人重组TRAIL对胆囊癌细胞生长的影响

目的探讨人重组肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(recombinant human tumor necrosis factor relat-ed apoptosis inducing ligand,rhTRAIL)对胆囊癌细胞株SGC-996的作用。方法用Western-blot法检测胆囊癌细胞株中TRAIL死亡受体DR4、DR5和Fas相关死亡结构域(fas-associated death domain,FADD)的表达状况,生长曲线、相差显微镜和流式细胞仪观测rhTRAIL作用于胆囊癌细胞株后的细胞生长状况。结果胆囊癌细胞株SGC-996中,有死亡受体DR4、DR5和Fas相关死亡结构域(FADD)的表达,rhTRAIL作用胆囊癌细胞后,细胞生长受到抑制,作用前后细胞Casepase-3/7活性明显升高,流式细胞仪检测表明rhTRAIL治疗组和对照组细胞的凋亡差异明显(P<0.05)。结论rhTRAIL在体外对胆囊癌细胞株SGC-996有明显抑制作用,可能成为治疗胆囊癌的新途径。     

TRAIL联合顺铂对胃癌多药耐药基因GST-π的影响

目的探讨肿癌坏死因子相关凋亡配体(TRAIL)与顺铂联合应用对胃癌耐药细胞株SGC-7901/VCR多药耐药(MDR)基因谷胱甘肽S-转移酶-π(GST-π)的影响。方法采用MTT法检测不同浓度顺铂的抗癌活性并计算其亚毒性剂量IC10。流式细胞术检测TRAIL(200μg/L)及顺铂(亚毒性剂量)单用及联合应用后的细胞凋亡率。分别采用RT-PCR和ELISA法检测加药前后耐药基因GST-πmRNA及蛋白的表达情况。结果对照组、顺铂组、TRAIL组以及TRAIL顺铂联合用药组作用48 h后胃癌细胞凋亡率分别为2.69%、8.26%、9.71%和31.13%,与对照及单药组比较,联合用药组细胞凋亡明显升高(P<0.05)。RT-PCR和ELISA法结果显示,与单药组比较,联合用药组协同作用明显,多药耐药(MDR)基因GST-πmRNA和蛋白表达下降(P<0.05)。结论 TRAIL和顺铂联合应用能协同诱杀胃癌细胞,其机制可能是通过下调GST-π基因和蛋白表达,逆转或部分逆转MDR。     

来氟米特对免疫性肝损伤大鼠Kupffer细胞TRAIL表达的影响

目的 观察来氟米特（Lef）对免疫性肝损伤大鼠的保护作用及对Kupffer细胞（KC）中肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）及其受体表达的影响,探讨Lef防治肝损伤的作用及机制。方法 雄性SD大鼠24只,随机分为正常组、模型组和Lef组,每组8只。模型组及Lef组采用卡介苗（BCG）+脂多糖（LPS）诱导大鼠免疫性肝损伤模型,Lef组再采用lef干预,考察Lef对大鼠免疫性肝损伤的保护作用;体外分离培养KC,观察Lef对KC分泌细胞因子TRAIL及其受体TRAIL-R的影响。结果 Lef可明显改善免疫性肝损伤大鼠肝细胞损伤、肝细胞变性坏死减轻,视野内凋亡小体变少。Lef能显著降低KC分泌的TRAIL、TRAIL-R1、TRAIL-R2表达,与模型组相比明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 Lef对BCG+LPS诱导的免疫性肝损伤有保护作用,其机制可能与抑制TRAIL信号传导通路有关。     

