三氧化二砷对肝癌细胞株的体外抑制作用

目的研究三氧化二砷(As2O3)对肝癌细胞株HepG2,BEL-7402的抑制作用。方法用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测用As2O3对肝癌细胞株HepG2,BEL-7402生长及抑制率的影响;凋亡电泳检测电泳条带,流式细胞仪(FCM)分析细胞周期和凋亡率变化。结果在0.1~50.0μmol/L的浓度范围内As2O3对BEL-7402、HepG2细胞的生长均有明显的抑制作用,且有时间和浓度的依赖性;凋亡电泳显示5μmol/L As2O3对肝癌细胞株HepG2,BEL-7402凋亡率分别是46.7%和53.1%;流式细胞仪DNA组方图上可见细胞G1前期出现亚二倍峰。结论As2O3可抑制肝癌细胞株HepG2,BEL-7402的生长,且在一定的范围内,抑制率具有一定的浓度和时间依赖性;As2O3对BEL-7402细胞株的生长抑制作用大于HepG2;As2O3抑制肝癌细胞株HepG2,BEL-7402生长的作用与细胞凋亡有关。     

三氧化二砷诱导人胆管癌细胞系HCCC-9810凋亡的初步研究

目的 研究三氧化二砷(As2O3)对胆管癌细胞的抑制作用及其机制。方法 用不同浓度的As2O3处理胆管癌细胞株HCCC-9810，应用倒置显微镜、MTT法、流式细胞仪观察胆管癌细胞的变化。结果 As2O3在0．75、1．5、3．0、6．0μmol／L的浓度对胆管癌细胞作用不同时间，作用72h时生长抑制率分别为22．34％、43．25％、59．68％、69．95％。结论 适合浓度的As2O3在体外可诱导胆管癌细胞凋亡，有较明显的时间和剂量依赖性，其发生机制可能与细胞周期阻滞有关。     

抗坏血酸与三氧化二砷联合应用诱导肝癌细胞凋亡

目的探讨抗坏血酸(ascorbic acid,AA)与三氧化二砷(As2O3)联合应用增强肝癌细胞凋亡的作用。方法肝癌细胞株BEL-7402及SMMC-7721细胞分别用As2O3(1 μmol/L)、AA(62.5 μmol/L)、As2O3(1 μmol/L) AA(62.5 μmol/L)处理24～96 h,流式细胞仪上检测细胞凋亡百分率;用试剂盒法测定细胞内谷胱甘肽(glutathione, GSH)含量。结果1 μmol/As2O3作用24～96 h有诱导BEL-7400及SMMC-7721细胞凋亡的作用,从(62.5 μmol/L) As2O3(1 μmol/L)作用72 h BEL-7402细胞凋亡百分率为(61.7±0.8)%,SMMC-7721细胞为(26.8±0.9)%,较单独应用As2O3(1 μmol/L)的凋亡百分率[(40.2±0.8)%;(11.4±0.5)%]明显增高。As2O3(1 μmol/L)单独作用对SMMC-7721和BEL-7402细胞内GSH的含量无明显影响。从(62.5 μmol/L)单独作用对BEL-7402细胞内GSH的含量无明显影响,但可明显降低SMMC-7721细胞内GSH的含量(P<0.05)。AA(62.5 μmol/L)与As2O3(1 μmol/L)联合作用可明显降低SMMC-7721和BEL-7402细胞内GSH的含量(P<0.05),SMMC-7721细胞内GSH的含量降低更显著(P<0.01)。结论AA及As2O3联合应用能增强肝癌细胞株BEL-7402及SMMC- 7721细胞凋亡作用,尤其是对As2O3不敏感细胞株SMMC-7721细胞作用更显著。     

