正常人表皮细胞老化过程中生物学特性研究

目的　研究表皮细胞体外增殖与老化规律 ,为选择合适的组织工程化皮肤种子细胞提供依据。方法　取正常年轻人表皮细胞进行传代培养 ,以不同代龄细胞为实验对象 ,采用形态学观察、群体倍增时间(PDT)、免疫细胞化学及 β 半乳糖苷酶染色等一系列方法 ,检测表皮细胞老化规律。 结果　体外单层培养 9代 ,P2 (第 2代 )的PDT最短 ,前 5代增殖能力较强 ,P5(第 5代 )以后PDT明显延长 ,P8细胞不再增殖 ;随着细胞的连续传代培养 ,SA β Gal表达呈现从弱 (在年轻细胞中占 9% )到强 (在老化细胞中占 6 5 % )的趋势。 结论　体外培养第 1～第 5代表皮细胞可作为构建组织工程化皮肤的种子细胞。     

人表皮角朊细胞和表皮的培养

人表皮角朊细胞和表皮的培养张道荣刘小兵张丽红一、材料和方法１．培养液、试剂及材料：ＤＭＥＭ培养液（Ｓｉｇｍａ），ＭＥＭ洗液（Ｓｉｇｍａ），３Ｔ３细胞（Ｇｉｏａｎｎｉ教授惠赠），胎牛血清，表皮生长因子（Ｓｉｇｍａ），霍乱毒素（Ｓｉｇｍａ），非必需氨基酸...     

表皮细胞去分化的表皮干细胞

背景：表皮干细胞以显著的自我更新和多向分化潜能及皮肤组织工程学中诱人的应用前景,作为“种子细胞”成为皮肤创伤研究领域的热点之一。 目的：综述表皮细胞去分化逆转为表皮干细胞的研究近况。 方法：应用计算机检索1998-01/2011-01 PubMed、Highwire和中国期刊全文数据库相关文章,检索词“dedifferentiation,epidermal cells,epidermal stem cells,induction,去分化,表皮细胞,表皮干细胞,诱导”。共检索到文献2 754篇,最终纳入符合标准的文献46篇。 结果与结论：去分化来源的表皮干细胞与机体自身来源的表皮干细胞之间在形态学和功能有许多相似点,并可表达表皮干细胞的特异性标记物。表皮细胞去分化途径制造表皮干细胞,可以作为机体自身来源表皮干细胞的替代细胞应用于皮肤损伤重建和再生的相关研究,为实现皮肤创伤由解剖修复到功能修复的“完美修复”提供新思路。     

组织工程皮肤的种子细胞—表皮干细胞的生物学行为研究进展

近年来,组织工程皮肤的研究已成为当前研究的热点之一。但直到现在还没有任何一种组织工程皮肤能作为理想的合适的皮肤覆盖物,以满足临床严重烧伤病人的需求,其中原因之一是未找到合适的种子细胞,通过对皮肤发育生物学研究发现,表皮干细胞在皮肤形成过程中起重要作用。皮肤的多层表皮结构通常是由表皮干细胞再生而来,因此,表皮干细胞可能成为构建组织工程皮肤的种子细胞,但目前,我们对它还了解甚少,现就表皮干细胞的有关生物学行为包括一般特性、分布位置、表面标志物、可能的应用前景等方面的研究进展作一综述。     

组织工程用角质形成细胞体外培养的进展

本综述了近年来角质形成细胞的各种培养方法，以及相关培养模型的建立，以期为组织工程皮肤的研究提供最新的理论基础及试验依据。模拟体内生理条件下的三维培养是最佳细胞培养模型，为人工皮肤的研究创造了有利条件。     

人表皮细胞体外培养方法的改进

人表皮细胞体外培养方法的改进张慧敏郝振林＊王东霞＊（沈阳医学院附属中心医院医学实验科，烧伤科＊沈阳１１００２４）张志芬王连璞＊＊（沈阳医学院生化教研室，解剖教研室＊＊沈阳１１００３１）表皮细胞体外培养技术的建立和发展对于烧伤治疗、皮肤病学研究等方面，...     

组织工程用角质形成细胞体外培养的进展

本文综述了近年来角质形成细胞的各种培养方法,以及相关培养模型的建立,以期为组织工程皮肤的研究提供最新的理论基础及试验依据。模拟体内生理条件下的三维培养是最佳细胞培养模型,为人工皮肤的研究创造了有利条件。     

表皮细胞体外培养及临床应用

用手术切除阴茎包皮，制成单细胞悬液，经体外培养和传代培养，达到扩大增殖面积目的。将培养的单层表皮细胞薄膜，移植１００例深二度烧伤创面及肉芽创面，（最大移植面积３００ｃｍ２，最小面积２８ｃｍ２）均获得满意效果。因此，用阴茎包皮作为培养皮肤的细胞来源，具有实用价值和发展前景。     

组织工程皮肤的种子细胞--表皮干细胞的生物学行为研究进展

近年来,组织工程皮肤的研究已成为当前研究的热点之一.但直到现在还没有任何一种组织工程皮肤能作为理想的合适的皮肤覆盖物,以满足临床严重烧伤病人的需求,其中原因之一是未找到合适的种子细胞.通过对皮肤发育生物学研究发现,表皮干细胞在皮肤形成过程中起重要作用,皮肤的多层表皮结构通常是由表皮干细胞再生而来,因此,表皮干细胞可能成为构建组织工程皮肤的种子细胞,但目前我们对它还了解甚少.现就表皮干细胞的有关生物学行为包括一般特性、分布位置、表面标志物、可能的应用前景等方面的研究进展作一综述.     

