应用特异性引物鉴定红色毛癣菌

目的探讨建立一种快速、简单可重复的鉴定红色毛癣菌的方法. 方法利用特异性引物TR1F和TR1R对32株皮肤癣菌进行PCR扩增. 结果红色毛癣菌和苏丹毛癣菌产生特征性带型,而其他皮肤癣菌为阴性. 结论这种PCR方法可以快速、准确、敏感地鉴定红色毛癣菌.     

实时荧光环介导等温扩增检测毛癣菌属方法的建立

目的建立实时荧光环介导等温扩增（Real-time Loop-mediated Isothermal Amplification,LAMP）技术检测皮肤癣的方法,实现皮肤癣菌病的快速实验室诊断。 方法通过在NCBI官网查找下载皮肤癣菌中毛癣菌属、小孢子菌属和表皮癣菌属临床分离率较高的菌种rRNA序列（18S rRNA, ITS1, 5.8S rRNA, ITS2和28S rRNA）,运用DNASTAR Lasergene软件进行分析比对,寻找出毛癣菌属内高度保守的靶序列,且该段靶序列要与其他属存在差异,运用Primer Explorer V5设计LAMP引物。提取须癣毛癣菌NBRC6202基因组DNA作为模板筛选引物以及建立LAMP检测毛癣菌属的反应体系,以红色毛癣菌ATCC28188基因组DNA作为模板测试其敏感性和稳定性,以毛癣菌属以外的其他真菌、细菌基因组DNA验证LAMP反应体系的特异性。 结果筛选的4套引物里,primer2的扩增效果较好,可在22 min检测出须癣毛癣菌,且可以特异地检测出红色毛癣菌、指间毛癣菌、疣状毛癣菌、许兰毛癣菌、紫色毛癣菌。本研究建立的毛癣菌属RT-LAMP检测方法的最低检测限为1 pg/μL;在10 000 pg/μL、100 pg/μL和1 pg/μL三个浓度的分别10次重复检测实验中平均CT值和CV%分别为9.24±0.30,3.29%、10.57±0.54,5.12%、15.95±0.52,3.24%。 结论实验建立的毛癣菌属LAMP检测方法在特异性、敏感性和稳定性三方面均表现出优越的性能,能快速准确地检测出毛癣菌属常见菌种,具有良好的临床应用前景。     

任意引物聚合酶链反应法对职业性皮肤癣病的诊断价值

目的探讨任意引物聚合酶链反应(AP-PCR)法对职业性皮肤癣病的诊断价值及在普查诊断酿酒工人皮肤癣菌病中的意义。方法用任意引物OPD18(5’-GAGAGCCAAC-3’)和OPAA11(5’- ACCGGACCTG-3’)对50例患体癣和58例患股癣的酿酒工人所感染的致病皮肤癣菌进行AP-PCR法检测,同时用直接镜检法检测真菌并用传统的培养法进行培养;并且与50名健康人皮屑的检测结果作对比。结果在50例临床诊断为体癣工人的皮屑中,用AP-PCR方法检测真菌阳性的例数为45例(90.00%),检测出的真菌菌种分别为红色毛癣菌、须癣毛癣菌、犬小孢子菌和絮状表皮菌;作真菌直接镜检的阳性例数为31例(62.00%);作真菌培养的阳性例数为41例(82.00%),培养出的真菌菌种分别为红色毛癣菌、须癣毛癣菌和犬小孢子菌。在58例临床诊断为股癣的工人皮屑中,用AP-PCR方法检测真菌阳性的例数为53例(91.38%),检出的真菌菌种分别为红色毛癣菌、絮状表皮癣菌和须癣毛癣菌;作真菌直接镜检的阳性例数为37例(63.79%);作真菌培养的阳性例数为48例(82.76%),培养出的真菌菌种为红色毛癣菌、絮状表皮癣菌和须癣毛癣菌。50例健康人皮屑用AP-PCR方法检测阳性例数为3例(6.00%),检测的菌种2例为红色毛癣菌,1例为须癣毛癣菌;直接镜检未检出阳性者;用培养法检出阳性者1例(2.00%),菌种为红色毛癣菌。结论AP-PCR方法对于职业性皮肤癣菌病患者具快速诊断的价值,且具有较好的敏感性和特异性,可用于职业性皮肤癣菌病的检测和诊断。     

