Bcl-xl反义寡核苷酸对荷瘤裸鼠人鼻咽癌细胞生长抑制及其机制的探讨

目的:探讨Bcl-xl反义寡核苷酸(ASODN)对裸鼠人鼻咽癌移植瘤的生长抑制作用和机制探讨.方法:建立裸鼠人鼻咽癌模型,随机分成5组,包括生理盐水组、2.5、5.0和10.0 mg/kg ASODN组,10.0 mg/kg序列对照寡核苷酸组(SCODN)(每组8只).接种肿瘤细胞后24 h之内皮下注射进行治疗,透射电镜观察肿瘤大小和细胞形态变化,并用RT-PCR和蛋白质印迹法检测反义治疗后肿瘤细胞中靶基因Bcl-xl、相关凋亡基因Bcl-2、bax mRNA和蛋白表达变化.结果:2.5、5.0和10.0 mg/kg ASODN对荷瘤裸鼠的抑瘤率分别为6.8%、26.4%和41.7%, 呈明显的量效关系,其中10.0 mg/kg ASODN通过持续局部皮下给药具有较明显的抗肿瘤作用,与对照组相比差异有统计学意义,P<0.01,并且明显下调了Bcl-xl、Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平,对bax mRNA和蛋白水平无影响.而SCODN组抑瘤率仅为19.0%,差异无统计学意义,对Bcl-xl、Bcl-2、bax mRNA和蛋白水平均无明显影响,P＞0.05.结论:局部用ASODN对荷瘤裸鼠鼻咽癌的生长和基因表达具有一定的抑制作用,为鼻咽癌的治疗提供新的思路.     

Bcl-xl反义寡核苷酸对裸鼠人鼻咽癌移植瘤抑制作用的研究

目的　探讨bcl xl反义寡核苷酸 (ASODN)对裸鼠人鼻咽癌移植瘤生长和基因表达的抑制作用。方法　建立裸鼠人鼻咽癌模型 ,接种肿瘤细胞后 2 4h之内将bcl xlASODN、序列对照寡核苷酸 (ODN)皮下注射进行治疗 ,观察肿瘤大小变化和组织形态学改变 ,并检测药物治疗后肿瘤细胞中bcl xlmRNA和蛋白表达情况。结果　Bcl xlASODN治疗组裸鼠鼻咽癌的生长受到明显抑制 ,抑瘤率为 41.7% ,其对应的bcl xlmRNA和蛋白水平明显降低 ,与对照组相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ,而序列对照ODN治疗组抑瘤率仅为 19.0 % ,差异无显著性 ,对基因的表达亦无明显影响。结论　Bcl xlASODN对裸鼠鼻咽癌移植瘤的生长具有一定的抑制作用 ,为鼻咽癌的治疗提供新的方法。     

Bcl-2反义寡核苷酸对人肺癌裸鼠移植瘤的抑制作用

背景与目的：研究表明,靶向bcl-2 mRNA的反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynuelectide, ASODN）在体内外可产生抗肿瘤效应。我们已经在bcl-2 mRNA蛋白编码区发现了一个新的有效反义作用靶点,同时证实这个靶点的ASODN能增强白血病及肺癌细胞对化疗药物、放射线的敏感性。本研究进一步探讨bcl-2 ASODN对裸鼠非小细胞肺癌NCl—H460细胞移植瘤的成瘤能力和移植瘤的抑制作用。方法：将经硫代修饰的bcl-2ASODN直接加入到培养的NCl—H460细胞内,MTF法检测细胞生长抑制率．然后将这种细胞接种于裸鼠皮下,观察肿瘤出现的时间和肿瘤体积的变化,并计算抑瘤率。同时取未经处理的NCl—H460细胞接种于裸鼠背部皮下建立裸鼠人肺癌移植瘤模型,待瘤结节直径≥5mm后,分为bcl-2ASODN实验组、生理盐水对照组和无义寡核苷酸对照组。实验组用15mg／kgASODN两天一次直接瘤内注射．连用3周,测肿瘤大小和组织形态学改变。结果：bcl-2ASODN显著抑制NCl—H460细胞的生长,并呈时间依赖性,与无义寡核苷酸组相比．有显著性差异（P〈0．05）。bcl-2ASODN作用后的NCl—H460细胞在裸鼠皮下成瘤能力降低。平均成瘤时间延长为12．6天（P〈0．01）,最大抑瘤率达87．5％（P〈0．01）。在处理NCl—H460细胞裸鼠移植瘤过程中．生理盐水对照组和无义寡核苷酸对照组的瘤体进行性增大．而bcl-2ASODN组的瘤块生长缓慢,ASODN处理组与两个对照组相比均有显著性差异（P〈0．05）。处理后第30天剥离瘤块．ASODN处理组分别与两个对照组瘤重相比均有显著性差异（P〈0．01）。bcl-2ASODN处理组裸鼠NCl—H460细胞移植瘤的生长受到明显抑制,抑瘤率为71．0％。病理学检查可见．bcl-2ASODN处理组瘤块内有大片的变性坏死灶．结缔组织增生．炎性细胞浸润：而两个对照组瘤体内癌细胞呈弥漫性密集分布。结论：bcl-2ASODN能降低NCl—H460细胞的成瘤能力．抑制移植瘤生长。     

