胆汁内外引流术对梗阻性黄疸大鼠肝脏诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的 探讨胆汁引流方法对梗阻性黄疸大鼠肝脏诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.方法 将42只成年雄性SD大鼠随机分为四组,采用我们既往建立的二次手术方法分别建立梗阻性黄疸(OJ,n=12)、胆汁内引流术(ID,n=10)、胆汁外引流术(ED,n=10)及假手术(SH,n=10)模型.于第二次术后7 天留取肝脏标本.通过SABC免疫组化方法测定肝脏组织iNOS的表达情况.结果 假手术组大鼠肝组织几乎无iNOS表达.梗阻性黄疸时,大鼠肝组织iNOS表达增强,阳性面积增加(30.539±6.255),平均光密度升高(0.296±0.055).通过胆汁内引流术解除黄疸后,肝脏iNOS表达明显受到抑制,阳性表达面积减少(16.571±2.044)(P=0.017),平均光密度下降(0.204±0.029)(P<0.01).但通过胆汁外引流术后,肝组织iNOS表达阳性面积(38.186±7.495)及平均光密度(0.399±0.086)非但不减少,反而显著增加(P<0.01,P＝0.004).结论 梗阻性黄疸时,大鼠肝脏iNOS表达增强,胆汁内引流术可明显抑制肝脏iNOS表达,而胆汁外引流术却使其表达增强,提示在抑制诱导型一氧化氮合酶的表达方面胆汁内引流术优于外引流术.     

胆汁内外引流术对梗阻性黄疸大鼠肺肿瘤坏死因子α、中性粒细胞弹性蛋白酶的影响

目的研究胆汁内外引流方法对梗阻性黄疸大鼠肺肿瘤坏死因子α(TNF-α)、中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)水平的影响。方法将64只成年SD雄性大鼠随机分为4组,分别建立梗阻性黄疸(OJ)、胆汁内引流术(ID)、胆汁外引流术(ED)及假手术(SH)4组模型。于2次术后第14天留取肺组织匀浆液标本。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测10%肺匀浆液TNF-α水平,生化法检测10%肺匀浆液NE水平。结果成功建立了大鼠梗阻性黄疸及内外引流术模型。梗阻性黄疸时大鼠肺TNF-α、NE水平较假手术对照组明显升高(100.893 pg/mL±21.271 pg/mL vs 64.091 pg/mL±13.034 pg/mL,P<0.01;50.396μg/mL±17.388μg/mL vs 39.718μg/mL±9.625μg/mL,P<0.05)。通过胆汁内引流术解除黄疸后,大鼠肺TNF-α浓度(75.141 pg/mL±15.849 pg/mL)与梗阻性黄疸组相比下降明显(P<0.01);而通过胆汁外引流术解除黄疸后,大鼠肺TNF-α浓度仍较高(112.129 pg/mL±36.886 pg/mL),与梗阻性黄疸组相比无差异(P>0.05)。行胆汁内、外引流术后,大鼠肺NE水平均降低(39.390μg/mL±12.410μg/mL、44.790μg/mL±16.681μg/mL),但与梗阻性黄疸组相比内引流明显(P<0.05)、外引流无差异(P>0.05),且内引流恢复至正常水平,与假手术对照组相比无差异(P>0.05)。结论梗阻性黄疸可导致肺组织炎症细胞因子升高,胆汁内引流术可明显改善梗阻性黄疸时肺组织炎症细胞因子水平、甚至接近正常,而胆汁外引流术没有改善肺炎症细胞因子水平,提示术前利用胆汁内引流术解除梗阻性黄疸缓解肺部炎症反应优于外引流术。     

胆汁内外引流术对梗阻性黄疸大鼠肝脏Kupffer细胞CD14表达的影响

目的探讨胆汁内外引流术对梗阻性黄疸大鼠肝脏Kupffer细胞CD14表达的影响。方法将60只成年SD雄性大鼠随机分为4组,梗阻性黄疸组(OJ组)、胆汁内引流术组(ID组)、胆汁外引流术组(ED组)及假手术组(SH组)并分别建立模型;采用免疫组织化学染色及半定量分析的方法测定各组大鼠肝脏Kupffer细胞CD14的表达情况。结果 OJ组大鼠肝脏Kupffer细胞CD14表达明显强于SH组(P0.01),ID组与OJ组比较表达明显降低(P0.01),ED组与OJ组比较无显著性差异(P=0.5907)。结论梗阻性黄疸时胆汁内引流术在改善Kupffer细胞CD14表达方面优于胆汁外引流术,提示胆汁内引流术优于外引流术的机制可能与肝脏Kupffer细胞CD14表达过程有关。     

