建兰茎腐病原菌尖孢镰刀菌的生物学特性研究

为明确建兰茎腐病原菌尖孢镰刀菌的生物学特性,室内测定了温度、pH值、光照、碳氮源对病原菌生长和产孢量的影响,以及病原菌孢子的致死温度及时间。结果表明:该病原菌生长及产孢最适温度为25℃、pH值为7、光照条件为12h光暗交替、碳源为a-乳糖、氮源为NaNO_2,病原菌孢子的致死温度及时间为55℃水浴5min。研究结果可为建兰茎腐病的有效防控措施的选择奠定基础。     

6种杀菌剂对建兰茎腐病原菌尖孢镰刀菌的毒力及联合作用

为筛选出对建兰茎腐病防效好的增效混剂,室内测定6种杀菌剂对建兰茎腐病原菌尖孢镰刀菌的毒力及其联合作用。结果表明:6种杀菌剂对建兰茎腐病原菌尖孢镰刀菌均有不同程度的抑制作用,抑制中浓度EC50的由小到大依次为:咪鲜胺、苯醚甲环唑、多菌灵和肟菌酯、噁霉灵和代森锰锌;设定的4组混剂配方,苯醚甲环唑+多菌灵、多菌灵+肟菌酯混配表现为增效作用,苯醚甲环唑+多菌灵混配的最佳有效成分质量配比为5∶5,共毒系数为378.63;多菌灵+肟菌酯混配的最佳配比则为8∶2,共毒系数为247.80。可见,苯醚甲环唑+多菌灵和多菌灵+肟菌酯合理比例混配能较好防控建兰茎腐病的发生为害。     

几株尖孢镰刀菌的绿色荧光蛋白基因转化

利用PEG介导的原生质体转化方法,将绿色荧光蛋白基因转入到6株香蕉枯萎病菌和1株棉花枯萎病菌中。结果表明:转化子连续转接5代能够稳定遗传,荧光强度良好,PCR验证gfp基因已转入到菌株中,为后续研究香蕉枯萎病菌和棉花枯萎病菌的侵染、防治等提供可视化的检测和分析手段。     

西瓜尖孢镰刀菌FOV-135的绿色荧光蛋白基因转化

建立并优化了PEG-CaCl2介导的原生质体转化体系,成功地将绿色荧光蛋白基因转入到西瓜尖孢镰刀菌FOV-135菌株中.转化子连续转接5代能够稳定遗传,荧光强度良好,每微克质粒DNA可获得4～6个性状稳定的转化子.PCR验证也表明gfp基因已转入到菌株FOV-135中.     

绿色荧光蛋白基因标记芒果畸形病病原菌研究

芒果畸形病是世界性的芒果重要病害。采用PEG介导的原生质体转化法用绿色荧光蛋白(GFP)表达载体(pCT74-sGFP)转化芒果畸形病病原菌(Fusarium proliferatum),获得了表达GFP的转化子。转化子经过单孢纯化后连续继代培养仍能发出稳定而强烈的荧光,通过GFP特异性引物PCR扩增转化子基因组获得预期片段,表明GFP基因已成功转入芒果畸形病病原菌基因组中且稳定遗传。GFP标记菌株生长正常,致病性和野生菌丝无差别。获得GFP标记的转化子,为应用发绿色荧光的芒果畸形病病原菌研究病原菌的侵染方式、扩展过程等奠定了基础。     

尖孢镰刀菌的应用研究进展

尖孢镰刀菌是一种重要的真菌资源,对其在农业、工业生产、食品安全和人类健康等方面的研究与应用具有重要意义。在农业方面,尖孢镰刀菌主要用于生物防控植物病害和杂草、农药研发及植物生长等研究;在工业方面尖孢镰刀菌主要用于生产有机酸、酶、其他代谢产物、工业污染处理及食品安全等研究。近年来针对尖孢镰刀菌应用的研究日益增多,本文综述了尖孢镰刀菌在多领域的应用,为促进之后实际生产中应用尖孢镰刀菌的研究方向及挑战提供解决思路。     

