枸杞多糖通过TLR4/Src通路促进巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌

目的 探究枸杞多糖（Lycium barbarum polysaccharide,LBP）对巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus的影响及其机制。方法 采用CCK-8法检测不同浓度的LBP对巨噬细胞活力的影响;利用Western blotting法检测LBP对巨噬细胞丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）和核因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）及Src激酶家族成员（Src family kinases,SFKs）中的Src蛋白表达水平的影响;运用庆大霉素保护实验和流式细胞术检测LBP对巨噬细胞吞噬S.aureus的影响,同时使用Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）、MAPK、NF-κB和Src的抑制剂初步判断LBP的作用机制。结果 100～600 μg/mL的LBP对巨噬细胞无毒性,但能有效提高巨噬细胞的活力（P<0.01、0.001）,并且显著促进巨噬细胞对S.aureus的吞噬作用。虽然LBP可促进巨噬细胞中MAPK信号通路相关蛋白、NF-κB以及Src的磷酸化水平（P<0.01、0.001）,但LBP诱导巨噬细胞吞噬S.aureus能力仅被TLR4抑制剂TAK242和Src激酶家族抑制剂AZD0530显著抑制（P<0.001）,而不受NF-κB、MAPK抑制剂的影响。结论 LBP能够活化巨噬细胞,并通过TLR4/Src信号通路促进巨噬细胞对S.aureus的吞噬。     

桑苏饮调控TLR4通路抑制哮喘大鼠气道炎症

目的:探讨桑苏饮调控Toll样受体4(TLR4)通路对哮喘大鼠气道炎症的抑制作用.方法:48只SD大鼠中选取40只建立哮喘模型,并按照随机数表法等分为模型组,地塞米松组,桑菊饮低、中、高剂量组5组,剩余8只SD大鼠作为空白组.地塞米松组予以0.005 g·kg-1灌胃,桑苏饮低、中、高剂量组分别予以2.1,4.2,8....     

槐定碱与TLR4/MD-2阻断剂对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞TLR4-NF-κB-TNF-α通路的影响

目的:研究槐定碱及TLR4/MD-2阻断剂对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞TLR4-NF-κB-TNF-α通路的影响,探讨其抗内毒素的药理机制。方法:培养RAW264.7巨噬细胞,分为5组:空白对照组,LPS模型组,槐定碱+LPS组,TLR4/MD-2阻断剂+LPS组,TLR4/MD-2阻断剂+槐定碱+LPS组,各组分别于处理完毕后120 min时收集细胞及细胞培养液。West-ern blot检测TLR4蛋白表达,免疫细胞化学检测NF-κB蛋白的分布与表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测NF-κB,TNF-αmRNA表达,放射免疫分析法检测细胞培养液中TNF-α含量。结果:与LPS模型组比较,槐定碱+LPS组TLR4蛋白,NF-κBmRNA与NF-κB入核率,TNF-αmRNA及培养液中TNF-α含量均显著降低(P<0.01);TLR4/MD-2阻断剂+LPS组与TLR4/MD-2阻断剂+槐定碱+LPS组NF-κB mRNA及NF-κB入核率,TNF-αmRNA及培养液中TNF-α含量均低于LPS模型组(P<0.01),接近空白对照组,但2组之间上述各值的差异均无统计学意义。结论:TLR4/MD-2可能是槐定碱作用的靶位之一,槐定碱抑制TLR4-NF-κB-TNF-α通路活化可能是其抗内毒素机制之一。     

基于TLR4/NF-κB/NLRP3通路探讨补阳还五汤调控巨噬细胞极化的作用机制

目的：基于Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)通路探讨补阳还五汤调控巨噬细胞极化的作用机制。方法：本实验通过采用不同浓度(0、1.25、2.5、5、10、20、40、80 mg·L^-1)脂多糖(LPS)对RAW264.7巨噬细胞干预24 h,细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测RAW264.7巨噬细胞存活率,筛选最适浓度建立体外LPS诱导RAW246.7巨噬细胞炎症模型。将实验分为空白组(20%空白血清),模型组(20%空白血清+10 mg·L^-1LPS),模型对照组(20%FBS+10mg·L^-1LPS),低、中、高(5%、10%、20%)补阳还五汤含药血清组及NLRP3抑制剂MCC950(50μmol·L^-1)、活性氧(ROS)抑制剂NAC(10μmol·L^-1)、NF-κB抑制剂PDTC(10μmol·L^-1)联合补阳还五汤高剂量(20%)组。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测...     

