未成熟日本血吸虫卵的组分蛋白及其免疫学特性的研究

应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ对日本血吸虫４周、５周和６周－ＳＥＡ进行分析，分别出现２１、１４和２０条组分蛋白带，三者间既有共同组分又存在差异，显著出不同的分子基础。     

日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原的分析

采用免疫沉淀技术和ＥＩＴＢ技术分析了日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ）。结果：能被ＳＩＥＡ免疫血清识别的ＳＩＥＡ带主要于３０．８ＫＵ到４９．６ＫＵ之间，其主要反应带为４９．６ＫＵ，３９．７ＫＵ和３３．７ＫＵ。推测４９．６ＫＵ和３３．７ＫＵ这两怕 诱导宿主产生抗卵或熟过程中可能起着重要作用。     

日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原的分析

采用免疫沉淀技术和ＥＩＴＢ技术分析了日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ）。结果：能被ＳＩＥＡ免疫血清识别的ＳＩＥＡ带主要集中于３０８ＫＵ到４９６ＫＵ之间，其主要反应带为４９６ＫＵ、３９７ＫＵ和３３７ＫＵ。推测４９６ＫＵ和３３７ＫＵ这两抗原分子在诱导宿主产生抗卵成熟过程中可能起着重要作用。     

日本血吸虫可溶性虫卵抗原38kDa分子Dipstick快速诊断模式的初步建立

目的 建立简便的血吸虫病Dipstick快速诊断法。方法 以纯化的日本血吸虫虫卵可溶性抗原（SEA）38kDa分子为诊断抗原,以胶体金标记的鼠抗人IgG为二抗,建立Dipstick快速诊断体系;检测日本血吸虫病血清,急性期37例,慢性期30例,正常人52例,肝吸虫病人血清30例。结果 所测得的阳性率分别为94.6%,86.7%,1.9%,0%。结论 以SEA38kDa纯化分子建立的血吸虫病Dipstick快速诊断法具有较好的敏感性和特异性,且简便快捷,有较好现场应用前景。     

日本血吸虫卵可溶性抗原与病人和病兔血清的免疫印斑反应

日本血吸虫可溶虫卵抗原（ＳＥＡ）与血吸虫病人和兔血清的免疫印斑反应结果表明：ＳＥＡ中有七咱不同分子量的蛋白为主要血清学反应成分，其中≤２６ＫＤ、７ＫＤ及９６ＫＤ组分蛋白在血吸虫病检查中具有高度的敏感性和特异性，尤其是抗７ＫＤ和９６ＫＤ抗体在治疗兔的血清中消失较早。     

重组日本血吸虫副肌球蛋白的表达与纯化

用基因重组技术 ,将日本血吸虫副肌球蛋白 (rSj97)基因亚克隆至表达载体pQE30上。在IPTG诱导下 ,重组日本血吸虫副肌球蛋白在大肠杆菌中得以高效表达。通过快速蛋白质液相色谱仪 (FPLC) ,经TALON柱和离子交换柱两步分离纯化 ,获得大量高纯度的重组日本血吸虫副肌球蛋白 ,为水牛现场试验提供了充足的抗原     

日本血吸虫成虫和虫卵可溶性抗原及其组分抗原的研究

目的:探讨日本血吸虫雄虫、雌虫、虫卵的可溶性抗原雄虫(AWA-m、雌虫AWA-f、虫卵SEA)及其组分抗原的特性.方法:用DE22纤维素层析柱对日本血吸虫AWA-m,AWA-f,SEA抗原进行纯化,得到相应组分抗原.分别以SDS-PAGE和Western blot对组分抗原进行全面分析,并与相应未经纯化的可溶性抗原作比较.结果:经DE22纤维素层析处理的AWA-m,AWA-f,SEA,均能获得含多种蛋白的组分抗原.SDS-PAGE结果表明,AWA-m见10条主带和9条次带,其中Mr 37 000,28 000,25 000为特异性条带,出现8条免疫反应阳性带;而AWA-m组分抗原为9条蛋白带和6条免疫反应阳性带.AWA-f见15条蛋白带,其中Mr 26 500为特异性条带,组分抗原为8条蛋白带.AWA-f粗抗原及其组分抗原均见9条反应带.SEA见8条主带和10条次带,13条为免疫反应阳性条带;SEA组分抗原见11条带,其中9条为免疫反应阳性带.结论:AWA-m,AWA-f,SEA经DE22纤维素层析纯化获得组分抗原,方法简单、可靠.该组分抗原含有粗抗原的主要免疫反应成分,去除了多种与日本血吸虫病免疫反应无关的蛋白.     