矿质元素对西瓜枯萎病病原菌尖孢镰刀菌产孢的影响

研究了8种矿质元素对西瓜枯萎病病原菌尖孢镰刀菌产孢的影响.初筛试验表明,Fe、Mn、Zn、Cu、B可在一定程度上抑制尖孢镰刀菌产孢,上述元素浓度分别为1、1、100、0.1、0.1 mg/L时对尖孢镰刀菌产孢的抑制率最高,分别为37.2％、18.6％、52.8％、47.7％、36.4％,Mo、Mg、Ca对尖孢镰刀菌产孢基本无抑制作用.正交试验表明,对尖孢镰刀菌产孢影响最大的因素是Mn,其次是Fe,最佳因素水平组合Fe、Mn、B、Cu的浓度分别为1、10、0.1、0.01 mg/L.     

香石竹尖孢镰刀菌PCR检测

采用多重引物聚合酶链式反应(Multiplex-PCR)技术检测香石竹尖孢镰刀菌纯培养和香石竹样品,并用分离培养技术加以验证.结果表明,PCR能特异地检测出所有16个香石竹尖孢镰刀菌菌株,并证实了昆明地区的香石竹尖孢镰刀菌为2号生理小种.PCR与分离培养技术检测结果基本一致,但总体上PCR检测阳性率稍高于分离培养检测的发病率.PCR能检测出接种7 d后香石竹病原菌,而观察病症需20 d.该项技术具有更高的灵敏度,适用于香石竹种苗的检测和病害流行学研究.     

香石竹尖孢镰刀菌PCR检测

采用多重引物聚合酶链式反应(Mulljplex—PCR)技术检测香石竹尖孢镰刀菌纯培养和香石竹样品,并用分离培养技术加以验证。结果表明,PCR能特异地检测出所有16个香石竹尖孢镰刀菌菌株,并证实了昆明地区的香石竹尖孢镰刀菌为2号生理小种。PCR与分离培养技术检测结果基本一致,但总体上PCR检测阳性率稍高于分离培养检测的发病率。PC能检测出接种7d后香石竹病原菌,而观察病症需20d。该项技术具有更高的灵敏度,适用于香石竹种苗的检测和病害流行学研究。     

尖孢镰刀菌引起的杭白菊叶枯病

对浙江磐安地区发生叶枯病的杭白菊进行分析,分离纯化获得病原真菌,经形态及分子鉴定其为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)。进一步进行室内毒力测定,发现所分离获得的病原菌能引起杭白菊叶片发生叶枯症状,与田间观察到的症状表型一致,完成科赫氏法则验证。研究结果扩大了杭白菊叶枯病的病原菌范围,将为病害的有效防治提供指导。     

黄瓜尖孢镰刀菌的营养特性

[研究目的]研究黄瓜尖孢镰刀菌生长对营养的需求及不同生长阶段的产孢差异,同时筛选一种最适产生小型分生孢子的培养基,为菌株小型分子孢子的收集及利用提供理论基础;[方法]以Bilai''s培.养基和VBC培养基为基础设计了6种培养基配方,分别为全糖型、淀粉型、低糖型、尿素型、低氮型和VBC型,运用方差分析及聚分析研究了黄瓜尖孢镰刀菌菌落生长与产孢的营养需求及其在不同生长阶段的差异;[结果]研究表明培养基类型对菌株的菌落生长影响不显著(p＞0.05),但是对分生孢子产量影响差异很大,不同类型培养上产孢量在(1.25～14.60)×106cfu/ml之间.全糖型培养基对菌株小型分生孢子的产生最有利,对大型分生孢子的产生最不利,而VBC型培养基则相反;[结论]促进尖孢镰刀菌小型分生孢子产生的最佳培养基为全糖型培养基,最大产孢量发生在培养11d.     

