附子多糖对SD乳鼠缺氧/复氧心肌细胞的保护作用及其机制研究

目的 以乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型模拟在体心肌缺血再灌注损伤,观察附子多糖后处理对缺氧/复氧后心肌细胞的作用及机制.方法 建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,将乳鼠心肌细胞分为正常对照组、缺氧/复氧组、缺氧后适应组和附子多糖组.缺氧/复氧组给予心肌细胞缺氧3h后复氧6h;缺氧后适应组在细胞缺氧3h后,复氧前即给予3个循环的5 min复氧/5 min缺氧,随后复氧6h;附子多糖组在缺氧3h后,将心肌细胞换入含附子多糖浓度为10 mg·mL-1的培养液中,常规培养6h.MTT法检测细胞活力,流式细胞仪测定细胞内钙离子浓度和心肌细胞凋亡率,检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)的活性.结果 与缺氧/复氧组比较,经附子多糖后处理,可以增加心肌细胞存活率(P＜0.01),减少LDH(P＜0.01)和CK(P＜0.05)的释放,降低细胞内钙离子浓度(P＜0.05),有效抑制心肌细胞的凋亡(P＜0.05).结论 附子多糖对缺氧/复氧后心肌细胞产生保护效应,机制与其抑制钙超载、减轻线粒体的损伤有关.     

金属硫蛋白介导附子多糖对缺氧复氧心肌细胞的保护

目的:以金属硫蛋白为着眼点,探讨附子多糖对缺氧复氧后心肌细胞的保护机制.方法:建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,将乳鼠心肌细胞分为正常对照组、缺氧/复氧组、附子多糖组.缺氧/复氧组给予心肌细胞缺氧3h后复氧6h;附子多糖组分别给予10.0,1.0,0.1 g·L-1的附子多糖预处理心肌细胞24 h后再予缺氧3h后复氧6h.ELISA检测金属硫蛋白的含量,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,测定心肌细胞内丙二醛( MDA)的含量和细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量.结果:与缺氧/复氧组相比较,附子多糖可以呈剂量依赖形式地增加金属硫蛋白的合成,减少MDA的生成与LDH的的释放,抑制心肌细胞凋亡,在10.0 g·L-1时作用达到峰值.结论:附子多糖对于缺氧复氧心肌细胞损伤具有保护效应,其机制与附子多糖促进金属硫蛋白的合成,对抗氧化应激损伤,抑制心肌细胞凋亡有关.     

基于心肌细胞缺氧/复氧损伤的麦冬多糖提取工艺研究

目的:优化麦冬多糖提取工艺,并验证其对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。方法:采用L9(34)正交试验,以麦冬多糖含量为考察指标,以溶媒量、提取时间、提取次数为考察因素,筛选麦冬多糖最佳提取工艺;单因素实验,考察其最佳醇沉浓度;在此基础上,采用体外细胞实验建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,以细胞损伤抑制率为指标,验证麦冬多糖对心肌细胞的保护作用。结果:麦冬多糖的最佳提取工艺为14倍量的水回流提取3次,每次1h,醇沉浓度以80%为宜;按此工艺提取的麦冬多糖对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤具有较好的保护作用,但表现出一定的剂量、时间与药效的非线性关系。结论:本实验优化了麦冬多糖的提取工艺,同时验证了麦冬多糖对缺氧/复氧损伤型冠心病的治疗作用,为揭示其药效物质基础与大规模工业化生产提供参考。     

附子多糖抗心肌细胞凋亡的Smac/Diablo机制研究

目的:建立体外缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)模型,以模拟在体心肌细胞缺血/再灌注损伤,观察附子多糖(FPS)对H/R后心肌细胞凋亡的影响,并以Smac/Diablo为切入点探讨其作用机制。方法:采用原代培养的乳鼠心肌细胞建立缺氧/复氧模型,随机分为:正常对照组(Control)、缺氧/复氧组(H/R)、附子多糖(0.1、1、10mg/mL)组。MTT法测定细胞的存活率,流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率,荧光定量PCR检测BCL-2 mRNA的表达量,Western blot检测胞浆Smac/Diablo蛋白的表达。结果:与对照组比较,H/R组细胞存活率降低,细胞凋亡率显著增加,BCL-2 mRNA的表达量减少,胞浆中Smac/Diablo的表达增加。与H/R组比较,经附子多糖处理24 h后,附子多糖可呈剂量依赖性增加心肌细胞的存活率,抑制细胞凋亡率,促进BCL-2 mRNA的表达,降低胞浆中Smac/Diablo的表达,在10 mg/mL浓度时保护效应达到峰值。结论:FPS可抑制缺氧复氧后心肌细胞凋亡的发生,作用机制可能与其促进BCL-2 mRNA的表达,保护线粒体,抑制Smac/Diablo的释放,从而阻碍细胞凋亡的线粒体信号转导有关。     