Bcl-XL反义寡核苷酸对裸鼠人食管癌移植瘤抑制作用的研究

目的:探讨Bcl-XL反义寡核苷酸(ASODN)对裸鼠体内人食管癌移植瘤的抑制作用。方法:建立裸鼠体内人食管癌移植瘤动物模型,当移植瘤平均体积约为50mm3时,在裸鼠体内进行连续15d的Bcl-XLASODN治疗,观察人食管癌移植瘤的生长情况和组织形态学改变,应用RT-PCR和WesternBlot检测肿瘤组织中Bcl-XLmRNA和蛋白表达水平的改变以及凋亡的原位末端标记检测肿瘤的凋亡情况。结果:裸鼠体内人食管癌移植瘤的生长受到明显抑制,治疗后,对照组、无关序列寡核苷酸(N-ODN)组和ASODN组的移植瘤体积分别为(1062.8±599.7)mm3、(853.0±327.9)mm3和(267.7±152.3)mm3,ASODN组与对照组及N-ODN组比较,具有显著性差异(P＜0.05)。同时,ASODN组的Bcl-XLmRNA及蛋白表达受到抑制,并且移植瘤组织中凋亡细胞显著增加(P＜0.05)。结论:Bcl-XLASODN可有效抑制裸鼠体内人食管癌移植瘤的生长,为食管癌的基因治疗提供重要的理论依据。     

Survivin反义寡核苷酸诱导SMMC-7721细胞凋亡及对化疗药物敏感性作用的研究

目的：观察survivin反义寡核苷酸（ASODN）对SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响及其对化疗药物敏感性的作用。方法：设计合成特异性survivin的ASODN，脂质体转染肝细胞癌SMMC-7721细胞，透射电镜观察细胞超微结构变化；RT—PCR法检测survivinmRNA的表达变化；FCM法检测对细胞周期、凋亡及survivin蛋白表达的影响；MTT法测定survivin表达抑制前后细胞对吡柔比星、氟苷、顺铂敏感性的影响。结果：ASODN转染后细胞呈现凋亡的形态学改变，survivin mRNA和蛋白表达减弱（P〈0．05），诱导SMMC-7721细胞凋亡（P〈0．01），细胞周期阻滞于G2／M期（P〈0．05）。ASODN转染组可增加SMMC-7721细胞对吡柔比星、氟苷、顺铂的敏感性（P〈0、01）。结论：Survivin ASODN转染能下调survivin表达，诱导SMMC-7721细胞凋亡，提高对吡柔比星、氟苷、顺铂的敏感性。     

WT1反义寡核苷酸对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤形成的抑制作用

目的:观察WT1反义寡核苷酸作用后的人卵巢癌细胞株SKOV3在裸鼠皮下的成瘤能力.方法:应用反义寡核苷酸(ASODN)技术,将WT1反义寡核苷酸转染到SKOV3细胞中,然后将这种被转染的细胞接种于裸鼠皮下,观察肿瘤体积的变化,并计算抑瘤率.结果:脂质体介导的WT1反义寡核苷酸作用后的卵巢上皮癌细胞在裸鼠皮下成瘤能力降低...     