肿瘤坏死因子α和血管紧张素Ⅱ干预内皮细胞后细胞凋亡和诱导型一氧化氮合酶的表达

目的探讨肿瘤坏死因子α和血管紧张素Ⅱ在导致内皮细胞凋亡过程中诱导型一氧化氮合酶的表达变化及核因子κB的作用。方法核因子κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐预处理和未预处理原代培养的脐静脉内皮细胞,用肿瘤坏死因子α和血管紧张素Ⅱ分别进行干预,逆转录聚合酶链反应检测诱导型一氧化氮合酶mR-NA的表达,免疫印迹法检测诱导型一氧化氮合酶和IκBα的蛋白表达,电泳迁移率分析检测核因子κB的活性,TUNEL法检测细胞凋亡。结果在10μg/L肿瘤坏死因子α和1μmol/L血管紧张素Ⅱ的干预下,核因子κB的活性显著增加(P<0.05),诱导型一氧化氮合酶mRNA和蛋白的表达与对照组比较显著增加(P<0.05),细胞凋亡发生显著增加(P<0.05);吡咯烷二硫代氨基甲酸盐抑制肿瘤坏死因子α和血管紧张素Ⅱ引起的细胞凋亡和诱导型一氧化氮合酶表达的增加。结论在肿瘤坏死因子α和血管紧张素Ⅱ作用于内皮细胞时,通过降解IκBα引起诱导型一氧化氮合酶的核转位,后者可引起诱导型一氧化氮合酶表达上调和细胞凋亡。     

外科黄疸患者血清肿瘤坏死因子生物学活性测定与分析

本文的主要目的是测定非感染性梗阻黄疸患者与感染性梗阻性黄疸患者血清TNF生物学活性,并分析患者肝功指标与TNF活性间的可能关系。本研究共分为对照组、非感染性梗阻性黄疸组及感染性梗阻性黄疸组。结果提示:1.梗阻性黄疸患者血清TNF生物学活性升高,而感染可能是其升高的主要原因;2.TNF生物学活性升高,可能是引起梗阻性黄疸患者肝脏功能恶化的一个重要因素。     

肿瘤坏死因子-α、诱导性一氧化氮合酶在扑热息痛肝损害中的表达

目的:探讨炎症反应在扑热息痛(acetaminoph-en,AAP)肝损害中的作用.方法:应用AAP建立SD大鼠肝损害模型;分别于给药后3、6、12、24h处死大鼠,AAP组和对照组分别测定ALT水平,HE染色观察肝脏病理变化,放射免役分析法测定血清TNF-α水平,免疫组织化学和Westernblot方法检测肝组织中TNF-α、iNOS蛋白的表达.结果:AAP组和对照组相比:血清ALT(nKat/L)进行性升高(3、6、12、24h的值分别为:1166.90±151.03vs586.78±89.35,2153.84±254.55vs573.45±75.18,4220.84±928.52vs750.15±81.68,13202.64±1392.78vs780.16±161.37,均P<0.01);肝脏病理损伤进行性加剧,24h达高峰;给药后24h血清TNF-α(g/L)水平显著升高(5.69±0.46vs2.64±0.27,P<0.01),且与血清ALT水平呈显著的正相关(r=0.773,P<0.01);免疫组织化学方法测定肝组织TNF-α、iNOS表达明显增强,分别于6、12h达高峰;Westernblot方法检测肝组织TNF-α、iNOS蛋白的表达显著高于对照组(P<0.01),分别于3、6h达高峰,24h时仍高于正常水平.结论:炎症反应在AAP肝损伤发生、发展的过程中发挥着关键的作用.     

肿瘤坏死因子-α对内皮祖细胞功能及其一氧化氮合酶含量的影响

目的观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对外周血内皮祖细胞(EPC)功能及一氧化氮合酶含量的影响。方法采用密度梯度离心法从外周血获得单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板上,培养7d后收集贴壁细胞,加入不同浓度TNF-α(分别为0,10,20,50和100mg/L)分别培养0,6,12,24和48h。激光共聚焦显微镜鉴定异硫氰酸荧光黄标记荆豆凝集素Ⅰ和Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白双染色阳性的细胞为正在分化的EPC;将其在倒置荧光显微镜下计数,然后分别采用MTT比色法、改良的Boyden小室、黏附能力测定实验和体外血管生成试剂盒来观察EPC的增殖、迁移、黏附和体外血管形成能力。免疫印迹杂交法(Westernblot)半定量测定诱导型和内皮型一氧化氮合酶(iNOS和eNOS)含量。结果TNF-α降低外周血EPC增殖、迁移、黏附、体外血管形成能力、iNOS和eNOS含量,并且EPC增殖、迁移、黏附、体外血管形成能力、iNOS和eNOS含量随TNF-α浓度与作用时间增加而降低。结论TNF-α降低EPC的增殖、迁移、黏附和体外血管形成能力,还减少EPC中iNOS和eNOS含量。     