Bexarotene协同TRAIL对白血病细胞株KG1a的凋亡诱导作用

目的 探讨bexarotene联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对白血病细胞株KG1a凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法 取对数生长期KG1a,根据不同处理方式分为TRAIL组、bexarotene组、300 ng/mL TRAIL联合bexarotene组和2.0 μmol/L bexaroten联合TRAIL组.流式细胞仪检测各组细胞凋亡率.以先加bexarotene或TRAIL孵育,后加TRAIL或bexarotene处理设计序贯实验,流式细胞仪检测细胞凋亡率.Western blotting分析KG1a细胞型自杀相关因子(Fas)相关死亡域样白介素-1β转换酶抑制蛋白(c-FLIP)表达变化.结果 TRAIL和bexarotene组的各浓度组间(bexarotene 2.0 μmol/L除外)细胞凋亡率比较,差异无统计学意义(P>0.05);两联合用药组的细胞凋亡率均明显高于相应浓度的TRAIL组和bexarotene组(P<0.01).序贯实验表明,bexarotene具有逆转 KG1a对TRAIL耐药的作用(P<0.001).与2.0 μmol/L bexarotene 或300 ng/mL TRAIL 单独用药比较,两者联合应用能显著下调c-FLIP表达(P<0.05).结论 Bexarotene能显著增强TRAIL对KG1a的诱导凋亡作用,下调c-FLIP表达是协同作用的可能机制.     

联合索拉非尼与TRAIL对人结肠癌HT-29细胞凋亡的影响

目的:研究多激酶抑制剂甲苯磺酸索拉非尼(SOR)是否具有增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡作用。方法:体外培养HT-29细胞。碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)定量分析亚二倍体(sub-G1)细胞百分率。比色法测定细胞Caspase-3活性。AO/EB双染色荧光显微镜观察凋亡细胞形态。结果:SOR(5μmol/L)和TRAIL(100ng/mL)以及两者合用作用48小时HT-29细胞的sub-G1百分率分别是4.65%±2.33%、5.29%±2.80%和42.6.50%±4.65%;HT-29细胞的Caspase-3的活性分别是培养基组的1.24、1.37和9.51倍。两者合用展示出细胞核染色质固缩和碎裂的典型凋亡细胞形态。结论:亚细胞毒性浓度的SOR具有增强TRAIL诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡作用。     

Bexarotene协同TRAIL对白血病细胞株KG1a的凋亡诱导作用

目的 探讨bexarotene联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对白血病细胞株KG1a凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法 取对数生长期KG1a,根据不同处理方式分为TRAIL组、bexarotene组、300 ng/mL TRAIL联合bexarotene组和2.0 μmol/L bexaroten联合TRAIL组。流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。以先加bexarotene或TRAIL孵育,后加TRAIL或bexarotene处理设计序贯实验,流式细胞仪检测细胞凋亡率。Western blotting分析KG1a细胞型自杀相关因子(Fas)相关死亡域样白介素-1β转换酶抑制蛋白(c-FLIP)表达变化。结果 TRAIL和bexarotene组的各浓度组间（bexarotene 2.0 μmol/L除外）细胞凋亡率比较,差异无统计学意义（P>0.05）;两联合用药组的细胞凋亡率均明显高于相应浓度的TRAIL组和bexarotene组(P<0.01)。序贯实验表明,bexarotene具有逆转KG1a对TRAIL耐药的作用（P<0.001）。与2.0 μmol/L bexarotene 或300 ng/mL TRAIL 单独用药比较,两者联合应用能显著下调c-FLIP表达（P<0.05）。结论 Bexarotene能显著增强TRAIL对KG1a的诱导凋亡作用,下调c-FLIP表达是协同作用的可能机制。     

大蒜素增强脑胶质瘤细胞株U87对TRAIL敏感性的机制研究

目的 研究大蒜素是否能通过增加脑胶质瘤细胞U87对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL）的敏感性来促进U87细胞的凋亡及其相关机制的研究。方法 采用MTT法检测大蒜素联合TRAIL对U87细胞活性的影响;流式细胞术（Annexin V/FITC）评估大蒜素联合TRAIL对U87细胞凋亡的影响;Transwell实验进一步检测大蒜素联合TRAIL对U87细胞的侵袭能力的影响;Western-blot、RT-PCR和Q-RT-PCR方法检测大蒜素联合TRAIL对与U87细胞凋亡相关的基因和蛋白的表达影响。结果 与其他组比较,大蒜素联合TRAIL明显降低U87细胞活力和侵袭能力,促进U87细胞凋亡。在分子水平上,与单独作用组比较,联合作用组明显增加DR4、DR5、Caspase-3和Caspase-8的活性,而AKT、pFKHR、MMP-2和MMP-9的活性明显被抑制。结论 大蒜素能增强脑胶质瘤细胞U87对TRAIL的敏感性,从而促进U87凋亡。     