参苏饮含药血清对小鼠巨噬细胞Toll样受体及其下游信号转导通路的影响

目的：研究参苏饮含药血清对脂多糖(LPS)和聚肌胞(POLY I∶C)刺激的小鼠巨噬细胞株RAW 264.7表达Toll样受体3(TLR3),Toll样受体4(TLR4)及其下游信号转导通路髓样分化蛋白(MyD88),肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6),Toll样受体相关分子(TRAM)和Toll样受体相关的干扰素活化子(TRIF) mRNA的影响。方法：用LPS(5 μg·mL^-1),POLY I∶C(50 μg·mL^-1)分别刺激RAW 264.7细胞株,同时给予参苏饮含药血清(11.2,6.7,4.0,2.4,1.5 g·kg-1·U^-1)进行干预,ELISA法测定细胞培养上清液中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-β (IFN-β)的含量。先计算参苏饮IC₅₀,然后再以IC₅₀(11,5,2.5,4.9 g·kg^-1·U^-1)做为药物剂量进行干预,荧光定量PCR方法测定TLR3,TLR4和下游通路相关指标mRNA的表达,分析评价参苏饮含药血清清热解毒药效学作用的现代药理学基础。结果：参苏饮含药血清对POLY I∶C刺激的TLR3及其下游通路的MyD88和TRAM有抑制作用,对LPS刺激的TLR4的病理性升高无抑制作用,但对TLR4下游通路TRAM和TRIF mRNA的表达有明显的抑制作用。以上综合作用引起炎症因子TNF-α和IFN-β的降低。结论：参苏饮清热解毒的药效学作用可能与抑制TLR3,MyD88,TRAM和TRIF等细胞因子的表达有关。     

基于TLR4信号通路的中药抗肝脏疾病作用研究进展

肝脏疾病是发生在肝脏的所有疾病的总称。近年来中药在治疗肝脏疾病中有一定优势,其实验研究作用显著或临床应用疗效较好,不良反应较少,呈现了广阔的前景。Toll样受体4(TLR4)信号通路与肝脏疾病息息相关,其抑制机制是通过TLR4介导的信号通路活化核转录因子-κB(NF-κB),抑制白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等炎症因子的分泌,抑制肝细胞的炎症损伤,进一步抑制了IL-1β,IL-6,TNF-α等对肝星状细胞(HSC)等细胞的激活,其阻断TRL4通路的方式为①抑制TLR4的表达;②抑制TLR4二聚体化;③阻断胞内信号转导,通过作用于衔接蛋白,作用于激酶IL-1受体相关激酶(IRAKs),作用于去泛素化酶锌指蛋白A20(TLRAFst)。通过这几个方面阻断TRL4通路,抑制炎症反应发生,达到抗肝脏疾病的作用。因此,抑制或增强TLR4信号通路或针对TLR4信号通路中某些环节进行干预成为肝病治疗的新策略。目前TLR4信号通路成为中药抗肝脏疾病的靶点之一。本文对近年中药抗TLR4信号通路活化,通过中药单体及有效部位、中药提取物、中药复方等发挥抗肝脏疾病作用的文献进行整理,为下一步中西医治疗肝脏疾病提供重要的指导意义和方向。     