Bcl-2反义寡核苷酸对裸鼠人肺癌移植瘤抑制作用的研究

目的探讨Bcl-2反义寡核核苷酸(ASODN)对裸鼠人肺癌移植瘤的成瘤能力和生长的抑制作用。方法将经硫代修饰的Bcl-2ASODN导入非小细胞肺癌。NCI-H460细胞内,然后将这种细胞接种于裸鼠皮下,观察肿瘤出现的时间和肿瘤体积的变化,并计算抑瘤率。同时采用未经处理的NCI-H460细胞接种于裸鼠背部皮下建立裸鼠人肺癌移植瘤模型,待长出瘤结节直径为≥5mm后,分为Bcl-2ASODN实验组、生理盐水对照组和无义寡核苷酸对照组3组。实验组用15mg/kgASODN两天一次直接瘤内注射,连用3周,测肿瘤大小变化和组织形态学改变。结果Bcl-2ASODN作用后的NCI-H460细胞在裸鼠皮下成瘤能力降低,最大抑瘤率达87.5%(P相似文献   

低剂量节拍化疗对人卵巢癌裸鼠移植瘤中ALDH1表达的影响

目的:探讨顺铂(cisplatin,DDP)最大可耐受剂量化疗(maximum tolerated dose chemotherapy with DDP,MTD-DDP)和DDP低剂量节拍化疗(low-dose metronomic chemotherapy with DDP,LDM-DDP)对人卵巢癌裸鼠移植瘤的作用及其对移植瘤中乙醛脱氢酶1(aldehyde dehydrogenase 1,ALDH1)表达的影响。方法:建立人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠皮下移植瘤模型,并进行MTDDDP和LDM-DDP化疗,观察不同化疗模式对移植瘤生长的影响。制备裸鼠移植瘤原代细胞,并应用流式细胞分选术分选ALDH1阳性细胞。应用平板克隆形成实验和裸鼠体内成瘤实验检测ALDH1阳性细胞的克隆形成能力和裸鼠体内成瘤能力,蛋白质印迹法检测ALDH1阳性细胞中Ki-67、乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistant protein,BCRP)和CD133的表达水平。结果:MTD-DDP和LDM-DDP均可抑制裸鼠移植瘤的生长,LDMDDP的抑瘤作用更明显(P<0.001)。MTD-DDP组移植瘤原代细胞中ALDH1阳性细胞所占比率明显高于对照组(以0.9%氯化钠溶液代替DDP),LDM-DDP组移植瘤原代细胞中ALDH1阳性细胞所占比率明显低于对照组,差异均有统计学意义(P值均<0.001)。ALDH1阳性细胞的平板克隆形成能力(P<0.001)和裸鼠体内成瘤能力均高于ALDH1阴性细胞。ALDH1阳性细胞中Ki-67的表达水平低于ALDH1阴性细胞,而BCRP和CD133的表达水平高于ALDH1阴性细胞,差异均有统计学意义(P值均<0.001)。结论:LDM-DDP抑制卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长的作用较强,并可降低ALDH1阳性细胞所占比率。     

乙酰肝素酶反义寡核苷酸对人鼻咽癌CNE-2细胞侵袭力抑制的研究

目的: 探讨乙酰肝素酶(HPSE)反义寡核苷酸(AS-ODN)对人鼻咽癌CNE-2细胞HPSE基因表达的影响及其细胞侵袭力的抑制作用.方法: 设计合成HPSE AS-ODN转染CNE-2细胞进行培养24h,采用完整细胞原位杂交法检测CNE-2细胞HPSE mRNA表达;同时采用基质凝胶侵袭实验对转染CNE-2细胞的侵袭力变化进行检测.并设正常对照组和脂质体对照组.结果: AS-ODN各组的HPSE mRNA表达水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).且AS-ODN各浓度组间的HPSE mRNA表达水平差异亦有统计学意义(P<0.05).AS-ODN在终浓度分别为0.1μmol/L、0.2μmol/L和0.4μmol/L时对CNE-2细胞侵袭力抑制率分别为56.3%、78.7%和91.2%.结论: HPSE AS-ODN通过下调HPSE基因表达可显著抑制CNE-2细胞侵袭力.     