梗阻性黄疸大鼠血清IL-6、TNF-α及肝脏Kuppfer细胞CD14表达变化

目的观察梗阻性黄疸（0J）大鼠血清IL-6、TNF-α及肝脏Kuppfer细胞CD14表达变化,探讨黄疸性肝损伤的免疫机制。方法将60只成年雄性sD大鼠随机分为三组各20只,其中黄疸组结扎切断胆管制备OJ模型,假手术组仅行胆管分离而不结扎切断,对照组不行特殊处理。三组均于7d后留取下腔静脉血及肝组织标本,采用EusA法检测血清IL-6、TNF-仪水平,采用免疫组化法检测肝脏CD,。表达。结果与假手术组及对照组比较,黄疸组血清IL-6及TNF-α均显著升高（P均〈0．05）、肝脏Kuppfer细胞CD14表达明显增多（P〈0．01）,前两组比较无显著差异（P〉0．05）。结论OJ大鼠肝脏Kuppfer细胞被激活、CD14表达增强并导致炎症因子血清IL-6及TNF-α大量表达,此可能为0J引起肝损伤及机体免疫功能下降的机制之一。     

心力衰竭病人心肌组织肿瘤坏死因子、诱导型一氧化氮合酶的基因表达与心功能的临床研究

目的了解充血性心力衰竭(CHF)病人心肌组织肿瘤坏死因子-α(THF-α)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的基因表达与心功能的关系.方法通过手术取材,采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术测定31例瓣膜病所致不同程度CHF病人(心力衰竭组)与5例正常人(正常对照组)心肌组织TNF-α和iNOS的mRNA表达.结果心力衰竭组与正常对照比较,心肌细胞TNF-α和iNOS的mRNA表达明显增强,且随心功能恶化和心腔扩大,TNF-α和iNOS的mRNA表达越强.CHF病人中,左心室舒张末内径(LVEDd)≥55mm者与＜55mm者比较,左心室射血分数(LVEF)＜0.45者与≥0.45者相比,心肌组织TNF-α和iNOS的mRNA表达均明显增强,P＜0.05.结论CHF病人心肌组织TNF-α和iNOS的基因表达与疾病严重程度和左心室扩大呈正相关,而与左心室收缩功能呈负相关,提示心脏局部的细胞因子在CHF病人的心室重构和心功能恶化等病理过程中起重要作用.     

一氧化氮、诱导型一氧化氮合酶与腹主动脉瘤

腹主动脉瘤(abdominal aortic aneurysm,AAA)是在动脉粥样硬化的基础上发生的最常见的主动脉扩张性病变,65岁以上人群发生率约9%.20世纪50年代以来出现的主动脉重建手术和90年代出现的腔内隔绝术使AAA的治疗有了很大的进展.但本病的诱发因素以及持续扩张直至破裂的控制因素仍未清楚.广泛的基础和临床研究显示:腹主动脉瘤壁的细胞外基质合成与降解以及中膜平滑肌细胞的增殖与凋亡失衡是其形成和发展的关键之一[1].而近年来的研究显示一氧化氮(Nitric oxide,NO)和诱导型一氧化氮合酶(Inducible NO synthase,iNOS)在多个层面上影响了这二者的平衡,在腹主动脉瘤的发生发展中起了一定的作用.本文就NO,iNOS的分类与功能,NO与细胞因子的相互作用及NO,i-NOS与腹主动脉瘤的临床病理联系作一综述.     

