大脑皮层内皮素 1(ET 1)mRNA进行定性及定量分析 ,探讨先天性HCMV感染致脑损害的机制 ,为临床防治提供一种有价值的手段。方法　在建立HCMV先天性中枢神经系统 (CNS)感染胎鼠模型的基础上 ,用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)测定受不同病毒剂量感染的胎鼠大脑皮质ET 1mR NA ,并用地高辛标记的ET 1寡核苷酸探针对大脑皮层细胞印片进行原位杂交以检测相应mRNA及胞内定位 ,并同步进行病毒分离和病理学检查。结果　病毒分离结果显示 ,在脑组织的上清液中HCMV分离阳性 ;病理学研究证实受染胎鼠大脑皮层表现为侵袭性脑膜炎性改变 ,并在神经细胞内发现特征性核内嗜碱性包涵体 ;受染胎鼠大脑皮层内ET mRNA增加 ,以 1 0ml和 0 5ml组为显著 (P<0 0 0 1) ,而 0 2 5ml组与正常对照组比较差别无显著性。原位杂交结果证实 ,ET 1mRNA主要存在于大脑皮层的胶质细胞中。结论　HCMV可经小鼠胎盘垂直传播至胎鼠脑组织。受染胎鼠大脑皮层ET 1mRNA明显增加 ,且这种结果与所接种的病毒量存在量效关系。ET 1mRNA主要存在于大脑皮层的胶质细胞中可能表明ET 1可作为一种神经调节肽以旁分泌和自分泌方式影响神经组织的功能 ,参与HCMV先天性感染脑损害的过程     

先天性巨细胞病毒、乙型肝炎病毒和弓形体感染的研究

对青岛市276例产妇及其新生儿脐血巨细胞病毒(HCMV)抗体,乙型肝炎病毒(HBV)标记物及弓形体抗体进行了检测。产妇HCMV感染率为98.91%,活动性感染率为18.48%;HBV感染率为39.13%;弓形体感染率仅为1.81%。HCMV,HBV和弓形体的先天性感染率分别为3.99%,2.17%和0。从新生儿出生时情况看,HCMV先天性感染所致危害远大于HBV和弓形体。     

巨细胞病毒在病毒性肝炎中感染状况的研究

为探讨巨细胞病毒（ＣＭＶ）在肝炎患者中的感染情况,利用酶联免疫反应和聚合酶链反应检测２０名助血员的１２６例肝炎患者血清标本的ＣＭＶ－ＩｇＭ、ＣＭＶ－ＩｇＧ和ＣＭＶ－ＤＮＡ。结果肝炎患者的ＣＭＶ感染率与助血员相比无显著性差异（Ｐ〉０．０５）,ＣＭＶ－ＩｇＧ含量在甲型病毒性肝炎、乙型病毒性肝炎、丙型病毒性肝炎单一感染患者中无显著性差异（Ｐ〉０．０５）;而重叠感染患者明显高于一感染患者和助血员（Ｐ〈０．     

先天性感染人巨细胞病毒小鼠肝脏损伤模型的建立

目的:建立人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)先天性感染肝脏损伤的小鼠模型,为研究 HCMV感染性疾病及抗HCMV药物的筛选提供实验基础.方法:取健康纯系清洁级10 周龄Balb/c鼠 24只,雌雄各半,随机分为3组,每组4对.A、B两组为感染组,将6.0 logTCID50 HCMV-...     

巨细胞病毒宫内感染的初步研究

目的：寻找巨细胞病毒宫内感染产前诊断的途径。方法：应用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）和聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，对２４例妊娠患有巨细胞病毒（ＣＭＶ）活动性感染的产妇，分娩的新生儿脐血抗ＣＭＶ－ＩｇＭ型抗体和羊水及尿液ＣＭＶ－ＤＮＡ进行检测。结果：２４例ＣＭＶ活动性感染孕妇中有１４例发生宫内感染，宫内感染率５８．３％，与对照组比较有高度显著性差异。宫内感染儿羊水ＣＭＶ－ＤＮＡ阳性率７８．６％，显著     

人巨细胞病毒p52蛋白基因的克隆及表达

目的制备人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ｐ５２蛋白特异性抗原。②方法用ＰＣＲ技术扩增ＨＣＭＶｐ５２蛋白ＩｇＭ抗原决定簇编码区ＤＮＡ片段，克隆到表达载体ｐＢＶ２２０中，转化Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α株，用氨苄青霉素抗性和质粒酶切图谱分析法筛选阳性克隆，经温控诱导其表达。③结果重组克隆能有效表达天然蛋白ｐ５２，ＥＬＩＳＡ检测重组ｐ５２蛋白具良好的抗原特异性。④结论通过基因工程制备的重组ｐ５２蛋白可作为ＨＣＭＶ血清学诊断的良好抗原。     