尖孢镰刀菌毒素的初步研究

引起大豆根腐病的尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)的不同菌株产毒量不同，毒素具有较强的热稳定性。用两种方法提取毒素，结果表明用炭吸附法提取的毒素量多于乙酸乙酯萃取法。生物活性测定表明：该毒素对大豆胚根有明显的抑制作用，对大豆一出复叶期幼苗有致萎作用。尖孢镰刀菌毒素不仅对大豆种子萌发、胚根生长有抑制作用，对其它作物种子萌发、胚根生长也有抑制作用。     

尖孢镰刀菌基因组SSR位点分析

为明确尖孢镰刀菌基因组中SSR位点的分布特点,本研究利用生物信息软件SSRIT对7条已公布的尖孢镰刀菌染色体基因组序列中的SSR位点进行了搜索,并用Excel软件对其进行统计分析。结果表明:基因组中7条染色体共有860个SSR位点,平均每条染色体出现122个SSR位点,大约每44.2kb出现一个长度不小于18bp的SSR位点。其中四、五核苷酸重复为主要重复类型,占全部SSR的比例分别为23.84%和32.56%;435种重复基元的分布情况存在差异,基元为ACAA/TTGT出现次数最多,为33次,其次为CAAA/TTTG,出现32次。说明尖孢镰刀菌基因组中含有丰富的SSR位点,为Genomic-SSR标记在尖孢镰刀菌鉴别中的应用奠定了理论基础。     

尖孢镰刀菌寄主专化型脂肪酸生物标记鉴别特性

【目的】分析不同寄主尖孢镰刀菌脂肪酸生物标记的结构组成和分布特性,建立尖孢镰刀菌寄主专化型脂肪酸生物标记鉴别模型。【方法】通过脂肪酸鉴定系统（Sherlock MIS）对来自于西瓜、香蕉和花生寄主的22株尖孢镰刀菌进行脂肪酸生物标记检测,采用聚类分析方法分析尖孢镰刀菌脂肪酸的同质性,采用主成分分析提取尖孢镰刀菌寄主专化型特征脂肪酸,利用Bayes逐步判别方法,建立尖孢镰刀菌寄主专化型判别模型。【结果】从供试的22个菌株中检测到8种脂肪酸,其中常见脂肪酸有6条,相对含量60%以上的主要脂肪酸有16:0、18:0 和18:2 CIS 9,12/18:0a。对常见脂肪酸进行聚类分析,结果表明脂肪酸与尖孢镰刀菌寄主专化型的系统发育存在着对应关系。对常见脂肪酸进行主成分分析,得到尖孢镰刀菌脂肪酸中的特征脂肪酸有5个,分别为14:0（X1）、16:0（X2）、16:1 CIS 9（W7）（X3）、18:0（X4）和18:2 CIS 9,12/18:0a（X5）。利用Bayes逐步判别分析,建立的尖孢镰刀菌寄主专化型判别模型为Y1=-183.06+12.24X1+8.05X2+5.39X4+3.58X5、Y2=-174.09+10.40X1+ 7.96X2+5.40X4+3.42X5、Y3=-173.97+ 14.85X1+7.25X2+ 6.58X4+ 3.53X5,当1≤Yi＜2时,菌株的寄主为西瓜;当2≤Yi＜3时,菌株的寄主为香蕉;当Yi＞3时,菌株的寄主为花生,且模型判对的概率为0.91。利用这套模型,对从西瓜、香蕉、花生上采集的56株尖孢镰刀菌寄主专化型进行判别,准确率达92.86%。【结论】脂肪酸生物标记可以作为尖孢镰刀菌寄主鉴别指标,脂肪酸14:0、16:0、18:0、18:2 CIS 9,12/18:0a是判别尖孢镰刀菌寄主的4个重要指标,建立的判别模型比较符合实际,有很好的应用价值。     