细胞分化剂增强三氧化二砷诱导肝癌细胞的凋亡效应

目的：探讨细胞分化剂（CDA－Ⅱ）在三氧化二砷（As2O3)诱导肝癌细胞凋亡效应中的作用。方法：应用CDA－Ⅱ和As2O3共同处理肝癌细胞株BEL－7402、HepG2，通过四唑蓝比色法检测细胞存活率；用活细胞荧光染色观测细胞凋亡及形态学变化、流式细胞术分析细胞周期变化及凋亡率。结果：CDA－Ⅱ毒性作用很低，但可以显增强As2O3对肝癌细胞生长的抑制作用，1．0g/L CDA-Ⅱ便可使As2O3对两株细胞的半数抑制浓度由5．0μmol/L降低至1．0μmol/L（P＜0．01）。形态学可观察到CDA－Ⅱ明显加强了As2O3诱导的细胞凋亡，且与剂量有关；流式细胞术分析，低质量浓度的CDA－Ⅱ（＜2．0g/L)细胞生长阻滞于G2期较对照组多，而随着剂量的增加则凋亡细胞和滞留于G1期的细胞增多，低剂量CDA－Ⅱ与As2O3共同处理肝癌细胞后，凋亡率明显高于单独用As2O3。结论：CDA－Ⅱ可增强As2O3诱导肝癌细胞的凋亡效应，两药具有协同作用。     

三氧化二砷在体外抑制结肠癌细胞的研究

目的 在体外观察三氧化二砷(As2O3)对结肠癌细胞系HT-29的抑制作用,并探讨其作用机制,为其是否能作为结肠肿瘤的化疗药物提供理论基础.方法 将不同浓度As2O3作用于HT-29细胞不同时间后,用MTT检测细胞抑制率,光镜及透射电镜观察细胞形态学和超微结构的变化,通过流式细胞仪及共聚焦显微镜分析凋亡及自噬.结果 4.0μmol/L As2O3作用72h可明显抑制HT-29细胞增殖及诱发其凋亡,且抑制率与药物作用时间及浓度成正比.在凋亡早期细胞形态学变化在光镜下可见细胞缩小变圆,在电镜上可见细胞质浓缩、核固缩及自噬溶酶体.4.0μmol/L As2O3作用72h后HT-29细胞凋亡率为25%.结论 As2O3能明显抑制结肠癌细胞系HT-29的增殖,其作用机制与引起凋亡及自噬密切相关.     

三氧化二砷体外诱导口腔鳞癌细胞凋亡的研究

目的 探讨三氧化二砷（As2O3)对口腔鳞癌细胞的体外生物学作用及机制。方法 采用形态学、MTT、克隆形成试验、DNA梯度降解试验、原位末端标记及流式细胞仪等方法，对As2O3在Tca8113细胞系中的作用进行体外研究。结果 As2O3对Tca8113细胞产生明显的生长抑制作用，MTT显示生长抑制率为76.3%。DNA梯度降解试验、原位末端标记、流式细胞仪显示As2O3诱导了Tca8113细胞凋亡。流式细胞仪显示As2O3的Tca8113细胞凋亡与细胞周期阻滞有关。结论 As2O3对口腔鳞癌细胞具有显著的体外生长抑制及凋亡诱导作用。     

三氧化二砷诱导人卵巢癌细胞凋亡及对线粒体的影响

目的 研究三氧化二砷(As2O3)诱导人卵巢癌细胞凋亡中是否发生线粒体系统和Bcl-2蛋白表达的改变,探讨As2O3诱导凋亡的可能引发机制.方法 采用光镜、电镜和流式细胞术等技术,观察细胞凋亡、线粒体超微结构改变及检测线粒体跨膜电位(Δψm).结果 As2O3可诱导卵巢癌细胞凋亡,具有剂量依赖性和细胞株类型差异性;不同浓度As2O3均可诱导SKOV3、3AO细胞Δψm的降低,且随浓度升高,下降愈明显;电镜观察到As2O3作用SKOV3、3AO 72 h后,线粒体明显肿胀,内嵴消失,基质电子密度降低.免疫荧光染色显示As2O3能抑制SKOV3、3AO细胞的Bcl-2蛋白表达.结论 线粒体Δψm的下降和Bcl-2蛋白表达的抑制,是As2O3诱导细胞凋亡的重要环节.     

三氧化二砷诱导卵巢癌HO8910细胞凋亡的形态学研究

目的:探讨三氧化二砷对卵巢癌细胞株HO8910的抑制作用.方法:用三氧化二砷处理HO8910细胞,采用MTT法检测药物对细胞的抑制作用,倒置显微镜和电镜观察细胞形态学改变.结果:在三氧化二砷作用下,HO8910细胞呈凋亡改变,形成凋亡小体.结论:三氧化二砷能诱导卵巢癌细胞凋亡,抑制卵巢癌细胞增殖.     