孕早期人巨细胞病毒宫内活动性感染的诊断方法学研究

目的　探讨诊断孕早期HCMV宫内活动性感染的实验方法及其价值。方法　留取 68例有异常妊娠史的早孕妇女绒毛组织 ,分为两份 ,一份提取总RNA ,采用RT PCR检测其中的HCMVmRNA ,一部分制成冰冻切片 ,分别采用原位杂交技术 (ISH)检测HCMVmRNA ,免疫组织化学法检测HCMV早期抗原。结果　采用RT PCR检测到的孕早期绒毛组织HCMVmRNA阳性率为 39 7% ;ISH阳性率为 2 3 5 % ;免疫组化检测HCMV早期抗原阳性率2 2 1 %。RT PCR检出率明显高于ISH(P <0 0 5) ,而ISH与免疫组化的阳性率无显著性差异 (P >0 0 5)。结论　测定绒毛组织中的HCMVmRNA、早期抗原是HCMV宫内活动性感染的客观指标。RT PCR的敏感性最高 ,但ISH与免疫组化可同时作定位、定量观察 ,可操作性强 ,因而有较大的临床推广应用价值     

孕妇血清人巨细胞病毒脱氧核糖核酸与先天感染的关系

目的：探讨孕妇血清人巨细胞病毒脱氧核糖核酸（ＨＣＭＶ－ＤＮＡ）与先天感染的关系。方法：应用套式聚合酶链反应检测９６例孕妇血清及３２例孕妇分娩时的脐血清ＨＣＭＶ－ＤＮＡ。结果：９６例孕妇血清ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性检出率为１０．４％;７全犯罪 清ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性孕妇脐血清ＨＭＶ－ＤＮＡ检出率为５７％（４／７）,２５例阴性孕妇脐血甭ＨＣＭＶ－ＤＮＡ检出率为１２％（３／２５）,血清ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性孕     

巨细胞病毒糖蛋白B基因型与新生儿感染关系研究

目的：探讨感染新生儿人巨细胞病毒（HCMV）糖蛋白B（gB）基因型分布，研究不同HCMVgB基因型致病性的差异。方法：采用巢式聚合酶链反应（nested PCR），限制性片段长度多态性（RFLP）分析技术等测定88例感染患儿尿中HCMV gB基因型，并分析gB基因型与不同临床症状的关系。结果：感染新生儿HCMV4个gB基因型分布为gB1型占48％，gB2型占舻％，gB3型占18％，gB4型占7％。不同gB基因型HCMV感染的临床表现存在差异。结论：4个gB基因型HCMV均能引起新生儿感染，以gB1型为主。不同HCMVgB型感染可导致不同的临床结果。     

人巨细胞病毒抑制剂的研究进展

人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）是β疱疹病毒亚科的成员,是已知最大的人类病毒之一。HCMV在全球范围内广泛传播,在人群中血清阳性率为40%～100%。HCMV对免疫功能正常的个体影响较小,多数感染者无临床症状,但在免疫功能低下或缺陷的个体中,可引起严重的并发症,导致多器官衰竭甚至危及生命。目前尚无预防HCMV感染的有效疫苗,已批准的抗病毒药物（如更昔洛韦、缬更昔洛韦、膦甲酸、西多福韦和莱特莫韦）是唯一可行的抗HCMV方法。但在临床使用中,因为这些药物存在口服生物利用率低、抗病毒活性中等和耐药性等特点,极大限制了其临床治疗效用,亟需研发新的HCMV抑制剂。HCMV包含多种自身编码的蛋白质和不完全确定数量的宿主细胞蛋白质,这些蛋白质在其复制过程中发挥着重要的作用。本文从靶向病毒蛋白和宿主蛋白两个方面,对处于临床试验阶段的抑制剂和正在研究的新型抑制剂进行综述,为HCMV疾病治疗和药物研发提供一定的理论基础。     

巨细胞病毒在乙型肝炎患者中感染状况的探讨

目的：了解巨细胞病毒在乙型肝炎中感染状况。方法：在病例组及对照组中应用酶联免疫法(ELISA)法及CMV-IgM及CMV-DNA(PCR)法检测巨细胞病毒(CMV)。结果与结论：提示PCR技术敏感性高于ELISA法，用PCR技术检测乙肝患者血清中CMV-DNA是一种早期、快速、准确诊断CMV活动性感染的有效方法之一。