VEGF-C反义寡核苷酸抑制人胃癌裸鼠移植瘤淋巴管生成的实验研究

目的:探讨VEGF-C反义寡核苷酸(VEGF-C-ASODN)对人胃癌裸鼠移植瘤淋巴管生成的影响。方法:构建人胃癌裸鼠移植瘤模型,反义组在接种部位皮下注射VEGF-C-ASODN,正义组和对照组分别注射VEGF-C正义寡核苷酸和生理盐水,观察移植瘤生长变化。半定量RT-PCR检测移植瘤VEGF-CmRNA表达,酶组织化学方法(5'-Nase-ALPase)染色行淋巴管计数。结果:反义组移植瘤生长缓慢,体积和重量分别为(387.57±166.29)mm³、(1.4±0.7)g,较正义组和对照组显著下降(P<0.01)。反义组VEGF-CmRNA表达的相对系数为(0.35±0.12),淋巴管计数为(14.37±4.21),较正义组和对照组均显著降低(P<0.01)。结论:VEGF-C-ASODN可抑制人胃癌裸鼠移植瘤的生长及淋巴管的生成。     

Lipofectin介导bcl-xL反义寡核苷酸抑制鼻咽癌细胞增殖活性的研究

目的　观察并探讨阳离子脂质体 (L ipofectin,L ip)介导的 bcl- x L 反义寡核苷酸 (antisenseoligodeoxynucletide,ASODN)对鼻咽癌细胞株 CNE- 1、CNE- 2 Z细胞体外抑制增殖活性的影响。方法　人工合成硫代修饰型 bcl- x L 反义寡核苷酸 (ASODN) ,与 L ip混合制备成 L ip+oligodeoxynucletide(ODN)复合物 ,处理鼻咽癌细胞株 CNE- 1、CNE- 2 Z细胞 ,用 MTT比色法检测细胞存活状态 ;流式细胞术检测细胞凋亡。结果　 ASODN处理细胞 3 6小时 ,于 40 0 μm ol/ L 浓度条件下鼻咽癌细胞的增殖受到明显抑制 ,且这一抑制作用随着浓度的增加与时间的延长而加强 ,与硫代修饰型随机序列对照寡核苷酸 (sequence control ODN,SCODN)组及单独脂质体组比较 ,差异有显著性 (P<0 .0 5 )。结论　 bcl- x L 反义寡核苷酸可显著抑制鼻咽癌细胞株 CNE- 1、CNE- 2 Z细胞体外增殖活性 ,其抑制作用可能通过封闭 bcl- x L 基因表达实现 ,bcl- x L 反义寡核苷酸有可能成为一种潜在性的基因治疗药物用于鼻咽癌的治疗     

内皮抑素联合微波消融治疗裸鼠肾癌移植瘤研究

目的研究内皮抑素联合微波消融对裸鼠肾癌移植瘤的抑制作用。方法将人源性肾癌细胞接种到48只小鼠的背部皮下,肿瘤直径约1.5 cm时随机分成4组,对照组：隔日尾静脉生理盐水;联合治疗组：隔日尾静脉推注内皮抑素＋皮下肿瘤微波消融;微波消融组：皮下肿瘤微波消融;内皮抑素组：隔日尾静脉推注内皮抑素。首先对联合治疗组及微波消融组局部皮下肾移植瘤进行微波消融治疗,其后经尾静脉注射药物。14天后每组处死6只小鼠,比较各组瘤重,计算抑瘤率,检测血浆VEGF浓度,剩余6只小鼠观察其存活期。结果联合治疗组小鼠肿瘤体积显著小于其他各组（P〈0.0 5）,其血浆VEGF水平较其他各组显著减低（P〈0.0 5）,存活时间较其他各组显著延长（P〈0.05）。结论内皮抑素联合微波消融抗肿瘤作用优于单用内皮抑素或微波消融治疗,并使小鼠存活期延长。     