重组可溶性TRAIL的表达及其诱导A549和H460wt细胞凋亡

目的：获得人重组可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(rsTRAIL)蛋白,并探讨其应用于非小细胞肺癌(NSCLC）治疗的前景。方法：RT-PCR从外周血单核细胞(PBMCs)中获取目的基因片段,构建重组质粒PQE₃0-TRAIL并转化入大肠杆菌(E.coli)M₁5,IPTG诱导目的蛋白表达并经镍固定金属亲和层析纯化,MTT法检测细胞增殖情况,荧光显微镜观察H460^wt细胞的形态学改变,流式细胞仪检测其凋亡率。结果：获得与GenBank中报道一致的TRAIL基因片段。SDS-PAGE电泳和免疫印 迹分析显示,获得具有TRAIL免疫原性、相对分子质量约为21 000目的蛋白。Ni²⁺-NTA agarose纯化得到单一条带蛋白。rsTRAIL处理H460^wt细胞24 h后,细胞凋亡率为43.2％,顺铂可以增强rsTRAIL对A549细胞的杀伤作用。结论：获得了与天然TRAIL蛋白具有相同生物学活性的目的蛋白,该目的蛋白具有诱导NSCLC细胞凋亡的作用,联合顺铂能够增强rsTRAIL对NSCLC的杀伤作用。     

TRAIL与5-Fu合用对结肠癌细胞系SW480杀伤作用的研究

目的 观察TRAIL与5—Fu联合应用对结肠癌SW480细胞的作用。方法 采用MTT法检测TRAIL与5-Fu联合应用对结肠癌SW480细胞存活分数的影响；TUNEL法检测TRAIL与5—Fu联合应用对结肠癌SW480细胞凋亡率的影响。结果 MTT法证实30～300ng/ml的TRAIL与3．0mmol／L 5—Fu联合应用对结肠癌SW480细胞存活分数的影响有协同作用，TUNEL法表明3．0mmol／L 5—Fu可显著增强TRAIL诱导结肠癌SW480细胞凋亡的作用。结论 5-Fu可提高结肠癌SW480细胞对TRAIL的敏感性。     

TRAIL与肿瘤关系的研究进展

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）是肿瘤坏死因子超家族第三个成员,可诱导多种肿瘤细胞发生凋亡,但不会损害正常组织细胞.其特异性受体死亡受体（DR）4、DR5在多数肿瘤细胞表达,正常细胞缺失,这使得应用TRAIL进行抗肿瘤治疗成为可能.TRAIL能触发细胞凋亡通路,激活caspase家族,促进线粒体凋亡途径的启动,诱导细胞凋亡.该文就TRAIL的结构、受体及其与肿瘤的关系作一综述.     

原代肺癌细胞培养与耐药性研究进展

肿瘤细胞的多药耐药是导致肿瘤患者化疗失败的主要原因,针对不同个体制定个体化化疗方案是临床化疗中亟待解决的问题。检测肿瘤细胞耐药基因的表达和药物敏感性将为临床化疗提供有效的帮助。现综述肺癌细胞的体外培养、耐药基因及药物敏感性检测方面的研究进展。     

原代肺癌细胞培养与耐药性研究进展

肿瘤细胞的内在和(或)获得性多药耐药是导致肿瘤患者化疗失败的主要原因,寻求个体化化疗方案,是目前临床研究中的热点和难点。对肺癌细胞进行体外培养、药物敏感性试验和检测耐药基因的表达将为临床化疗提供客观的依据。现综述肺癌细胞的体外培养、药物敏感性及耐药基因检测方面的研究进展。     