用于组织工程构建的表皮角质形成细胞的生物学特性

目的　研究体外培养的人表皮角质形成细胞的生物学特性 ,为构建组织工程皮肤提供技术参数。方法　用Dispase/胰蛋白酶法消化分离人表皮角质形成细胞 ,进行原代及传代培养。计算原代细胞获得率 ,观察各代细胞形态学改变 ,描记细胞生长曲线 ,计算群体倍增时间 (PDT) ,免疫组织化学方法检测细胞角蛋白表达。结果　原代表皮角质形成细胞获得率为 ( 0 .72 6± 0 .3 48)× 10 6 /cm2 ,表皮角质形成细胞体外可培养至第 7代 ,第 2代的PDT最短 ,为( 46.5 7± 2 .2 5 )h ,第 4代的细胞角蛋白表达仍为阳性。结论　综合细胞增殖速率、细胞数量及细胞功能的维持各因素 ,考虑第 3、4代的表皮角质形成细胞是构建组织工程皮肤最佳的种子细胞     

An improved method for the isolation and culture of rat epidermal stem cells

The management of burns and injuries using novel treatment strategies involving epidermal stem cells (ESC) requires a better understanding of the biology of these cells, in particular, their isolation and the maintenance of their unique characteristics in culture. The purpose of this study was to describe an improved method for isolating putative ESC from fetal rat skin and to maintain them long term in culture. Single ESC suspensions were obtained from fetal rat skin by enzyme digestion containing 0.5% neutral protease. The target cells were harvested by rapid adherence on type IV collagen plates and were cultured in complex DMEM. After primary isolation, cells were continuously cultured in K-serum free medium. After reaching 70-80% confluence, the cells were digested with 0.25% trypsin at 37°C for 5-10 minutes, and passaged at a ratio of 1:2. The cultured ESC showed good growth, resulting in cell viability of over 98%. Four days later, clones containing 100-200 cells were detected, showing cobblestone-like characteristics. The rapidly adherent cells were positive for keratin 15, 19 and P63. Eighty three percent of cells expressed β1 integrin. The growth-curve showed that the rapidly adherent cells were in the exponential growth phase. The protocol described in this paper provides a simplified and effective method to isolate and maintain long-term culture of epidermal stem cells from fetal rat skin. This method should be valuable for isolating and studying ESC from various transgenic rat lines that are currently available.     

表皮细胞培养移植载体的研究与应用

表皮细胞培养移植载体的研发是皮肤组织工程的重要内容之一,是永久性皮肤替代物不断深入研究的前提。本文介绍了表皮细胞培养移植过程中所应用载体的研究与应用的最新进展。     

胎儿骨髓间充质干细胞的分离培养及表面标志的检测

目的 建立胎儿骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSC)的分离培养方法，并对其表面标志进行检测。方法 采用体外细胞培养技术，分离培养胎儿骨髓MSC，用流式细胞术对其进行鉴定，并研究其增殖及生长特征。结果 流式细胞术证明，MSC具有间质细胞的特征。原代及传代培养显示，胎儿骨髓MSC具有活跃增殖的能力。结论 胎儿骨髓MSC作为组织工程重建的种子细胞具有较强的可行性。     

改良雪旺细胞传代培养的实验研究

目的:采用改良传代法进行雪旺细胞培养,以获取大量纯净的雪旺细胞用于周围神经组织工程研究。方法:采用4-5 d SD乳鼠坐骨神经和臂丛神经,运用双酶消化法结合单酶消化法进行雪旺细胞的原代培养。5-7 d后,采用单酶快速消化离心法进行传代培养,同时纯化雪旺细胞。结果:SABC免疫组化染色鉴定和计数板计数,改良传代法使体外培养的雪旺细胞纯度达98％左有,两种方法之间有显著性差异,P<0.001。MTT检测雪旺细胞生存和增殖时间延长1-2周左右。结论:与传统的传代培养方法相比,改良法既省时又避免了外源性物质如Ara-C对雪旺细胞的毒性作用,同时有利于雪旺细胞活力和纯度的提高。     

表皮干细胞鉴别与分离的研究进展

近年来,对干细胞的深入研究揭示了表皮主要由三种细胞成分组成表皮干细胞(epidermalstemcells熏ESCs)及其子代细胞——短暂增殖(transitamplifying熏TA)细胞、有丝分裂后(post鄄mitoticdiffer鄄entiating熏PMD)细胞。但由于尚未找到能够有效区别ESCs与TA细胞的方法,限制了以ESCs的分离及体外培养为基础的研究工作与临床应用。本文就ESCs的鉴别、分离方法的研究进展进行综述。     

Aging rather than sun exposure is a major determining factor for the density of miR‐125b‐positive epidermal stem cells in human skin

Sunlight exposure and aging are two major factors in the deterioration of skin function. In the present study, we used eighty formalin‐fixed human skin samples from sun‐exposed and unexposed areas from old and young individuals to evaluate the presence of miR‐125b‐positive epidermal stem cells (ESCs) by in situ hybridization. miR‐125b‐positive ESCs were detected in the basal layer of the epidermis. The density of miR‐125b‐positive ESCs was significantly associated with age rather than sun exposure, whereas the density of miR‐125b‐positive ESCs tended to decrease in the sun‐exposed area. These data suggest the potential use of miR‐125b as a surrogate marker for the quality of epidermal cells.     

A method for isolation of viable cells from human dental pulp

Summary A simple, reliable technique for establishing cultures of human pulpal fibroblasts is presented. The technique relies on a sequential digestion of minced pulpal tissue with collagenase and trypsin and produces confluent cultures in 7 to 10 d from four to five pulps.