被动转移抗SIEA－Cp101血清对人工感染日本血吸虫鼠肺虫卵肉芽形成的影响

目的　了解SIEA Gp10 1对日本血吸虫虫卵肉芽肿形成的影响。方法　采用虫卵肉芽肿肺模型对SIEA Gp10 1的作用进行研究。将 36只昆明鼠随机分为 5组 ,各组被动转移的成分分别为 :抗SIEA Gp10 1,抗SIEA2 8kDa ,抗SIEA Gp10 1与抗SIEA2 8kDa混合血清 ,同时设正常兔血清组与生理盐水对照组。分别于第 1、3、5天尾静脉注射抗血清、正常兔血清或生理盐水 ,各组于第 2天注射日本血吸虫成熟虫卵 ,第 8天取鼠肺组织切片 ,观察虫卵肉芽肿变化并测量、比较虫卵肉芽肿大小。结果　正常兔血清组与生理盐水组相比 ,虫卵肉芽肿大小无统计学差别 (P >0 0 5 ) ;与正常兔血清组比较 ,实验组虫卵肉芽肿的大小分别下降了 18 0 8%、2 8 30 %和 6 44 % ,其中抗SIEA2 8kDa差别显著 (P<0 0 5 ) ,抗SIEA Gp10 1和混合血清组差别不显著 (P >0 0 5 )。肉芽肿内外细胞成分的观察显示 ,正常兔血清组与生理盐水组无明显的差别 ;而抗SIEA2 8kDa血清被转组 ,虫卵破坏加快 ,部分虫卵卵内仅见残渣和少量炎性细胞。抗SIEA Gp10 1与混合血清组部分虫卵坏死 ,有一定数量的炎性细胞浸润。结论　SIEA2 8kDa分子具有抗卵胚发育和抑制虫卵肉芽肿形成的作用。混合血清组较抗SIEA2 6 2 8kDa组虫卵破坏较轻 ,虫卵肉芽肿增大 ,细胞数量增多 ,是否     

日本血吸虫重组32kD抗原的纯化和诊断应用

用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结合电渗洗脱的方法分离，纯化日本血吸虫重组３２ｋＤ抗原；用酶联免疫印迹技术分析纯化抗原的免疫活性。用纯化抗原，日本血吸虫成虫抗原和可溶性虫卵抗原分别检测慢性血吸虫病人肺吸虫病，肝吸虫病人，钩虫和健康人血清抗体。     

日本血吸虫虫卵特异性蛋白的基因克隆及多态性分析

目的日本血吸虫虫卵中可能参与免疫调节的分子的克隆及其多态性分析。方法在NCBI数据库及国家人类基因组南方研究中心（Chinese National HumanGenome Center,CHGC）日本血吸虫基因数据库中筛选出两个类 IPSE（IL-4-inducing principle of S. mansoni eggs）基因（AY812212和AY223149）、一个类蛇毒过敏样蛋白基因（AY812797）和-个类亲环素蛋白基因（AY814078）。用RT—PCR检测表达谱。并从日本血吸虫虫卵cDNA文库中克隆这四个基因。定向克隆入质粒pET28-a,经双酶切鉴定筛选得重组的阳性克隆后测序。所得序列应用生物信息学分析软件VectorNTISuite7．0、Mega4．0和在线软件Rankpep进行初步分析。结果成功构建了4个重组质粒pET28a-223149,pET28a-812212,pET28a-812797和pET28a-814078,并测定和分析了这4个基因。结论日本血吸虫虫卵基因存在基因多态性,可能与免疫逃避有关。     

日本血吸虫成虫分泌抗原的鉴定

目的制备日本血吸虫成虫分泌代谢抗原,对其免疫原性以及免疫反应性进行初步鉴定。方法日本血吸虫尾蚴感染家兔,42 d后剖杀获取成虫,将虫体置无血清DMEM培养基中,5%CO2孵箱37℃培养4 h,得到成虫分泌代谢抗原;用该抗原免疫小鼠,ELISA法检测小鼠血清特异性抗体反应;用该抗原包板,ELISA法检测血吸虫感染人血清抗体效价;采用十二烷基硫酸钠聚丙酰烯胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对其组分进行分析,然后用Western blot分析其对抗成虫分泌代谢抗原单抗发生反应的蛋白条带。结果成功制备日本血吸虫成虫分泌代谢抗原;免疫小鼠可产生较高滴度(1∶16 000)抗体反应;急性血吸虫病患者、慢性血吸虫病患者、晚期血吸虫病患者和钩虫病患者血清抗该抗原的抗体效价分别为1∶800、1∶400、1∶800和1∶100,华支睾吸虫患者和正常人血清均为阴性;SDS-PAGE显示其具有4条蛋白条带,分子量分别是13、40、60和180 ku左右;Westernblot结果表明该抗原能够被抗成虫分泌代谢抗原单抗在5ku左右处识别。结论制备的日本血吸虫成虫分泌代谢抗原具有较强的免疫原性和免疫反应性。     