肺癌细胞株对6种抗癌药物敏感性测定

目的　探讨肺癌细胞株抗癌药物的敏感性。方法　采用体外MTT比色分析法对 10株肺癌细胞进行NVB、GEM、TAX、SN - 38、CDDP、5 -Fu 6种抗癌药物的体外敏感试验。结果　 ( 1) 6种抗癌药物对SCLC的显效顺序依次为GEM、NVB、CDDP、TAX、5 -Fu、SN - 38,4株SCLC的敏感性顺序依次为Lu135、N2 31、H6 9、SBC - 3;( 2 ) 6种抗癌药物对NSCLC的显效顺序依次为 5 -Fu、NVB、GEM、CDDP、TAX ,对SN - 38均为耐药 ,3种 6株NSCLC的敏感性顺序依次为Lu 6 5、PC 7、LK - 2、PC 9、PC 14、A 5 49;( 3)SCLC株对 6种抗癌药物敏感性优于NSCLC ,6种抗癌药物对 4株SCLC的总有效率为 87 5 % ,敏感为 6 2 5 % ,较敏感为 2 5 % ,耐药为12 5 % ;对 6株NSCLC的总有效率为 5 2 78% ,敏感为 16 6 7% ,较敏感为 36 11% ,耐药为 4 4 4 4%。结论　 10株肺癌细胞株对 5 -Fu最敏感 ,GEM、NVB、CDDP、TAX次之 ,SN - 38效果最差。 6种药物中对 5 -Fu、CDDP未表现出明显耐药性 ,其余 4种均存在不同程度的耐药性 ,表明肺癌细胞株存在自然耐药性。     

miRNA-155表达对人肺癌细胞A549增殖的影响

【目的】探讨miRNA-155在正常肺组织和非小细胞肺癌组织中的表达及miRNA-155对人肺癌细胞A549增殖的影响。【方法】采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）技术检测15例非小细胞肺癌组织及其癌旁组织中miRNA-155的表达;A549细胞分别转染miR-NC和miRNA-155 mimic ,采用Real-time PCR技术检测转染后A549细胞中的miRNA-155表达水平,同时采用MTT 技术和流式细胞技术检测转染后A549细胞增殖情况,Western印迹法检测转染后A549细胞中Akt、p-Akt（Ser473）、p27、bcl-2、bax的表达。【结果】miRNA-155在非小细胞肺癌组织中的表达情况明显高于癌旁组织（ P ＜0．05）;与转染 miR-NC 组相比, A549细胞转染miRNA-155 mimic后miRNA-155表达水平明显增高（ P ＜0．001）,MTT实验和流式细胞技术显示miRNA-155促进A549细胞的增殖;Western印迹法结果显示：转染miRNA-155的A549细胞p-Akt （Ser473）,bcl-2的表达水平增高,p27、bax的表达水平降低。【结论】miRNA-155可能通过促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,上调p-Akt（Ser473）、bcl-2表达,同时抑制p27、bax的表达来促进非小细胞肺癌的发生发展。     

ERCC1反义寡核苷酸对肺癌铂类药物敏感性的研究进展

ERCC-1基因是目前恶性肿瘤基因治疗研究中的新靶点.采用反义寡核苷酸技术可以抑制ERCC1基因的表达,从而降低肿瘤细胞DNA修复的能力,增强对铂类化疗药物的敏感性.为肺癌特别是非小细胞肺癌(NSCLC)的治疗提供了新的思路.     

塞来昔布对Lewis肺癌细胞增殖及移植瘤的抑制作用

目的:探讨选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对Lewis肺癌细胞株增殖及小鼠皮下移植瘤的影响。方法:常规培养Lewis肺癌细胞,实验分为对照组和塞来昔布用药组。MTT法检测细胞增殖水平,损伤修复实验检测细胞迁移能力;将Lewis肺癌细胞接种于12只C57BL/6小鼠皮下,对照组隔日腹腔注射生理盐水;塞来昔布用药组隔日腹腔注射塞来昔布30 mg/kg,24 d后处死,计算抑瘤率,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测移植瘤组织中VEGF mRNA表达水平,同时酶联免疫检测小鼠血清中MMP-9浓度。结果:塞来昔布对Lewis肺癌细胞增殖的抑制作用呈时间-剂量依赖性效应(P<0.05)。20μmol/L塞来昔布组细胞迁移速度(0.37±0.03)μm/h明显减慢,与对照组(3.17±0.22)μm/h相比具有显著性差异(P<0.01);在体实验显示,塞来昔布具有明显的抑制Lewis肺癌移植瘤增殖的作用,同时能抑制移植瘤组织中VEGF表达、降低血清MMP-9浓度。结论:塞来昔布可以显著抑制Lewis肺癌细胞的增殖与迁移能力,且对Lewis肺癌移植瘤有明显抑制作用。     