Superoxide and nitric oxide production by Kupffer cells in rats with obstructive jaundice: effect of internal and external drainage

BACKGROUND AND AIMS: The role of Kupffer cells in obstructive jaundice (OJ) has not been fully understood. The aims of the present study were to measure superoxide and nitric oxide (NO) production by Kupffer cells in experimental OJ in rats and to investigate the response to internal and external biliary drainage. METHODS: Eighty male Sprague-Dawley rats were assigned to four groups: sham operation, OJ, and internal and external biliary drainage. Kupffer cells were isolated on day 7 in the sham operation and OJ group, and on day 7 after drainage procedures. Cells were cultured with or without lipopolysaccharide (LPS). Superoxide production was quantified in cultured Kupffer cells at 2 h and 48 h, respectively, after cell isolation using the superoxide dismutase inhibitable ferricytochrome c reduction method. Nitrite production in cell culture supernatants was measured 48 h later using Greiss reagents. RESULTS: Without LPS stimulation, Kupffer cells produced comparable superoxide and nitrite in each group (P > 0.05). With LPS stimulation, Kupffer cells in the OJ group produced significantly higher superoxide anions than the other groups (P = 0.006). Nitrite production was significantly increased in the OJ group and external biliary drainage group compared to rats in the sham operation and internal drainage groups (P < 0.01). CONCLUSIONS: Kupffer cells from rats with OJ produce great amounts of endotoxin-mediated oxidants. Both internal and external biliary drainage can decrease the elevated superoxide production. Internal drainage is superior to external drainage for reversing the distortional capacity of NO production by Kupffer cells.     

奥曲肽对实验性急性坏死性胰腺炎大鼠肿瘤坏死因子α和一氧化氮的作用

目的探讨急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠肿瘤坏死因子α(TNFα)和一氧化氮(NO)含量的变化及奥曲肽的治疗作用。方法30只SD大鼠随机分为三组,即ANP生理盐水处理组(ANP+NS组)、ANP奥曲肽治疗组(ANP+奥曲肽组)和假手术组(SO组)。测定血清TNFα和NO2－/NO3－量的变化,并于光镜及电镜下观察胰、肺组织标本。结果ANP+NS组血清TNFα和NO2－/NO3－分别为623.5±100.4pg/mL和99.9±28.6μmol/L,明显高于ANP+奥曲肽组(143.1±38.2pg/mL和59.2±26.2μmol/L)及假手术组(2.0±2.7pg/mL和39.2±6.2μmol/L),(P＜0.05)。ANP+NS组大鼠的胰、肺严重受损、而ANP+奥曲肽组大鼠的胰、肺受损程度较轻。结论奥曲肽对ANP大鼠的胰、肺损伤具有保护作用,其机制可能与抑制循环中TNFα和NO水平的增高有关。     

库普弗细胞功能状态对肠缺血再灌注小鼠肝细胞凋亡和血清肿瘤坏死因子的影响

目的 研究库普弗细胞功能状态对肠缺血再灌注小鼠肝细胞凋亡和血清肿瘤坏死因子的影响。方法 封闭和不封闭BALB／c小鼠库普弗细胞(从尾静脉注射GdCl3或生理盐水27ml／kg体重)48h后，夹闭肠系膜上动脉1h后松夹，复制肠缺血再灌注模型。运用流式细胞术和酶联免疫法，分别检测缺血前、缺血60min、再灌注30min、60min肝细胞凋亡情况和血清肿瘤坏死因子的变化。结果 结果表明，肠缺血60min、再灌注30min、60min时，肝细胞凋亡数增多，血清肿瘤坏死因子水平逐渐升高；封闭库普弗细胞后，肝细胞凋亡数增多更显著，血清肿瘤坏死因子水平在同时间点上无显著差异。结论 库普弗细胞功能状态的变化对肠缺血再灌注时肝损伤有重要影响。     

胰腺癌梗阻性黄疸患者经皮穿刺胆管引流术后胰腺炎危险因素分析

目的探讨胰腺癌梗阻性黄疸患者经皮穿刺胆管引流术(PTBD)后发生胰腺炎的危险因素及预防策略。方法回顾性收集2001年5月至2014年10月天津医科大学肿瘤医院胰腺癌梗阻性黄疸行PTBD治疗患者。共241例纳入研究, 其中男性192例、女性49例, 年龄30～89岁, 中位年龄61岁。分析患者性别、年龄、血红蛋白、总胆红素水平、胰管扩张程度、胰腺萎缩程度、术中器械通过梗阻段难易程度、胰管是否显影及引流方式等9项因素与PTBD术后并发胰腺炎的相关性。结果单因素分析结果显示胰管扩张、胰腺萎缩、胰管显影、引流方式与PTBD术后胰腺炎发生率有关(P<0.05)。logistic回归分析结果显示胰管显影(OR=6.33)为发生胰腺炎的危险因素, 胰管扩张(OR=0.14)、胰腺萎缩(OR=0.12)、外引流(OR=0.11)为发生胰腺炎的保护因素。结论胰腺癌梗阻性黄疸行PTBD治疗, 术前影像提示胰管扩张、胰腺萎缩术后并发胰腺炎的概率相对较低, 而术中胰管显影、选择内外引流可能在一定程度上增加术后胰腺炎的发生率。     

