微生物饲料中有效活菌数的准确测定

微生物饲料种类繁多,如酵母饲料、活菌制剂、活性蛋白饲料等,它们都属于饲用活菌制品,有效活菌的数量是判断微生物饲料合格与否的重要指标.测定活菌数的方法很多,但由于所得数值都是统计数值,所以规范的操作和对结果必要的统计分析,就显得十分重要.如用血球板染色计数,虽然能区分活菌与死菌,但如不做统计分析易出现很大误差;用平板菌落记数法,不设3个以上稀释度或稀释度不成梯度,菌落不做显微镜观察确认,平板重复数不做统计分析,都会造成很大误差.因此,计数的关键在于规范的操作和结果的统计分析,现分两个方面介绍如下:     

屎肠球菌对AA肉鸡肠道酶活和绒毛形态的影响

为研究日粮中添加屎肠球菌对爱拔益加(Arbor Acres,AA)肉鸡肠道相关酶活以及绒毛形态的影响,试验选取1日龄AA肉鸡600只(公鸡),随机分为5组,每组6个重复,每个重复20只。对照组(CON组)饲喂基础日粮,抗生素组(Ant组)在基础日粮中添加0.1%金霉素,低(LEF组)、中(MEF组)、高(HEF组)剂量屎肠球菌组分别在基础日粮中添加50、100、200 mg/kg屎肠球菌。试验时间为42 d。结果表明:(1)在空肠中,与CON组相比,HEF组的脂肪酶活性显著提高(P0.05)。对于胰蛋白酶来说,CON组与HEF组活性显著高于Ant组以及LEF组、MEF组的活性(P0.05);在回肠中,与CON组相比,MEF组、HEF组和Ant组的糜蛋白酶活性显著提高(P0.05)。MEF组、HEF组麦芽糖酶活性显著高于CON组、Ant组(P0.05)。同时HEF组、Ant组胰蛋白酶活性显著高于CON组(P0.05)。(2)与CON组相比,HEF组的回肠绒毛高度显著提高(P0.05)。(3)Ant组的空肠绒毛宽度显著低于CON组、LEF组、MEF和HEF组(P0.05),Ant组的空肠绒隐比显著高于CON组、LEF组(P0.05)。由此可见,AA肉鸡日粮中添加200 mg/kg屎肠球菌能够显著提升小肠中蛋白酶活性,并且有提升小肠绒毛高度的趋势,有利于改善小肠黏膜结构,促进肉鸡生长性能提高。     

热灭活屎肠球菌及其活菌对仔猪腹泻率、消化酶活性和脏器指数的影响

为了研究屎肠球菌对哺乳期仔猪的益生作用,试验选用健康的杜×长×大新生仔猪9窝,将其随机分为对照组、屎肠球菌灭活菌组和屎肠球菌活菌组,每组3窝。从出生开始至6日龄,对照组、屎肠球菌灭活菌组和屎肠球菌活菌组仔猪分别经口灌服无菌脱脂乳、含屎肠球菌热灭活菌(浓度为1×108cfu/m L)的脱脂乳和含屎肠球菌活菌(浓度为1×108cfu/m L)的脱脂乳,10 m L/(头·d)。仔猪于7日龄开始饲喂教槽料,21日龄断奶。分别于7日龄和21日龄时从每窝中选出1头接近平均体重的仔猪屠宰,取肝脏和脾脏,采集空肠黏膜,计算并分析仔猪腹泻率、消化酶活性和脏器指数。结果表明:与对照组相比,灭活菌和活菌都不影响哺乳期仔猪的体重和日增重(P0.05);屎肠球菌灭活菌组和屎肠球菌活菌组仔猪第3周的腹泻率都下降至0,整个哺乳期腹泻率分别下降77.44%(P=0.078)和92.03%(P0.05),两个益生菌组间差异不显著(P0.05);屎肠球菌灭活菌组和屎肠球菌活菌组的21日龄仔猪空肠麦芽糖酶活性分别增加9.67倍(P0.05)和11.29倍(P=0.01),活菌还显著提高脂肪酶含量1.09倍(P0.05),但两个益生菌组间差异不显著(P0.05);灭活菌不影响仔猪肝脏指数和脾脏指数,活菌也不影响肝脏指数及7日龄仔猪脾脏指数,但显著降低21日龄仔猪脾脏指数(P0.05)。说明热灭活益生屎肠球菌对哺乳期仔猪的生长、腹泻率、小肠消化酶活性以及肝脏和脾脏指数都没有负面影响,而且在很大程度上与活菌的作用相似,具有替代活菌的潜力。     