细胞分化剂增强三氧化二砷诱导肝癌细胞的凋亡效应

【目的】探讨细胞分化剂 (CDA Ⅱ )在三氧化二砷 (As2 O3 )诱导肝癌细胞凋亡效应中的作用。【方法】应用CDA Ⅱ和As2 O3 共同处理肝癌细胞株BEL 74 0 2、HepG2 ,通过四唑蓝比色法检测细胞存活率 ;用活细胞荧光染色观测细胞凋亡及形态学变化、流式细胞术分析细胞周期变化及凋亡率。【结果】CDA Ⅱ毒性作用很低 ,但可以显著增强As2 O3 对肝癌细胞生长的抑制作用 ,1 0 g/LCDA Ⅱ便可使As2 O3 对两株细胞的半数抑制浓度由 5 0 μmol/L降低至 1 0 μmol/L(P <0 0 1)。形态学可观察到CDA Ⅱ明显加强了As2 O3 诱导的细胞凋亡 ,且与剂量有关 ;流式细胞术分析 ,低质量浓度的CDA Ⅱ (<2 0 g/L)细胞生长阻滞于G2 期较对照组多 ,而随着剂量的增加则凋亡细胞和滞留于G1期的细胞增多 ,低剂量CDA Ⅱ与As2 O3 共同处理肝癌细胞后 ,凋亡率明显高于单独用As2 O3 。【结论】CDA Ⅱ可增强As2 O3 诱导肝癌细胞的凋亡效应 ,两药具有协同作用。     

三氧化二砷诱导人胃癌细胞株MGC—803细胞凋亡的研究

为探讨三氧化二砷对胃癌细胞的作用及可能的机制。用不同浓度的Ａｓ２Ｏ３作用于增减的胃癌细胞株ＭＧＣ－８０３细胞。噻唑蓝细胞活力测定显示Ａｓ２Ｏ３能明显抑制ＭＧＣ－８０３细胞生长；     

As_2O_3对大鼠生精细胞凋亡及其Fas、FasL调控途径的研究

目的 观察不同剂量的染砷(As2O3)大鼠生精细胞凋亡及其Fas、FasL表达的变化,探讨砷的生殖毒性机制.方法 40只健康雄性SD大鼠随机分成4组,分别为0.375、0.75、1.5 mg/kg3个染毒组和对照组,灌胃法连续给药16wk后,采用TUNEL法检测大鼠生精细胞凋亡,免疫组化法检测大鼠生精细胞Fas、FasL的表达.结果 ①与对照组相比,中剂量组(0.75 mg/kg)和高剂量组(1.5 mg/kg)生精细胞凋亡指数(AD显著升高(P<0.01),生精细胞Fas、FasL表达明显升高(P<0.01);②每日精子生成量与生精细胞凋亡呈负相关(r=-0.563,P<0.01);③生精细胞凋亡与Fas、FasL表达呈正相关(分别为r=0.767,r=0.771,P<0.01).结论 一定剂量的As2O3可通过上调生精细胞Fas、FasL的表达,诱导生精细胞凋亡增加而导致精子生成量的减少,产生雄性生殖毒性.     

氧化砷诱导食管癌细胞系细胞凋亡的研究

目的:研究食管癌细胞系SHEEC1以三氧化二砷（AS2O3）诱导细胞凋亡光镜和电镜的形态改变。方法：SHEEC1细胞常规培养在199培养基,在5umoL/LAs2O3作用72h收获细胞以苏木精－伊红染色,TUNEL标记,透射电镜和流式细胞仪检查。结果：光镜下凋亡细胞核致密,染色质片段化,胞浆红染,TUNEL标记阳性,流式细胞仪检查出现凋亡峰（亚G1／G 0峰）。电镜下可见两种死亡细胞：一种是核固缩,有染色质凝集靠近核膜等典型凋亡改变;另一种细胞浆退行性变及细胞坏死改变。结论：食管癌细胞系SHEEC1可以用As2O3引起凋亡,提示其可以作为治疗食管癌的辅助药物。     