冠心病患者血中一氧化氮、肿瘤坏死因子和胰岛素含量变化及意义

目的 :探讨一氧化氮 (NO)、肿瘤坏死因子 (TNF-α)及胰岛素 (IS)在冠心病 (CHD)发病机制中的作用。方法 :采用比色法、酶联免疫法和放射免疫法测定 6 4例不同病情的 CHD患者血 NO、TNF-α和 IS水平。结果 :CHD患者血清 NO水平显著低于对照组 (P <0 .0 0 1) ,TNF-α和 IS水平显著高于对照组 (均 P <0 .0 1) ,且 NO与 TNF- α、IS呈负相关 (r=- 0 .73,P<0 .0 1和 r=- 0 .5 9,P<0 .0 5 ) ,TNF- α与 IS呈正相关 (r=0 .72 ,P<0 .0 1)。结论 :NO、TNF- α和 IS在 CHD发病中起重要作用并存在相互联系。NO降低、TNF- α和 IS升高的程度与病情具有一致性趋势。动态检测 CHD患者血中 NO、TNF- α和 IS水平可望成为临床判断病情和疗效的有效指标。     

大黄及其提取物对脑缺血大鼠一氧化氮和肿瘤坏死因子的影响

目的 从一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子(TNF)的变化探讨大黄及其提取物抗脑缺血损伤的机制。方法 采用双侧颈总动脉缺血模型，分为假手术组、模型组、尼莫地平组、大黄组、大黄部位1组、大黄部位2组、大黄部位3组、大黄部位4组。观察脑组织病理改变，测定脑电图、脑组织和血清NO和TNF—α。结果 模型组脑电图幅值降低、脑组织病理损伤严重，血清和脑组织中：NO、TNF—α水平增高。与模型组比较，尼莫地平组和其他用药组脑组织病理损伤减轻；除了大黄部位2组外，其他用药各组脑电幅值增高；尼莫地平组、大黄组、大黄部位3组、大黄部位4组血清和脑组织NO、TNF—α水平显著降低；大黄部位1组脑组织TNF—α水平和血清NO、TNF—α水平降低显著，大黄部位2组脑组织NO含量和血清、脑组织TNF—α水平皆降低明显。结论 大黄及4个不同部位可改善缺血后脑组织损伤，其保护机制可能与减轻NO、TNF介导的神经毒性作用有关。     

醛固酮对血管外膜诱导型一氧化氮合酶/一氧化氮通路影响的实验研究

目的观察醛固酮对血管外膜诱导型一氧化氮合酶（iNOS）／一氧化氮（NO）通路的影响及作用机制。方法取sD大鼠胸主动脉外膜,分别给予不同浓度醛固酮（ALD）10^-8～10^-6mol／L、ALl）＋螺内酯以及ALD＋RU486进行孵育,此外在给予脂多糖激活血管外膜iNOS／NO的情况下,观察以上各组药物刺激后iNOS／NO系统的变化。与上述药物共同孵育6h后通过Griess法测定相对稳定的代谢产物硝酸盐和亚硝酸盐（NOx）代表NO的产生量,采用[^3H]-L-精氨酸标记的同位素法测定外膜iNOS活性。结果（1）NOx产生的变化：ALD刺激后血管外膜NOx生成无明显变化。用螺内酯拮抗盐皮质激素受体后,高浓度ALD组（10～～10^-6mol／L）血管外膜NOx产生呈下降趋势（P〈0．05）。用RU486拮抗糖皮质激素受体后随ALD浓度增加NOx生成量也呈浓度依赖性增加（P〈0．01）。脂多糖刺激后上述趋势更为明显。（2）iNOS活性的变化：ALD刺激后iNOS活性无明显变化,螺内酯刺激后血管外膜iNOS活性有下降趋势,但无统计学意义。而RU486刺激后血管外膜iNOS活性显著增加（P〈0．05）。同时给予脂多糖刺激后,螺内酯＋ALD组血管外膜iNOS活性显著下降（P〈0．01）,ALD＋RU486组血管外膜iNOS活性显著增加（p〈0．05）。结论ALD主要通过盐皮质激素受体和糖皮质激素受体通路两种途径直接影响血管外膜iNOS／NO系统,醛固酮作用于盐皮质激素受体能够诱导iNOS激活、刺激NO产生,作用于糖皮质激素受体抑制iNOS／NO激活。