黄芪多糖抑制缺氧/复氧损伤乳鼠心肌细胞凋亡与自噬机制研究

目的:探讨黄芪多糖(APS)对缺氧/复氧(H/R)所致乳鼠心肌细胞凋亡与自噬抑制作用的相关机制.方法:分离并体外培养乳鼠心肌细胞3 d后制备H/R损伤细胞模型,设正常对照组、H/R组、APS低、中、高剂量(20、40、80μmol/ml)组,各组于造模前30 min给药处理.复氧2 h后,CCK-8法检测细胞增殖抑制率...     

附子人参不同配伍比例对缺糖缺氧/复糖复氧损伤大鼠心肌细胞的保护作用

目的观察不同配伍比例的附子人参对缺糖缺氧/复糖复氧损伤大鼠心肌细胞的保护作用。方法将原代培养6 d的心肌细胞分为正常对照组、模型组、不同配伍比例的附参组、空白血清组。建立原代大鼠心肌细胞缺糖缺氧/复糖复氧损伤模型,观察不同配伍比例的附子人参血清对损伤心肌细胞自发搏动、细胞活力的作用,并测定心肌细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量以及心肌组织上清液中一氧化氮(NO)分泌量和乳酸脱氢酶(LDH)释放率。结果与空白血清组比较,各附参配伍组心肌细胞自发搏动频率、细胞活力显著升高(P0.05),心肌细胞SOD活性显著升高(P0.05),MDA含量、NO分泌量和LDH释放率均显著降低(P0.05),而且附参(2∶1)组对心肌细胞的自发搏动频率、细胞活力、SOD、MDA和LDH作用均不同程度地优于其余各配伍组。结论各附参配伍组对缺糖缺氧/复糖复氧损伤大鼠心肌细胞具有保护作用,其中以附参(2∶1)组作用效果最为显著。     

活络效灵丹对乳鼠缺氧/复氧损伤心肌细胞的保护作用研究

目的 探讨活络效灵丹含药血清对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧( hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤的保护作用及其机制.方法 取体外培养的乳鼠心肌细胞,建立H/R心肌细胞损伤模型,实验分为4组:正常血清对照组、模型组(H/R组)、活络效灵丹(HXP)血清组和单硝酸异山梨酯(ISMN)血清组,采用MTT比色法检测活络效灵丹对H/R损伤心肌细胞存活率的影响,测定细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量以及胞浆丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,并采用流式细胞仪检测活络效灵丹对H/R损伤心肌细胞凋亡的影响.结果 与正常组比较,模型组细胞存活率明显降低,上清液中LDH漏出量和胞浆MDA含量升高,SOD活性降低,细胞凋亡率显著增加(P＜0.01);与模型组比较,活络效灵丹含药血清可明显提高细胞存活率,增加胞浆SOD活性,减少上清液中LDH漏出量和胞浆MDA含量,并降低细胞的凋亡率(P＜0.01).结论 活络效灵丹对H/R损伤的心肌细胞具有保护作用,其作用可能与其抗脂质过氧化作用有关.     

薯蓣皂苷对缺氧/复氧所致乳鼠心肌细胞凋亡的保护作用

目的:研究薯蓣皂苷对缺氧/复氧所致乳鼠心肌细胞凋亡的保护作用,并探讨其作用机制。方法:体外原代培养乳鼠心肌细胞,建立缺氧/复氧损伤模型,以不同剂量的薯蓣皂苷进行干预。实验分为5组:空白对照组、缺氧/复氧组、薯蓣皂苷低、中、高剂量(10,20,40μmol/ml)干预组。MTT法检测心肌细胞存活率;TUNEL法检测心肌细胞凋亡百分率;Fluo-3负载激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内[Ca2+]i的变化;硝酸还原酶法测定心肌细胞培养液中一氧化氮(NO)浓度。结果:与缺氧/复氧组比较,薯蓣皂苷各剂量干预组心肌细胞存活率明显升高,细胞凋亡率明显降低,心肌细胞[Ca2+]i荧光强度明显减弱,心肌细胞培养液中NO浓度降低。结论:薯蓣皂苷能有效抑制缺氧/复氧导致的乳鼠心肌细胞的凋亡,其可能与减轻细胞内钙超载,抑制受损心肌细胞NO升高,减轻过量NO的细胞毒性作用有关。     