白藜芦醇保护三氧化二砷引起的心肌毒性的实验研究

目的评估白藜芦醇在预防三氧化二砷（Arsenic trioxide,As2O3）引起心肌损伤方面的作用。方法 50只雄性Wistar大鼠随机分为5组：正常对照组（单独给予生理盐水）,As2O3对照组（单独给予As2O3）,白藜芦醇低剂量组（白藜芦醇5 mg/kg＋As2O3）、白藜芦醇中剂量组（白藜芦醇15 mg/kg＋As2O3）、白藜芦醇高剂量组（白藜芦醇45 mg/kg＋As2O3）。所有治疗均隔1天进行,第6天处死大鼠。用标准肢体Ⅱ导联测定大鼠心电图变化;测定大鼠血清中肌酸激酶（creatine kinase,CK）、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenasem,LDH）、超氧化物歧化酶（superoxidedismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活性以及丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量;光镜下观察心肌组织结构变化;四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）比色法测定As2O3和白藜芦醇抗肿瘤效应。结果①与正常对照组相比,As2O3对照组大鼠血清CK、LDH活力显著升高,MDA含量升高,SOD及GSH-Px活力下降,具有显著性差异（P〈0.05）。②白藜芦醇各剂量（5、15、45 mg/kg）均能减轻As2O3引起的上述改变,与As2O3对照组相比,可降低血清CK、LDH活力及MDA含量,增强血清SOD及GSH-Px活力,以白藜芦醇高剂量组作用最为显著。③光镜下见白藜芦醇可减轻心肌组织结构损伤,白藜芦醇的治疗作用以高剂量组最为显著。④体外研究证实白藜芦醇可增加As2O3的抗肿瘤作用。结论①As2O3引起心脏毒性的发生机制可能与氧自由基及其诱导的脂质过氧化有关。②大剂量白藜芦醇对As2O3所致心脏毒性具有预防作用,其机制可能与其提高机体内抗氧化酶活性及拮抗脂质过氧化有关。     

砷染毒大鼠生精细胞Bcl-2表达的变化

目的观察不同剂量的三氧化二砷（As2O3）对成年大鼠生精细胞Bcl-2表达的影响。方法40只健康雄性SD大鼠随机分成4组，分别为0．375mg/kg、0．75mg/kg、1．5mg/kg 3个染毒组和对照组，灌胃法连续给药16w后对各组大鼠计算睾丸脏器系数、精子头计数，并计算每日精子生成量（DSP）。采用免疫组化法检测大鼠生精细胞Bcl-2表达的情况。结果①中剂量组（0．75mg/kg）和高剂量组（1．5mg/kg）睾丸精子头计数和DSP均低于对照组（P〈0．05）；②与对照组相比，中、高剂量组大鼠生精细胞Bcl-2阳性产物表达明显降低（P〈0．01）；③生精细胞Bcl-2阳性率与每日精子生成量呈正相关（r=0．589,P〈0．01）。结论一定剂量的As2O3可通过抑制生精细胞Bcl-2的表达而导致精子生成量的减少，产生雄性生殖毒性。     

三氧化二砷诱导胃癌细胞凋亡和Bcl-2表型变化的意义

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）是否能够诱导SGC7901胃癌细胞凋亡,以及Bcl-2的表型变化是否在其中发挥了作用。方法：将不同浓度的三氧化二砷作用于SGC7901细胞,采用CCK-8进行细胞毒检测;采用DAPI染色进行细胞核形态分析;采用免疫荧光显微镜观察不同表型的Bcl-2表达的变化;采用Western Blot蛋白印迹法检测Bcl-2的表达。结果：三氧化二砷可以诱导SGC7901细胞凋亡。三氧化二砷诱导SGC7901细胞的凋亡伴随着Bcl-2表型的变化,且Bcl-2的表达无改变。结论：三氧化二砷可能通过Bcl-2表型的变化诱导SGC7901胃癌细胞凋亡,而不是通过下调Bcl-2的表达。     

雄黄诱导白血病细胞凋亡及其bcl-2蛋白表达的研究

目的检测雄黄诱导白血病细胞凋亡能力,探讨分子机制。方法应用形态学观察细胞凋亡,计算细胞凋亡率,免疫组化方法检测白血病细胞bcl-2蛋白表达。结果雄黄可诱导白血病细胞发生典型的凋亡,同时雄黄可使白血病细胞bcl-2蛋白表达呈时间依赖性下降。结论雄黄通过影响白血病细胞bcl-2蛋白的表达,从而导致白血病细胞发生凋亡,这是其治疗白血病的重要分子机制。     

