同种异体组织工程软骨修复气管壁缺损的实验研究

目的　探讨以同种异体的软骨细胞作为种子细胞 ,可吸收材料PLA作为支架 ,应用组织工程学方法形成的新生软骨组织修复动物气管壁缺损的可行性。方法　将出生 3～ 5d的新西兰大白兔乳兔四肢关节软骨组织酶解 ,分离出软骨细胞 ,接种到PLA可吸收支架上 ,移植到成年新西兰大白兔的背部皮下 ,7周后形成新生软骨组织修复实验动物颈部气管前壁约 10mm× 10mm大小的缺损 ,术后观察 8周 ,组织标本行大体观察和组织学检查。结果　软骨细胞 PLA复合物在同种异体的动物体内形成新生组织 ,经组织学染色 ,证实为软骨组织。新生组织工程软骨修复动物气管壁缺损后 8周 ,气管管腔通畅 ,无狭窄 ;组织学染色证实修复处软骨组织生长良好 ,无坏死 吸收。结论　同种异体幼年动物的软骨细胞 PLA复合物在有免疫力的动物体内形成的组织工程软骨可以作为气管壁缺损的修复材料。     

同种异体组织工程软骨修复兔气管软骨缺损实验研究

已有采用组织工程软骨修复裸鼠气管软骨缺损及同种异体组织工程软骨修复甲状软骨缺损等相关研究报道[1,2 ] ,在此基础上 ,我们采用同种异体组织工程软骨修复兔气管软骨缺损。一、材料和方法1 采用短期固定培养法构建兔软骨细胞 聚羟基乙酸(ｐｏｌｙｇｌｙｃｏｌｉｃａｃｉｄ ,ＰＧＡ)复合体[3 ] (图 1,2 ) ,复合培养 3周后行同种异体移植。2 软骨细胞 ＰＧＡ复合体同种异体皮下移植 :0 5～ 1ｋｇ新西兰兔 12只 ,每只兔背部皮下移植 3ｍｍ× 3ｍｍ的软骨细胞 ＰＧＡ复合体各 2块 ,移植术后 1、2、3和 4个月分批取出标本 ,每批 3只 (6块标…     

转化生长因子β1和同种异体软骨细胞及高孔隙率聚乳酸复合物修复兔耳廓软骨缺损

目的 观察加入转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta1，TGF-β1)的同种异体软骨细胞／高孔隙率聚乳酸(poly-DL-lactide，PDLLA)支架复合物修复兔耳廓软骨缺损的效果。方法 18只大白兔随机分为同种异体软骨细胞／PDLLA复合物加TGF-β1组(复合物组)、同种异体软骨细胞／PDLLA复合物组(复合物对照组)和不用任何修复材料的空白对照组，每组6只。分别于4、12、18周取材，行HE和甲苯胺蓝染色，观察各组兔耳廓软骨缺损修复情况。结果 术后18周，TGF-β1复合物组修复软骨缺损的效果无论从大体标本观察或是病理组织学检查都比复合物对照组的修复效果好，空白对照组为纤维组织修复。结论 同种异体软骨细胞／PDLLA复合物移植可形成组织工程化软骨修复兔耳廓软骨缺损，TGF-β1可提高同种异体软骨细胞／PDLLA复合物移植修复兔耳廓软骨缺损的质量。     

同种异体组织工程化软骨组织形成的初步研究

目的：探讨以同种异体的软骨细胞作为种子细胞、以聚乳酸(PLA)作为支架，应用组织工程学方法在体内形成新生软骨组织的可能性，为组织工程软骨修复喉、气管软骨缺损提供实验依据。方法：将出生3～5d的新西兰大白兔乳兔四肢关节软骨组织酶解，分离出软骨细胞，体外扩增后，将其接种到PLA三维可吸收支架上；将软骨细胞-PLA复合物移植到成年新西兰大白兔的背部皮下，经过7周的体内培养，将组织标本行大体观察和组织学检查。结果：软骨细胞-PLA复合物在同种异体的动物体内有新生组织形成，经组织学染色，证实为软骨组织；随着植入时间的延长，软骨基质的分泌增加，炎性细胞的浸润逐渐减轻。结论：同种异体的软骨细胞-PLA复合物在有免疫力的动物体内能够形成新生软骨组织，这一方法为喉、气管软骨缺损的修复提供了一条新的途径。     