粪肠球菌生长曲线的测定

用分光光度仪和活菌计数两种不同的方法对粪肠球菌生长曲线进行测定,结果表明,在细菌对数生长期以前,两种方法所得结果基本一致,但在衰亡期,两种方法具有差异,活菌记数法更能如实反映细菌的生长情况.     

粪肠球菌生长曲线的测定及其对小鼠脑组织的影响

为测定致羔羊脑炎粪肠球菌（Enterococcus faecalis）的生长曲线,寻求一种快速而准确的方法测定不同生长时期粪肠球菌数量,并客观评价其毒性强弱及其对小鼠脑组织的影响,试验采用平板菌落计数法和OD-Monitor振荡比浊法（D_λ值法）测定粪肠球菌的生长曲线,探究该菌在合适时间段内的吸光值（D_{600 nm}）与平板菌落计数法测定的活菌数（CFU）的关系。用粪肠球菌感染小鼠,观察记录小鼠的死亡情况,最后采用Karber法计算粪肠球菌感染小鼠的半数致死量（LD₅₀）。用LD₅₀的剂量感染小鼠,及时采集死亡小鼠脑组织,未死亡的小鼠72 h后全部剖杀取脑组织,一部分做涂片染色,制作病理切片,观察病理变化;一部分进行培养,用于PCR方法进行细菌的回收鉴定。结果显示,用两种方法测定此株粪肠球菌的生长曲线基本一致,在2~8 h生长迅速,为对数生长期,8~14 h生长缓慢,为稳定期,14 h之后死亡数增加,进入衰亡期;对12 h粪肠球菌D_{600 nm}与CFU的关系进行探讨,成功建立回归方程：y=20.769x-1.3422,R²=0.997;其感染小鼠的LD₅₀为7.77×10¹¹个活菌。以此剂量感染小鼠,脑组织涂片染色和培养染色,均能看到革兰氏阳性球菌;PCR结果显示,均出现了大小为112 bp的条带。对脑组织进行病理学观察发现该菌可导致脑组织充血、出血、形成微血栓,脑膜充血。通过生长曲线和其D_{600 nm}与CFU关系的建立,可实时监测粪肠球菌数量,为后期更深入研究粪肠球菌穿越血脑屏障的机制奠定重要的理论基础。     

粪肠球菌生长曲线的测定及其对小鼠脑组织的影响

为测定致羔羊脑炎粪肠球菌(Enterococcus faecalis)的生长曲线,寻求一种快速而准确的方法测定不同生长时期粪肠球菌数量,并客观评价其毒性强弱及其对小鼠脑组织的影响,试验采用平板菌落计数法和OD-Monitor振荡比浊法(Dλ值法)测定粪肠球菌的生长曲线,探究该菌在合适时间段内的吸光值(D600nm)与平板菌落计数法测定的活菌数(CFU)的关系。用粪肠球菌感染小鼠,观察记录小鼠的死亡情况,最后采用Karber法计算粪肠球菌感染小鼠的半数致死量(LD50)。用LD50的剂量感染小鼠,及时采集死亡小鼠脑组织,未死亡的小鼠72h后全部剖杀取脑组织,一部分做涂片染色,制作病理切片,观察病理变化;一部分进行培养,用于PCR方法进行细菌的回收鉴定。结果显示,用两种方法测定此株粪肠球菌的生长曲线基本一致,在2~8h生长迅速,为对数生长期,8~14h生长缓慢,为稳定期,14h之后死亡数增加,进入衰亡期;对12h粪肠球菌D600nm与CFU的关系进行探讨,成功建立回归方程:y=20.769x-1.3422,R2=0.997;其感染小鼠的LD50为7.77×1011个活菌。以此剂量感染小鼠,脑组织涂片染色和培养染色,均能看到革兰氏阳性球菌;PCR结果显示,均出现了大小为112bp的条带。对脑组织进行病理学观察发现该菌可导致脑组织充血、出血、形成微血栓,脑膜充血。通过生长曲线和其D600nm与CFU关系的建立,可实时监测粪肠球菌数量,为后期更深入研究粪肠球菌穿越血脑屏障的机制奠定重要的理论基础。     