甘木通总黄酮对乳鼠原代心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的:研究甘木通总黄酮(TFCD)对大鼠乳鼠原代心肌细胞缺氧复氧(H/R)损伤的保护作用。方法:采用原代培养SD大鼠乳鼠心肌细胞建立H/R损伤模型,实验分为正常组、模型组、TFCD组(75、150、300μg/m L)及地奥心血康阳性药物对照组。采用MTT法测定TFCD对心肌细胞的存活率;Hoechest染色观察细胞核形态变化;比色法测定培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)的含量;荧光法测定细胞内钙离子浓度。结果:TFCD可显著提高H/R损伤心肌细胞内SOD的活性,能显著抑制LDH、CK的活性、MDA的生成以及细胞内钙浓度。结论:TFCD对乳鼠H/R损伤的心肌细胞具有保护作用,其作用机制可能与抗脂质过氧化和减轻细胞内钙超载有关。     

当归、红芪超滤膜提取物对培养乳鼠心肌细胞缺氧-复氧损伤的影响

目的探讨当归、红芪超滤膜提取物对心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响。方法通过给原代培养乳鼠心室肌细胞进行缺氧1h/复氧1h,建立缺氧/复氧（A/R）心肌细胞损伤模型。于复氧期开始随机将心肌细胞分为正常对照组（C）、缺氧/复氧组（A/R组）、药物低剂量组（LD）、药物高剂量组（HD）,于药物作用24h后测定各组缺氧/复氧后细胞损伤指标肌酸激酶（CK）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、髓过氧化物酶（MPO）。结果LD、HD组MDA、MPO、肌酸激酶（CK）明显较A/R组降低（P〈0.01）,SOD明显增高（P〈0.01）。结论当归、红芪超滤膜提取物（10万分子量）可减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤。     

芳香新塔花黄酮抗氧化活性及对大鼠乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的 探讨芳香新塔花黄酮(ZCF)的抗氧化活性,以及对大鼠乳鼠心肌细胞缺氧-复氧损伤的影响.方法 采用二苯代苦味酰基自由基(DPPH自由基)清除法测定ZCF的自由基捕获清除能力.体外培养原代SD乳鼠心肌细胞,建立心肌细胞缺氧-复氧损伤模型,用MTT法测定药物对心肌细胞存活率的影响,测定给药后丙二醛(MDA)的变化.结果...     

绞股蓝总黄酮对缺氧/复氧心肌细胞TNF-α浓度,Fas/FasL蛋白表达的影响

目的:探讨绞股蓝总黄酮(TFG)对培养的缺氧/复氧(H/R)乳鼠心肌细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)浓度,凋亡相关基因Fas/FasL蛋白表达的影响.方法:利用原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞建立心肌细胞H/R模型,实验分6组:①对照组;②H/R组;③15 mg·L-1 TFG+H/R组;④45 mg·L-1 TFG+H/R组;⑤105 mg·L-1 TFG+H/R组;⑥105 mg·L-1 TFG对照组.用ELISA法测定心肌细胞TNF-α,免疫组化法检测Fas/FasL蛋白表达.结果:H/R后,心肌细胞Fas/FasL蛋白阳性表达指数(PEI)显著高于对照,TFG组PEI 低于(H/R)组;TFG能抑制心肌细胞产生TNF-α.结论:H/R时凋亡相关基因Fas及其配体FasL蛋白表达增强,TFG对H/R心肌具有保护作用,其机制与减少TNF-α的生成,下调Fas/FasL蛋白表达,减少凋亡有关.     