同种异体软骨修复甲状软骨缺损的实验研究

OBJECTIVE: To study the effect of laryngeal cartilage defect repair with differently preserved allogeneic cartilage grafts. METHODS: 16 New Zealand white rabbits were used and divided into two groups. A 6 mm x 3 mm x 1 mm whole thickness cartilage defect was made in each side of the thyroid cartilage of each rabbit. In group one, the tissue-cultured cartilage grafts, preserved in RPMI-1640 medium for 30 days, were implanted in the left defects and the 4% formaldehyde preserved cartilage grafts for 30 days were implanted in the right defects. Fresh autogenous and allogeneic grafts were seprately transplanted into the right and left thyroid cartilage defects of the other group. Thyroid cartilages were taken out at 7, 30, 180 and 360 days after implantation. Samples were observed by macroscopy and prepared for hematoxylin and eosin (H&E) staining and immunohistochemical examination. RESULTS: No marked changes in form and volume were found in the fresh allografts and RPMI-1640 cultured cartilage grafts. The same as the autogenous cartilages, the defects of thyroid cartilage were successfully repaired by the fresh allografts and RPMI-1640 cultured cartilages. Whereas 4% formaldehyde preserved cartilage grafts were completely absorbed and replaced by cicatricial tissues in the thyroid cartilage defects. Histological observation showed that severe inflammatory cellular infiltration in the formaldehyde preserved cartilages at 7 and 30 days. The cartilage matrixes were resorpted and the chondrocytes showed degenerative change. Finally they were replaced by fibrous connective tissue at 360 days. In the RPMI-1640 cultured and fresh allogeneic cartilages only a little inflammatory cellular infiltration was observed and the cartilage matrixes were almost normal from 7 to 360 days. CONCLUSION: It is clinically feasible to use allogeneic grafts stored in RPMI-1640 medium or fresh allogeneic cartilage grafts for repairing laryngeal cartilage defects.     

组织工程与喉气管软骨缺损的修复和重建

因疾病或外伤引起的喉气管软骨缺损的理想修复与重建仍是耳鼻咽喉科医师面临的一大难题。组织工程的发展为寻找一种理想的喉气管软骨缺损修复材料带来了希望。本文就组织工程的基本方法、喉报导管软央缺损修复与重建材料和方法的演变及组织工程在喉气管缺损与重建中的研究现状作一概述，以期对喉气管软骨组织工程的研究提供一些有益资料。     

同种异体软骨修复甲状软骨缺损的实验研究

目的　观察用不同类型的同种异体软骨修复喉软骨缺损的效果。方法　取新西兰白兔16只 ,平均分成两组。在每只兔的双侧甲状软骨切除 6mm× 3mm× 1mm全层软骨。一组动物将RPMI 16 4 0液和甲醛保存 30d的同种异体甲状软骨 (大小为 5mm× 2mm× 1mm)分别植入甲状软骨两侧缺损处 ,另一组动物于甲状软骨两侧缺损处分别植入新鲜的自体和异体软骨。分别于术后 7、30、180及 36 0d时处死取材 ,用大体观察、HE染色及免疫组织化学方法观察移植修复效果。结果经连续 1年观察 ,RPMI 16 4 0液保存的及新鲜的同种异体软骨与自体软骨移植排斥反应轻 ,均能较好修复甲状软骨缺损 ,而甲醛保存软骨早期有明显炎性细胞浸润 ,移植 180d至 36 0d时软骨基质明显吸收 ,软骨细胞退变 ,甲状软骨缺损区为纤维结缔组织修复。结论　RPMI 16 4 0液保存的及新鲜的同种异体软骨都具有活性 ,和自体软骨一样是软骨缺损修复的良好材料 ,可应用于临床     