蘘荷根茎乙醇提取物对LPS诱导巨噬细胞RAW264.7炎症反应的影响北大核心CSCD

目的:探究蘘荷根茎乙醇提取物的抗炎活性及作用机制。方法:以70%乙醇为溶剂对蘘荷根茎回流提取制得提取物,测定其总酚酸和总黄酮含量,采用超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱串联质谱(UPLC-Q-Orbitrap MS)鉴定其化学成分;MTT法测定蘘荷根茎乙醇提取物对RAW264.7细胞和L929细胞存活率的影响;用脂多糖(LPS)对RAW264.7细胞进行诱导建立体外炎症模型,通过NO检测试剂盒、ROS检测试剂盒、ELISA、免疫印迹法检测其对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和核转录因子κB(NF-κB)信号通路中一氧化氮(NO)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的释放量、活性氧(ROS)水平及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响,探究蘘荷根茎乙醇提取物的抗炎作用及可能的作用机理。结果:蘘荷根茎乙醇提取物富含酚类成分[(15.07±0.13)mg GAE/g],鉴定出酚类化合物为L-酪氨酸、原儿茶酸、原儿茶醛、4-甲基水杨酸、对羟基安息香醛、咖啡酸、香兰素、对羟基肉桂酸、白果新酸;蘘荷根茎乙醇提取物在31.3、62.5、125、250μg/mL时对RAW264.7和L929细胞的存活率无显著影响;与空白对照组比较,模型对照组NO、IL-6、TNF-α和ROS含量显著升高(P<0.01),iNOS表达、P38、JNK、ERK、IκBα的磷酸化表达以及细胞核NF-κB p65表达明显上调(P<0.05或P<0.01),IκBα和细胞质NF-κB p65的表达显著下调(P<0.01);与模型对照组比较,蘘荷根茎乙醇提取物31.3、62.5、125、250μg/mL组NO、IL-6的释放量明显降低(P<0.05或P<0.01);蘘荷根茎乙醇提取物62.5、125、250μg/mL组ROS水平显著降低,iNOS表达、JNK、ERK、IκBα的磷酸化表达以及细胞核NF-κB p65表达显著下调,细胞质NF-κB p65表达显著上调(P<0.01);蘘荷根茎乙醇提取物125、250μg/mL组IκBα表达明显上调(P<0.05或P<0.01);蘘荷根茎乙醇提取物250μg/mL组TNF-α的释放量明显降低和P38的磷酸化表达明显下调(P<0.05)。结论:蘘荷根茎乙醇提取物具有良好的抗炎作用,其抗炎机制可能与抑制LPS诱导的MAPK和NF-κB通路的活化有关。     

基于TLR4信号通路的中医药干预溃疡性结肠炎研究进展

溃疡性结肠炎（UC）是一种累及结直肠黏膜及黏膜下层的病变,以肠道黏膜炎症为特征。UC发病率呈逐年上升趋势,病情复杂多变,迁延难愈,严重影响患者的身心健康。该病病理机制复杂,其中肠道免疫应答及不可控性炎症反应是其重要的病理生理机制之一。Toll样受体4(TLR4)作为一种跨膜信号转导受体,可介导免疫应答和炎症反应,在UC发生发展中发挥关键作用。目前,UC的治疗主要使用水杨酸剂、糖皮质激素等减轻肠道炎症,虽然可在一定程度上遏制病情的进展,但不良反应较大,停药后又易复发。中医学可以多途径、多效应、多靶点调控TLR4通路,抑制炎症反应,有效干预UC的进展,已逐渐成为防治UC的热点。大量研究表明,中医药治疗UC具有独特优势,其可通过调控TLR4信号通路,加强免疫防御、抑制炎症反应,从而促进肠道黏膜愈合及维持肠道微生物生态系统平衡,有效治疗UC,并取得了一定的研究进展,但目前仍缺乏对中医药调控TLR4信号通路治疗UC全面的综述。故该文通过检索查阅近年来的相关文献,对TLR4信号通路与UC的关系及中医药在其中的作用进行系统性总结,以期为UC的潜在治疗及新药开发提供新的思路。     

桂枝汤含药血清对小鼠巨噬细胞Toll样受体3、4型及其下游信号转导通路元件的影响

目的:研究桂枝汤含药血清对LPS和Poly(I:C)刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7的Toll样受体(TLR)及其下游主要信号转导通路元件的影响,从mRNA和蛋白水平探讨桂枝汤含药血清防治感染性疾病的免疫学基础。方法:用LPS或Poly(I:C)分别刺激RAW264.7细胞,加桂枝汤含药血清干预24h后,取细胞上清液测定炎症因子TNF-α和IFN-β的含量;荧光定量PCR方法测定TLR3、TLR4和下游信号转导通路元件MyD88、TRAF-6、TRAM和TRIF mRNA的表达;Western blotting法分析TLR3、TLR4蛋白的表达;细胞免疫荧光法分析MyD88、TRAF-6蛋白表达的强弱。结果:桂枝汤含药血清可显著降低LPS刺激诱导的MyD88、TRAM和TRIF的高表达;Poly(I:C)刺激后,桂枝汤含药血清显著降低TLR3、MyD88和TRAM的高表达。结论:桂枝汤能直接作用于TLR3,抑制其高表达,阻断TLR3胞内信号转导的MyD88依赖和非依赖两条途径,抑制相关基因表达产物TNF-α、IFN-β过度分泌,具有TLR3拮抗剂样作用。桂枝汤也可直接作用于接头蛋白MyD88、TRAM和TRIF,影响TLR4信号转导的MyD88依赖和非依赖性途径,抑制TNF-α、IFN-β的过度分泌。     