放疗联合吉西他滨加顺铂化疗序贯治疗中晚期鼻咽癌的临床研究

目的:评价吉西他滨+顺铂(DDP)联合放疗序贯治疗中晚期鼻咽癌疗效及其毒副反应。方法:首诊中晚期(Ⅲ、ⅣA)鼻咽癌患者240例,随机分为3组。实验组采用常规放疗联合GP化疗方案序贯治疗(GP+RT:GP化疗方案为吉西他滨800 mg/m2,d1,d8;DDP 20 mg/m2,d1~d3,每4周重复,共4个周期,并行常规放疗);对照1组采用同期放化疗(CT:放疗期间行化疗DDP 20 mg/m2,d1,每周1次,共6周;放疗结束后再行常规DDP+5-FU辅助化疗2个周期,即DDP 20 mg/m2,5-FU 500 mg/m2,d1~d5,每4周1个周期)。对照2组采用常规放疗联合PF化疗方案序贯治疗(PF+RT:5-FU 500 mg/m2,DDP 20 mg/m2,d1~d5,每4周1个周期,共4个周期)。评价3组病例近远期疗效及毒副反应。结果:经GP+RT序贯治疗后鼻咽及颈部病灶CR 98.8%(79/80),而同期放化疗组、PF+RT组分别为91.3%(73/80)、93.8%(75/80)。GP方案化疗的主要毒副反应为血小板及白细胞减少。所有病例随访均>3年。1、1~3及3年生存率、无瘤生存率和无远处转移率GP+CT组最高;PF+RT组次之;同期放化疗组较差。GP+DT组病例复发率及转移率则较其他2组低。结论:吉西他滨+顺铂化疗联合放疗序治疗中晚期鼻咽癌近远期疗效确切,值得临床一线应用。     

放疗同期DDP单药方案与PF联合方案治疗局部晚期鼻咽癌近期疗效的对照研究

目的对比观察顺铂(DDP)单药用于局部晚期鼻咽癌同期放化疗与顺铂加5-氟尿嘧啶(5-FU)联合方案同期放化疗的近期疗效及不良反应。方法 112例初治局部晚期鼻咽癌患者随机分成两组:同期DDP单药放化疗组(单药组)40例,同期DDP加5-FU(PF)方案放化疗组(联合组)72例,两组放疗方案相同,单药组在放疗第1至第7周每周给予25 mg/m2的低剂量DDP化疗,联合组在放疗第1、4周分别给予25 mg/m2DDP+450 mg/m25-FU化疗。结果联合组患者中有2例患者未完成化疗,所有入组患者都完成放疗。放疗60 Gy时、放疗后3月两组患者鼻咽原发灶、颈部转移淋巴结的消退率差异均无统计学意义(P>0.05)。不良反应,单药组的口腔黏膜反应显著轻于联合组(P<0.05);白细胞下降、血小板减少、恶心呕吐、放射性皮炎、肝功能损伤等其他不良反应,两组差异无统计学意义(P>0.05)。结论低剂量顺铂单药用于局部晚期鼻咽癌同期放化疗与顺铂加5-氟尿嘧啶联合方案同期放化疗的近期疗效相近,急性不良反应较轻,值得进一步研究。     

多西他赛和顺铂同步放化疗治疗局部晚期鼻咽癌临床观察

目的观察局部晚期鼻咽癌同步放化疗的疗效及毒副反应。方法 70例局部晚期鼻咽癌,采用静脉化疗2周期,化疗方案：多西他赛75 mg/m2,分于第1,8天给药;顺铂（DDP）25 mg/（m2.d）d1-3天,21天为1周期。同时给予同步放疗,鼻咽部原发灶给予6 MV-X线和15 MV-X线DT 70 Gy～78 Gy/7-8周。结果 70例中CR 20例,PR 37例,总有效率81.4%。1年、3年生存率分别为98.4%、83.9%。主要毒副反应为骨髓抑制、急性口腔黏膜炎、恶心呕吐、皮肤反应。结论多西他赛和顺铂同步放化疗治疗局部晚期鼻咽癌疗效较好,毒副反应可以耐受。     