内衬上皮的管状组织工程软骨构建的实验研究

目的研究以聚丙交酯-乙交酯共聚物[poly（DL-lactide-co-glycolide）,PLGA]包埋甲壳胺无纺布为细胞支架,在有免疫力的动物体内构建内衬上皮的管状组织工程软骨的可行性,为喉、气管缺损的修复探索新方法。方法取1月龄兔耳廓软骨,收集体外培养第3～4代的软骨细胞,接种于经多聚赖氨酸处理的以PLGA包埋甲壳胺无纺布的片状细胞支架材料上,体外培养7～10d后包裹于兔腹部缝制的皮管上并深埋于体内,分别于6、12、18周取材行大体和组织学观察以及HE染色、甲苯胺蓝染色和Masson＇s三色染色。结果同种异体软骨细胞/PLGA包埋甲壳胺无纺布的细胞支架复合物体外培养1周时有基质产生;植入体内6周后,复合物中有基质分泌,软骨细胞不成熟;12周时,软骨细胞接近成熟并形成凹陷,内衬上皮的管状组织工程软骨形成;18周时,新生软骨基本接近正常软骨。结论以PLGA包埋甲壳胺无纺布为细胞支架,同种异体软骨细胞与细胞支架所形成的复合物在有免疫力的动物体内可构建出内衬上皮的管状组织工程软骨。     

用组织培养的同种异体软骨进行喉重建的实验研究

目的　观察用组织培养法保存的兔活性甲状软骨进行同种异体喉软骨移植重建的效果。方法　先取大小约 5mm× 2mm× 1mm兔甲状软骨块 ,分别用RPMI - 1640培养液及 4 %甲醛保存 2 0d ,然后将两种方法保存的软骨块同时移植于同一兔甲状软骨板中线两侧缺损处 ,培养软骨置于左侧 ,甲醛保存软骨置于右侧 ,分别于 7d、14d、30d、60d、90d、12 0d、180d、2 0 0d及 30 0d时取标本观察移植重建效果。结果　用组织培养软骨进行喉移植后与受体组织相容性好 ,移植排斥反应小 ,喉重建修复效果明显优于甲醛保存软骨。结论　用组织培养法保存的活性软骨进行同种异体喉软骨移植其排斥反应小 ,喉重建修复效果满意。     

耳鼻咽喉科领域的软骨组织工程

耳、鼻、喉和气管的软骨组织工程研究已有较大进展，已分别在裸鼠和具有免疫力动物体内形成了与耳鼻咽喉有关的组织工程化软骨组织，并有初步应用的实验研究报道。随着胚胎干细胞、骨髓基质干细胞、同种异体软骨细胞和智能生物材料的研发和应用，耳鼻咽喉科软骨组织工程有望获得突破性进展。本文综述了该领域的软骨组织工程研究现状和发展趋势。     

喉、气管软骨修复重建对组织工程学的要求

软骨组织工程是组织工程学最具活力的研究领域之一，虽然喉、气管软骨组织工程研究起步较晚．但已呈现出发展和应用的良好前景。本文从今后临床需要出发，就喉、气管软骨修复重建对组织工程学的要求提出了一些设想，并对其研究现状做简要介绍。     

同种异体气管移植

气管移植目前仍处于动物实验阶段,影响气管移植应用于临床的主要因素在于移植气管的再血管化,有效的免疫抑制及供者气管的保存。本文就近年来如何解决这些问题的相关研究进行综述。     

同种异体气管移植

气管移植目前仍处于动物实验阶段,影响气管移植应用于临床的主要因素在于移植气管的再血管化,有效的免疫抑制及供者气管的保存。本文就近年来如何解决这些问题的相关研究进行综述。     

软骨组织工程在喉、气管修复重建中的应用

软骨组织工程基础研究巳取得重要进展,但在喉、气管修复重建实际应用中尚未呈现其应有的优势.目前真正意义上的组织工程技术修复重建喉、气管支架功能尚未实现.本文就软骨组织工程基础研究及其在喉、气管修复重建应用中的瓶颈问题与可能突破点做一概述,展望其应用前景.     