人参尖镰孢菌原生质体制备条件优化及绿色荧光蛋白转化

为人参根腐病菌的侵染及防治提供可视化的检测和分析手段,通过摸索分生孢子最适萌发时间、酶解液组成、酶解温度、摇床转数及渗透压稳定剂种类,研究人参根腐病菌-尖镰孢菌(Fusarium oxysporum)原生质体制备技术.结果 表明:将人参尖镰孢菌野生型菌株0083分生孢子在YEPD培养基中培养11h,酶解温度37℃、摇床转数180 r/min,渗透压稳定剂为0.7 mol/L NaC1的条件下,酶解液(崩溃酶、溶菌酶、纤维素酶和蜗牛酶质量浓度分别为0.01,0.03,0.02,0.005 g/mL)酶解0.25 g菌丝时,收获的菌丝体最有利于原生质体的形成和释放,共获得2.8× 107/mL原生质体.用聚乙二醇PEG介导外源DNA随机插入的方法,成功获得具有绿色荧光信号和潮霉素B筛选标记的转化子,转化效率(以单位质量的DNA的转化子数计)为1400/mg.选取转化子FOG1菌株经过6代继代培养后,菌落形态、产孢量和绿色荧光蛋白的表达与菌株0083无明显差异.因此,利用聚乙二醇(PEG)为媒介的遗传转化体系是稳定高效的遗传转化体系.     

枯萎病尖孢镰刀菌RAPD体系的建立

通过对PCR退火温度、反应体系中Mg2+、TaqDNA聚合酶、dNTPs、引物浓度等因子的优化,成功建立了枯萎病菌(Fusarium oxysporum)RAPD分析技术,并对其稳定性进行检测。结果表明在退火温度36℃,体系为TaqDNA聚合酶1.5 U,dNTPs浓度0.15 mM,Mg2+浓度1.5 mM,随机引物浓度30 ng时可以建立稳定灵敏度较高的RAPD分析体系。     

改良Trizol法提取尖孢镰刀菌RNA

西瓜枯萎病是西瓜的主要病害之一,其病原是尖孢镰刀菌。用经典Trizol法提取RNA的质量不能满足研究尖孢镰刀菌RNA的需要,而改良Trizol法提取的RNA杂质少,质量高,浓度也有所提高,完整性较好。试验结果表明,改良Trizol法可以满足研究尖孢镰刀菌RNA的需求。     

香荚兰尖孢镰刀菌致病性测定

对来自云南省西双版纳、河口和海南省兴隆香荚兰种植区的96株尖孢镰刀菌的致病性测定结果,强致病性菌株占56．3％,中等强度致病性菌株占9．4％,弱致病性菌株占21．8％,非致病性菌株占12．5％;云南省西双版纳、河口及海南省香荚兰种植区根腐病主要由尖孢镰刀菌引起。并从中筛选出12株非致病性尖孢镰刀菌作为香荚兰根腐病防治的候选菌株。     

尖孢镰刀菌发酵混合糖产乙醇

以尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)cs-28为研究对象,设置不同比例的葡萄糖木糖混合发酵生产乙醇。结果表明:葡萄糖在混合糖中被优先利用。葡萄糖的存在限制了木糖的利用,并且当葡萄糖消耗完,尖孢镰刀菌对木糖的利用也有个适应过程。在单糖发酵中,葡萄糖的消耗速率(0.248g.L-1.h-1)高于木糖的消耗速率(0.159g.L-1.h-1)。在葡萄糖发酵中,最大乙醇产量为8.50g.L-1,而木糖发酵中,最大乙醇产量为5.77g.L-1。但菌体干质量正好相反,在葡萄糖上最大菌体干质量为4.67g.L-1,而在木糖上最大菌体干质量为6.18g.L-1。葡萄糖发酵周期(3d)比木糖发酵周期(7d)短。     

尖孢镰刀菌致病菌营养体亲和群研究

在分离、鉴定侵染黄瓜的尖孢镰刀菌的基础上，测定30个尖孢镰刀菌菌株（包括6个专化型）对黄瓜的致病性和营养体亲和性。研究结果表明，侵染我国黄瓜的尖孢镰刀菌至少有5个以上的营养体亲和群（VCGs)，除来自黑龙江的9909－1菌株与膜的黄瓜根茎腐专化型（Fusarium axysporum f.sp.radicis-cucmeinun,FOCS)菌株属同一亲和群外，其它菌株均与希腊的尖孢镰刀菌黄瓜专化型（F.o.f.sp.cucumerinum,FOC)和FORC不亲和，本文所测定的尖孢镰刀非致病菌株均与致闰 株不亲和，不同专化型的尖孢镰刀菌菌株归属于不同的营养体亲和群。研究结果初步显示了应用营养体亲和性区分菌的致病性及专化型的可能性。