PCR法快速检测、诊断职业驾驶员皮肤癣病

目的比较用聚合酶链反应(PCR)法和培养法检测某地区患股癣的职业司机所感染真菌的异同,探讨用PCR法在普查诊断职业司机皮肤癣菌病的意义。方法用真菌通用引物ITS86和ITS4(5-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3和5-GTGAATCATCGAATCTTTAAC-3)对职业司机所患股癣的常见致病真菌进行PCR;同时用传统的培养法进行培养。结果在218例临床诊断为股癣的职业司机皮损处皮屑中,用PCR方法检测出真菌阳性者199例,占91.28%,检出的真菌菌种为红色毛癣菌、絮状表皮癣菌和须癣毛癣菌;用培养法检测出真菌阳性者191例,占87.61%,检出的真菌菌种也是红色毛癣菌、絮状表皮癣菌、须癣毛癣菌。结论采用真菌通用引物ITS对患股癣的职业司机进行PCR检测,具有准确、快速、特异性和敏感性高的特点,可用于职业性皮肤癣菌病的检测和诊断。     

运用随机扩增多态性DNA分析对皮肤癣菌进行鉴别

目的建立快速简便的鉴别皮肤癣菌的分子生物学方法.方法提取石膏样小孢子菌、狗小孢子菌、红色毛癣菌、石膏样毛癣菌和絮状表皮癣菌等常见皮肤癣菌的DNA,采用寡核苷酸重复序列(GACA)4单个引物进行随机扩增,电泳检测聚合酶链反应(PCR)产物.结果全部菌株均得到有效扩增,根据扩增条带特征,各属种易于区分辨别.结论采用随机扩增多态性DNA分析指纹图谱的方法对常见的皮肤癣菌进行鉴别,快速稳定,能够协助临床早期诊断、治疗,值得推广.     

先对药 足癣可根治

足癣是由皮肤癣菌引起的足部真菌感染,主要累及趾间、足跖及侧缘．我国流行病学资料显示,80％以上足癣为红色毛癣菌、须癣毛癣菌、断发毛癣菌和絮状表皮癣菌导致。     

选对药 足癣可根治

足癣是由皮肤癣茵引起的足部真菌感染，主要累及趾间、足跖及侧缘。我国流行病学资料显示，80％以上足癣为红色毛癣菌、须癣毛癣菌、断发毛癣菌和絮状表皮癣菌导致。文献报道，足癣在人群中的发生率为30％-70％，湿热地区、高湿季节多见，运动员、煤矿工人、士兵、糖尿病患者等多发。治疗足癣的目的是清除致病菌，快速消除症状，防止复发。目前常用的治疗方法是局部治疗、系统治疗，以及二者联合治疗。     

选对药 足癣可根治

足癣是由皮肤癣菌引起的足部真菌感染,主要累及趾间、足跖及侧缘。我国流行病学资料显示,80%以上足癣为红色毛癣菌、须癣毛癣菌、断发毛癣菌和絮状表皮癣菌导致。文献报道,足癣在人群中的发生率为30%～70%,湿热地区、高温季节多见,运     

596例皮肤真菌培养结果分析

目的了解三明市皮肤真菌病病原菌的种类和构成。方法对2008-2009年来皮肤病院就诊的具有典型浅部真菌病临床表现且真菌镜检阳性者标本596份做真菌培养及鉴定。结果共分离出致病真菌352株(59.1%),其中红色毛癣菌283株(80.4%)、念珠菌44株(12.6%),其中白念珠菌27株、其它念珠菌17株)、须癣毛癣菌13株(3.7%)、紫色毛癣菌5株、絮状表皮癣菌1株、断发毛癣菌4株、枝顶孢霉属1株、石膏小孢子菌1株。结论红色毛癣菌是体癣、甲真菌病、股癣、足癣和手癣的主要致病菌,占浅部真菌感染的80.4%;不同年龄组中,20~59岁组患病率占67.6%,主要是红色毛癣菌感染。     

“秋老虎”引发足癣病 治疗用药“1＋1”

“秋老虎”的威力毫不逊色于酷暑,气温闷热潮湿,足癣也到了高发季节。 足癣是由皮肤癣菌引起的足部真菌感染,主要累及趾间、足跖及侧缘。资料显示,80％以上足癣为红色毛癣菌、须癣毛癣菌、断发毛癣菌和絮状表皮癣菌导致。足癣在人群中的发生率为30％～70％,湿热地区、高温季节多见,运动员、煤矿工人、士兵、糖尿病患者等多发。     