软骨组织工程管状泡沫支架的研制

目的研制管状泡沫支架,为气管软骨组织工程提供合适的支架.方法以PDLLA(Mw=4.23×104)为原材料,氯化钠颗粒(直径50～200μm)为致孔剂,通过"溶剂浇铸-颗粒滤沥"法制备一定孔径,不同孔隙率的管状泡沫支架,经过大体及扫描电镜观察、孔隙参数的测定及分析,选择软骨组织工程合适的支架.结果支架外观为白色、管柱状泡沫,内径8mm,外径12mm.各型支架具有不同的特点.孔径80～250μm、孔隙率90.6%的支架具有一定的强度及韧性,适于气管软骨组织工程.结论通过"溶剂浇铸-颗粒滤沥"法制备的管状泡沫支架是气管软骨组织工程合适的支架.     

软骨组织工程进展

组织工程软骨的研究目前仍处于实验室阶段，本文就组织工程软骨的概念，生物支架材料，体外和体内培养方法及组织工程软骨性能等方面作一简述。     

聚羟基乙酸负载软骨细胞修复同种异体甲状软骨缺损

目的 探讨聚羟基乙酸(polyglycolic acid，PGA)负载软骨细胞在有免疫力动物修复同种异体甲状软骨缺损的可行性。方法 酶消化法获取3天龄新西兰乳兔肋软骨和关节软骨细胞，采用组织工程技术制备软骨细胞-PGA复合物，体外共同培养1周后用于修复同种异体成年新西兰白兔甲状软骨缺损(实验组7只)。设单纯PGA材料修复组(对照A组4只)和单纯软骨细胞修复组(对照B组4只)作为对照实验。分别于术后不同时间取材，对甲状软骨缺损的修复效果进行大体和组织学评价。结果 体外培养阶段可见黏附于PGA纤维表面的细胞分泌出丰富的软骨基质，呈蜘蛛网状分布于PGA纤维之间。术后4周大体观察：实验组修复区呈淡黄色，与正常软骨界限分明；组织学检查：修复区内有软骨细胞生成和基质分泌，但与正常软骨间存在界面无细胞区，未见明显炎细胞浸润。8周：实验组修复区色乳白，与正常软骨仍有界限；镜下见修复区软骨细胞较成熟，软骨基质含量丰富。12周：实验组修复区呈瓷白色，界面区软骨细胞不明显，但修复区软骨细胞数量、形态和基质与正常软骨相似。各时间点对照组大体观察修复区均呈不同程度的凹陷，暗红色，部分软组织充填其中，质软；组织学及特殊染色检查未发现软骨样结构及其分泌的基质成分。新生软骨内未见血管生长。结论PGA负载软骨细胞能修复具有正常免疫功能同种异体兔甲状软骨缺损，但新生软骨与正常软骨间存在无细胞区界面，无明显免疫排斥。     

同种异体工程化软骨的构建和修复甲状软骨缺损的实验研究

目的探讨同种异体预定形态组织工程化软骨在有免疫功能动物体内构建的可行性及其对甲状软骨缺损的修复能力.方法利用组织工程技术制备同种异体片状和"C”型半管状工程化软骨;将4周形成的片状工程化软骨用于修复12只新西兰大白兔甲状软骨大片缺损;一定时间取材,分别对预定形态工程化软骨的构建情况及其修复效果进行大体和组织学评价.结果①构建4周形成的预定形态工程化软骨呈乳白色,有弹性和支撑力,8周时软骨呈瓷白色,镜下观察显示软骨组织特征;②甲状软骨缺损修复术后4、8、12周观察,修复区愈合良好,组织学检查修复区与正常软骨间的界面区可见软骨细胞生长及软骨基质生成,无免疫排斥迹象.结论在有免疫功能的动物体内可形成同种异体预定形态组织工程化软骨,获取的工程化软骨对甲状软骨缺损有良好的修复效果,无明显免疫排斥反应.