抗日本血吸虫病分子疫苗(SIEA28kDa)氨基酸组成的分析

目的 采用反向高效液相色谱方法分析SIEA28kDa蛋白分子的氨基酸组成。方法 用邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生反相高效液相色谱法测定SIEA28kDa抗原组分样品中氨基酸成分，并在Expasy中数据分析与比较。结果：SIEA28kDa分子抗原主要由13种氨基酸组成。其中，甘氨酸在其氨基酸组成中比值最大，在Expasy中根据其氨基酸组成的比值及其一级属性参数比较发现6种Score值较高的血吸虫蛋白质分子，但SIEA28kDa分子与它们均有不同方面的差别。结论 SIEA28kDa分子可能不是6种Score值较高的血吸虫蛋白质分子中的任何1种，但与它们在氨基酸组成上具有较高的相似性，而与GST相似性较低。     

日本血吸虫中国大陆株32ku抗原cDNA的克隆及其核苷酸序列分析

目的　研究日本血吸虫重组疫苗，表达和制备血吸32ku抗原重组疫苗。方法　根据Merekelbach等报道的日本血吸虫中成虫32ku抗原完整编码序列设计引物，以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板，采用逆转录—聚合酶链反应技术，扩增其32ku抗原完整编码区cDNA。将cDNA重组于pGEM-T easy载体上，转化大肠杆菌。结果　重组质粒经测序进行鉴定，结果与Merckelbach等报道的32ku抗原编码区cDNA进行比较，二序列一致。结论　32ku抗原在不同的地区异株间的32ku蛋白进化上存在高度保守性，因此32ku抗原可以作为重组疫苗的候选抗原。     

日本血吸虫感染小鼠脾细胞体外IL-2转录水平的实验观察

应用RT PCR方法对日本血吸虫感染小鼠脾细胞体外在SEA与ConA诱导下产生的IL 2从mRNA转录水平进行研究 ,以探讨该细胞因子mRNA转录水平的动态变化及其在肉芽肿形成与调节过程中的作用。结果显示 ,未感染和感染 3周小鼠脾细胞均无IL 2表达 ,感染后第 5周的小鼠脾细胞出现IL 2特异性条带 ,感染后第 8周IL 2表达明显增强 ,感染后第 1 0、1 2周无论SEA或ConA都不能诱导IL 2mRNA的转录。表明IL 2表达的动态变化与肉芽肿的形成、发展及调节相平行 ,提示IL 2可能在肉芽肿形成和调节过程中起重要作用。     

紫外线照射日本血吸虫尾蚴疫苗保护性抗原的筛选

目的：分析经紫外线照射处理后日本血吸虫尾蚴蛋白的差异性表达，并从中筛选出有效的保护性抗原组分。方法：收集尾蚴，制备抗原，进行SDS-PAGE电泳后，转印至硝酸纤维素膜上，与照射尾蚴免疫血清和正常感染血清分别进行免疫印渍(Western blot)试验，比较两反应条带的差异性，筛选出惟有免疫血清所能识别的特有的抗原组分，并测定其分子量。结果：在童虫抗原中发现一条能被免疫血清所识别的特异性抗原条带，并测得其分子量为75kDa。结论：紫外线照射致弱尾蚴可诱导宿主产生特异性抗体，被该抗体所识别的抗原分子量为75kDa。     

日本血吸虫副肌球蛋白T细胞表位的预测和鉴定

目的鉴定日本血吸虫副肌球蛋白的T细胞表位。方法用SYFPEITHI软件预测日本血吸虫(中国大陆株)副肌球蛋白的T细胞表位，候选表位分别命名为P20、P21、P22、P23、P24。设计并合成候选表位的编码核苷酸，定向克隆入融合表达载体pET-32c( )，经酶切及测序鉴定出重组克隆。阳性克隆经IPTG诱导表达，表达产物以Ni^2 -NTA柱亲和层析及透析纯化。纯化后的硫氧还蛋白(Trx)融合蛋白体外刺激C3H／HeJ及C57BL／6小鼠腹股沟淋巴结或脾脏单个核细胞，^3H-TdR掺入法检测其增殖。结果候选表位中P20、P21、P22、P23能有效刺激C3H鼠致敏淋巴细胞细胞增殖，P20、P22能刺激C57鼠致敏淋巴细胞增殖。结论P20和P22可能是日本血吸虫副肌球蛋白的通用性T细胞表位。