当归芍药散对非酒精性脂肪肝大鼠TLR4/MyD88/JNK信号通路的影响

目的:探讨当归芍药散对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠的治疗作用及其机制.方法:60只清洁级SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、易善复组(0.144 g·kg-1)及当归芍药散低、中、高剂量组(2.44,4.88,9.76 g·kg-1).通过喂饲高脂饲料复制NAFLD大鼠模型,造模同时给予相应药物治疗,8周后,采集血...     

宁夏枸杞尼古丁来源研究

目的:研究枸杞子中尼古丁来源,为设定科学合理的枸杞子尼古丁限量标准提供参考。方法:采集34份无外源污染宁夏枸杞的根、茎、叶、花、果样品,采用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)研究宁夏枸杞不同部位样品尼古丁含量;收集124份人工种植宁夏枸杞成熟果实(枸杞子)样品及62份宁夏枸杞生产常用投入品,采用高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)检测宁夏枸杞成熟果实及宁夏枸杞生产常用投入品中尼古丁含量。结果:无外源污染情况下,宁夏枸杞的根、茎、叶、花、果中均检出微量尼古丁,尼古丁质量分数≤0.00361 mg·kg^-1;21份宁夏枸杞成熟果实中检出尼古丁,尼古丁质量分数为0.00055~0.03030 mg·kg^-1。其中,仅7份样品尼古丁含量超过欧盟最大残留限量标准(0.01 mg·kg^-1),超标样品中有6份宁夏枸杞成熟果实在生产中使用过尼古丁严重超标的苦参碱投入品。结论:宁夏枸杞可内源合成微量尼古丁,市场检测出尼古丁超标的枸杞子可能与生产过程中使用含有尼古丁投入品有关。     

宁夏枸杞醋酸乙酯部位化学成分研究

目的 研究宁夏枸杞Lycium barbarum的化学成分.方法 采用大孔吸附树脂AB-8、硅胶柱色谱、反相ODS柱色谱等进行分离和纯化,根据理化性质及光谱数据鉴定化合物的结构.结果 从宁夏枸杞70％乙醇提取物的醋酸乙酯部分分离得到14个化合物,根据其波谱数据鉴定了其中11个化合物的结构,分别为邻苯二甲酸二甲酯(1)、邻苯二甲酸二丁酯(2)、β-谷甾醇(3)、烟酰胺(4)、东莨菪素(5)、5-羟甲基糠醛(6)、反式松柏醇(7)、槲皮素(8)、N-反式阿魏酸酪酰胺(9)、4-O-(对甲氧基肉桂酰基)-β-D-葡萄糖苷(10)和东莨菪苷(11).结论 化合物1、2、4、6、7、9和10为首次从宁夏枸杞中分离得到,也是首次从该属植物中分离得到.     

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??Lycium leaf (LL) is the dried leaf of Lycium chinese Mill or Lycium barbarum L. In this paper, the edible and medicinal history, the chemical composition and pharmacological effects of LL were reviewed; and the status of development and utilization of LL was collected. That LL contains polysaccharides are found, flavonoids, steroids and terpenes, and has the effect of anti-oxidation, hypoglycemic, hypolipidemic, and improving memory.     