三氧化二砷对黑素瘤B16细胞内活性氧自由基的影响

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）对黑素瘤B16细胞增殖及细胞内活性氧自由基（ROS）水平的影响。方法：30μmol/LAs2O3与500μmol/L N-乙酰半胱氨酸（N-acetylcysteine,NAC）分别单独或联合作用于B16细胞,应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞生长抑制情况;流式细胞术检测ROS水平。结果：As2O3能明显抑制B16细胞的增殖,NAC可部分拮抗As2O3对黑素瘤细胞的杀伤效应及诱导凋亡效应。As2O3作用1 h后的B16细胞内ROS水平比对照组升高（P〈0.01）,4 h达到高峰,24 h有所下降,与对照组差异均有统计学意义（P〈0.01）。ROS升高的趋势可被抗氧化物NAC部分阻断（P〈0.05-P〈0.01）。结论：As2O3诱导B16细胞凋亡与ROS水平改变有关,As2O3可通过提高细胞内ROS水平诱导细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用,这也可能是As2O3抗黑素瘤的途径之一。     

化癥胶囊方剂诱导前列腺癌细胞系PC-3凋亡的实验研究

目的：明确化癥胶囊方剂对前列腺癌细胞PC-3的诱导凋亡作用。方法：PC-3细胞与适宜浓度化癥胶囊方剂共同孵育于1640培养液中,采用一系列细胞凋亡定性、定量检测方法研究化癥胶囊方剂诱导的PC-3细胞凋亡,如行DNA凝胶电泳、流式细胞仪DNA含量分析以检测凋亡。结果：化癥胶囊方剂可诱导PC-3细胞发生凋亡特征性的生化改变,如DNA提取及琼脂糖凝胶电泳分析显示,化癥胶囊方剂可诱导PC-3细胞染色体DNA片段化,形成凋亡特征性的“DNA梯状(DNA ladder)”电泳图谱;流式细胞仪检测可见有低G1期细胞出现。在试验范围内凋亡比率与药物浓度呈一定相关。结论：化癥胶囊方剂可诱导PC-3细胞凋亡,其作用与药物浓度呈一定相关性。     

Bcl-2反义寡核苷酸对放射治疗诱导肺癌细胞凋亡的促进作用

目的通过体外试验,研究Bcl-2反义寡核苷酸对放射治疗诱导肺癌细胞凋亡的促进作用。方法NCI-H446肺癌细胞株分5组,分别为空白对照、单纯照射组、脂质体加照射组、无义序列加照射组、反义寡核苷酸加照射组。培养至6h、12h、24h、48h和72h,分别收集各组细胞,瑞吉染色做细胞形态学分析,应用RT-PCR半定量测定p53、Bcl-2和PTEN基因的mRNA表达,流式细胞仪检测各组细胞DNA倍体,分析细胞凋亡指数。结果Bcl-2反义寡核苷酸联合照射后p53和PTEN表达明显增加,Bcl-2mRNA表达则明显降低。流式细胞仪检测照射后72h空白对照组、照射组、脂质体加照射组、无义序列加照射组、反义寡核苷酸加照射组凋亡率分别为0.14±0.09,13.17±2.47,11.84±1.76,13.72±1.4,21.26±2.97,反义寡核苷酸加照射组与其余4组比较差别有显著性意义(P<0.01)。结论Bcl-2反义寡核苷酸对放射治疗诱导肺癌细胞凋亡有促进作用;细胞凋亡受p53和Bcl-2基因调控,p53基因的表达促进了细胞的凋亡,而Bcl-2基因的高表达抑制细胞的凋亡,PETN的表达与凋亡也有相关性。     

癌灵一号对人肝癌细胞凋亡作用的研究

研究癌灵一号对肝癌细胞的凋亡的作用。用台盼蓝染色观察药物对照细胞增殖的抑制人艇及其形态变化;采用流式细胞仪技术检测凋亡百分数及凋亡峰。结果表明,癌灵一号对人肝癌细胞具有抑制作用,并使细胞出现形态改变;