几丁质酶及β-1,3-葡聚糖基因转化橡胶树的研究

旨在通过基因工程的方法提高橡胶树白粉病抗性.以高产、综合性状优良的大规模推广级品种‘热研7-33-97'15090块花药愈伤组织为受体,通过农杆菌介导将菜豆几丁质酶和烟草β-1,3-葡聚糖酶基因转入橡胶树,获得1386个抗性胚状体,其中277个通过次生体胚发生成功增殖.PCR结果表明有49个胚状体为阳性,转化效率为0.33％.通过农杆菌介导将菜豆几丁质酶和烟草β-1,3-葡聚糖酶基因转入橡胶树,PCR阳性率为0.33％,为通过基因工程手段提高橡胶树白粉病抗性奠定了良好的基础.     

烟草抗赤星病的诱导因子谱研究

6种诱导方法测定表明,3种化学物质、非病原细菌的3个菌株、赤星菌6个菌株均可程度不同地诱导烟草对赤星病的系统抗性,抗性诱导效应最高可达71%.化学、细菌因子以叶面喷洒和灌根诱导效果较好,赤星菌株以叶面悬滴和叶面喷洒效果较好.     

核黄素、烟酸对烟草抗赤星病诱导的交互作用

用核黄素、烟酸单独或二者组合分别诱导烟草植株,１６ｈ提取总ＲＮＡ,用５种防卫基因的ｃＤＮＡ探针作印迹杂交．结果表明,病程相关蛋白ＰＲ－ｌａ在４种处理中均表现出转录活性增强,其中以核黄素诱导效应最好．几丁质酶（ＣＨＴ）、查尔酮合成酶（ＣＨＳ）及脂氧合酶（ＬＯＸ）基因的表现为：受核黄素、烟酸／核黄素诱导后活性略有增强,而受烟酸、核黄素／烟酸诱导后活性下降．苯丙氨酸氨裂解酶（ＰＡＬ）基因在４种处理中都不能被激活．ＰＡＧＥ电泳显示,ＰＲ－ｌａ和ＣＨＴ积累与基因转录活性相一致;ＰＲ蛋白积累动态又与诱导抗性发生动态呈先后关系,抗病性最大期比蛋白质积累的最高期晚３天;烟草基因组ＤＮＡ的随机引物扩增（ＲＡＰＤ）检测结果指出,除烟酸单独诱导在引物２中扩增出两种产物外,其他处理都不能诱导烟草ＤＮＡ分子结构发生变化．     

产β-1,3-葡聚糖酶链霉菌菌株的筛选及其酶特性研究

从大白菜植株根际土壤中取样,通过茯苓粉琼脂培养基的透明圈试验,分离筛选到4株产β 1,3 葡聚糖酶的链霉菌菌株R8,R15,R31和AS.经比较发现,链霉菌菌株R15最早产生较明显的透明圈,且透明圈最大,澄清度最高.从R15菌株提取酶液,测定其分解β 1,3 葡聚糖的酶活力.结果表明,该酶作用的最适温度为55℃,最适pH为5 0;低于55℃,pH7 5以下,该酶较稳定;Fe3 ,K ,Cu2 ,Hg2 对酶有抑制作用,而Ca2 ,Fe2 ,Ba2 ,Mn2 ,Al3 及Zn2 对酶有激活作用.抑菌圈试验表明,该酶对小麦纹枯病菌具有很强的抑制作用,抑菌圈宽度达15mm.盆栽防病试验结果表明,小麦种子经酶液处理后,病根率为34 51%,防病效果为64 28%.     

球孢白僵菌蛋白质酶、几丁质酶和β-N-乙酰葡萄糖苷酶产生水平及其与毒力关系的研究

本文研究球孢白僵菌产蛋白质酶、几丁质酶及N-乙酰葡萄糖苷酶水平,同时研究了其产酶水平与其对马尾松毛虫毒力之间的关系。结果表明:球孢白僵菌12个菌株都不同程度的分泌蛋白质酶、几丁质酶和β-N-乙酰葡萄糖苷酶,同时蛋白酶产生水平(P)、β-N.乙酰葡糖苷酶产生水平(B)、几丁质酶产生水平(C)之间存在显著的直线相关性;RP,C=0.7655,RP,B=0.7651,RC,B=0.8266,说明几丁质酶是一种诱导酶。比较球孢白僵菌产酶水平与其对马尾松毛虫毒力,结果表明毒力水平与其产蛋白酶、β-N-乙酰葡萄糖苷酶水平存在一定的相关性:LT50=53.6809／(P-10.2066)+5.2549(R=0.7903>R0.01=0.7079);LT50=11.6385／(B-2.8733)+4.0506(R=0.8502>R0.01=0.7079)。