Polysaccharide Krestin enhances manganese superoxide dismutase activity and mRNA expression in mouse peritoneal macrophages

Manganese superoxide dismutase (MnSOD), an inductive antioxidant enzyme, can protect cells from oxidative injury to the mitochondria. The elevation of MnSOD activity in cells can effectively prevent many diseases associated with oxidative stress. Polysaccharide Krestin (PSK), a kind of protein-bound polysaccharide extracted from Coriolus versicolor, is used as an immune response modifier in anti-tumor therapy. We have previously found that PSK could alleviate the oxidative injury that oxidized low density lipoprotein (Ox-LDL) brought to monocytes/macrophages, and therefore had some preventive or therapeutic effect on atherosclerosis. In order to find out if the effects of PSK were associated with the alteration ofantioxidant enzymes, we investigated its effect on MnSOD activity and gene expression in mouse peritoneal macrophages. The results showed that PSK could enhance SOD activity and increase the contents ofMnSOD mRNA in mouse peritoneal macrophages. Furthermore, the induction of MnSOD by PSK could be blocked by cycloheximide and actinomycin D.     

针刺益气活血法对血管性痴呆大鼠超氧化物歧化酶及丙二醛的影响

目的探讨针刺益气活血法对血管性痴呆（VD）大鼠学习记忆能力和脑海马组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量的影响。方法将SD大鼠30只随机分为模型组、治疗组及对照组,每组各10只。模型组及治疗组采用改良的Pulsinelklli-4血管阻断法建立VD大鼠模型;治疗组造模后选用百会、膈俞、气海、三阴交、膻中组成益气活血方针刺治疗;未造模大鼠作为对照组。观察各组大鼠Morris水迷宫实验各项指标及脑海马组织SOD活性和MDA含量的变化。结果模型组大鼠每日逃避潜伏期均明显长于对照组（P〈0.01）,治疗组大鼠逃避潜伏期较模型组明显缩短（P〈0.01）,但仍长于对照组（P〈0.01）。3组大鼠在训练第5 d后通过原平台位置的次数,治疗组大鼠多于模型组（P〈0.01）,但低于对照组（P〈0.05）。模型组脑海马组织中的SOD活性较对照组明显降低,而MDA含量明显增高（P〈0.01）。治疗组与模型组比较能明显升高SOD活性,降低MDA含量（P〈0.01）,并且治疗组升高的SOD活性、降低的MDA含量已接近正常组（P﹥0.05）。结论针刺益气活血法治疗血管性痴呆的作用可能与其改善VD大鼠学习记忆能力,显著提高脑海马组织中SOD活性及降低MDA含量有关。     

葛根素对乳鼠心肌细胞缺氧-复氧时脂质过氧化损伤的保护作用

目的 观察葛根素（puerarin,Pue)对缺氧－复氧损伤造成的大鼠乳鼠心肌细胞脂质过氧化反应的作用。方法 分别测定各个时点对照组、模型组及各给药组（1，0．1，0．01g/L Pue)培养上清中SOD活性和MDA含量，细胞MTT代谢率的变化。结果 缺氧及复氧都可造成SOD活性下降、MDA含量升高及MTT代谢率下降，复氧后2h最为显著（P＜0．01）。3种剂量Pue均能对抗这3个指标的异常变化，但浓度越小，作用越弱。结论 Peu能减轻缺氧时产生的自由基损害，减少SOD的消耗，并可能促进其合成，亦可保护心肌细胞的线粒体功能，这些作用呈剂量依赖趋势。     

黄芪甲苷对缺氧/复氧损伤H9c2心肌细胞的影响

目的:观察黄芪甲苷对缺氧/复氧损伤H9c2心肌细胞干预作用。方法:H9c2心肌细胞培养,传代后随机分为5组,对照组、缺氧/复氧组、黄芪甲苷药物预处理组:培养液中加入终浓度分别为25、50和100μmol/L的黄芪甲苷预处理,12h后进行缺氧/复氧处理。分别收取细胞培养上清液,用酶联免疫吸附技术(Elisa)测定上清液中的白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α),并检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;采用RT-PCR技术检测NF-κB的基因表达。结果:黄芪甲苷(25、50、100μmol/L)预处理12h后可明显降低IL-6、TNF-α、MDA的含量,可明显提高SOD含量,并可以减低核转录因子NF-κB P65基因表达水平,并且具有一定的量效关系。结论:黄芪甲苷保护缺氧/复氧对H9c2心肌细胞损伤,通过提高SOD含量,降低MDA含量,发挥抗氧化作用,并且抑制炎性因子IL-6、TNF-α分泌,其机制与减低核转录因子NF-κB P65基因表达水平有关。     