姜黄素诱导人肺癌细胞凋亡及其机制

目的:探讨姜黄素诱导人肺癌细胞凋亡的分子机制.方法:MTT法检测姜黄素对肺癌细胞活力的影响,流式细胞计数法检测姜黄素对肺癌细胞凋亡及线粒体膜电位的影响,Caspase活性试剂盒检测姜黄素处理后肺癌细胞Caspase活性的变化,Western-blot检测姜黄素对胞质中细胞色素C的含量及肺癌细胞Akt信号通路的活性的影响.结果:20 μmol/L以上浓度的姜黄素作用48 h后可显著抑制A549细胞的活力,显著诱导细胞发生凋亡,姜黄素作用24 h后肺癌细胞中的线粒体跨膜电位明显下降,细胞色素C释放到胞质增多,Caspase-9、-3活性显著增强,磷酸化Akt水平显著下降.结论:抑制Akt信号通路活性诱发线粒体通路介导的细胞凋亡可能是姜黄素抑制肺癌细胞的重要机制.     

非小细胞肺癌组织ERCC1和RRM1表达及其临床预后的相关性研究

目的 探讨DNA修复基因蛋白ERCC1和RRM1在非小细胞肺癌(NSLCL)中的表达与临床预后的关系.方法 采用免疫组织化学Envision法检测91例NSLCL组织中ERCC1和RRM1的表达.结果 在NSLCL组织中,ERCC1阳性表达率为45.05% (41/91),RRM1表达率为70.33%(64/91),与...     

姜黄素联合奥沙利铂对肺腺癌细胞系A549细胞体外侵袭的作用

目的:探讨姜黄素和奥沙利铂两种药物联用对肺腺癌细胞系A549细胞体外侵袭能力的作用,并观察对侵袭相关蛋白CD147表达的影响。方法:应用MTT法检测两种药物单用及联用后A549细胞的吸光度,并计算增殖抑制率;Transwell侵袭小室检测药物作用后A549细胞的体外侵袭能力;Western blot和免疫细胞化学检测药物作用前后CD147蛋白表达的差异。结果:姜黄素和奥沙利铂单用均能抑制A549细胞的增殖,呈量-效关系,联用时作用相加;奥沙利铂单用能抑制A549细胞的体外侵袭能力和CD147蛋白的表达,与姜黄素联用时抑制作用更明显。结论:姜黄素和奥沙利铂均可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖和侵袭能力,在一定浓度范围内,呈量-效关系,而且两者联用具有相加作用,其抑制侵袭转移的机制可能通过下调CD147蛋白的表达而实现。     

全硫代反义寡核苷酸对肺癌细胞生长及端粒酶活性的影响

目的将互补于hTR模板区的全硫代修饰型反义寡核苷酸(PS-ASODN)作用于肺癌细胞NCI-H292,探讨其对肺癌的治疗价值。方法PS-ASODN经lipotap脂质体转染作用于NCI-H292细胞,采用MTT法、ELISA法和流式细胞术检测NCI-H292细胞的体外增殖、端粒酶活性、细胞凋亡和细胞周期的改变。结果①MTT法检测,1.0μmol/LPS-ASODN处理后24h细胞生长抑制率为12.86%,且随着时间的延长,抑制作用逐渐增强。②ELISA法检测结果,0.5～1.5μmol/L的PS-ASODN对NCI-H292细胞作用72h后端粒酶皆为阴性,对照组阳性。③流式细胞仪检测结果:端粒酶PS-ASODN转染NCI-H292细胞培养72h后,检测到细胞早期凋亡率增加,凋亡率为15.3%,与对照组相比有极显著意义(P<0.01)。PI染色结果细胞被阻止在G1/G0期,S期比率有所降低,降为14.5%。结论①端粒酶PS-ASODN对NCI-H292细胞增殖有明显的抑制作用,其抑制作用具有浓度、时间依赖性。②端粒酶PS-ASODN能明显地抑制NCI-H292的端粒酶活性。