枸杞子中1个新的环香叶烷类单萜

目的 研究宁夏枸杞Lycium barbarum果实（枸杞子）正丁醇部位的化学成分。方法 运用D101大孔吸附树脂、硅胶、ODS和Sephadex LH-20等柱色谱以及反相制备型HPLC等各种现代色谱分离技术进行系统的分离纯化,根据化合物的光谱数据和理化性质进行结构鉴定。结果 从枸杞子正丁醇部位中分离得到11个化合物,分别鉴定为（3S,5R）-allenic ketodiol 5-O-β-D-glucosyl-（1→3）-β-D-glucoside （1 ）、citroside B （2 ）、alangionoside D （3 ）、turpinionoside D （4 ）、莨菪亭-7-O-β-D-木糖基-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖苷（5 ）、2-苯乙醇-β-D-葡萄糖苷（6 ）、2-苯乙醇-β-纤维二糖苷（7 ）、tuberonoid A （8 ）、对羟基肉桂酸（9 ）、3-甲氧基-4-羟基苯丙酸（10 ）、阿魏酸（11 ）。结论 化合物1 为1个新的环香叶烷类单萜,命名为柑橘苷C。化合物2 和3 为首次从枸杞属植物中分离得到。体外降血糖活性实验表明,化合物1 和4 在浓度10.0μmol/L时,可以增加胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗量。     

宁夏枸杞内生菌抗氧化活性菌株的筛选与鉴定

采用组织匀浆法对枸杞各药用组织内生真菌和放线菌进行分离,共得到29株,真菌18株、内生放线菌11株,内生菌的数量在各组织器官中表现为根皮>叶>花>果实;通过Fenton反应法和T-AOC法对其中11株内生菌的羟自由基清除能力和总抗氧化能力进行测定,结合培养特性与序列分析法对菌株进行分类归属,其中5株内生真菌隶属于3属,6株内生放线菌属于3科3属;抗氧化实验结果表明5株内生真菌与6株内生放线菌的总抗氧化能力和羟自由基清除能力差异较大,曲霉属菌株抗氧化活性相对较强,其中fL6总抗氧化能力为(188.5±0.549) U·mL^-1,IC₅ 0.3 mg·L^-1,fL1的IC₅₀ 0.42 mg·L^-1,fL9总抗氧化能力为(113.63±1.021) U·mL^-1,都强于阳性对照Vit C;表明宁夏枸杞内生真菌具有潜在的抗氧化药物开发应用前景。     

枸杞子化学成分的研究

目的 :对枸杞子的化学成分进行了化学鉴定。方法 :色谱技术进行分离 ,MS ,NMR和IR光谱解析及与对照品比较鉴定化合物。结果 :分得 8个化合物 ,其中 6个鉴定为莨菪亭 (Ⅰ) ,β-谷甾醇 (Ⅱ) ,香豆酸 (Ⅲ) ,葡萄糖 (Ⅳ) ,胡萝卜苷 (daucosterol) (Ⅴ ) ,甜菜碱 (betaine) (Ⅵ )。结论 :化合物Ⅲ ,Ⅳ ,Ⅴ为首次从该植物中分离得到。     

枸杞子醋酸乙酯部位非生物碱类化学成分研究

目的 研究宁夏枸杞Lycium barbarum果实(枸杞子)的化学成分.方法 运用硅胶、ODS、Sephadex LH-20以及反相制备型HPLC等各种现代色谱分离技术进行分离纯化,根据化合物的光谱数据和理化性质进行结构鉴定.结果 从枸杞子95％乙醇提取物的醋酸乙酯部位中共分离得到23个化合物,分别鉴定为3-O-β-...     

利用转录组数据挖掘枸杞雄性不育相关基因

目的 探知宁夏枸杞Lyciumbarbarum雄性不育发生涉及的相关基因。方法 以雄性不育品种“宁杞5号”和正常可育品种“宁杞1号”单双核花粉时期花药为材料,构建c DNA文库,Illumina HiSeq2500高通量平台进行转录组测序。结果 组装得到14 154条Unigenes序列,在错误发现率（false discovery rate,FDR）<0.05且差异倍数（fold change,FC）≥2的条件下,获得3012个差异表达基因（differentially expressed genes,DEGs）,其中,有2327个DEGs在NCBI的非冗余蛋白质数据库（non-redundant protein databasse,NR）、基因本体数据库（gene ontology,GO）、直源同源群集数据库（clusters of orthologous groups,COG）、基因功能和代谢途径数据库（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）、真核同源群数据库（eu Karyotic orthologous Groups,...     

宁夏枸杞花药转录组分析及花药发育相关基因的筛选

目的 为了探知宁夏枸杞Lycium barbarum花药发育过程及挖掘花药发育相关基因.方法 以单双核花粉时期和成熟花粉时期的花药为研究材料,通过高通量Illumina HiSeq2500测序平台进行转录组分析.结果 组装共获得128151条Unigene,将Unigene与NCBI的非冗余蛋白质数据库(non-red...