丹红共煎剂对乳鼠肥大心肌细胞ATP影响的研究

目的观察以丹红共煎剂为代表的活血治法对乳鼠肥大心肌细胞ATP的影响,进而观察活血治法在干预心肌细胞能量代谢中的作用,为活血中药防治心衰提供依据。方法体外培养乳鼠心肌细胞,利用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)模拟心衰大鼠心肌细胞环境,制作肥大心肌细胞模型,观察丹红共煎剂含药血清对心肌细胞细胞活性及ATP的影响。结果丹红共煎剂含药血清干预12、24、48 h,干预组心肌细胞活性高于模型组,24 h各组ATP含量无明显变化,48 h时干预组ATP含量低于模型组。结论丹红共煎剂可改善AngⅡ所致肥大心肌细胞的能量代谢。     

补肾明目冲剂对大鼠组织脂质过氧化物和超氧化物歧化酶的影响

目的：探讨补肾明目冲剂清除体内有害自由基、延缓和预防机体组织细胞生理衰老的作用机理。方法：用补肾明目冲剂对９月龄的雌性Ｗｉｓｔａｒ大鼠灌胃２５天，并与维生素Ｅ组作对照。给药结束后，用丙二醛法测定大鼠肝、晶体蛋白、视网膜、脉络膜组织脂质过氧化物（ｌｉｐｉｄｐｅｒｏｘｉｄｅ，ＬＰＯ）含量，用亚硝酸盐试剂盒检测超氧化物歧化酶（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ，ＳＯＤ）活性。结果：补肾明目冲剂能使大鼠肝、晶体蛋白、视网膜和脉络膜组织脂质过氧化物含量降低，超氧化物歧化酶活性增高。结论：补肾明目冲剂含有抗氧化物质，具有较强的抗组织氧化、延缓及预防机体组织细胞衰老的作用。     

Mechanisms of vitexin preconditioning effects on cultured neonatal rat cardiomyocytes with anoxia and reoxygenation

This study was aimed at investigating the protective effect and mechanism of vitexin preconditioning (VPC) on cultured neonatal rat cardiomyocytes after anoxia and reoxygenation (A/R). An A/R model was established by using cultured neonatal rat cardiomyocytes. Cellular injury was evaluated by measuring cell viability, the releases of creatine kinase (CK), and lactate dehydrogenase (LDH). The apoptosis rate of cardiomyocytes after Anoxia/reoxygenation and the activities of extracellular signal-regulated protein kinases (ERKs) were measured. The intracellular calcium indicated by the fluorescence in cardiomyocytes was measured by the laser confocal microscope. Vitexin preconditioning (10, 30 and 100 microM) significantly enhanced the cell viability, markedly inhibited A/R-induced increases of LDH and CK release, obviously decreased the number of apoptotic cardiomyocytes and markedly decreased the fluorescence intensity value of [Ca(2+)](i) in cardiomyocytes. Exposure to anoxia or vitexin preconditioning significantly increased the phospho-ERK level, and the increase was markedly inhibited by PD98059, an inhibitor of the upstream kinase of ERK. These results suggest that vitexin preconditioning has a protective effect on cardiomyocytes A/R injury through the improvement of cell viability, decrease of LDH and CK release, such that the protective mechanism may relate to its ability to inhibit the cardiomyocytes apoptosis, reduce the cardiomyocytes calcium overload and increase the abundance of phosphor-ERK1/2 of the cardiomyocytes after anoxia and reoxygenation.     

舒糖宝对糖尿病大鼠超氧化物歧化酶、丙二醛的影响

目的　探讨舒糖宝对糖尿病 (DM)大鼠血清超氧化物歧化酶 (SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的影响。方法　用腹腔注射四氧嘧啶 (Alloxan)的方法制作DM动物模型 ,观察舒糖宝对DM大鼠血糖、SOD和MDA的影响。结果　舒糖宝可降低血糖 (P <0 .0 1)、MDA(P <0 .0 1) ,提高SOD(P <0 .0 1)。结论　舒糖宝可提高四氧嘧啶DM大鼠抗氧化能力。