常见致病真菌通用引物PCR检测技术研究

目的 建立常见致病真菌的通用引物PCR检测技术,为研究致病真菌的基因芯片检测技术打下基础.方法 以真菌的5.8S rRAN基因和28S rRAN基因为靶基因,利用其保守序列设计用于常见致病真菌检测的PCR通用引物,并观察检测方法的特异性及敏感性.结果 建立的常见致病真菌通用引物PCR检测方法可有效检测白色念珠菌、新生隐球菌、烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉、构巢曲霉等20个种属的致病真菌,敏感性为15 pg/ml DNA,实际应用效果与标准菌株检测结果一致.结论 本研究建立的通用引物PCR可以用于常见致病真菌的检测.

Abstract：

Objective To develop the detection method of common fungal pathogens by general primer PCR.Methods The primers were designed from the target genes of 5.8S rDNA and 28S rDNA of fungi,and the specificity and sensitivity were observed.Results The general primer PCR can be used to detected C.albicans,C.parapsilosis,C.krusei,C.glabrata,C.tropicalis,C.neoformans,A.fumigatus,A.flavus,A.nidulans,A.niger,C.carrionii,P.verrucosa,Sschenckii,F.pedrosoi,T.rubrum,T.mentagrophytes,M.gypseum,M.canis,E.floccosum,M.racemosus,the sensitivity was 15 pg/ml of DNA.Conclusion The general primer PCR can be used to detect common fungal pathogens.     

MRI对血精性精囊炎的诊断价值

目的分析血精性精囊炎的MRI表现，探讨MRI在血精性精囊炎诊断中的价值。方法回顾性分析了25例血精性精囊炎的MRI表现，观察其形态、大小及内部异常信号改变，分别采用SE T1WI(TR/TE558／14ms)，Flash 2D水激励T1WI(TR/TE18．5／5．2ms)，TSE T2WI(TR/TE 4000／99ms)加脂肪抑制序列扫描。结果本组25例血精性精囊炎均表现为两侧精囊体积增大；精囊内“出血”于SE T1WI呈斑片状／斑点状高信号，此高信号影于Flash 2D水激励T1WI序列显示更清晰，低信号精囊管道壁因高信号出血衬托而得以显示；精囊内“出血”于TSE T2WI呈相对较低信号，低信号精囊管道壁被较低信号出血影掩盖而显示不清。结论MRI能对血精性精囊炎做出明确诊断，是血精性精囊炎最可靠的影像学检查方法。     

Experimental Trichophyton rubrum infection in animals

The objective of the work was to induce experimental infection with the anthropophil dermatophyte Trichophyton rubrum in animals and to confirm it by clinical, mycological and histopathological examination. For preparation of the inoculum the authors used a T. rubrum culture isolated from patients suffering from dermatomycosis. The inoculum was cultivated under conditions of intensive aeration (shaking). Its density was 2.0 x 10(6)/ml of germinative spores and hyphal fragments. On the animal's back shoved and irritated by scarification (area 4 cm2) 2 ml inoculum were rubbed in. Experimental mycotic infection was induced in one of four guinea pigs and one of two domestic rabbits. The first clinical manifestations of mycotic infection were found on the 6th and 9th day after inoculation. From the focus T. rubrum was cultivated. From the unaffected hair in the close vicinity and at more remote sites numerous contaminants were isolated, other fungi as well as dermatophytes. In the histopathological material the authors found in the shed layers of the stratum corneum PAS positive septate fibres. Numerous PAS positive septate fibres were found also in the hair follicles. In the corium a mixed inflammatory infiltration was present with a predominance of histiocytes and polymorphonuclear leukocytes. No morphological changes were found after passaging the dermatophyte T. rubrum via animals. Guinea pigs and the domestic rabbit are useful animals for inducing experimental infection with the dermatophyte Trichophyton rubrum.     