植物乳杆菌亚致死处理对发酵液活菌数影响

该研究以植物乳杆菌BLCC2-0015为研究对象,发酵对数前期处以不同温度、pH、2%不同盐离子亚致死处理,以期提高发酵液活菌数。结果表明,在对数期20℃及pH6.0处理1h发酵液活菌数分别可以达到3.23、3.95×109cfu/mL,与对照组相比活菌数分别可以提高14.73%、31.67%,且差异显著(P0.05)。2%的NaCl、CaCl2、MgCl2亚致死处理不能提高发酵液活菌数。植物乳杆菌BLCC2-0015发酵对数期进行温度、酸处理亚致死处理可以提高发酵液活菌数,以期提高该类产品的货架期。     

蛋白胨对仔猪副伤寒疫苗培养菌数和冻干后活菌率的影响

细菌生长的好坏与培养基的质量密切相关。在仔猪副伤寒疫苗的生产中，使用不同的蛋白胨，培养菌液的菌数和疫苗冻干后活菌率差异明显。从结果看，以月示蛋白胨效果最好。     

检测沙门菌活菌数的MTT方法建立

本研究旨在探讨MTT法用于沙门菌(Salmonella)活菌计数的可行性及操作的最佳试验条件。通过改变波长、反应时间、试剂剂量等,确定MTT法测沙门菌活菌数的最佳试验条件,同时采用Pearson相关模型进行双变量的相关性分析。结果显示MTT检测沙门菌活菌数与平板计数法的测量结果是一致的,并且不同生长阶段的沙门菌对检测结果没有影响。研究表明MTT法用于检测沙门菌活菌数是可行的。     

甘露寡糖对乳酸粪肠球菌和沙门菌细胞凝集的影响研究

探讨甘露寡糖对乳酸粪肠球菌和沙门菌细胞体外凝集的影响。将乳酸粪肠球菌和沙门菌分别在添加1%甘露寡糖和未添加正常的培养液中进行培养,观察细胞形态;在乳酸粪肠球菌和沙门菌脑心浸液肉汤中分别添加0、0.2%、0.5%、0.9%和1.7%的甘露寡糖,在35、37和39℃培养24 h,测定0、3、6、12和24 h时培养液的OD_(600)值。培养基中添加1%的甘露寡糖对乳酸粪肠球菌和沙门菌均产生凝集作用;对于乳酸粪肠球菌,与对照组相比,35℃时,添加量为1.7%的甘露寡糖在3~24 h时对乳酸粪肠球菌的细胞凝集效果显著(P0.05);37℃培养条件下,添加量为0.5%~1.7%的甘露寡糖在培养24 h时对乳酸粪肠球菌的细胞凝集效果显著(P0.05),且凝集效应具有剂量依赖性和时间依赖性,作用时间小于24 h或甘露寡糖添加量小于0.5%不能使乳酸粪肠球菌产生凝集效应;39℃条件下,添加量为0.2%~1.7%的甘露寡糖时,在3~24 h对乳酸粪肠球菌的细胞凝集效果显著(P0.05);对于沙门菌,35℃条件下,添加量为0.9%的甘露寡糖组与对照组相比在6~12 h对沙门菌的凝集效果差异显著(P0.05),添加量为1.7%的甘露寡糖组在12 h时与对照组相比对沙门菌的凝集效果差异显著(P0.05);37℃条件下,添加量为1.7%的甘露寡糖组在3~12 h与对照组相比对沙门菌的凝集效果差异显著(P0.05);39℃条件下,添加量为1.7%的甘露寡糖组与对照组相比在3~9 h对沙门菌的凝集效果差异显著(P0.05),添加量为0.2%~0.9%的甘露寡糖时在12~24 h对乳酸粪肠球菌的细胞凝集效果差异显著(P0.05)。     