乙酰肝素酶反义硫代寡核苷酸对人肝癌细胞珠BEL-7402侵袭力的影响

目的:探讨乙酰肝素酶(Hpa)反义硫代寡脱氧核苷酸(AS-ODN)对人肝癌细胞BEL-7402侵袭力的影响。方法:设计合成互补于HpamRNA起始密码区的AS-ODN,以阳离子脂质体Oligofectami-neTMReagent包埋后转染BEL-7402细胞。采用RT-PCR和Western-blot检测不同浓度AS-ODN转染后细胞HpamRNA及蛋白表达的变化,以基底膜重建实验检测细胞侵袭力的变化。结果:0、100、200和300nmol/LAS-ODN转染组BEL-7402细胞HpamRNA的表达量分别为0·911、0·898、0·774和0·280;Hpa65×103蛋白表达量分别为0·923、0·875、0·834和0·237;Hpa50×103蛋白表达量分别为1·872、1·919、0·821和0·325。300nmol/LAS-ODN转染后BEL-7402细胞HpamRNA和蛋白的表达明显下降;0、100、200和300nmol/LAS-ODN转染组侵袭细胞数分别为137±15、141±13、134±18和49±7,300nmol/L,AS-ODN转染组侵袭细胞数较正常对照组明显减少,P=0·000。结论:一定浓度的HpaAS-ODN可通过下调HpamR-NA和蛋白的表达抑制肝癌细胞的侵袭力。     

Cyclin D1反义寡核苷酸对SGC7901胃癌细胞生长和化疗敏感性的影响

目的 研究Cyclin D1反义寡核苷酸对胃癌细胞SGC7901生长和化疗敏感性的影响，并探讨其内在机制。方法 采用脂质体lipoiect AMINE2000包裹硫代修饰的Cyclin D1 ASODN转染细胞，观察对SGC7901细胞的量效曲线及其生长曲线。0．2μmol／L Cyclin D1 ASODN转染细胞24小时后，给予梯度浓度的5—氟尿嘧啶(5—FU)、氨甲喋呤(MTX)、顺铂(DDP)，观察量效反应，计算IC50。应用RT—PCR检测细胞转染后24小时和48小时时Cyclin D1、胸苷酸合成酶(TS)、胸腺嘧啶磷酸化酶(TP)、二氢叶酸还原酶(DHFR) mRNA表达情况。结果 Cyclin D1 ASODN对SGC7901细胞产生剂量依赖性的抑制效应，0．2μmol／L Cyclin D1 ASODN转染24小时能显著抑制胃癌细胞生长，降低Cyclin D1 mRNA表达。Cyclin D1 ASODN增加了胃癌细胞对5—FU，MTX，DDP的敏感性，ASODN 化疗组对各化疗药物的IC50均有显著下降。RT—PCR显示Cyclin D1 ASODN转染后24小时时TS、DHFR mRNA表达较对照组下降，而TPmRNA表达较对照组升高，48小时时TS、TP、DHFR mRNA表达的改变更加明显。结论 Cyclin D1 ASODN能降低Cyclin D1 mRNA表达，抑制胃癌细胞SGC7901的生长，并通过改变5—FU，MTX代谢相关酶的表达提高细胞对它们的敏感性。     

白藜芦醇增强顺铂对肝癌细胞Bel-7402的生长抑制作用

目的观察白藜芦醇与顺铂联合应用对人源肝癌细胞Bel-7402生长的影响。方法采用MTT法、协同指数分析及裸鼠移植瘤模型研究白藜芦醇与顺铂合用对Bel-7402体外增殖及体内生长的抑制作用。结果细胞活性分析表明,两药合用对体外培养的Bel-7402细胞增殖有协同抑制作用,协同指数从0.904-0.739之间分布;动物实验也证实白藜芦醇与顺铂合用可明显抑制Bel-7402裸鼠移植瘤的生长,其药效优于两药单用（P〈0.01）。结论白藜芦醇与顺铂合用可协同抑制人肝癌细胞Bel-7402的生长。