150例广州地区汉族人肿瘤坏死因子TNFα-850 C/T基因突变频率的检测

目的了解广州地区汉族人肿瘤坏死因子TNFα-850 C/T基因的分布特点。方法应用PCR-RFLP方法对150例广州地区健康汉族人肿瘤坏死因子TNFα-850 C/T基因进行检测,并结合文献进行了不同地区间的分析比较。结果肿瘤坏死因子TNFα-850 C/C野生型纯合子频率为78.67%,C/T杂合子频率为19.33%,T/T突变型纯合子频率为2.0%,突变等位基因频率为0.1167。结论该方法简便、快速、准确,适合于一般实验室检测及大规模的人群调查,肿瘤坏死因子TNFα-850 C/T基因多态性在不同地区间分布存在着一定的差异。     

143例广东籍汉族人转化生长因子TGFβ1T869C基因多态性检测

目的 了解广东籍汉族人转化生长因子TGFβ1 T869C基因的分布特点.方法 应用聚合酶链反应技术对143例广东籍正常人转化生长因子TGFβ1 T869C基因进行扩增,以PstΙ进行限制性内切酶酶切图谱分析,并结合文献进行了不同地区间的分析比较.结果 转化生长因子TGFβ1＋869 C/C、C/T、T/T表型频率分别为：0.216 8、0.475 5、0.307 8,转化生长因子TGFβ1＋869 C、TGFβ1＋869T基因频率分别为：0.454 5、0.545 5.结论 转化生长因子TGFβ1 T869C基因多态性在不同地区间分布存在着一定的差异.     

2,2′,4,4′-四溴联苯醚对小鼠肝脏甲状腺激素受体TRα1和TRβ1表达的影响

目的观察2,2′,4,4′-四溴联苯醚(BDE-47)暴露对小鼠肝脏甲状腺激素受体亚型TRα1、TRβ1在mRNA及蛋白水平表达的影响。方法将C57BL/6小鼠分成对照组和低、中、高三个染毒剂量组,对照组给予玉米油,染毒组分别按0.5、5和50mg/kgBW剂量给予BDE-47,连续4天腹腔注射后,以GAPDH为内参,实时荧光定量PCR(QRT-PCR)和蛋白印迹(Westernblot)测定肝脏组织甲状腺激素受体TRα1、TRβ1mRNA和蛋白表达。结果与对照组相比,中、高染毒剂量组小鼠肝脏TRα1和TRβ1mRNA表达均上调(P0.05),幅度分别为1.9、1.7和1.9、1.5倍(P0.05);三个剂量组TRα1蛋白表达均升高,TRβ1均下降。结论 BDE-47可改变小鼠肝脏TRα1、TRβ1mRNA和蛋白表达。     

Identification of trypanosomes in Glossina pallidipes and G. longipennis in Kenya.

The polymerase chain reaction (PCR) was used to identify trypanosomes in Glossina pallidipes and G. longipennis caught in Kenya. Of 3826 flies dissected, 188 (4.9%) were parasitologically positive overall. The infection rate in G. pallidipes was 5.7% (187 of 3301 flies), but only one of 525 G. longipennis was infected (infection rate 0.2%). There was a higher infection rate in female G. pallidipes flies than male flies (chi(2) = 18.5, P < 0.001) and odds ratio = 2.5 (95% 1.6, 3.7). The infected flies were analysed by PCR using 10 sets of primers specific for species and subgroups within the subgenera Nannomonas, Trypanozoon and Duttonella. Of 188 parasitologically positive samples, PCR identified 137 (72.9%), leaving 51 (27.1%) non-identified. We recorded infection rates of 47.2% for Trypanosoma congolense savannah, forest and kilifi subgroups, 20.9% for T. simiae/T. simiae tsavo/T. godfreyi, 14.9% for T. brucei ssp. and 13.8% for T. vivax. Thirty-nine (26.7%) flies had mixed infections, with a minor association between T. congolense savannah/T. simiae tsavo/T. godfreyi (chi(2) = 6.93, d.f. = 1, P < 0.05). The relative proportion of each trypanosome species or subgroup varied between fly belts with T. congolense (all subgroups) being the most abundant and T. godfreyi the least. Statistical analysis showed that dissection method and PCR test classified infections independently (chi(2) = 10.5, d.f. = 1, P < 0.05 and kappa = 0.38). This study shows that pathogenic trypanosomes are widespread in all sampled testes fly belts with G. pallidipes as the main vector. Further, PCR test is more reliable in detecting and identifying trypanosomes than dissection method.