活菌培养法测定饲料酵母中活细胞数

活菌培养法测定饲料酵母中活细胞数辽宁省大连市饲料兽药监测站曲韵坤，蒋晖，苗畅海饲料酵母中具有活性的酵母菌，在适宜温度条件下，用特定培养基进行培养，以计数平板中长出的酵母菌落数，计算出每克饲料酵母中的活细胞数。１材料与方法１．１试验材料国产饲料酵母；斜...     

屎肠球菌对仔猪肠道健康的影响

屎肠球菌是仔猪生产中常用的益生菌之一。该益生菌不仅能够在仔猪的胃肠道中存活,并维持仔猪肠道菌群平衡,还可以调节仔猪的小肠绒毛发育、养分吸收、免疫功能以及抗衣原体、轮状病毒和鼠伤寒沙门氏菌感染的能力,对仔猪肠道健康有重要影响。本文就上述研究进展进行综述。     

益肠康（酪酸菌活菌制剂）

益肠康是由无锡大江中盛生物科技有限公司、江苏省微生物研究所有限责任公司联合研制开发的益生活菌制剂，2008年11月19日被农业部批准为国家二类新兽药，证书编号为（2008）新兽药证字28号。     

MTT-分光光度法快速测定地衣芽孢杆菌发酵液活菌数的研究

试验以地衣芽孢杆菌发酵液为研究对象,旨在建立1种快速、稳定、灵敏度高的活菌计数方法,并探讨MTT-分光光度法用于活菌计数的可行性。试验筛选显色反应终止液最适浓度、最适反应波长、最适反应时间、最适菌液浓度等,考察不同培养基、培养液保存后和其他干扰物对测定结果的影响,并对比MTT-分光光度法与稀释平板法测定发酵菌液中地衣芽孢杆菌活菌数结果的关系。结果显示,在最大吸收波长550 nm处测定OD值,反应时间为1 h,反应终止液为1.0 mol/L盐酸,MTT添加量为0.2 mL,新鲜的地衣芽孢杆菌发酵液OD值>0.04。菌液浓度为10⁸～10⁹ CFU/m L时,OD_{550 nm}值与稀释平板法得到的活菌数具有很好的线性对应关系,当菌液浓度<10⁸ CFU/mL时对应关系不再成立。研究表明,活菌量>10⁸ CFU/mL时,MTT-分光光度法不受地衣芽孢杆菌生长阶段的影响,可准确计量地衣芽孢杆菌发酵液活菌量相对应的吸光度,从而快速、准确地检测活菌数。     

粪肠球菌对仔猪后期生长性能的影响

在昆明市石林县维则乡云南神农育种公司对90头PIC仔猪进行试验,以研究粪肠球菌对仔猪后期生长性能的影响。选择42日龄的仔猪,按体重相近原则随机分栏成为两个试验组和1个对照组(基础日粮):试验组I和试验组II分别在基础日粮中添加0.050kg/t和0.075kg/t的粪肠球菌,每个处理2个重复(♂和♀各1栏),每个重复14头猪,试验期为9d。结果表明,对照组和试验组的平均日采食量分别为0.611kg、0.488kg和0.556kg;平均日增重分别为0.334kg、0.317kg和0.341kg;平均料肉比分别为1.83、1.54和1.63。对照组的平均日采食量和平均料肉比均比两个试验组高;对照组的平均日增重高于试验组Ⅰ而少于试验组Ⅱ。     

共培养沙门菌对粪肠球菌N41株生长特性及毒力基因的影响

为探讨共培养条件下沙门菌对粪肠球菌N41分离株生长特性及其不同生长时期26种毒力基因转录的影响,将N41菌株、沙门菌菌株单独/混合培养后,分别进行菌落计数并绘制生长曲线,观察其生长状况及影响,同时提取其对数中期、对数后期、稳定前期和稳定期的总RNA,SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法分析N41菌株26种毒力基因的转录情况。结果显示,共培养后沙门菌和N41生长均受到影响,其中,在N41菌体浓度降低约3.9倍,而沙门菌菌体浓度降低约110倍。在N41菌株26种毒力基因中,沙门菌促进了ebpA、ebpC、rnjB、ace、ebpR、psr等12种毒力基因在4个不同生长时期的转录,但同时也降低了毒力基因SlyA和sprE在4个生长期中转录水平;另外,除了CylL-S、CylL-L、efaA和AS在4个生长时期变化不明显外,其余的大部分毒力基因都在对数后期转录水平有明显上升,但在其他生长时期则表现不同。这说明,两菌共培养后,N41菌株明显抑制了沙门菌的生长,同时沙门菌也整体促进了N41菌株毒力基因的转录。本试验为研究细菌间相互作用机制以及肠球菌的致病机制奠定基础。     

屎肠球菌发酵工艺优化及菌粉的制备

为应用高活性的屎肠球菌菌粉制作畜禽饲料添加剂,试验对屎肠球菌的发酵培养基、发酵时间、喷粉载体等发酵和制粉条件进行优化。结果表明：最优发酵培养基选用32.50 g/L低蛋白乳清粉、30.00 g/L葡萄糖、2.00 g/L酵母提取物、5.00 g/L蛋白胨、0.15 g/L硫酸镁、0.03 g/L硫酸锰、2.00 g/L磷酸氢二钾,发酵时间为15 h,喷粉载体选用13%扶态粉、2%白炭黑作为保护剂制备菌粉。该方法制备的屎肠球菌菌粉中活菌数约3.46×10⁸CFU/g,可添加于畜禽饲料。     

不同发酵温度对液体发酵饲料营养成分、挥发性脂肪酸和活菌数的影响

文章旨在研究不同发酵温度对液体发酵饲料营养成分、挥发性脂肪酸和活菌数的影响。试验分别设定20、25、30℃三个发酵温度,每个发酵温度设置6个重复,厌氧发酵24?h。试验结果表明,随着发酵温度的升高,饲料中粗蛋白质含量显著提高（P <0.05）,粗纤维含量无显著变化（P> 0.05）,但总能显著降低（P <0.05）;25和30℃发酵时,液体饲料中乳酸含量显著高于20℃组（P <0.05）,但25和30℃之间差异不显著（P> 0.05）;而挥发性脂肪酸方面,25和30℃发酵时,饲料中乙酸和丙酸含量显著高于20℃发酵组（P <0.05）,而25和30℃之间的丙酸含量差异不显著（P> 0.05）,乙酸含量25℃发酵组高于30℃发酵组（P <0.05）。丁酸含量则随发酵温度升高而显著降低（P <0.05）;液体饲料中的乳酸菌和酵母菌活菌数显著升高（P <0.05）,其中25和30℃发酵组酵母菌活菌数无显著差异（P> 0.05）;液体饲料中均未检出沙门氏菌和大肠杆菌。     

微生态制剂与饲料混合制粒对微生态活菌数的影响试验报告

为了验证微生态制剂与饲料混合制粒后瞬时高温是否对微生态制剂中活菌数产生影响,特设计本试验。1材料与方法1.1材料